Diseño de un plan operacional para impulsar la sostenibilidad económica de las comunidades ubicadas en el departamento de La Libertad atendidas por la Fundación para la cooperación y el desarrollo comunal de El Salvador, (CORDES).

Uno de los objetivos para realizar la investigación, fue la de proporcionar a la Fundación para la cooperación y el desarrollo comunal de El Salvador (CORDES), una herramienta que, al ponerla en práctica, potencie la sostenibilidad económica de los habitantes de las comunidades que atiende, integradas por familias de desplazados, repobladores y desmovilizados a raíz del conflicto armado ocurrido en El Salvador durante los años 1980 a 1992. El objetivo principal del presente documento, consiste en proponer un plan operacional a la Fundación para la Cooperación y el Desarrollo Comunal de El Salvador (CORDES), para impulsar la sostenibilidad económica de las comunidades atendidas por dicha fundación, que al implementarlo permita, a los miembros de las comunidades, accesar al financiamiento adecuado para promover la diversificación de cultivos, de acuerdo a la vocación agrícola de la tierra en cada comunidad. En la investigación de campo se utilizó un cuestionario dirigido a un miembro de la Junta Directiva de cada comunidad en estudio. El universo comprendió 18 comunidades, distribuidas geográficamente en la zona sur del departamento de La Libertad, de las cuales se seleccionaron 11 comunidades de acuerdo a los criterios: Nivel de organización, capacidad productiva y número de usuarios de crédito. Los principales resultados de la investigación de campo fueron: El 100% de los habitantes, que cultivan la tierra, de las comunidades evaluadas siembran Maíz y que la mayor parte de esta producción es para su autoconsumo. El ingreso promedio por familia, que pertenece a las comunidades evaluadas es de ¢972.73, lo que no les permite iniciar nuevos proyectos de cultivos. El financiamiento recibido, no es suficiente por lo que recurren a la venta de animales domésticos para complementar el recurso financiero para realizar el cultivo. Al analizar los resultados se concluye que: No existe orientación para determinar los cultivos a sembrar, y todas las comunidades se dedican a la siembra de los mismos cultivos, al realizar la venta del excedente de los productos agrícolas cosechados lo hacen simultáneamente y en forma individual, generando una oferta mayor que la demanda, lo que hace disminuir los precios de los productos. Lo anterior permitió plantear lo siguiente: las comunidades deben priorizar los cultivos de tal forma que les permita diversificar los cultivos a cada una y de esta forma evitar que la oferta generada al momento de la venta sea mayor que la demanda, ya que tiende a bajar los precios. Así mismo la comercialización de la cosecha debe hacerse en forma conjunta y lograr de esta manera mejores precios en la negociación de los productos. También, las comunidades deben buscar el financiamiento complementario o total, aplicando a los diferentes programas especiales tales como: agrícolas, pecuarios y Programa de Micro y pequeña Empresa, ofrecidos por el Banco Multisectorial de Inversiones a través de la Banca Comercial. En el tercer capítulo se presenta la propuesta de las líneas de crédito que se pueden ofrecer para incentivar la producción de nuevos cultivos, generar mayor rendimiento por manzana cultivada para los ya establecidos y además una propuesta de las tasas de interés a cobrar por dichos créditos. Se presenta además una propuesta de organización de la unidad de créditos para efecto de realizar un mayor control y recuperación de los préstamos. Se presenta el procedimiento de otorgamiento de créditos y el procedimiento para su recuperación. También se incluye la clasificación de la cartera de préstamos y de usuarios de créditos, en cuanto a morosidad, a efecto de ofrecerles un esquema de refinanciamiento o reestructuración de pago.

Propuesta de un manual de procedimientos de control interno para el cumplimiento de obligaciones tributarias de las asociaciones, fundaciones y corporaciones de utilidad pública sin fines de lucro de El Salvador.

En la actualidad la mayoría de las Asociaciones, Fundaciones y Corporaciones de utilidad pública sin fines de lucro de El Salvador, no poseen un documento que sirva de guía para el cumplimiento de las obligaciones tributarias que ayuden a minimizar el riesgo por incumplimientos a la legislación tributaria. Las Asociaciones, Fundaciones y Corporaciones de utilidad pública sin fines lucro tienen que cumplir con las obligaciones formales y sustantivas, en lo referente a las regulaciones de la Ley de Impuesto Sobre la Renta, la Ley de Impuesto a la Transferencia de Bienes Muebles y a la Prestación de Servicios, Código Tributario, sus respectivos reglamentos, las reformas a las Leyes tributarias a la fecha y la Ley de Asociaciones y Fundaciones de Utilidad Pública. Dichas instituciones no cuentan con un manual de procedimientos de control interno de cumplimiento de obligaciones formales y sustantivas para dar cumplimiento a la normativa tributaria vigente y contribuir a que dichas Instituciones desarrollen sus actividades de una forma ordenada y organizada a través de una adecuada aplicación de Control Interno que contenga descritos de forma detallada y sistemáticamente los procedimientos, así como también la asignación de responsabilidades al personal involucrado en la realización de las diferentes actividades administrativas. Documento que la mayoría de las instituciones no poseen y que sería conveniente proponer, a efecto de poder subsanar aquellas deficiencias que puedan ocasionar incumplimientos en la aplicación de las leyes tributarias. Por lo que el presente trabajo está enfocado a diseñar una propuesta de un manual de procedimientos de control interno de cumplimiento de obligaciones tributarias como una herramienta para ser aplicada por la Dirección General de las Asociaciones, Fundaciones y Corporaciones de utilidad pública sin fines de lucro de El Salvador en la cual al mismo tiempo se dan a conocer el impacto legal y económico en el entorno de trabajo de las Instituciones de manera directa e indirectamente, ya sea por la normativa que existe en la actualidad así como también las diferentes reformas tributarias que le son aplicables.

Evaluación financiera del uso de gas licuado de petróleo (GLP) en empresas dedicadas al transporte de carga terrestre.

Las empresas de transporte de carga terrestre del país son parte de uno de los sectores productivos más importantes, que contribuyen en la economía y en el producto interno bruto (PIB), a través de las operaciones requeridas para su actividad. Así mismo, influye en los costos de los bienes que se movilizan desde su lugar de embarque hacia su destino, mediante el cobro de la tarifa del servicio de transporte y/o logística. El origen de esta investigación radica en la incidencia del alza de los precios de los combustibles en los costos operativos de las empresas dedicadas al transporte de carga terrestre nacional, y la decisión de estas; entre incrementar el importe de la prestación, afectando el nivel de competitividad que se tiene en el mercado o absorber las variaciones provocando la disminución del margen de ganancias. El objetivo de este trabajo es brindar información referente al uso del recurso energético alternativo llamado gas licuado de petróleo (GLP) para automotores, que disminuya significativamente los costos de operación del sector de transporte de carga terrestre en el país y contribuya de esta manera en la competitividad brindando precios rentables sin sacrificar sus utilidades. Además, dar a conocer la legislación, los aspectos técnicos de instalación, mantenimiento, el análisis del ahorro generado y el valor de la inversión. Con el propósito que los empresarios de dicho sector puedan tomar la decisión, de invertir en el proyecto del uso del recurso energético alternativo GLP. El desarrollo de la investigación se enfocó en las empresas dedicadas al transporte de carga terrestre ubicadas en el departamento de San Salvador, municipio de San Salvador. Formando un universo de 66 empresas y de las que se tomó una muestra de 32. La encuesta fue la herramienta de investigación utilizada para entrevistar a los empresarios y/o responsables del área contable financiera, por medio de preguntas relevantes para la comprobación de la problemática y la ampliación del estudio, las cuales se encuentran tabuladas y con su correspondiente análisis. Los resultados obtenidos permitieron elaborar un diagnóstico, el cual determina que las empresas han visto afectados sus costos de operación de una forma representativa, principalmente por el incremento de los precios de los combustibles, este dato lo reportan por medio del análisis financiero que de forma periódica llevan a cabo. También los empresarios poseen información significativa de algunas opciones para el ahorro en los carburantes, y además se evidencia la necesidad de un documento completo que les brinde el conocimiento de una alternativa para enfrentar la problemática mencionada. En conclusión, al ejecutar el estudio y al realizar el análisis financiero de los ahorros generados a partir de la instalación del sistema de conversión combustión Diesel – Gas Licuado de Petróleo (GLP) en los equipos de transporte de carga terrestre, se observa una disminución sustancial de los costos operativos de la empresa permitiendo mayores ganancias y una mejor competitividad del negocio. Por lo tanto, se recomienda sean tomados en cuenta los resultados de esta investigación por parte de los empresarios de dicho sector para que les sirva de apoyo en la evaluación y toma de mejores decisiones.

Propuesta de un sistema de control interno contable aplicable a los Consejos directivos escolares de los centros educativos públicos.

El objetivo general trazado en la realización del trabajo de investigación, consiste en brindar a los Consejos Directivos Escolares (C.D.E.) específicamente a los de educación media del área metropolitana de San Salvador, el diseño de un Sistema de Control Interno Contable, que muestre la forma en que los miembros de los Consejos Directivos deben administrar y controlar los recursos financieros. El desarrollo y contenido del trabajo se llevó a cabo por medio de una investigación realizada en las instituciones educativas al igual que en la unidad de Auditoría Interna del Ministerio de Educación, la cual permitió, conocer las deficiencias existentes en los Consejos Directivos, dicha investigación ayudó a efectuar un diagnóstico y poder así determinar la necesidad que tienen las administraciones escolares de contar con un Sistema de Control Interno Contable que les ayude en el desarrollo de su trabajo en lo que respecta al control y administración de los recursos financieros. La investigación preliminar es de naturaleza teórica en lo que respecta a la historia del control interno a nivel mundial y nacional al igual que las generalidades del mismo, además, se presentan conceptos y aspectos generales de los Consejos Directivos Escolares. La metodología utilizada para el desarrollo del trabajo fue enfocar el estudio en el área geográfica de San Salvador, es así como el universo quedó constituido por 23 instituciones. Para la obtención de la información se elaboró un cuestionario el cual se dividió en dos áreas: Generalidades de los C.D.E., Los Recursos Financieros y la Adquisición de Bienes y Servicios. Los resultados obtenidos de la investigación fueron tabulados y presentados gráficamente con su respectiva interpretación. Los resultados obtenidos sirvieron de base para la elaboración del Sistema de Control Interno Contable. Al final del documento se presentan las conclusiones y las recomendaciones del trabajo de investigación con un breve comentario sobre las mismas.

Diseño de un vector no viral basado en nanopartículas lipídicas para el tratamiento de la hepatitis C mediante ARN de interferencia

199 p.

Implementación del sistema contable e identificación de centros de costos, aplicable a la técnica de la rizipisicicultura, como una alternativa para los agricultores de la Asociación de Regantes de Atiocoyo Sur (ARAS)

A partir del año 1,996, en El Salvador se inició el Programa de Fortalecimiento a las Asociaciones de Regantes de Atiocoyo Sur, en busca de mejorar el rendimiento en su producción, a través de la implementación de una nueva técnica de rizipiscicultura, la cual consiste en la combinación del cultivo de arroz y peces. Debido a que es una nueva forma de cultivo es necesario crear y mejorar los controles existentes de la inversión en la producción de arroz y peces, que desarrollan los agricultores, a fin de reducir costos y optimizar los recursos existentes, así como también, definir los Centros de Costos de la rizipiscicultura y presentarla como una alternativa de producción para el aprovechamiento máximo de recursos. El tipo de estudio que se realizó, tuvo un enfoque hipotético deductivo, el cual es un instrumento para el desarrollo de investigaciones llamado también cuantitativo, ya que este permitió relacionar la investigación bibliográfica y de campo. Dicha indagación se llevó a cabo en la Asociación de Agricultores del Distrito de Riego de Atiocoyo Sur, dedicado al cultivo de la tilapia y arroz en El Salvador. Al tabular y analizar los datos obtenidos de las encuestas y reforzándolas con las entrevistas se determinó mediante el diagnostico que los agricultores de Atiocoyo Sur dedicados a la producción de arroz y peces no tienen definido un modelo de centros de costos que les permita identificar las erogaciones efectuadas durante el desarrollo del cultivo por el hecho de no llevar contabilidad formal, ya que desconocen en cierta medida, la adecuada asociación contable que debe hacerse con respecto a las actividades realizadas durante las fases del cultivo. Además el producción de arroz y peces se desarrolla de manera separada utilizando para esto gran cantidad de recursos, generando elevación de costos. Por lo anterior, como aporte social del grupo se elaboró una propuesta que coopere a desarrollar un sistema contable y un modelo de centros de costos aplicados al cultivo combinado de arroz y peces que ayude a mejorar los controles de la inversión.

Targeting microRNAs involved in the BDNF signaling impairment in neurodegenerative diseases

Neurodegenerative diseases are becoming an ever-increasing problem in aging populations. Low levels of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) have previously been associated with the pathogenesis of numerous neurodegenerative diseases. Recently, microRNAs (miRNAs) have been proposed as potential novel therapeutic targets for treating various diseases of the central nervous system (CNS), and interestingly, few studies have reported several miRNAs that downregulate the expression levels of BDNF. However, substantial challenges exist when attempting to translate these findings into practical anti-miRNA therapeutics, especially when the targets remain inside the CNS. Thus, in this review, we summarize the specific molecular mechanisms by which several miRNAs negatively modulate the expressions of BDNF, address the potential clinical difficulties that can be faced during the development of anti-miRNA-based therapeutics and propose strategies to overcome these challenges.

Characteristics of microRNAs and their potential relevance for the diagnosis and therapy of the acute respiratory distress syndrome: from bench to bedside

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a complex disease associated with high morbidity and mortality. Biomarkers and specific pharmacologic treatment of the syndrome are lacking. MicroRNAs (miRNAs) are small (∼19–22 nucleotides) noncoding RNA molecules whose function is the regulation of gene expression. Their uncommon biochemical characteristics (eg, their resistance to degradation because of extreme temperature and pH fluctuations, freeze-thaw cycles, long storage times in frozen conditions, and RNAse digestion) and their presence in a wide range of different biological fluids and the relatively low number of individual miRNAs make these molecules good biomarkers in different clinical conditions. In addition, miRNAs are suitable therapeutic targets as their expression can be modulated by different available strategies. The aim of the present review is to offer clinicians a global perspective of miRNA, covering their structure and nomenclature, biogenesis, effects on gene expression, regulation of expression, and features as disease biomarkers and therapeutic targets, with special attention to ARDS. Because of the early stage of research on miRNAs applied to ARDS, attention has been focused on how knowledge sourced from basic and translational research could inspire future clinical studies.

Reproductive aspects of the oceanic whitetip shark, Carcharhinus longimanus (Elasmobranchii: Carcharhinidae), in the equatorial and southwestern Atlantic Ocean

The present study sought to study the reproductive biology of the oceanic whitetip shark, Carcharhinus longimanus, in the equatorial and southwestern Atlantic Ocean. A total of 234 specimens were collected as bycatch during pelagic longline fisheries targeting tunas and swordfish, between December 2003 and December 2010. The fishing area was located between latitudes 10N and 35S and longitudes 3E and 40W. Of the 234 individuals sampled, 118 were females (with sizes ranging from 81 to 227 cm TL, total length) and 116 males (ranging from 80 to 242 cm TL). The reproductive stages of the females were classed as immature, mature, preovulatory and pregnant, while males were divided into immature, maturing and mature. The size at maturity for females was estimated at 170.0 cm TL, while that for males was between 170.0 and 190.0 cm TL. Ovarian fecundity ranged from 1 to 10 follicles and uterine fecundity from 1 to 10 embryos. The reproductive cycle of this species is most likely biennial, with parturition occurring once every two years.

Bioenergetics of cancer cells in anoxia and role of the miRNAs in melanoma resistance to targeted therapies

Tumours are characterized by a metabolic rewiring that helps transformed cells to survive in harsh conditions. The endogenous inhibitor of the ATP-synthase IF1 is overexpressed in several tumours and it has been proposed to drive metabolic adaptation. In ischemic normal-cells, IF1 acts limiting the ATP consumption by the reverse activity of the ATP-synthase, activated by ΔΨm collapse. Conversely, IF1 role in cancer cells is still unclear. It has been proposed that IF1 favours cancer survival by preventing energy dissipation in low oxygen availability, a frequent condition in solid tumours. Our previous data proved that in cancer cells hypoxia does not abolish ΔΨm, avoiding the ATP-synthase reversal and IF1 activation. In this study, we investigated the bioenergetics of cancer cells in conditions mimicking anoxia to evaluate the possible role of IF1. Data obtained indicate that also in cancer cells the ΔΨm collapse induces the ATP-synthase reversal and its inhibition by IF1. Moreover, we demonstrated that upon uncoupling conditions, IF1 favours cancer cells growth preserving ATP levels and energy charge. We also showed that in these conditions IF1 favours the mitochondrial mass renewal, a mechanism we proposed driving apoptosis-resistance. Cancer adaptability is also associated with the onset of therapy resistance, the major challenge for melanoma treatment. Recent studies demonstrated that miRNAs dysregulation drive melanoma progression and drug-resistance by regulating tumour-suppressor and oncogenes. In this context, we attempted to identify and characterize miRNAs driving resistance to vemurafenib in patient-derived metastatic melanoma cells BRAFV600E-mutated. Our results highlighted that several oncogenic pathways are altered in resistant cells, indicating the complexity of both drug-resistance phenomena and miRNAs action. Profiling analysis identified a group of dysregulated miRNAs conserved in vemurafenib-resistance cells from distinct patients, suggesting that they ubiquitously drive drug-resistance. Functional studies performed with a first miRNA confirmed its pivotal role in resistance towards vemurafenib.

Impact of Glycosyltransferases on the Phenotype, Signaling and Transcriptome of Colorectal Cancer Cell Lines. Focus on the role of glycosyltransferases B4GALNT2 and FUT6 and their cognate Sda and sLex antigens

In colorectal cancer (CRC), two carbohydrate structures are modulated: the Sda antigen, synthesized by B4GALNT2, and sLex antigen, mainly synthesized by FUT6. sLex antigen is often overexpressed and associated with worse prognosis; B4GALNT2/Sda antigen are dramatically downregulated but their role in tumor progression and development is not fully clear. TCGA interrogation revealed a dramatic down-regulation of B4GALNT2 mRNA in CRC, compared with normal samples. Patients with higher B4GALNT2 mRNA in CRC samples displayed longer survival. Yet, methylation and miRNA expression play a relevant role in B4GALNT2 downregulation in CRC. To clarify the mechanisms linking the B4GALNT2/Sda expression level to CRC phenotype, three different CRC cell lines were modified to express B4GALNT2: LS174T cell line, in which the constitutively expressed sLex antigen was partially replaced by Sda; SW480/SW620 pair, both lacking Sda and sLex antigens. In LS174T cells, the expression of B4GALNT2 reduced the ability to grow in poor adherence conditions and the expression of ALDH, a stemness marker. In SW620 cells, B4GALNT2 expression impacted on the main aspects of malignancy. In SW480 cells the expression of B4GALNT2 left unchanged the proliferation rate and the wound healing ability. To clarify the impact of sLex on CRC phenotype, the SW480/SW620 pair were permanently transfected to express FUT6 cDNA. In both cell lines, overexpression of FUT6/sLex boosted the clonogenic ability in standard growth conditions. Conversely, the growth in soft agar and the capacity to close a wound were enhanced only in SW620 cells. Transcriptome analysis of CRC cell lines transfected either with B4GALNT2 or FUT6 showed a relevant impact of both enzymes on gene expression modulation. Overall, current data may help to personalize therapies for CRC patients according to the B4GALNT2 levels and support a causal effect of this glycosyltransferase on reducing malignancy independently of sLex inhibition.

Predictive And Prognostic Role Of Biological Markers In Neuroendocrine Neoplasia And Evaluation Of Activity And Safety Of Second Line Treatments In Neuroendocrine Carcinoma Patients

BACKGROUND Neuroendocrine neoplasia (NEN) are divided in well differentiated G1,G2 and G3 neuroendocrine tumors (NETs) and G3 neuroendocrine carcinomas (NECs). For the latter no standard therapy in second-line is available and prognosis is poor. METHODS Primary aim was to evaluate new prognostic and predictive biomarkers (WP1-3). In WP4 we explored the activity of FOLFIRI and CAPTEM as second-line in NEC patients in a multicenter non-comparative phase II trial RESULTS In WP1-2 we found that 4 of 6 GEP-NEC patients with a negative 68Ga-PET/CT had a loss of expression of RB1. In WP3 on 47 GEP-NENs patients the presence of DLL3 in 76.9% of G3 NEC correlate with RB1-loss (p<0.001), negative 68Ga-PET/CT(p=0.001) and a poor prognosis. In the WP4 we conducted a multicenter non-comparative phase II trial to explore the activity of FOLFIRI or CAPTEM in terms of DCR, PFS and OS given as second-line in NEC patients. From 06/03/2017 to 18/01/2021 53 out of 112 patients were enrolled in 17 of 23 participating centers. Median follow-up was 10.8 (range 1.4 – 38.6) months. The 3-month DCR was 39.3% in the FOLFIRI and 32.0 % in the CAPTEM arm. The 6-months PFS rate was 34.6% ( 95%CI 17.5-52.5) in FOLFIRI and 9.6% (95%CI 1.8-25.7) in CAPTEM group. In the FOLFIRI subgroup the 6-months and 12-months OS rate were 55.4% (95%CI 32.6-73.3) and 30.3% (CI 11.1-52.2) respectively. In CAPTEM arm the 6-months and 12-months OS rate were 57.2% (95%34.9-74.3) and 29.0% (95%10.0-43.3). The miRNA analysis of 20 patients compared with 20 healthy subjects shows an overexpression of miRNAs involved in staminality , neo-angiogenesis and mitochontrial anaerobic glycolysis activation. CONCLUSION WP1-3 support the hypothesis that G3NECs carrying RB1 loss is associated with a DLL3 expression highlighting a potential therapeutic opportunity. Our study unfortunately didn’t met the primary end–point but the results are promising

Role of non-coding RNA alterations in melanoma

Cutaneous melanoma (CM) is a potentially lethal form of skin cancer and its most important histopathologic factor for staging is Breslow thickness (BT). Its correct determination is fundamental for pathologists. A deeper understanding of the molecular processes guiding CM pathogenesis could improve diagnosis, treatment and prognosis. MicroRNAs (miRNAs) play a key role in CM biology. The firs aim was to investigate miRNA expression in reference to BT assessment. We found that the combined miRNA expression of miR-21-5p and miR-146a-5p above or below 1.5 was significantly associated with overall survival and successfully identified all superficially spreading melanoma (SSM) patients with relapsing suggesting that the combined assessment of these miRNAs expression could aid in SSM staging. Secondly, we focus on multiple primary melanoma (MPM) patients, which develop multiple primary melanomas in their lifetime, and represent a model of high-risk CM occurrence. We explored the miRNome of single CM and MPM: CM and MPM present several dysregulated miRNAs, including key miRNAs involved in epithelial-mesenchymal transition. A different miRNA profile was observed between 1st and 2nd melanoma from the same patient. MiRNA target analysis revealed a more differentiated and less invasive status of MPMs compared to CMs. This characterization of the miRNA regulatory network of MPMs highlights molecular features differentiating this subtype from CM. Recently, NGS experiments revealed the existence of miRNA variants (isomiRs) with different length and sequence. We identified a shorter 3’isoform as tenfold over-represented compared to the canonical form of miR-125a-5p. Target analysis revealed that miRNA shortening could change the pattern of target gene regulation. Finally, we study miRNA and isomiR dysregulation in benign nevi (BN) and CM and in CM and melanoma metastasis. The reported non-random dysregulation of specific isomiRs contributes to the understanding of the complex melanoma pathogenesis and serves as the basis for further functional studies.

Analysis of extracellular vesicles from patients with advanced pancreatic cancer identifies miRNAs with predictive value for treatment with gemcitabine + nab-paclitaxel

Pancreatic cancer (PC) is the seventh leading cause of cancer death. Despite recent therapy advancements, 5-year survival is 11%. Resistance to therapy is common, and no predictive factors, except for BRCA1/2 and PALB2 mutations, can drive treatment selection. Based on the easy isolation of extracellular vesicles (EVs) from blood and the role of EV-borne miRNAs in chemoresistance, we analyzed EVs and their miRNA content in order to identify predictive factors. First, we analyzed samples from 28 PC patients and 7 healthy subjects, in order to establish methods for isolation and analysis of EVs and their miRNA content. We observed a significantly different expression of 28 miRNAs, including oncogenic or tumor suppressor miRNAs, showing the ability of our approach to detect candidate biomarkers. Then, we analyzed samples of 21 advanced PC patients, collected before first-line treatment with gemcitabine + nab-paclitaxel, and compared findings in responders and non-responders. EVs have been analyzed with Nanoparticle tracking analysis, flow cytometry and RNA-Seq; then, laboratory results have been matched with clinical data. Nanoparticle tracking analysis did not show any significant difference. Flow cytometry showed a lower expression of SSE4 and CD81 in responders. Finally, miRNA analysis showed 25 upregulated and 19 downregulated miRNAs in responders. In particular, in responders we observed upregulation of miR-141-3p, miR-141-5p, miR-200a-3p, miR-200b-3p, miR-200c-3p, miR-375-3p, miR-429, miR-545-5p. These miRNAs have targets with a previously reported role in PC. In conclusion, we show the feasibility of the proposed approach to identify EV-derived biomarkers with predictive value for therapy with gemcitabine + nab-paclitaxel in PC. Our findings highlight the possibility to exploit liquid biopsy for personalized treatment in PC, in order to maximize chances of response and patients’ outcome. These findings are worthy of further investigation: in the same setting, with different chemotherapy schedules, and in different disease settings such as preoperative therapy.

Understanding the role of microglial extracellular vesicles (EVs) in neuroinflammation spreading: an in vitro study

Neuroinflammation is a crucial pathogenic mechanism that commonly underlies most neurodegenerative diseases. Microglia, the immune cells of the brain, play a critical role that changes depending on the stage of neuropathology: at early phases of brain diseases microglia display the neuroprotective phenotype which is switched to the classically activated pro-inflammatory subtype at later stages, contributing to neurodegeneration. The microglial phenotypic shift is characterized by a change in the release of bioactive molecules both soluble and through extracellular vesicles. Our in vitro studies aim to understand whether different types of activation could determine change in vesicles content, in particular miRNAs, and whether this could influence the activation state of control microglial cells. Microglial polarization has been induced in two different in vitro models: N9, microglial murine cell line, have been treated by using LPS towards a proinflammatory/neurotoxic phenotype or ATP towards antinflammatory/neuroprotective status; HMC3, human microglial cell line, have been activated using IFN-+ATP. We demonstrated that conditioned media/exosomes obtained from donor microglia were able to promote a pro-inflammatory phenotype in control cells, leading us to prove the existence of a neuroinflammation spreading process mediated by extracellular vesicles of microglia with a crucial role of miRNAs. Increased expression of miRNA-34a observed in N9 model underlines a possible contribution in the diffusion of proinflammatory activation of microglia. Thus, we tried to downregulate miR-34a expression using cleaving sequences of anti-mir-34a DNAzyme delivered by DNA nanostructures aimed to confirm the involvement of miR-34a in microglia polarization towards the neurotoxic phenotype. In conclusion, this thesis work reveal a new inflammation spreading mechanism that involves release of vesicles containing specific cargos by donor polarized microglia, particularly miRNAs, able to influence the phenotypic shift in unpolarized microglia: this process deserves to be deeply investigated as potential therapeutic target to counteract neurodegenerative diseases.