553 resultados para Barbas linker
Resumo:
Relatório de Estágio apresentado para a obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multiméddia
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Relatório de estágio apresentado para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia.
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The folding and targeting of membrane proteins poses a major challenge to the cell, as they must remain insertion competent while their highly hydrophobic transmembrane (TM) domains are transferred from the ribosome, through the aqueous cytosol and into the lipid bilayer. The biogenesis of a mature membrane protein takes place through the insertion and integration into the lipid bilayer. A number of TM proteins have been shown to gain some degree of secondary structure within the ribosome tunnel and to retain this conformation throughout maturation. Although studies into the folding and targeting of a number of membrane proteins have been carried out to date, there is little information on one of the largest class of eukaryotic membrane proteins; the G-protein-coupled receptors (GPCRs). This project studies the early folding events of the human ortholog of GPR35. To analyse the structure of the 1st TM domain, intermediates were generated and assessed by the biochemical method of pegylation (PEG-MAL). A structurally-similar microbial opsin (Bacterioopsin) was also used to investigate the differences in the early protein folding within eukaryotic and prokaryotic translation systems. Results showed that neither the 1st TM domain of GPR35 nor Bacterioopsin were capable of compacting in the ribosome tunnel before their N-terminus reached the ribosome exit point. The results for this assay remained consistent whether the proteins were translated in a eukaryotic or prokaryotic translation system. To examine the communication mechanism between the ribosome, the nascent chain and the protein targeting pathway, crosslinking experiments were carried out using the homobifunctional lysine cross-linker BS3. Specifically, the data generated here show that the nascent chain of GPR35 reaches the ribosomal protein uL23 in an extended conformation and interacts with the SRP protein as it exits the ribosome tunnel. This confirms the role of SRP in the co-translational targeting of GPR35. Using these methods insights into the early folding of GPCRs has been obtained. Further experiments using site-directed mutagenesis to reduce hydrophobicity in the 1st TM domain of GPR35, highlighted the mechanisms by which GPCRs are targeted to the endoplasmic reticulum. Confirming that hydrophobicity within the signal anchor sequence is essential of SRP-dependent targeting. Following the successful interaction of the nascent GPR35 and SRP, GPR35 is successfully targeted to ER membranes, shown here as dog pancreas microsomes (DPMs). Glycosylation of the GPR35 N-terminus was used to determine nascent chain structure as it is inserted into the ER membrane. These glycosylation experiments confirm that TM1 has obtained its compacted state whilst residing in the translocon. Finally, a site-specific cross-linking approach using the homobifunctional cysteine cross-linker, BMH, was used to study the lateral integration of GPR35 into the ER. Cross-linking of GPR35 TM1 and TM2 could be detected adjacent to a protein of ~45kDa, believed to be Sec61α. The loss of this adduct, as the nascent chain extends, showed the lateral movement of GPR35 TM1 from the translocon was dependent on the subsequent synthesis of TM2.
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É crescente a utilização dos dispositivos móveis com ecrãs maiores e melhores, mais memória, maiores capacidades multimédia e métodos mais refinados para introduzir dados. Dispositivos que integram comunicações, acesso à internet e diversos tipos de sensores possibilitarão, seguramente, abordagens inovadoras e criativas em atividades pedagógicas, em contraste com as utilizações atuais nos computadores pessoais. A análise das aplicações que atualmente integram os módulos do Moodle nos dispositivos móveis mostra que existe ainda um longo caminho a percorrer. As aplicações existentes têm, quase na sua totalidade, como objetivo adaptar o interface aos dispositivos móveis, o que é apenas o primeiro passo no sentido de aproveitar todas as potencialidades destes dispositivos. É, pois, possível imaginar um futuro próximo, onde as potencialidades dos dispositivos móveis darão origem a aplicações com um enorme potencial de aprendizagem, que advém do facto de os estudantes encontrarem conexões entre as suas vidas e a sua educação, através da realização de atividades em contexto no dispositivo móvel, sempre omnipresente. Com este trabalho de investigação e desenvolvimento pretende-se: a) avaliar o estado da arte do mobile learning, na área dos Learning Management System (LMS); b) refletir sobre as funcionalidades que deve oferecer uma aplicação para dispositivos móveis, com enfoque no sistema operativo Android, que permita a gestão e atualização dos fóruns e ficheiros do Moodle; c) conceber e produzir a referida aplicação, de acordo com as especificações consideradas relevantes; d) avaliar o seu impacto educativo e funcional. É demonstrado neste estudo que o recurso a dispositivos móveis potencia a aprendizagem baseada em LMS (Learning Management System), identificando-se as vantagens da sua utilização. São também apresentadas as funcionalidades da aplicação Mais(f), desenvolvida no âmbito da investigação, a avaliação da mesma pelos participantes no estudo, bem como as perspectivas futuras de utilização da aplicação Mais(f).
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International audience
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253 p.
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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Molecular, 2016.
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Conjugated polymers (CPs) are intrinsically fluorescent materials that have been used for various biological applications including imaging, sensing, and delivery of biologically active substances. The synthetic control over flexibility and biodegradability of these materials aids the understanding of the structure-function relationships among the photophysical properties, the self-assembly behaviors of the corresponding conjugated polymer nanoparticles (CPNs), and the cellular behaviors of CPNs, such as toxicity, cellular uptake mechanisms, and sub-cellular localization patterns. ^ Synthetic approaches towards two classes of flexible CPs with well-preserved fluorescent properties are described. The synthesis of flexible poly( p-phenylenebutadiynylene)s (PPBs) uses competing Sonogashira and Glaser coupling reactions and the differences in monomer reactivity to incorporate a small amount (∼10%) of flexible, non-conjugated linkers into the backbone. The reaction conditions provide limited control over the proportion of flexible monomer incorporation. Improved synthetic control was achieved in a series of flexible poly(p-phenyleneethynylene)s (PPEs) using modified Sonogashira conditions. In addition to controlling the degree of flexibility, the linker provides disruption of backbone conjugation that offers control of the length of conjugated segments within the polymer chain. Therefore, such control also results in the modulation of the photophysical properties of the materials. ^ CPNs fabricated from flexible PPBs are non-toxic to cells, and exhibit subcellular localization patterns clearly different from those observed with non-flexible PPE CPNs. The subcellular localization patterns of the flexible PPEs have not yet been determined, due to the toxicity of the materials, most likely related to the side-chain structure used in this series. ^ The study of the effect of CP flexibility on self-assembly reorganization upon polyanion complexation is presented. Owing to its high rigidity and hydrophobicity, the PPB backbone undergoes reorganization more readily than PPE. The effects are enhanced in the presence of the flexible linker, which enables more efficient π-π stacking of the aromatic backbone segments. Flexibility has minimal effects on the self-assembly of PPEs. Understanding the role of flexibility on the biophysical behaviors of CPNs is key to the successful development of novel efficient fluorescent therapeutic delivery vehicles.^
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Relatório de estágio apresentado para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia.
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Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação do Instituto Politécnico de Santarém para obtenção do grau de Mestre em Educação e Comunicação Multimédia
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Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação do Instituto Politécnico de Santarém para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia
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Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação do Instituto Politécnico de Santarém para a obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia
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Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação do Instituto Politécnico de Santarém para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia
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Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação do Instituto Politécnico de Santarém para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia
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Relatório de estágio apresentado para obtenção do grau de mestre em Educação e Comunicação Multimédia.