1000 resultados para Fígado gorduroso Teses
Resumo:
Constitui interesse emergente em sade pblica avaliar a possibilidade de intoxicao humana por biotoxinas de algas cianofceas, principalmente as hepatotoxinas do grupo das microcistinas. A microcistina, um heptapeptdeo monocclico, produzida principalmente pela cianobactria Microcistis aeruginosa. So caracterizadas por alguns aminocidos variveis, dois deles com uma estrutura no usual que possuem importante papel na hepatotoxidade da microcistina. Apesar do acometimento humano atribudo as microcistinas inclurem gastroenterite, reaes alrgicas ou irritativas, neurotoxicidade, o principal alvo da toxina o fígado. Nos hepatcitos as microcistinas so carreadas pelo sistema transportador do cido biliar, inibindo a atividade da protena fosfatase no citoplasma. A inibio leva a mudanas morfolgicas na membrana plasmtica pela hiperfosforilao de citoqueratinas, e atividade de promoo tumoral pelas protenas hiperfosforiladas. Os mtodos de deteco e quantificao de microcistinas no ambiente incluem a cromatografia lquida, o bioensaio em camundongos e os testes imunoenzimticos. O ltimo vem ganhando destaque pela praticidade e alta sensibilidade.
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os anexos da teses esto disponveis no CD
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O presente trabalho surgiu com dois objectivos principais: avaliar o grau de contaminao, por metais pesados, em produtos hortcolas de duas zonas diferenciadas e avaliar as diferenas de concentraes de musks em diferentes amostras biolgicas. Numa primeira fase, perante os resultados obtidos para os metais pesados nas duas zonas diferenciadas (Vila Nova de Mil Fontes e Carrasqueira) foi possvel avaliar o risco de exposio das duas populaes. Os produtos hortcolas utilizados no estudo do grau de contaminao foram: alfaces, couves, batatas e tomates. Numa tentativa de identificar uma possvel fonte de contaminao foi analisado igualmente a gua utilizada para rega e o solo que rodeava a cultura. O mtodo usado na determinao foi a espectrometria de massa acoplada a plasma induzido (ICP-MS). Foram analisados os seguintes elementos: Mangans, Arsnio, Cdmio, Cobalto, Cobre, Chumbo, Estrncio, Nquel, Crmio, Selnio e Zinco. Houve grandes variaes das concentraes dos elementos entre as duas zonas em que os hortcolas, gua e solo foram colhidos. Em todas as amostras, os elementos maioritrios foram o zinco, o mangans e o estrncio. Nas culturas, o chumbo era o elementos que apresentava concentraes mais baixas. Para a gua utilizada nas regas, a zona da Carrasqueira apresenta concentraes muito baixas comparando com a zona de Vila Nova de Mil Fontes. Todos os valores encontrados nas culturas, na gua e no solo se encontram abaixo dos valores mximos legislados. A anlise de risco, revela situaes de alerta, para um individuo da Carraqueira e quatro individuos de Vila Nova de Mil Fontes, uma vez que para o arsnio a dose diria tolervel segundo a EFSA de 0,30 g/kg/dia e os valores encontrados foram 0,30; 0,33; 0,61; 0,42 e 0,34 g/kg/dia, respectivamente. A determinao de musks em amostras biolgicas, como ostras e mexilhes, salmo (msculo, fígado e gnadas) e enguias de vidro, por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC/MS) recorrendo ao metdo de QuEChERS revelou que o galaxolide e o tonalide foram os analitos maioritrios em todas as amostras. De entre as amostras de ostras e mexilhes, as colhidas na ria de aveiro apresentam concentraes muito superiores para o galaxolide e o tonalide, 13,4 e 2,1 ng/g respectivamente, que as outras analisadas. Nas anlises de salmo foram tidas em conta duas zonas diferenciadas, Nivelle e Bidassoa. Perante os resultados, a zona de bidassoa apresentou menor contaminao de musks nas amostras recolhidas. Por ltimo as anlises s enguias de vidro dopadas permitiu traar a cintica de acumulao de galaxolide e tonalide por parte do organismo e por outro lado identificar o galaxolidone, metabolito resultante do galaxolide.
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As helmintoses em ovinos e bovinos so provocadas principalmente por parasitas dos filos Platyhelminthes e Nematoda. Atualmente esto espalhadas um pouco por todo o mundo, inclusivamente Portugal, desde o Continente Americano (norte e sul) ao continente Asitico, passando pela Europa e algumas regies do continente Africano, estando a sua incidncia relacionada com locais onde existe uma enorme criao de gado. Apesar de a sua prevalncia ser muitas vezes subestimada, esto associados a morbilidade e mortalidade animal, levando a perdas econmicas em exploraes pecurias, e podem tambm constituir um problema de sade pblica para humanos, que geralmente so infetados de forma acidental. Este estudo aborda as trs espcies principais de helmintas parasitas hepticos em bovinos e ovinos em Portugal: E. granulosus, a F. hepatica e o D. dendriticum. O principal objetivo deste estudo estimar a prevalncia destas helmintoses, e a sua distribuio, em animais abatidos em matadouros de Portugal, particularmente em ovinos e bovinos, e perceber se a inspeo visual feita em matadouros suficientemente eficaz para deteo daqueles parasitas, com possveis consequncias para a sade pblica e para estimao de prevalncia. As amostras estudadas foram fígado e pulmo, obtidas em dois matadouros da Regio Centro de Portugal (Leiria e Pedrogo Grande), a partir de ovinos e bovinos aquando do sacrifcio do animal. Foi efetuada a extrao de DNA e posteriormente a amplificao por PCR do gene mitocondrial COI e das regies ITS1 e ITS2 com primers descritos na literatura (LCO1490/HCO2198, JB2/JB4.5, BD1/4S e Dd58SF1/Dd28SR1). Para aumentar a sensibilidade de deteo de DNA dos 3 parasitas estudados e permitir assim efetuar um diagnstico diferencial foram desenhados e testados novos primers, internos aos existentes na literatura, desenvolvendo assim uma tcnica de Nested-PCR. Posteriormente foram purificados e sequenciados alguns produtos de amplificao das reaes de PCR com os primers descritos na literatura e analisados do ponto de vista filogentico. Os resultados obtidos indicaram que os primers descritos na literatura tm a capacidade de amplificar a regio alvo dos parasitas estudados, mesmo na presena de DNA do hospedeiro, e que em nenhuma amostra de ovino e bovino ocorreu a deteo de DNA de quaisquer dos 3 helmintas. A anlise filogentica de produtos de PCR obtidos de amostras portuguesas revelou que as sequncias obtidas eram muito semelhantes a amostras Europeias e foi encontrado um novo hapltipo para a regio ITS1 e ITS2 de F. hepatica na amostra Fasc3 e Fasc4, respetivamente. Os dados obtidos indicam que a prevalncia de D. dendriticum e E. granulosus foi estimada entre 0 e 2% (intervalo de confiana de 0.95). Quanto a F. hepatica, detetou-se uma prevalncia de 1% com uma margem de 0 a 5% (intervalo de confiana de 0.95).
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Apresentamos o caso de uma paciente do sexo feminino, que apresentou quadro de febre hemorrgica da dengue, evoluindo com ictercia e importantes alteraes da coagulao. O diagnstico de dengue foi realizado pela presena de anticorpos IgM antidengue (MAC-ELISA). Esta doena deveria ser considerada no diagnstico diferencial das ictercias febris agudas.
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With this dissertation we aim to analyze the most relevant aspects of the excise duties harmonized regime, considering Community origins, but having also in attention all legal specifications of its implementation in Portugal. The legal regime of excise duties is presented as an ambitious theme, considering the challenge of different branches of law that influence this subject, such as Tax, Economic and Community laws, the inescapable influence of customs procedures, or regarding environmental objectives. In the European context, the harmonization of excise duties was seen as a condition for the implementation of the internal market, contributing to undo secular tax barriers between Member States and, since so, ensure fair competition and free movement of services and goods. Along with VAT, the excise duties harmonization process could represent a potential European tax system, essential for a full and integrated single market. In this context, it is essential to pay special attention to specific characteristics of excise duties regime, such as duty suspension arrangement applicable during the production phase, storage and movement in certain conditions. The growing importance of excise duties, as for revenue or extra-fiscal purposes, recommends new academic studies on this subject, seeking new opportunities and challenges.
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Este trabalho aborda a conceito de desordem psquica na obra de Galeno (129-216). A primeira parte enquadra o pensamento de Galeno na viso da Filosofia e Medicina em vigor no incio do sc. II d.C. De seguida descrevo a concepo Hipocrtica de epilepsia, e a abordagem que Plato desenvolve no Timeu e Fedro acerca da loucura, para de seguida abordar a concepo de doena em Galeno, onde so analisados os conceitos de nosma, diathesis, pathos e energeia. Aps este excurso descrevo o ponto de vista de Galeno acerca da controvrsia sobre a localizao da parte dirigente da alma (hgemonikon) que se dividia entre defensores do encefalocentrismo (Plato, Hipcrates e Herfilo) e do cardiocentrismo (Aristteles e os Esticos). De modo a aprofundar a compreenso de Galeno acerca deste tema descrevo o trabalho anatmico-fisiolgico desenvolvido pelos mdicos Alexandrinos Erasistrato e Herfilo, activos no sec. III a. C., que descobriram, atravs de dissecao de animais e muito provavelmente de humanos, o papel dos nervos e tendes nas atividades cognitivas e sensrio-motoras. Esta foi uma descoberta central para a argumentao de Galeno acerca da interaco mente-corpo assim como para a descrio das desordens psquicas. Posteriormente apresento a metodologia de Galeno no que concerne ao processo de diagnstico e etiologia, essencial para se compreender como possvel aceder a entidades no visveis, como o hgemonikon e as suas diferentes faculdades: imaginao, memria e raciocnio. Por fim, analiso alguns casos clnicos de pacientes afectados por desordens do hgemonikon, a saber: phrenitis, mania e melancolia. Os principais textos objecto de anlise so: Acerca dos Lugares Afectados, Acerca das Teses de Hipcrates e Plato e Que as Faculdades da Alma Seguem as Disposies do Corpo. Todavia, outros textos de Galeno sero convocados consoante a necessidade de analisar os conceitos que me proponho compreender, entre eles Acerca do Mtodo Teraputico e Acerca da Utilidade das Partes.
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Este relatrio descreve as fases essenciais do desenvolvimento de uma proposta para uma Web TV num contexto universitrio e sugere um modelo multimdia baseado num princpio de folksonomia. Este projecto pretende ser uma mais valia na forma como o trabalho acadmico divulgado e partilhado e visa ser um instrumento que d visibilidade ao trabalho desenvolvido numa instituio acadmica, dinamiza a relao entre alunos e professores e torna possvel a publicao dos mesmos para o publico em geral. Foi desenvolvido a pensar nas especificidades do Departamento de Cincias da Comunicao (DCC) da Faculdade de Cincias Sociais e Humanas da Universidade Nova de Lisboa (FCSH-UNL), sobretudo ao nvel dos contedos de media produzidos nos ateliers e cadeiras prticas. Modelo que pode ser aplicado a outras instituies em contextos idnticos. A Web TV representa, no universo dos mdia, um conjunto muito alargado de aplicaes que abrange a publicidade, o divertimento, o jornalismo e o ensino entre outras. O ensino provavelmente a rea em que a Web TV mais pode contribuir como meio privilegiado de divulgao e partilha de informao tanto dentro como fora de uma instituio universitria. Com a Web TV podem ser apresentados e criados os mais diversos contedos, como, por exemplo: conferncias, aulas, documentrios, teses e/ou qualquer outro contedo de texto ou multimdia que seja de natureza cientfica. As competncias da Web 2.0, aplicadas na Web TV que proponho, conferem-lhe caractersticas nicas para a promoo e divulgao do conhecimento cientfico, revestindo assim este projecto de especial importncia.
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Um dos maiores desafios da neurofisiologia o de compreender a forma como a informao transmitida atravs do sistema nervoso. O estudo do sistema nervoso tem vrias aplicaes, tanto na neurologia, permitindo avanos ao nvel clnico, como noutras reas, e.g., nos sistemas de processamento de informao baseados em redes neuronais. A transmisso de informao entre neurnios feita por via de sinais eltricos. A compreenso deste fenmeno ainda incompleta e h projectos a nvel europeu e mundial com o objetivo de modular o sistema nervoso no seu todo de forma a melhor o compreender. Uma das teses que se desenvolve hoje em dia a de que a transmisso de sinais eltricos no sistema nervoso influenciada por fenmenos de sincronia. O objetivo desta dissertao o de otimizar um protocolo de aquisio e anlise de dados reais de eletroencefalograma e eletromiograma com o propsito de observar fenmenos de sincronia, baseando-se num algoritmo (anlise por referncia de fase, ou RPA, do ingls reference phase analysis) que deteta sincronias de fase entre os sinais de eletroencefalograma (EEG) e um sinal de referncia, que , no caso presente, o eletromiograma (EMG). A otimizao deste protocolo e sua validao indicaram a existncia de fenmenos significativos de sincronia no sinal eltrico, transmitido entre os msculos da mo e o crtex motor, no decorrer da ao motora.
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RESUMO: Na sociedade contempornea a diabetes tipo 2 e a obesidade esto a aumentar exponencialmente, representando um grave problema de sade pblica. De acordo com a IDF A diabetes e a obesidade so o principal problema de sade pblica do sculo XXI. Para alm destas duas patologias, a prevalncia de esteatose heptica no-alcolica (NAFLD), entre a populao obesa e diabtica, de cerca de 90%. O aumento da obesidade, diabetes e NAFLD tem uma forte correlao com o aumento do consumo de gorduras e acares, acompanhado de um decrscimo acentuado da actividade fsica. A obesidade, diabetes e NAFLD tem sido escrupolosamente investigada mas as teraputicas disponveis continuam a ser muito limitadas. Tendo em conta o nmero crescente e alarmante de obesos e diabticos o conhecimento detalhado da patofisiologia da obesidade, diabetes e NAFLD, tendo em vista a necessidade extrema de desenvolvimento de novas estratgias teraputicas, da mais elevada urgncia. O fígado reconhecido como um orgo primordial no controlo da homeostase. No estado ps-prandial, o fígado converte a glucose em glicognio e lpidos. Em contraste, no estado de jejum, o fígado promove a produo de glucose. Sistemas neuronais e hormonais, bem como o estado metablico do fígado, controlam de forma muito precisa a alternncia entre os diferentes substratos metablicos, dependente do estado prandial. A insulina tem um papel central no controlo do metabolismo energtico no fígado; se, por um lado, inibe a produo heptica de glucose e corpos cetnicos, por outro, promove a gliclise e a lipognese. O metabolismo energtico no fígado tambm regulado por vrios factores de transcrio e co-reguladores que, por sua vez, so regulados pela insulina, glucagina e outras hormonas metablicas. Em conjunto, todos estes factores e reguladores vo controlar de forma muito estreita a gluconeognese, a -oxidao e a lipognese, no fígado. Para alm dos j conhecidos reguladores do metabolismo heptico, novas molculas tm sido estudadas como tendo um papel fundamental na regulao do metabolismo energtico no fígado. Qualquer desequilbrio no metabolismo heptico vai contribuir para a insulino-resistncia, NAFLD e diabetes tipo 2. O principal objectivo do trabalho de investigao aqui apresentado o contributo para o estudo detalhado da patognese da diabetes e obesidade, num contexto de dietas ricas em acares e gorduras, e com a perspectiva de explorar novas estratgias teraputicas. Os objectivos especficos deste trabalho eram: primeiro, determinar se o tratamento com glutationo (GSH) e xido ntrico (NO) era suficiente para melhorar a insulino-resistncia associada ao elevado consumo de sacarose; segundo, determinar o papel da Rho-kinase 1 (ROCK1) na regulao do metabolismo heptico da glucose e dos lpidos; e terceiro, estudar o efeito do metilsulfonilmetano (MSM) em doenas metablicas associadas obesidade. Na primeira parte deste trabalho de investigao foram utilizados ratos Wistar machos sujeitos a uma dieta rica em sacarose (HS). Tal como esperado, estes animais apresentavam insulino-resistncia e hiperinsulinmia. A dieta HS levou ao aumento dos nveis hepticos de NO e ao decrscimo dos nveis de GSH no fígado. Em jejum, a administrao intraportal de GSH e NO, a animais saudveis promoveu um aumento significativo da sensibilidade insulina. Tambm nestes animais, a administrao intravenosa de S-nitrosotiis, compostos orgnicos que contm um grupo nitroso acoplado a um tomo de enxofre de um tiol, promoveu o aumento significativo da sensibilidade insulina. Pelo contrrio, em animais sujeitos dieta HS, as doses padro de GSH + NO e de S-nitrosotiis no conseguiram promover o aumento da sensibilidade insulina. No entanto, ao aumentar a dose de S-nitrosotiis administrados por via intravenosa, foi possvel observar o aumento da sensibilidade insulina dependente da dose, indicando um possvel papel dos S-nitrosotiis como sensibilizadores de insulina. O estudo detalhado do papel dos S-nitrosotiis na via de sinalizao da insulina revelou que h um aumento da fosforilao do receptor da insulina (IR) e da protena cinase B (Akt), sugerindo um efeito dos S-nitrosotiis nesta via de sinalizao. Os resultados apresentados nesta primeira parte sugerem que os S-nitrosotiis promovem a correcta aco da insulina, podendo vir a ser importantes alvos teraputicos. Na segunda parte deste trabalho de investigao utilizmos murganhos, com uma deleco especfica da ROCK1 no fígado, e sujeitos a uma dieta rica em lpidos (HFD). Foi possvel concluir que a ausncia da ROCK1 no fígado previne a obesidade, melhora a sensibilidade insulina e protege contra a esteatose heptica. A ausncia de ROCK1 no fígado levou a um decrscimo significativo da expresso gnica de genes associados lipognese, com uma diminuio acentuada do fluxo metablico associado a esta via. Pelo contrrio, a sobreexpresso de ROCK1, exclusivamente no fígado, promove a insulino-resistncia e a esteatose heptica no contexto de obesidade induzida pela dieta. Para alm disto, a deleco da ROCK1 no fígado de animais obesos e diabticos, os murganhos deficientes em leptina, corroborou os dados obtidos no primeiro modelo animal, com a franca melhoria da hiperglicmia, hiperinsulinmia e esteatose heptica. Os dados que compem esta parte do trabalho de investigao sugerem que a ROCK1 tem um papel crucial na regulao do metabolismo lipdico. Na terceira e ltima parte deste trabalho de investigao foi investigado o efeito do composto metilsulfunilmetano (MSM), um composto organosulfrico naturalmente presente em plantas e utilizado tambm como suplemento diettico, em murganhos obesos e insulino-resistentes, por exposio a uma dieta rica em lpidos (DIO). O tratamento com MSM melhorou a insulino-resistncia e protegeu contra a esteatose heptica. O contedo heptico em triglicridos e colesterol tambm diminuu de forma significativa nos animais DIO sujeitos ao tratamento com MSM, bem como a expresso gnica associada lipognese. Para alm disto, o tratamento com MSM levou a uma diminuio da expresso gnica associada inflamao. De realar que o tratamento com MSM levou a uma melhoria do perfil hematopoitico destes animais, tanto na medula ssea como no sangue. Para comprovar o efeito benfico do MSM na obesidade e insulino-resistncia utilizmos murganhos deficientes no receptor da leptina, e por isso obesos e diabticos, tendo observado um perfil semelhante ao obtido para murganhos sujeitos a uma dieta rica em lpidos e tratados com MSM. Conclumos, atravs dos dados recolhidos, que o MSM como suplemento pode ter efeitos benficos na hiperinsulinmia, insulino-resistncia e inflamao que caracterizam a diabetes tipo 2. Em resumo, os dados obtidos neste trabalho de investigao mostram que os S-nitrosotiis podem ter um papel importante como sensibilizadores da insulina, promovendo um aumento da sensibilidade insulina num contexto de dietas ricas em sacarose. Para alm disto, estudos in vitro, sugerem que os S-nitrosotiis regulam, especificamente, a via de sinalizao da insulina. Este trabalho teve tambm como objectivo o estudo da ROCK1 como regulador do metabolismo da glucose e dos lpidos no fígado. Atravs do estudo de animais com uma deleco ou uma sobreexpresso da ROCK1 no fígado mostrou-se que esta tem um papel crucial na patognese da obesidade e diabetes tipo 2, especificamente atravs do controlo da lipognese de novo. Finalmente, foi tambm objectivo deste trabalho, explorar o efeito do MSM em animais DIO e deficientes em leptina. O tratamento com MSM protege de forma evidente contra a obesidade e insulino-resistncia, com especial enfse para a capacidade que esta molcula demonstrou ter na proteco contra a inflamao. Em conjunto os vrios estudos aqui apresentados mostram que tanto os S-nitrosotiis como a ROCK1 tm um papel na patognese da obesidade e diabetes tipo 2 e que a utilizao de MSM como suplemento s teraputicas convencionais pode ter um papel no tratamentos de doenas metablicas.-------------------------------ABSTRACT: In modern western societies type 2 diabetes and obesity are increasing exponentially, representing a somber public concern. According to the International Diabetes Federation (IDF) Diabetes and Obesity are the biggest public health challenges of the 21st century. Aside from these the prevalence of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD), among the diabetic and obese population, is as high as 90%. It is now well established that the increase in obesity, diabetes and NAFLD strongly correlates with an increase in fat and sugar intake in our diet, alongside physical inactivity. The pathogenesis of obesity, diabetes and NAFLD has been thoroughly studied but the treatment options available are still narrow. Considering the alarming number in the obese and diabetic population the complete understanding of the pathogenesis, keeping in mind that new therapeutic strategies need to be attained, is of the highest urgency. The liver has been well established as a fundamental organ in regulating whole-body homeostasis. In the fed state the liver converts the glucose into glycogen and lipids. Conversely, in the fasted state, glucose will be produced in the liver. Neuronal and hormonal systems, as well as the hepatic metabolic states, tightly control the fast to fed switch in metabolic fuels. Insulin has a central role in controlling hepatic energy metabolism, by suppressing glucose production and ketogenesis, while stimulating glycolysis and lipogenesis. Liver energy metabolism is also regulated by various transcription factors and coregulators that are, in turn, regulated by insulin, glucagon and other metabolic hormones. Together, these regulators will act to control gluconeogenesis, -oxidation and lipogenesis in the liver. Aside from the well-established regulators of liver energy metabolism new molecules are being studied has having a role in regulating hepatic metabolism. Any imbalance in the liver energy metabolism is a major contributor to insulin resistance, NAFLD and type 2 diabetes. The overall goal of this research work was to contribute to the understanding of the pathogenesis of diabetes and obesity, on a setting of high-sucrose and high-fat diets, and to explore potential therapeutic options. The specific aims were: first, to determine if treatment with glutathione (GSH) and nitric oxide (NO) was sufficient to ameliorate insulin resistance induced by high-sucrose feeding; second, to determine the physiological role of rho-kinase 1 (ROCK1) in regulating hepatic and lipid metabolism; and third, to study the effect of methylsulfonylmethane (MSM) on obesity-linked metabolic disorders. In the first part of this research work we used male Wistar rats fed a high-sucrose (HS) diet. As expected, rats fed a HS diet were insulin resistant and hyperinsulinemic. HS feeding increased hepatic levels of NO, while decreasing GSH. In fasted healthy animals administration of both GSH and NO, to the liver, was able to increase insulin sensitivity. Intravenous administration of S-nitrosothiols, organic compounds containing a nitroso group attached to the sulfur atom of a thiol, in fasted control animals also increased insulin sensitivity. Under HS feeding the standard doses of GSH + NO and S-nitrosothiols were unable to promote an increase in insulin sensitivity. However, the intravenous administration of increasing concentrations of S-nitrosothiols was able to restore insulin sensitivity, suggesting that S-nitrosothiols have an insulin sensitizing effect. Investigation of the effect of S-nitrosothiols on the insulin signaling pathway showed increased phosphorylation of the insulin receptor (IR) and protein kinase B (Akt), suggesting that S-nitrosothiols may have an effect on the insulin signaling pathway. Together, these data showed that S-nitrosothiols promote normal insulin action, suggesting that they may act as potential pharmacological tools. In the second part of this research work we used liver-specific ROCK1 knockout mice fed a high-fat (HF) diet. Liver-specific deletion of ROCK1 prevented obesity, improved insulin sensitivity and protected against hepatic steatosis. Deficiency of ROCK1 in the liver caused a significant decrease in the gene expression of lipogenesis associated gene, ultimately leading to decreased lipogenesis. Contrariwise, ROCK1 overexpression in the liver promoted insulin resistance and hepatic steatosis in diet-induced obesity. Furthermore, liver-specific deletion of ROCK1 in obese and diabetic mice, the leptin-deficient mice, improved the typical hyperglycemia, hyperinsulinemia and liver steatosis. Together, these data identify ROCK1 as a crucial regulator of lipid metabolism. In the third and final part of this research work we investigated the effect of MSM, an organosulfur compound naturally found in plants and used as a dietary supplement, on diet-induced obese (DIO) and insulin resistant mice. MSM treatment ameliorated insulin resistance and protected against hepatosteatosis. Hepatic content in triglycerides and cholesterol was significantly decreased by MSM treatment, as well as lipogenesis associated gene expression. Furthermore, MSM treated mice had decreased inflammation associated gene expression in the liver. Importantly, FACS analysis showed that MSM treatment rescued the inflammatory hematopoietic phenotype of DIO mice in the bone marrow and the peripheral blood. Moreover, MSM treatment of the obese and diabetic mice, the leptin-deficient mice, resulted in similar effects as the ones observed for DIO mice. Collectively, these data suggest that MSM supplementation has a beneficial effect on hyperinsulinemia, insulin resistance and inflammation, which are often found in type 2 diabetes. In conclusion, this research work showed that S-nitrosothiols may play a role as insulin sensitizers, restoring insulin sensitivity in a setting of high-sucrose induced insulin resistance. Furthermore, in vitro studies suggest that S-nitrosothiols specifically regulate the insulin signaling pathway. This research work also investigated the role of hepatic ROCK1 in regulation of glucose and lipid metabolism. Using liver-specific ROCK 1 knockout and ROCK1 overexpressing mice it was shown that ROCK1 plays a role in the pathogenesis of obesity and type 2 diabetes, specifically through regulation of the de novo lipogenesis pathway. Finally, this research work aimed to explore the effect of MSM in DIO and leptin receptor-deficient mice. MSM strongly protects against obesity and insulin resistance, moreover showed a robust ability to decrease inflammation. Together, the individual studies that compose this dissertation showed that S-nitrosothiols and ROCK1 play a role in the pathogenesis of obesity and type 2 diabetes and that MSM supplementation may have a role in the treatment of metabolic disorders.
Resumo:
Lymnaea truncatula um gastrpode de gua doce com importncia em medicina por ser hospedeiro intermedirio do tremtode parasita Fasciola hepatica. o nico hospedeiro intermedirio desta espcie encontrado at agora em Portugal. A fasciolose responsvel por perdas de produtividade em gado. Nos humanos, uma parasitose emergente com relevo em sade pblica em vrias regies do globo. Portugal o segundo pas europeu com maior prevalncia. L. truncatula de difcil controlo por ser anfbia e ter boa capacidade de sobrevivncia e adaptao. A eficcia dos programas de controlo e monitorizao depende da correcta identificao das espcies de hospedeiros intermedirios, dado que nem todas as espcies apresentam a mesma sensibilidade infeco por F. hepatica. A morfologia da concha e a anatomia dos rgos so insuficientes na identificao das espcies, sendo necessrio usar tcnicas de biologia molecular. Os objectivos deste estudo foram: estudar a distribuio, a variao da densidade populacional ao longo do ano, a diversidade gentica, os habitats e a influncia de parmetros fsicos, qumicos e biolgicos, na densidade populacional de L. truncatula em cinco distritos portugueses (Coimbra, vora, Leiria, Lisboa e Funchal). Realizaram-se inquritos malacolgicos bimestrais durante 2 anos, entre Janeiro de 2006 e Dezembro de 2007 em Portugal continental e dois (Julho e Novembro de 2009) na ilha da Madeira. No continente, encontrou-se L. truncatula em: ribeiros temporrios, com pouca vegetao, substrato de argila e matria em decomposio e com gua lmpida, incolor e inodora, e com concentrao de clcio e de sulfatos at 50 mg/l e 267mg/l, respectivamente. A presena de outras espcies de moluscos, como Planorbarius metidjensis, Lymnaea peregra e da subclasse Prosobronchiata, assim como concentraes elevadas de nitratos, esto associados a uma menor densidade populacional. Na ilha da Madeira, os habitats foram predominantemente: escorrimentos de encosta, permanentes, com fraca exposio solar, pouca vegetao, substrato de rocha, argila e matria em decomposio e com gua lmpida, incolor e inodora, acima dos 14,4C. A densidade populacional diminui com o aumento dos valores de nitratos e aumenta com a concentrao de clcio na gua. As fezes de animais presentes junto s coleces de gua no apresentaram ovos de F. hepatica. Foi encontrado um exemplar de F. hepatica no fígado de um gamo da Tapada Nacional de Mafra (distrito de Lisboa)Estudou-se a diversidade gentica de L. truncatula atravs de RAPD-PCR e sequenciao do gene ribossomal 18S e da regio ITS-2 (este tambm por PCR-RFLP). Identificou-se pela primeira vez em Portugal continental e na ilha da Madeira uma espcie, geneticamente diferente mas morfologicamente muito semelhante a L. truncatula Lymnaea schirazensis. Na ilha da Madeira, foi detectado um haplotipo distinto do presente no continente. O marcador de RAPD - OPA2 e PCR-RFLP com HpaII, so bons marcadores para distino entre L. truncatula e L. schirazensis. Adicionalmente, detectou-se pela primeira vez na ilha da Madeira L. (Pseudosuccinea) columella, conhecido hospedeiro intermedirio de F. hepatica. Este estudo permitiu melhorar o conhecimento sobre hospedeiros intermedirios de F. hepatica em Portugal, o que poder melhorar o controlo e monitorizao da fasciolose.
Resumo:
RESUMO:Contexto: A avaliao do estado de nutrio do doente com indicao para transplante heptico (TH) deve ser abrangente, considerando o amplo espetro de situaes clnicas e metablicas. As alteraes metablicas relacionadas com a doena heptica podem limitar a aplicao de mtodos de avaliao nutricional, subestimando a desnutrio. Aps o TH, expectvel a reverso dos distrbios metablicos da doena heptica, pela melhoria da funo do fígado. No entanto, algumas complicaes metablicas podem surgir aps o TH, relacionadas com a m-nutrio, a desnervao heptica e o uso prolongado de imunossupresso, comprometendo os resultados clnicos a longo-prazo. A medio longitudinal e confivel do metabolismo energtico e dos compartimentos corporais aps o TH, avaliada em conjunto com fatores influentes no estado de nutrio, pode identificar precocemente situaes de risco e otimizar e individualizar estratgias clnicas e nutricionais com vantagens no prognstico. Objetivo: Avaliar longitudinalmente, a curto prazo, o estado de nutrio aps o TH em doentes com insuficincia heptica por doena crnica e identificar os fatores, para alm da cirurgia, que determinam diferentes evolues do metabolismo energtico e da composio corporal. Mtodos: Foi estudada uma coorte de indivduos com indicao para TH por doena heptica crnica, admitidos consecutivamente para TH ortotpico eletivo, durante 2 anos. Foram programados 3 momentos de avaliao: na ltima consulta pr-TH (T0), logo que adquirida autonomia respiratria e funcional aps o TH (T1) e um ms aps o TH (T2). Nesses momentos, foram medidos no mesmo dia: o suprimento nutricional por recordatrio das ltimas 24 horas, o estado de nutrio por Avaliao Subjetiva Global (ASG), o gasto energtico em repouso (GER) por calorimetria indireta, a antropometria, a composio corporal por bioimpedncia eltrica tetrapolar multifrequncias e a fora muscular por dinamometria de preenso palmar. O ndice de massa magra (IMM) e a massa celular corporal (MCC) foram usados como indicadores do msculo esqueltico e a percentagem de massa gorda (%MG) e o ndice de massa gorda (IMG) como indicadores de adiposidade. O GER foi comparado com o estimado pelas frmulas de Harris-Benedict para classificao do estado metablico em:hipermetabolismo (GER medido >120% do GER estimado), normometabolismo (GER medido entre 80 e 120% do GER estimado) e hipometabolismo (GER medido <80% do GER estimado). Foi utilizada anlise multivarivel: por regresso logstica, para identificar variveis associadas possibilidade (odds ratio OR) de pertencer a cada grupo metablico pr-TH; por regresso linear mltipla, para identificar variveis associadas variao dos compartimentos corporais no perodo ps-TH; e por modelos de efeitos mistos generalizados, para identificar variveis associadas evoluo do GER e dos compartimentos corporais entre o perodo pr- e ps-TH. Resultados: Foram includos 56 indivduos com idade, mdia (DP), 53,7 (8,5) anos, 87,5% do sexo masculino, 23,2% com doena heptica crnica de etiologia etanlica. Aps o TH, em 60,7% indivduos foi administrado regime imunossupressor baseado no tacrolimus. Os indivduos foram avaliados [mediana (AIQ)] 90,5 (P25: 44,2; P75: 134,5) dias antes do TH (T0), 9,0 (P25: 7,0; P75: 12,0) dias aps o TH (T1) e 36,0 (P25: 31,0; P75: 43,0) dias aps o TH (T2). Aps o TH houve melhoria significativa do estado de nutrio, com diminuio da prevalncia de desnutrio classificada pela ASG (37,5% em T0, 16,1% em T2, p<0,001). Antes do TH, 41,1% dos indivduos eram normometablicos, 37,5% hipometablicos e 21,4% hipermetablicos. A possibilidade de pertencer a cada grupo metablico pr-TH associou-se : idade (OR=0,899, p=0,010) e desnutrio pela ASG (OR=5,038, p=0,015) para o grupo normometablico; e ndice de massa magra (IMM, OR=1,264, p=0,049) e etiologia viral da doena heptica (OR=8,297, p=0,019) para o grupo hipermetablico. No se obteve modelo mltiplo para o grupo de hipometablico pr-TH, mas foram identificadas associaes univariveis com a histria de toxicodependncia (OR=0,282, p=0,047) e com a sarcopnia pr- TH (OR=8,000, p=0,040). Aps o TH, houve normalizao significativa e progressiva do estado metablico, indicada pelo aumento da prevalncia de normometabolismo (41,1% em T0, 57,1% em T2, p=0,040). Foram identificados diferentes perfis de evoluo do GER aps o TH, estratificado pelo estado metablico pr-TH: no grupo hipometablico pr-TH, o GER (Kcal) aumentou significativa e progressivamente (1030,6 em T0; 1436,1 em T1, p=0,001; 1659,2 em T2, p<0,001); no grupo hipermetablico pr-TH o GER diminuiu significativa e progressivamente (2097,1 em T0; 1662,5 em T1, p=0,024; 1493,0 em T2, p<0.001); no grupo normometablico no houve variaes significativas. Os perfis de evoluo do GER associaram-se com: peso corporal (=9,6, p<0,001) e suprimento energtico (=13,6, p=0,005) na amostra total; com peso corporal (=7,1, p=0,018) e contributo energtico dos lpidos (=18,9, p=0,003) no grupo hipometablico pr-TH; e com peso corporal (=14,1, p<0,001) e desnutrio pela ASG (=-171,0, p=0,007) no grupo normometablico pr-TH.Houve reduo transitria dos compartimentos corporais entre T0 e T1, mas a maioria destes recuperou para valores semelhantes aos pr-TH. As excees foram a gua extracelular, que diminuiu entre T0 e T2 (mdia 18,2 L e 17,8 L, p=0,042), a massa gorda (mdia 25,1 Kg e 21,7 Kg, p<0,001) e o IMG (mdia 10,6 Kg.m-2 e 9,3 Kg.m-2, p<0,001) que diminuram entre T1 e T2. Relativamente evoluo dos indicadores de msculo esqueltico e adiposidade ao longo do estudo: a evoluo do IMM associou-se com fora de preenso palmar (=0,06, p<0,001), creatininmia (=2,28, p<0,001) e nmero total de frmacos administrados (=-0,21, p<0,001); a evoluo da MCC associou-se com fora de preenso palmar (=0,16, p<0,001), creatininmia (=4,17, p=0,008) e nmero total de frmacos administrados (=-0,46, p<0,001); a evoluo da %MG associou-se com fora de preenso palmar (=-0,11, p=0,028), histria de toxicodependncia (=-5,75, p=0,024), creatininmia (=-5,91, p=0,004) e suprimento proteico (=-0,06, p=0,001); a evoluo do IMG associou-se com histria de toxicodependncia (=- 2,64, p=0,019), creatininmia (=-2,86, p<0,001) e suprimento proteico (=-0,02, p<0,001). A variao relativa (%) desses compartimentos corporais entre T1 e T2 indicou o impacto da teraputica imunossupressora na composio corporal: o regime baseado na ciclosporina associou-se positivamente com a % do IMM (=23,76, p<0,001) e % da MCC (=26,58, p<0,001) e negativamente com a % MG (=-25,64, p<0,001) e % do IMG (=-25,62, p<0,001), relativamente ao regime baseado no tacrolimus. Os esterides no influenciaram a evoluo do GER nem com a dos compartimentos corporais. Concluses: O estado de nutrio, avaliado por ASG, melhorou significativamente aps o TH, traduzida pela diminuio da prevalncia de desnutrio. O normometabolismo pr-TH foi prevalente e associou-se menor idade e desnutrio pr- TH. O hipometabolismo pr-TH associou-se histria de toxicodependncia e sarcopnia pr-TH. O hipermetabolismo pr-TH associou-se ao maior IMM e etiologia viral da doena heptica. Aps o TH, houve normalizao progressiva do estado metablico. Foram identificados trs perfis de evoluo do GER, associando-se com: peso corporal e suprimento energtico na amostra total; peso corporal e contributo energtico dos lpidos no grupo hipometablico pr- TH; e peso corporal e desnutrio pela ASG no grupo normometablico pr-TH. Foram identificados diferentes perfis de evoluo da composio corporal aps TH. A evoluo do msculo esqueltico associou-se positivamente com a fora de preenso palmar e a creatininmia e negativamente com o nmero total de frmacos administrados. A evoluo da adiposidade (%MG e IMG) associou-se inversamente com a histria de toxicodependncia, a creatininmia e o suprimento proteico; adicionalmente, a %MG associou-se inversamente com a fora de preenso palmar. O regime baseado na ciclosporina associou-se independentemente com diminuio da adiposidade e aumento do msculo esqueltico, comparativamente ao regime baseado no tacrolimus.---------------------------ABSTRACT:Background: The assessment of nutritional status in patients undergoing liver transplantation (LTx) should be comprehensive, accounting for the wide spectrum of the clinical and metabolic conditions. The metabolic disturbances related to liver disease may limit the precision and accuracy of traditional nutritional assessment methods underestimating the undernourishment. After LTx, it is expected that many metabolic derangements improve with the recovery of liver function. However, some metabolic complications arising after LTx, related to nutritional status, hepatic denervation, and prolonged immunosuppression, may compromise the longterm outcome. A reliable longitudinal assessment of both energy metabolism and body compartments after LTx, combined with assessments of other factors potentially affecting the nutritional status, may enable a better interpretation on the relationship between the metabolic and the nutritional status. These reliable assessments may precociously identify nutritional risk conditions and optimize and customize clinical and nutritional strategies improving the prognosis. Objective: To assess longitudinally the nutritional status shortly after orthotopic LTx in patients with chronic liver disease, and identify factors, beyond surgery, determining different energy metabolism and body composition profiles.Methods: A cohort of consecutive patients who underwent LTx due to chronic liver disease was studied within a period of two years. The assessments were performed in three occasions: at the last visit before LTx (T0), after surgery as soon as respiratory and functional autonomy was established (T1), and approximately one month after surgery (T2). On each occasion all assessments were performed on the same day, and included: the dietary assessment by 24- hour dietary recall, nutritional status by the Subjective Global Assessment (SGA), the resting energy expenditure (REE) by indirect calorimetry, anthropometry, body composition by multifrequency bioelectrical impedance analysis, and muscle strength by handgrip strength. Both the lean mass index (LMI) and body cell mass (BCM) were used as surrogates of skeletal muscle, and both the percentage of fat mass (%FM) and fat mass index (FMI) of adiposity. The REE was predicted according to the Harris and Benedict equation. Hypermetabolism was defined as a measured REE more than 120% of the predicted value; normometabolism as a measured REE within 80-120% of the predicted value; and hypometabolism as a measured REE less than 80% of the predicted value. Multiple regression analysis was used: by logistic regression to identify variables associated with odds of belong each pre-LTx metabolic groups; by linear multiple regression analysis to identify variables associated with body compartments relative variations (%) in the post-LTx period; and by mixed effects models to identify variables associated with the REE and body compartments profiles pre- and post-LTx. Results: Fifty six patients with a mean (SD) of 53.7 (8.5) years of age were included, 87.5% were men and 23.2% with alcoholic liver disease. After LTx 60.7% individuals were assigned to tacrolimus-based immunosuppressive regimen. The patients were assessed at a median time (inter-quartil range) of 90.5 (P25 44.2; P75 134.5) days before LTx (T0), at a median time of 9.0 (P25 7.0; P75 12.0) (T1) and 36 (P25 31.0; P75 43.0) (T2) days after LTx. After LTx the nutritional status significantly improved: the SGA-undernourishment decreased from 37.5% (T0) to 16.1% (T2) (p<0.001). Before LTx, 41.1% patients were normometabolic, 37.5% hypometabolic, and 21.4% hypermetabolic. The predictors of each pre-LTx metabolic group were: age (OR=0.899, p=0.010) and SGA-undernourishment (OR=5.038, p=0.015) for the normometabolic group; and LMI (OR=1.264, p=0.049) and viral etiology of liver disease (OR=8.297, p=0.019) for the hypermetabolic group. No multiple model was found for the pre-LTx hypometabolic group, but univariate association was found with history of drug addiction (OR=0.282, p=0.047) and pre- LTx sarcopenia (OR=8.000, p=0.040). After LTx a significant normalization of the metabolic status occurred, indicated by the increase in the prevalence of normometabolic patients (from T0: 41.1% to T2: 57.1%, p=0.040). Different REE profiles were found with REE stratified by preoperative metabolic status: in the hypometabolic group a significant progressive increase in mean REE (Kcal) was observed (T0: 1030.6; T1: 1436.1, p=0.001; T2: 1659.2, p<0.001); in the hypermetabolic group, a significant progressive decrease in mean REE (Kcal) was observed (T0: 2097.1; T1: 1662.5, p=0.024; T2: 1493.0, p<0.001); and in the normometabolic group, no significant differences were found. The REE profiles were associated with: body weight (- estimate=9.6, p<0.001) and energy intake (-estimate=13.6, p=0.005) in the whole sample; with body weight (-estimate=7.1, p=0.018) and %TEV from lipids (-estimate=18.9, p=0.003) in the hypometabolic group; and with body weight (-estimate=14.1, p<0.001), and SGAundernourishment (-estimate=-171, p=0.007) in the normometabolic group. A transient decrease in most body compartments occurred from T0 to T1, with subsequent catch-up to similar preoperative values. Exceptions were the extracellular water, decreasing from T0 to T2 (mean 18.2 L to 17.8 L, p=0.042), the fat mass (mean 25.1 Kg to 21.7 Kg, p<0.001) and FMI (mean 10.6 Kg.m-2 to 9.3 Kg.m-2, p<0.001), decreasing from T1 to T2. Significant predictors of skeletal muscle and adiposity profiles were found: LMI evolution was associated with handgrip strength (-estimate=0.06, p<0.001), serum creatinine (- estimate=2.28, p<0.001) and number of medications (-estimate=-0.21, p<0.001); BCM evolution was associated with handgrip strength (-estimate=0.16, p<0.001), serum creatinine (-estimate=4.17, p<0.001) and number of medications (-estimate=-0.46, p<0.001); the %FM evolution was associated with handgrip strength (-estimate=-0.11, p=0.028), history of drug addiction (-estimate=-5.75, p=0.024), serum creatinine (-estimate=-5.91, p=0.004) and protein intake (-estimate=-0.06, p=0.001); and FMI evolution was associated with history of drug addiction (-estimate=-2.64, p=0.019), serum creatinine (-estimate=-2.86, p<0.001) and protein intake (-estimate=-0.02, p<0.001). The % of the aforementioned body compartments from T1 to T2 indicated the influence of immunosuppressive agents on body composition: the cyclosporine-based regimen, compared with tacrolimus-based regimen, was positively associated with % LMI (-estimate=23.76, p<0.001) and % BCM (- estimate=26.58, p<0.001), and inversely associated with % FM (-estimate=-25.64, p<0.001) and % FMI (-estimate=-25.62, p<0.001). No significant changes in REE or body composition were observed associated with dose or duration of steroid therapy. Conclusions: The SGA-assessed nutritional status improved shortly after LTx, with significant decrease in prevalence undernourished individuals. XXI Preoperative normometabolism was prevalent and was associated with younger age and SGAundernourishment before LTx. Preoperative hypometabolism was associated with history of drug addiction and pre-LTx sarcopenia. Preoperative hypermetabolism was associated with higher LMI and viral etiology of liver disease. A significant normalization of the metabolic status was observed after LTx. The REE profiles were positively predicted by body weight and energy intake in the whole sample, by body weight and percentage of energy intake from lipids in the preoperative hypometabolic patients, and by body weight and SGAundernourishment in the preoperative normometabolic patients. Different body composition profiles were found after LTx. Skeletal muscle profile was positively associated with handgrip strength and serum creatinine, and inversely with the number of medications. The adiposity profile was inversely associated with history of drug addiction, serum creatinine and protein intake. Additionally, the %FM evolution was inversely associated with handgrip strength. The cyclosporine-based regimen, compared with tacrolimus-based regimen, was independently associated with skeletal muscle increase and adiposity decrease.
Resumo:
184 machos da Carcharchinus porosas foram capturados com rede de emalhar nas Reentrncias Maranhenses, entre Cururupu (1 20' S e 45 W) e So Luis (2 241 30'' S e 44 W) no perodo de outubro de 1983 janeiro de 1984 e de junho setembro de 1984. O desenvolvimento dos machos desta espcie foi estudado atravs da relao peso-comprimento e do crescimento: dos claspers, dos testculos, dos epiddimos e do fígado. Com exceo dos claspers e do fígado, o crescimento dos rgos em questo contnuo. No crescimento dos claspers evidenciou-se 3 fases que correspondem: a fase juvenil, a fase de adolescncia e a fase adulta. Demonstrou-se, tambm, que existe uma descontinuidade no crescimento do fígado no momento da passagem da fase de adolescncia fase adulta, e que esta se verifica quando se relaciona o peso deste rgo com o peso corporal. Esfregaos do contedo da visvula seminal mostraram que o lquido branco presente neste rgo livre de espermatozides at 70 cm. Com base no crescimento dos claspers e na produo de espermatozides normais, estabeleceu-se o tamanho de primeira maturidade em 71 cm (fim da fase de adolescncia) e o tamanho de 100% de maturidade em 75 cm (incio da fase adulta).
Resumo:
With this dissertation we aim to analyze the most relevant aspects of the excise duties harmonized regime, considering Community origins, but having also in attention all legal specifications of its implementation in Portugal. The legal regime of excise duties is presented as an ambitious theme, considering the challenge of different branches of law that influence this subject, such as Tax, Economic and Community laws, the inescapable influence of customs procedures, or regarding environmental objectives. In the European context, the harmonization of excise duties was seen as a condition for the implementation of the internal market, contributing to undo secular tax barriers between Member States and, since so, ensure fair competition and free movement of services and goods. Along with VAT, the excise duties harmonization process could represent a potential European tax system, essential for a full and integrated single market. In this context, it is essential to pay special attention to specific characteristics of excise duties regime, such as duty suspension arrangement applicable during the production phase, storage and movement in certain conditions. The growing importance of excise duties, as for revenue or extra-fiscal purposes, recommends new academic studies on this subject, seeking new opportunities and challenges.
Resumo:
RESUMO - Os nanomateriais manufaturados (NMs), isto , fabricados deliberadamente para fins especficos, apresentam propriedades fsico-qumicas nicas como a dimenso, rea superficial ou funcionalizao, que lhes conferem caratersticas mecnicas, ticas, eltricas e magnticas muito vantajosas para aplicaes industriais e biomdicas. Efetivamente, a tecnologia baseada nos NMs, ou nanotecnologia, foi identificada como uma key enabling technology, impulsionadora do crescimento econmico dos pases industrializados, devido ao seu potencial para melhorar a qualidade e desempenho de muitos tipos de produtos e de processos. Contudo, a expanso da utilizao de NMs contrasta com a insuficiente avaliao de risco para a sade humana e para o ambiente, sendo considerados como um risco emergente para a sade pblica. As incertezas sobre a segurana dos NMs para a sade pblica advm sobretudo de estudos epidemiolgicos em humanos expostos a nanomateriais produzidos como consequncia dos processos e atividades humanas e da poluio. Uma das principais preocupaes relativamente aos efeitos adversos dos NMs na sade humana o seu potencial efeito carcinognico, que sugerido por alguns estudos experimentais, como no caso dos nanomateriais de dixido de titnio ou dos nanotubos de carbono. Para avaliar em curto termo as propriedades carcinognicas de um composto, utilizam-se frequentemente ensaios de genotoxicidade em linhas celulares de mamfero ou ensaios em modelos animais, em que se analisa uma variedade de leses genticas potencialmente relacionados com o processo de carcinognese. No entanto, a investigao sobre as propriedades genotxicas dos NMs no foi, at hoje, conclusiva. O presente estudo tem por objectivo principal caracterizar os efeitos genotxicos associados exposio a nanomateriais manufaturados, de forma a contribuir para a avaliao da sua segurana. Constituram objectivos especficos deste estudo: i) avaliar a genotoxicidade dos NMs em trs tipos de clulas humanas expostas in vitro: linfcitos humanos primrios, linha celular de epitlio brnquico humano (BEAS-2B) e linha celular de adenocarcinoma epitelial de pulmo humano (A549); ii) avaliar a sua genotoxicidade num modelo de ratinho transgnico; iii) investigar alguns mecanismos de aco que podero contribuir para a genotoxicidade dos nanomateriais, como a contribuio de leses oxidativas para a genotoxicidade induzida pelos NMs in vitro, e a investigao da sua bioacumulao e localizao celular in vivo. Foram analisados os efeitos genotxicos associados exposio a duas classes de NMs, dixido de titnio e nanotubos de carbono de parede mltipla, bem como a um NM de xido de zinco, candidato a ser utlilizado como controlo positivo de dimenso nanomtrica. Os xx NMs utilizados foram previamente caracterizados com detalhe relativamente s suas caractersticas fsico-qumicas e tambm relativamente sua disperso em meio aquoso e no meio de cultura. A metodologia incluiu ensaios de citotoxicidade e de genotoxicidade in vitro, designadamente, ensaios de quebras no DNA (ensaio do cometa) e nos cromossomas (ensaio do microncleo) em clulas humanas expostas a vrias concentraes de NMs, por comparao com clulas no expostas. Tambm foram realizados ensaios in vivo de quebras no DNA, quebras cromossmicas e ainda um ensaio de mutaes em vrios rgos de grupos de ratinhos transgnicos LacZ, expostos por via intravenosa a duas doses de dixido de titnio. Foi investigada a existncia de uma relao dose-resposta aps exposio das clulas humanas ou dos animais a NMs. A contribuio de leses oxidativas para a genotoxicidade aps exposio das clulas aos NMs in vitro foi explorada atravs do ensaio do cometa modificado com enzima. Realizaram-se estudos histolgicos e citolgicos para deteo e localizao celular dos NMs nos rgos-alvo dos ratinhos expostos in vivo. Os resultados demonstraram efeitos genotxicos em alguns dos NMs analisados em clulas humanas. No entanto, os efeitos genotxicos, quando positivos, foram em nveis reduzidos, ainda que superiores aos valores dos controlos, e a sua reprodutibilidade era dependente do sistema experimental utilizado. Para outros NMs, a evidncia de genotoxicidade revelou-se equvoca, conduzindo necessidade de esclarecimento atravs de ensaios in vivo. Para esse fim, recorreu-se a uma anlise integrada de mltiplos parmetros num modelo animal, o ratinho transgnico baseado em plasmdeo contendo o gene LacZ exposto a um NM de dixido de titnio, NM-102. Embora tenha sido demonstrada a exposio e a acumulao do NM no fígado, no se observaram efeitos genotxicos nem no fígado, nem no bao nem no sangue dos ratinhos expostos a esse NM. Neste estudo concluiu-se que algumas formas de dixido de titnio e nanotubos de carbono de parede mltipla produzem efeitos genotxicos em clulas humanas, contribuindo para o conjunto de evidncias sobre o efeito genotxico desses NMs. As diferenas observadas relativamente genotoxicidade entre NMs do mesmo tipo, mas distintos em algumas das suas caractersticas fsico-quimicas, aparentemente no so negligenciveis, pelo que os resultados obtidos para um NM no devem ser generalizados ao grupo correspondente. Para alm disso, a genotoxicidade equvoca verificada para o NM-102 em clulas humanas expostas in vitro, no foi confirmada no modelo in vivo, pelo que o valor preditivo da utilizao dos ensaios in vitro para a identificao de NMs com efeitos genotxicos (e portanto potencialmente carcinognicos) ainda tem de ser esclarecido antes de ser possvel extrapolar as concluses para a sade humana. Por sua vez, como a informao aqui produzida pelas metodologias in vitro e in vivo no reflete os efeitos de exposio continua ou prolongada, que poder conduzir a efeitos genotxicos distintos, esta xxi dever ser complementada com outras linhas de evidncia relativamente segurana dos NMs. Perante a incerteza dos nveis de exposio real do organismo humano e do ambiente, a segurana da utilizao dos NMs no pode ser garantida a longo prazo e, tendo em conta a elevada produo e utilizao destes NMs, so prementes futuros estudos de monitorizao ambiental e humana.
