Development and evaluation of antibody-MHC/peptide conjugates as a new form of cancer immunotherapy

Summary One of the major goals of cancer immunotherapy is the induction of a specific and effective antitumor cytotoxic T lymphocyte (CTL) response. However, the downregulation of Class I Major Histocompatibility Complexes (MHC) expression and the low level of tumor peptide presentation on tumor cell surface, ás well as the low immunogenicity of tumor specific antigens, limit the effectiveness of anti-tumor CTL responses. On the other hand, monoclonal antibodies, which bind with high affinity to tumor cell surface markers, are powerful tumor targeting tools. However, their capacity to .kill cancer cells is limited and mAb cancer treatments usually require the addition of different form of chemotherapy. The new cancer immunotherapy strategy described herein combines the advantage of the high tumor targeting capacity of monoclonal antibodies (mAb) with the powerful cytotoxicity of CD8 T lymphocytes directed against highly antigenic peptide-MHC complexes. Monoclonal antibody Fab fragments directed against a cell surface tumor associated antigen (TAA) are chemically coupled to soluble MHC class I complexes carrying a highly antigenic peptide. Antibody guided targeting and oligomerization of numerous antigenic class IMHC/peptide complexes on tumor cell surfaces can redirect the cytotoxicity of peptide-specific CD8 T cells towards target cancer cells. After the description of the production of murine anti-tumor xMHC/peptide conjugates in the first part of this thesis, the therapeutic potential of such conjugates were sequentially investigated in different syngeneic tumor mouse models. As a first proof of principle, transgenic OT-1 mice and later CEA transgenic C57BL/6 (B6) mice, adoptively transferred with OT-1 spleen cells and immunized with ovalbumin, were used as a model of high frequency of ova peptide specific T cells. In these mice, growth inhibition and regression of palpable colon carcinoma expressing CEA, were obtained by systemic injection of anti-CEA Fab/H-2Kb/ova peptide conjugates. Next, LCMV virus and influenza virus infection of B6 mice were used as viral models to redirect natural antiviral CTL responses to tumors via conjugates loaded with viral peptides. We showed that in mice infected with the LCMV virus, subcutaneous CEA-expressing tumor cells were inhibited by the H2Db/GP33 restricted anti-viral CTL response when preincubated before grafting with anti-CEA Fab-H-2Db/GP33 peptide conjugates. In mice infected with the influenza virus, lung metastases expressing the HER2 antigen were inhibited by the H-2Db/NP366 restricted CTLs response when preincubated before injection with anti-Her2 Fab-H-2Db/NP366 peptide conjugates. In the last chapter, the stability of the peptide in the anti-CEA Fab-H-2Db/GP33 conjugates was improved by the covalent photocross-link of the GP33 peptide in the H-2Db MHC groove. Thus, LCMV immune mice could reject CEA expressing tumors when treated with systemic injections of anti-CEA FabH-2Db/GP33 cross-linked conjugates. These results are encouraging for the potential application of this strategy in clinic. Such conjugates could be used alone in patients boosted by the relevant virus, or used in combination with existing T cell based ìmmunotherapy. Résumé Une des principales approches utilisées dans l'immunothérapie contre le cancer consiste en l'induction d'une réponse T cytotoxique (CTL) spécifiquement dirigée contre la tumeur. Cependant, le faible niveau d'expression des complexes majeurs d'histocompatibilité de classe I (CMH I) et de présentation des peptides tumoraux à la surface des cellules cancéreuses ainsi que la faible immunogenicité des antigens tumoraux, limitent l'efficacité de la réponse CTL. D'autre part,. l'injection d'anticorps monoclonaux (mAb), se liant avec une haute affinité aux marqueurs de surface des cellules tumorales, a fourni des résultats cliniques encourageant. Cependant l'efficacité de ces mAbs contre des tumeur solides reste limitée et necessite souvent l'addition de chimiotherapie. La nouvelle stratégie thérapeutique décrite dans ce travail associe le fort pouvoir de localisation des anticorps monoclonaux et le fort pouvoir cytotoxique des lymphocytes T CD8+. Des fragments Fab d'anticorps monoclonaux, dirigés contre des antigènes surexprimés à la surface de cellules tumorales, ont été chimiquement couplés à des CMH I solubles, portant un peptide fortement antigénique. Le ciblage et l'oligomérisation à la surface des cellules tumorales de nombreux CMH I présentant un peptide antigénique, va réorienter la cytotoxicité des cellules T CD8+ spécifiques du peptide présenté, vers les cellules tumorales cibles. Après une description de la production de conjugé anti-tumeur x CMH Upeptide dans la première partie de cette thèse, le potentiel thérapeutique de tels conjugés a été successivement étudiés in vivo dans différents modèles de tumeur syngénéiques. Tout d'abord, des souris OT-1 transgéniques, puis des souris C57BL/6 (B6) transférées avec des cellules de rate OT-1 puis immunisées avec l'ovalbumine, ont été employées comme modèle de haute fréquence de cellules T CD8+ spécifiques du peptide ova. Chez ces souris, l'inhibition de la croissance et la régression de nodules palpables de carcinomes exprimant l'antigène caccino embryonaire (ACE), ont été obtenues par l'injection systémique de conjugés anti-ACE Fab/H-2Kb/ova. Par la suite, l'infection de souris B6 par le virus LCMV et par le virus de la grippe, ont été utilisés comme modèles viraux pour redirigées des réponses anti-virales naturelles vers les tumeurs, en utilisant des conjugés chargés avec des peptides viraux. Nous avons montré que .chez les souris infectées par le LCMV, la croissance de carcinome sous-cutané est empêchée par la réponse anti-virale, spécifique du complexe H2Db/GP33, lorsque les cellules tumorales greffées sont pré-incubées avec des conjugés anti-CEA Fab-H-2Db/GP33. Dans le cas de souris infectées par le virus de la grippe, la métastatisation de mélanomes pulmonaires exprimant l'antigène HER-2 est inhibée par la réponse anti-virale spécifique du complexe H-2Db/NP366, après pré-incubation des cellules tumorales avec des conjugés anti-Her2 FabxH-2Db/NP366. Dans le dernier chapitre, la liaison covalente du peptide GP33 dans le complexe H-2Db a amélioré la stabilité des conjugés correspondants et a permis le traitement systémique de souris greffées avec des tumeurs exprimant l'ACE et infectées par le LCMV. L'ensemble de ces résultats sont encourageant pour l'application de cette strategie en clinique. De tels conjugués pourraient être employés seuls ou en combinaison avec des protocols d'immunisation peptidique anti-tumoral. Résumé pour un large public Dans les pays industrialisés, le cancer se situe au deuxième rang des causes de mortalité après les maladies cardiovasculaires. Les principaux traitement de nombreux cancers sont la chirurgie, en association avec la radiothérapie et la chimiothérapie. L'immunothérapie est l'une des nouvelles approches mises en oeuvre pour la lutte contre le cancer. Elle peut être humorale, et s'appuyer alors sur la perfusion d'anticorps monoclonaux dirigés contre des antigènes tumoraux, par exemple les anticorps dirigés contre les protéines oncogéniques Her-2/neu dans le cancer du sein. Ces anticorps ont le grand avantage de spécifiquement se localiser à la tumeur et d'induire la lyse ou d'inhiber la proliferation des cellules tumorales exprimant l'antigène. Certains sont utilisés en clinique pour le traitement de lymphomes, de carcinomes de l'ovaire et du sein ou encore de carcinomes metastatiques du côlon. Cependant l'efficacité de ces anticorps contre des tumeurs solides reste limitée et les traitements exigent souvent d'être combiner avec de la chimiothérapie. L'immunothérapie spécifique peut également être cellulaire et reposer sur une démarche de type vaccinal, consistant à générer des lymphocytes T cytotoxiques (cytotoxic T lymphocytes :CTL) capables de détruire spécifiquement les cellules malignes. Pour obtenir une réponse lymphocytaire T cytotoxique antitumorale, la cellule T doit reconnaître un antigène associé à la tumeur, présenté sous forme de peptide dans un complexe majeur d'histocompatibilité de classe I. Or les cellules tumorales ne presentent pas efficacement les peptides antigèniques, car elles se caractérisent par une diminution ou une absence d'expression des antigènes d'histocompatibilité de classe I, des molécules d'adhésion et des cytokines costimulatrices, et par une faible expression des antigènes associés aux tumeurs. C'est en partie pourquoi, malgré l'induction de fortes réponses CTL specifiquement dirigés contre des antigens tumoraux, les régressions tumorales obtenus grace à ces vaccinations sont relativement rares. Alors que chez les personnes atteintes du cancer on observe l'instauration d'une tolérance immunitaire vis-à-vis de la tumeur, à l'inverse, notre systeme immunitaire reste parfaitement capable de combattre des infection virales classiques, tels que la grippe, qui font aussi appel à une réponse T cytotoxique. Notre groupe de recherche a donc eu l'idee de développer une nouvelle approche thérapeutique où une réponse immunitaire anti-virale très efficace serait redirigée vers les tumeurs par des anticorps monoclonaux. Concrètement, nous avons chimiquement couplés des fragments d'anticorps monoclonaux dirigés contre des antigènes surexprimés à la surface de cellules tumorales, à des CMH I portant un peptide viral antigénique. Les cellules tumorales, ciblées par le fragment anticorps et couvertes d' antigènes viraux présentés par des molécules de CMH I, peuvent ainsi tromper les lymphocytes cytotoxiques anti-viraux qui vont détruire les cellules tumorales comme si elles étaient infectées par le virus. Suite à des résultats prometteurs obtenus in vitro avec différents conjugués anticorps-CMH humain de type HLA.A2/peptide Flu, le but du projet était de tester in vivo des conjugués anticorps-CMH I murins sur des modèles expérimentaux de souris. Tout d'abord, des souris transgéniques pour un recepteur T specifique du peptide ova, puis des transferts adoptifs de ces cellules T specifiques dans des souris immunocompétentes, ont été choisi comme modèle de haute fréquence des cellules T spécifiques, et ont permi de valider le principe de la strategie in vivo. Puis, deux modèles viraux ont été elaboré avec le virus LCMV et le virus Influenza, pour réorienter des réponses antivirales naturelles vers les tumeurs grâce à des conjugés chargés avec des peptides viraux. Nous avons montré la grande capacité de nos conjugués à rediriger des réponses cytotoxiques vers les tumeurs et inhiber la croissance de tumeurs syngénéiques sous cutanés et pulmonaires. Ces résultats d'inhibition tumorales obtenus dans des souris immunocompétentes, grâce à l'injection de conjugués anticorps xCMH/peptide et réorientant deux réponses antivirales différentes vers deux modèles tumoraux syngeneiques, sont encourageant pour l'application de cette nouvelle stratégie en clinique.

The Smiling Project: development of a new program for gait and balance training

Introduction: The SMILING project, a multicentric project fundedby the European Union, aims to develop a new gait and balance trainingprogram to prevent falls in older persons. The program includes the"SMILING shoe", an innovative device that generates mechanical perturbationwhile walking by changing the soles' inclination. Induced perturbationschallenge subjects' balance and force them to react to avoidfalls. By training specifically the complex motor reactions used to maintainbalance when walking on irregular ground, the program will improvesubjects' ability to react in situation of unsteadiness and reduce theirrisk of falling. Methods: The program will be evaluated in a multicentric,cross-over randomized controlled trial. Overall, 112 subjects (aged≥65 years, ≥1 falls, POMA score 22-26/28) will be enrolled. Subjectswill be randomised in 2 groups: group A begin the training with active"SMILING shoes", group B with inactive dummy shoes. After 4 weeksof training, group A and B will exchange the shoes. Supervised trainingsessions (30 minutes twice a week for 8 weeks) include walkingtasks of progressive difficulties.To avoid a learning effect, "SMILINGshoes" perturbations will be generated in a non-linear and chaotic way.Gait performance, fear of falling, and acceptability of the program willbe assessed. Conclusion: The SMILING program is an innovative interventionfor falls prevention in older persons based on gait and balancetraining using chaotic perturbations. Because of the easy use of the"SMILING shoes", this program could be used in various settings, suchas geriatric clinics or at home.

Development of targeted therapies in advanced gastric cancer: promising exploratory steps in a new era.

PURPOSE OF REVIEW: Many chemotherapeutic drugs, including fluoropyrimidines, platinums, CPT-11, taxanes and adriamycin have single-agent activity in advanced gastric cancer. Although combination chemotherapy has been shown to be more effective than single agents, response rates between 30 and 50% have not fulfilled their promise as progression-free survival from the best combinations ranges between 3 and 7 months and overall survival between 8 and 11 months. The development of targeted therapies in gastric cancer clearly stays behind the integration of these novel agents into new treatment concepts for patients with colorectal cancer. This review summarizes the experience and major recent advances in the development of targeted therapies in advanced gastric cancer. RECENT FINDINGS: Recent publications on targeted therapies in gastric cancer are limited to nonrandomized phase I or II trials. The majority of agents tested were angiogenesis inhibitors or agents targeting the epidermal growth factor receptors epidermal growth factor receptor 1 and HER2. SUMMARY: Adequately powered, randomized phase III trials are necessary to define the clinical role of targeted therapies in advanced gastric cancer. Biomarker studies to correlate with treatment outcomes will be critical to identify patients who benefit most from chemotherapy and targeted therapy.

New IPERS Members Iowa Public Employees’ Retirement System, February 2012

The IPERS plan is a defined benefit pension plan. The lifetime monthly benefit you receive is predictable and stable because it is calculated using a formula. Your benefits grow with you throughout your IPERS-covered employment. As your years of service and salary increase, your IPERS benefits grow too. IPERS, a public agency, was established for the sole purpose of providing a retirement plan to public employees throughout Iowa. As a public agency, IPERS’ goals are aligned with members’. IPERS benefits are designed to supplement personal savings and Social Security benefits in retirement. Benefits also offer financial protection for families in the event of death or disability.

Working in a digital world: new leadership practices for the development of a digital library workforce

Digital library developments are part of a global move in many sectors of society toward virtual work and electronic services made possible by the advances in information technology. This environment requires new attitudes and skills in the workforce and therefore leaders who understand the global changes underlying the new information economy and how to lead and develop such a workforce. This article explores ways to develop human resources and stimulate creativity to capitalize on the immense potential of digital libraries to educate and empower social change. There is a shortage of technically skilled workers and even more so of innovators. Retention and recruitment is one of the greatest obstacles to developing digital library services and information products.

Development of a New Process for Determining Design Year Traffic Demands, TR-528, 2007

Researchers should continuously ask how to improve the models we rely on to make financial decisions in terms of the planning, design, construction, and maintenance of roadways. This project presents an alternative tool that will supplement local decision making but maintain a full appreciation of the complexity and sophistication of today’s regional model and local traffic impact study methodologies. This alternative method is tailored to the desires of local agencies, which requested a better, faster, and easier way to evaluate land uses and their impact on future traffic demands at the sub-area or project corridor levels. A particular emphasis was placed on scenario planning for currently undeveloped areas. The scenario planning tool was developed using actual land use and roadway information for the communities of Johnston and West Des Moines, Iowa. Both communities used the output from this process to make regular decisions regarding infrastructure investment, design, and land use planning. The City of Johnston case study included forecasting future traffic for the western portion of the city within a 2,600-acre area, which included 42 intersections. The City of West Des Moines case study included forecasting future traffic for the city’s western growth area covering over 30,000 acres and 331 intersections. Both studies included forecasting a.m. and p.m. peak-hour traffic volumes based upon a variety of different land use scenarios. The tool developed took goegraphic information system (GIS)-based parcel and roadway information, converted the data into a graphical spreadsheet tool, allowed the user to conduct trip generation, distribution, and assignment, and then to automatically convert the data into a Synchro roadway network which allows for capacity analysis and visualization. The operational delay outputs were converted back into a GIS thematic format for contrast and further scenario planning. This project has laid the groundwork for improving both planning and civil transportation decision making at the sub-regional, super-project level.

Evaluation de la satisfaction des infirmiers(-ères): développement et validation d'un nouvel outil d'analyse [Evaluation of satisfaction of nurses: development and validation of a new analysis tool]

A new device for the analyses of nurses' satisfaction has been developed and validated on two types of general and intensive treatments at the University Hospital in Vaudois, Switzerland. A questionnaire has been elaborated for identifying the variables linked with characteristics of the nurse's work, as well as personal variables of the employer which could have an influence on the level of satisfaction. In identifying the sources of satisfaction and dissatisfaction, it has been possible to propose recommendations and corrective measures in order to improve the level of global satisfaction of the nursing team.

The long non-coding RNA NEAT1 is increased in IUGR placentas, leading to potential new hypotheses of IUGR origin/development.

INTRODUCTION: Intrauterine Growth Restriction (IUGR) is a multifactorial disease defined by an inability of the fetus to reach its growth potential. IUGR not only increases the risk of neonatal mortality/morbidity, but also the risk of metabolic syndrome during adulthood. Certain placental proteins have been shown to be implicated in IUGR development, such as proteins from the GH/IGF axis and angiogenesis/apoptosis processes. METHODS: Twelve patients with term IUGR pregnancy (birth weight < 10th percentile) and 12 CTRLs were included. mRNA was extracted from the fetal part of the placenta and submitted to a subtraction method (Clontech PCR-Select cDNA Subtraction). RESULTS: One candidate gene identified was the long non-coding RNA NEAT1 (nuclear paraspeckle assembly transcript 1). NEAT1 is the core component of a subnuclear structure called paraspeckle. This structure is responsible for the retention of hyperedited mRNAs in the nucleus. Overall, NEAT1 mRNA expression was 4.14 (±1.16)-fold increased in IUGR vs. CTRL placentas (P = 0.009). NEAT1 was exclusively localized in the nuclei of the villous trophoblasts and was expressed in more nuclei and with greater intensity in IUGR placentas than in CTRLs. PSPC1, one of the three main proteins of the paraspeckle, co-localized with NEAT1 in the villous trophoblasts. The expression of NEAT1_2 mRNA, the long isoform of NEAT1, was only modestly increased in IUGR vs. CTRL placentas. DISCUSSION/CONCLUSION: The increase in NEAT1 and its co-localization with PSPC1 suggests an increase in paraspeckles in IUGR villous trophoblasts. This could lead to an increased retention of important mRNAs in villous trophoblasts nuclei. Given that the villous trophoblasts are crucial for the barrier function of the placenta, this could in part explain placental dysfunction in idiopathic IUGR fetuses.

The Development of Weak Signal Concept

Tämän hetken trendit kuten globalisoituminen, ympäristömme turbulenttisuus, elintason nousu, turvallisuuden tarpeen kasvu ja teknologian kehitysnopeus korostavatmuutosten ennakoinnin tarpeellisuutta. Pysyäkseen kilpailukykyisenä yritysten tulee kerätä, analysoida ja hyödyntää liiketoimintatietoa, jokatukee niiden toimintaa viranomaisten, kilpailijoiden ja asiakkaiden toimenpiteiden ennakoinnissa. Innovoinnin ja uusien konseptien kehittäminen, kilpailijoiden toiminnan arviointi, asiakkaiden tarpeet muun muassa vaativatennakoivaa arviointia. Heikot signaalit ovat keskeisessä osassa organisaatioiden valmistautumisessa tulevaisuuden tapahtumiin. Opinnäytetyön tarkoitus on luoda ja kehittää heikkojen signaalien ymmärrystä ja hallintaa sekäkehittää konseptuaalinen ja käytännöllinen lähestymistapa ennakoivan toiminnan edistämiselle. Heikkojen signaalien tyyppien luokittelu perustuu ominaisuuksiin ajan, voimakkuuden ja liiketoimintaan integroinnin suhteen. Erityyppiset heikot signaalit piirteineen luovat reunaehdot laatutekijöiden keräämiselle ja siitä edelleen laatujärjestelmän ja matemaattiseen malliin perustuvan työvälineen kehittämiselle. Heikkojen signaalien laatutekijät on kerätty yhteen kaikista heikkojen signaalien konseptin alueista. Analysoidut ja kohdistetut laatumuuttujat antavat mahdollisuuden kehittää esianalyysiä ja ICT - työvälineitä perustuen matemaattisen mallin käyttöön. Opinnäytetyön tavoitteiden saavuttamiseksi tehtiin ensin Business Intelligence -kirjallisuustutkimus. Hiekkojen signaalien prosessi ja systeemi perustuvat koottuun Business Intelligence - systeemiin. Keskeisinä kehitysalueina tarkasteltiin liiketoiminnan integraatiota ja systemaattisen menetelmän kehitysaluetta. Heikkojen signaalien menetelmien ja määritelmien kerääminen sekä integrointi määriteltyyn prosessiin luovat uuden konseptin perustan, johon tyypitys ja laatutekijät kytkeytyvät. Käytännöllisen toiminnan tarkastelun ja käyttöönoton mahdollistamiseksi toteutettiin Business Intelligence markkinatutkimus (n=156) sekä yhteenveto muihin saatavilla oleviin markkinatutkimuksiin. Syvähaastatteluilla (n=21) varmennettiin laadullisen tarkastelun oikeellisuus. Lisäksi analysoitiin neljä käytännön projektia, joiden yhteenvedot kytkettiin uuden konseptin kehittämiseen. Prosessi voidaan jakaa kahteen luokkaan: yritysten markkinasignaalit vuoden ennakoinnilla ja julkisen sektorin verkostoprojektit kehittäen ennakoinnin struktuurin luonnin 7-15 vuoden ennakoivalle toiminnalle. Tutkimus rajattiin koskemaan pääasiassa ulkoisen tiedon aluetta. IT työvälineet ja lopullisen laatusysteemin kehittäminen jätettiin tutkimuksen ulkopuolelle. Opinnäytetyön tavoitteena ollut heikkojen signaalien konseptin kehittäminen toteutti sille asetetut odotusarvot. Heikkojen signaalien systemaattista tarkastelua ja kehittämistyötä on mahdollista edistää Business Intelligence - systematiikan hyödyntämisellä. Business Intelligence - systematiikkaa käytetään isojen yritysten liiketoiminnan suunnittelun tukena.Organisaatioiden toiminnassa ei ole kuitenkaan yleisesti hyödynnetty laadulliseen analyysiin tukeutuvaa ennakoinnin weak signals - toimintaa. Ulkoisenja sisäisen tiedon integroinnin ja systematiikan hyödyt PK -yritysten tukena vaativat merkittävää panostusta julkishallinnon rahoituksen ja kehitystoiminnan tukimuotoina. Ennakointi onkin tuottanut lukuisia julkishallinnon raportteja, mutta ei käytännön toteutuksia. Toisaalta analysoitujen case-tapausten tuloksena voidaan nähdä, ettei organisaatioissa välttämättä tarvita omaa projektipäällikköä liiketoiminnan tuen kehittämiseksi. Business vastuun ottamiseksi ja asiaan sitoutumiseen on kuitenkin löydyttävä oikea henkilö