Cholesterol induces fetal rat enterocyte death in culture

The effect of cholesterol on fetal rat enterocytes and IEC-6 cells (line originated from normal rat small intestine) was examined. Both cells were cultured in the presence of 20 to 80 µM cholesterol for up to 72 h. Apoptosis was determined by flow cytometric analysis and fluorescence microscopy. The expression of HMG-CoA reductase and peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) was measured by RT-PCR. The addition of 20 µM cholesterol reduced enterocyte proliferation as early as 6 h of culture. Reduction of enterocyte proliferation by 28 and 41% was observed after 24 h of culture in the presence and absence of 10% fetal calf serum, respectively, with the effect lasting up to 72 h. Treatment of IEC-6 cells with cholesterol for 24 h raised the proportion of cells with fragmented DNA by 9.7% at 40 µM and by 20.8% at 80 µM. When the culture period was extended to 48 h, the effect of cholesterol was still more pronounced, with the percent of cells with fragmented DNA reaching 53.5% for 40 µM and 84.3% for 80 µM. Chromatin condensation of IEC-6 cells was observed after treatment with cholesterol even at 20 µM. Cholesterol did not affect HMG-CoA reductase expression. A dose-dependent increase in PPARgamma expression in fetal rat enterocytes was observed. The expression of PPAR-gamma was raised by 7- and 40-fold, in the presence and absence of fetal calf serum, respectively, with cholesterol at 80 mM. The apoptotic effect of cholesterol on enterocytes was possibly due to an increase in PPARgamma expression.

A "Trojan horse" strategy to reverse drug-resistance in brain tumors

Los gliomas malignos representan una de las formas más agresivas de los tumores del sistema nervioso central (SNC). De acuerdo con la clasificación de los tumores cerebrales de la Organización Mundial de la Salud (OMS), los astrocitomas han sido categorizados en cuatro grados, determinados por la patología subyacente. Es así como los gliomas malignos (o de alto grado) incluyen el glioma anaplásico (grado III) así como el glioblastoma multiforme (GBM, grado IV),estos últimos los más agresivos con el peor pronóstico (1). El manejo terapéutico de los tumores del SNC se basa en la cirugía, la radioterapia y la quimioterapia, dependiendo de las características del tumor, el estadio clínico y la edad (2),(3), sin embargo ninguno de los tratamientos estándar es completamente seguro y compatible con una calidad de vida aceptable (3), (4). En general, la quimioterapia es la primera opción en los tumores diseminados, como el glioblastoma invasivo y el meduloblastoma de alto riesgo o con metástasis múltiple, pero el pronóstico en estos pacientes es muy pobre (2),(3). Solamente nuevas terapias dirigidas (2) como las terapias anti-angiogénicas (4); o terapias génicas muestran un beneficio real en grupos limitados de pacientes con defectos moleculares específicos conocidos (4). De este modo, se hace necesario el desarrollo de nuevas terapias farmacológicas para atacar los tumores cerebrales. Frente a las terapias los gliomas malignos son con frecuencia quimioresistentes, y esta resistencia parece depender de al menos dos mecanismos: en primer lugar, la pobre penetración de muchas drogas anticáncer a través de la barrera hematoencefálica (BBB: Blood Brain Barrier), la barrera del fluido sangre-cerebroespinal (BCSFB: Blood-cerebrospinal fluid barrier) y la barrera sangre-tumor (BTB: blood-tumor barrier). Dicha resistencia se debe a la interacción de la droga con varios transportadores o bombas de eflujo de droga ABC (ABC: ATP-binding cassette) que se sobre expresan en las células endoteliales o epiteliales de estas barreras. En segundo lugar, estos transportadores de eflujo de drogas ABC propios de las células tumorales confieren un fenotipo conocido como resistencia a multidrogas (MDR: multidrug resistance), el cual es característico de varios tumores sólidos. Este fenotipo también está presente en los tumores del SNC y su papel en gliomas es objeto de investigación (5). Por consiguiente el suministro de medicamentos a través de la BBB es uno de los problemas vitales en los tratamientos de terapia dirigida. Estudios recientes han demostrado que algunas moléculas pequeñas utilizadas en estas terapias son sustratos de la glicoproteína P (Pgp: P-gycoprotein), así como también de otras bombas de eflujo como las proteínas relacionadas con la resistencia a multidrogas (MRPs: multidrug resistance-related proteins (MRPs) o la proteína relacionada con cáncer de seno (BCRP: breast-cancer resistance related protein)) que no permiten que las drogas de este tipo alcancen el tumor (1). Un sustrato de Pgp y BCRP es la DOXOrubicina (DOXO), un fármaco utilizado en la terapia anti cáncer, el cual es muy eficaz para atacar las células del tumor cerebral in vitro, pero con un uso clínico limitado por la poca entrega a través de la barrera hematoencefálica (BBB) y por la resistencia propia de los tumores. Por otra parte las células de BBB y las células del tumor cerebral tienen también proteínas superficiales, como el receptor de la lipoproteína de baja densidad (LDLR), que podría utilizarse como blanco terapéutico en BBB y tumores cerebrales. Es asi como la importancia de este estudio se basa en la generación de estrategias terapéuticas que promuevan el paso de las drogas a través de la barrera hematoencefalica y tumoral, y a su vez, se reconozcan mecanismos celulares que induzcan el incremento en la expresión de los transportadores ABC, de manera que puedan ser utilizados como blancos terapéuticos.Este estudio demostró que el uso de una nueva estrategia basada en el “Caballo de Troya”, donde se combina la droga DOXOrubicina, la cual es introducida dentro de un liposoma, salvaguarda la droga de manera que se evita su reconocimiento por parte de los transportadores ABC tanto de la BBB como de las células del tumor. La construcción del liposoma permitió utilizar el receptor LDLR de las células asegurando la entrada a través de la BBB y hacia las células tumorales a través de un proceso de endocitosis. Este mecanismo fue asociado al uso de estatinas o drogas anticolesterol las cuales favorecieron la expresión de LDLR y disminuyeron la actividad de los transportadores ABC por nitración de los mismos, incrementando la eficiencia de nuestro Caballo de Troya. Por consiguiente demostramos que el uso de una nueva estrategia o formulación denominada ApolipoDOXO más el uso de estatinas favorece la administración de fármacos a través de la BBB, venciendo la resistencia del tumor y reduciendo los efectos colaterales dosis dependiente de la DOXOrubicina. Además esta estrategia del "Caballo de Troya", es un nuevo enfoque terapéutico que puede ser considerado como una nueva estrategia para aumentar la eficacia de diferentes fármacos en varios tumores cerebrales y garantiza una alta eficiencia incluso en un medio hipóxico,característico de las células cancerosas, donde la expresión del transportador Pgp se vió aumentada. Teniendo en cuenta la relación entre algunas vías de señalización reconocidas como moduladores de la actividad de Pgp, este estudio presenta no solo la estrategia del Caballo de Troya, sino también otra propuesta terapéutica relacionada con el uso de Temozolomide más DOXOrubicina. Esta estrategia demostró que el temozolomide logra penetrar la BBB por que interviene en la via de señalización de la Wnt/GSK3/β-catenina, la cual modula la expresión del transportador Pgp. Se demostró que el TMZ disminuye la proteína y el mRNA de Wnt3 permitiendo plantear la hipótesis de que la droga al disminuir la transcripción del gen Wnt3 en células de BBB, incrementa la activación de la vía fosforilando la β-catenina y conduciendo a disminuir la β-catenina nuclear y por tanto su unión al promotor del gen mdr1. Con base en los resultados este estudio permitió el reconocimiento de tres mecanismos básicos relacionados con la expresión de los transportadores ABC y asociados a las estrategias empleadas: el primero fue el uso de las estatinas, el cual condujo a la nitración de los transportadores disminuyendo su actividad por la via del factor de transcripción NFκB; el segundo a partir del uso del temozolomide, el cual metila el gen de Wnt3 reduciendo la actividad de la via de señalización de la la β-catenina, disminuyendo la expresión del transportador Pgp. El tercero consistió en la determinación de la relación entre el eje RhoA/RhoA quinasa como un modulador de la via (no canónica) GSK3/β-catenina. Se demostró que la proteína quinasa RhoA promovió la activación de la proteína PTB1, la cual al fosforilar a GSK3 indujo la fosforilación de la β-catenina, lo cual dio lugar a su destrucción por el proteosoma, evitando su unión al promotor del gen mdr1 y por tanto reduciendo su expresión. En conclusión las estrategias propuestas en este trabajo incrementaron la citotoxicidad de las células tumorales al aumentar la permeabilidad no solo de la barrera hematoencefálica, sino también de la propia barrera tumoral. Igualmente, la estrategia del “Caballo de Troya” podría ser útil para la terapia de otras enfermedades asociadas al sistema nervioso central. Por otra parte estos estudios indican que el reconocimiento de mecanismos asociados a la expresión de los transportadores ABC podría constituir una herramienta clave en el desarrollo de nuevas terapias anticáncer.

nor-Mevaldic acid surrogates as selective antifungal agent leads against Botrytis cinerea. Enantioselective preparation of 4-hydroxy-6-(1-phenylethoxy)tetrahydro-2H-pyran-2-one

Solvent-free desymmetrisation of meso-dialdehyde 1 with chiral 1-phenylethan-1-ol, led to preparation of 4-silyloxy-6-alkyloxytetrahydro-2H-pyran-2-one (+)-3a with a 96:4 d.r. Deprotected lactone (+)-19a and the related racemic lactones 16a-18a present a lactone moiety resembling the natural substrate of HMG-CoA reductase and their antifungal properties have been evaluated against the phytopathogenic fungi Botrytis cinerea and Colletotrichum gloeosporioides. These compounds were selectively active against B. cinerea, while inactive against C. gloeosporioides.

Simvastatin therapy in cyclosporine A-induced alveolar bone loss in rats

Background and Objective: Cyclosporine A treatment is important in the therapy of a number of medical conditions; however, alveolar bone loss is an important negative side-effect of this drug. As such, we evaluated whether concomitant administration of simvastatin would minimize cyclosporine A-associated alveolar bone loss in rats subjected, or not, to experimental periodontal disease. Material and Methods: Groups of 10 rats each were treated with cyclosporine A (10 mg/kg/day), simvastatin (20 mg/kg/day), cyclosporine A and simvastatin concurrently (cyclosporine A/simvastatin) or vehicle for 30 days. Four other groups of 10 rats each received a cotton ligature around the lower first molar and were treated similarly with cyclosporine A, simvastatin, cyclosporine A/simvastatin or vehicle. Calcium (Ca(2+)), phosphorus and alkaline phosphatase levels were evaluated in serum. Expression levels of interleukin-1 beta, prostaglandin E(2) and inducible nitric oxide synthase were evaluated in the gingivomucosal tissues. Bone volume and numbers of osteoblasts and osteoclasts were also analyzed. Results: Treatment with cyclosporine A in rats, with or without ligature, was associated with bone loss, represented by a lower bone volume and an increase in the number of osteoclasts. Treatment with cyclosporine A was associated with bone resorption, whereas simvastatin treatment improved cyclosporine A-associated alveolar bone loss in all parameters studied. In addition, simvastatin, in the presence of inflammation, can act as an anti-inflammatory agent. Conclusion: This study shows that simvastatin therapy leads to a reversal of the cyclosporine A-induced bone loss, which may be mediated by downregulation of interleukin-1 beta and prostaglandin E(2) production.

Effects of simvastatin in abdominal sepsis in rats

Statins are widely recognized as hypolipemic drugs, but some studies have observed anti-inflammatory and immunomodulatory effects, known as pleiotropic. The aims of this work was to study possible anti-inflammatory effects of simvastatin in abdominal sepsis. Serum pro-inflammatory cytokines and leukocytes count were determined in an experimental model of abdominal sepsis, using cecal ligation and puncture (CLP) in rats. Methods: Twenty eigth Wistar rats weighing 285±12g were randomly divided in: CLP/Sinvastatin rats (n=7), treated with 10 mg/Kg of oral simvastatin 18 and 2 hs berofe CLP; CLP/Saline group rats (n=7), treated with oral saline; group Sham/Simvastatin (n=7), treated with simvastatin, and group Sham/Saline (n=7), treated with saline. Serum TNF-α, IL-1β and IL-6 by ELISA and total leukocytes, neutrophils, lymphocytes, and eosinophils were determined 24 hs after CLP. ANOVA and Tukey test were used considering significant p<0.05. Results: It was demonstrated that serum TNF-α, IL-1β and IL-6 were respectively 364,8±42pg/mL; 46,3±18pg/mL and 28,4±13pg/mL in CLP/Sinvastatin rats, significantly lower (p<0.05) than in group CLP/Saline (778,5±86pg/ml; 176,9±46pg/ ml; 133,6±21 pg/ml, respectively). The same results were observed in total leukocytes and neutrophils counts. Conclusion: These results clearly demonstrate that simvastatin is an effective agent that reduces cytokines levels and leukocyte count in sepsis, independently of its well-known lipid-lowering effects. Thus, HMG-CoA reductase inhibitors like simvastatin have important anti-inflammatory effects in abdominal sepsis in rats

Efeito do exercício físico e estatinas na função muscular em animais com dislipidemia

As estatinas são utilizadas no tratamento das dislipidemias, com grande tolerância; no entanto, vários efeitos colaterais podem surgir, destacando-se miopatia. A prática regular do exercício físico (EF) produz modificações favoráveis no perfil lipídico; entretanto, pode gerar lesões musculares. OBJETIVO: Avaliar o efeito da associação entre exercício físico e estatinas na função muscular, pela análise histológica, em modelo experimental animal com dislipidemia. MÉTODOS: Foram utilizados 80 ratos machos Wistar, distribuídos em oito grupos, incluindo animais submetidos à dieta hipercolesterolêmica (DH), sinvastatina com (G1) e sem (G2) EF; DH e fluvastatina, com (G3) e sem EF (G4); alimentados com ração comercial (RC) na presença (G5) e ausência de (G6) EF; DH submetidos (G7) ou não (G8) a EF. A DH foi administrada por 90 dias, as estatinas e prática de EF em esteira rolante por oito semanas. Os animais foram sacrificados, e o músculo sóleo retirado para análise histológica. Aplicaram-se os testes t de Student pareado e análise multivariada, com nível significante para p < 0,05. RESULTADOS: As principais alterações histológicas encontradas foram fibras de diferentes diâmetros, atróficas, em degeneração, splitting, edema, infiltrado inflamatório. Essas alterações foram observadas em 90% dos animais do grupo G1, 80% do G2, 70% do G3, 30% do G4, 40% do G5 e 30% do G7. Nos grupos G6 e G8 identificaram-se fibras musculares com morfologia preservada. CONCLUSÕES: Na avaliação histológica muscular, a associação entre fluvastatina, sinvastatina e exercício físico acarreta alterações morfológicas com predomínio no uso da sinvastatina, variando de grau leve a grave, no músculo sóleo de ratos, induzidos pelos inibidores da HMG-CoA redutase.

Caracterização do tratamento medicamentoso com estatinas em unidade básica de saúde

Study Model: Retrospective study. Study Objective: To characterize statin treatment management due to lipid alterations and side effects throughout statin treatment in basic healthcare unit. Methods: Medical reports of women from a basic healthcare unit were analyzed, obtaining: disease presence, regular medication prescription, statin type and dosage, biochemical exams results, musculoskeletal complaints, and statin use cessation, going back the information until the medical consultation of first prescription. Results: Prescribed statins were Simvastatin and Atorvastatin at low doses (10-20 mg). Dose (48,4%) and/or type (25,4%) alterations occurred for lipid profile adequacy. Lipid levels were reduced without creatine kinase elevation. Treatment withdrawn (30,6%) was mainly due to their own decision (74%), which was strongly associated with records of musculoskeletal complaints (Odds Ratio: 6,40[1,53-26,78]). Conclusion: Statin treatment was effective in reducing serum lipid levels and self-reported pain was underestimated, characterizing the major limiting factor for treatment adherence.

Vicilinas de leguminosas e seus efeitos no metabolismo lipídico de ratos dislipidêmicos

Pós-graduação em Alimentos e Nutrição - FCFAR

Relação entre diferentes períodos da exposição à obesidade induzida por dieta e lipotoxidade cardíaca: papel do eixo Leptina/OB0R/AMPK/ACC/Malonil CoA

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação da toxicidade reprodutiva da sinvastatina em Ratos machos adultos

Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada - IBB

Delayed reproductive development in pubertal male rats exposed to the hypolipemiant agent rosuvastatin since prepuberty

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Desenvolvimento reprodutivo de ratos machos expostos ao agente hipolipemiante rosuvastatina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Deconstructing the DGAT1 enzyme: Binding sites and substrate interactions

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Potent mutagenicity in the Ames test of 2-cyano-4-nitroaniline and 2,6-dicyano-4-nitroaniline, components of disperse dyes

Genotoxicity data on commercial azo dyes and their components remain sparse, despite their widespread use. We have tested the mutagenicity of 2-cyano-4-nitroaniline (CNNA) and 2,6-dicyano-4-nitroaniline (CNCNNA), components of azo dyes such as Disperse Blue 165 and Disperse Red 73, in Ames test strains. Both compounds are extraordinarily potent frameshift mutagens, with much greater activity than structurally similar dihalonitroanilines and halodinitroanilines. Analysis of the responses of strains over-expressing or deficient in bioactivation enzymes shows that bacterial nitroreductase and acetyl CoA: arylamine N-acetyltransferase are important mediators of the mutagenicity of CNNA and CNCNNA. Environ. Mol. Mutagen., 2015. © 2015 Wiley Periodicals, Inc.

Effect of simvastatin on passive strain-induced skeletal muscle injury in rats

Introduction: HMG-CoA reductase inhibitors are the most frequently prescribed drugs for treatment of lipid imbalance, but they have side effects, such as myopathy. Our aim was to assess the effect of simvastatin on the inflammatory process induced by skeletal muscle injury. Methods: Rats were divided into experimental groups [control group, simvastatin (20 mg/kg) group, group treated with simvastatin (20 mg/kg) and subjected to injury, and group subjected to injury only]. Histological analysis and analyses of creatine kinase activity and C-reactive protein were performed. Results: Animals treated with simvastatin exhibited significantly greater morphological and structural skeletal muscle damage in comparison to the control group and injured animals without treatment. Conclusions: Although simvastatin has a small anti-inflammatory effect in the early stage after a muscle strain injury, the overall picture is negative, as simvastatin increases the extent of damage to muscle morphology. Further studies are needed. Muscle Nerve 46: 908-913, 2012