Single-cell ELISA and flow cytometry as methods for highlighting potential neuronal and astrocytic toxicant specificity

The timeline imposed by recent worldwide chemical legislation is not amenable to conventional in vivo toxicity testing, requiring the development of rapid, economical in vitro screening strategies which have acceptable predictive capacities. When acquiring regulatory neurotoxicity data, distinction on whether a toxic agent affects neurons and/or astrocytes is essential. This study evaluated neurofilament (NF) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) directed single-cell (S-C) ELISA and flow cytometry as methods for distinguishing cell-specific cytoskeletal responses, using the established human NT2 neuronal/astrocytic (NT2.N/A) co-culture model and a range of neurotoxic (acrylamide, atropine, caffeine, chloroquine, nicotine) and non-neurotoxic (chloramphenicol, rifampicin, verapamil) test chemicals. NF and GFAP directed flow cytometry was able to identify several of the test chemicals as being specifically neurotoxic (chloroquine, nicotine) or astrocytoxic (atropine, chloramphenicol) via quantification of cell death in the NT2.N/A model at cytotoxic concentrations using the resazurin cytotoxicity assay. Those neurotoxicants with low associated cytotoxicity are the most significant in terms of potential hazard to the human nervous system. The NF and GFAP directed S-C ELISA data predominantly demonstrated the known neurotoxicants only to affect the neuronal and/or astrocytic cytoskeleton in the NT2.N/A cell model at concentrations below those affecting cell viability. This report concluded that NF and GFAP directed S-C ELISA and flow cytometric methods may prove to be valuable additions to an in vitro screening strategy for differentiating cytotoxicity from specific neuronal and/or astrocytic toxicity. Further work using the NT2.N/A model and a broader array of toxicants is appropriate in order to confirm the applicability of these methods.

Measurement of HNE-protein adducts in human plasma and serum by ELISA-Comparison of two primary antibodies

There is increasing evidence that non-enzymatic post-translational protein modifications might play key roles in various diseases. These protein modifications can be caused by free radicals generated during oxidative stress or by their products generated during lipid peroxidation. 4-Hydroxynonenal (HNE), a major biomarker of oxidative stress and lipid peroxidation, has been recognized as important molecule in pathology as well as in physiology of living organisms. Therefore, its detection and quantification can be considered as valuable tool for evaluating various pathophysiological conditions.The HNE-protein adduct ELISA is a method to detect HNE bound to proteins, which is considered as the most likely form of HNE occurrence in living systems. Since the earlier described ELISA has been validated for cell lysates and the antibody used for detection of HNE-protein adducts is non-commercial, the aim of this work was to adapt the ELISA to a commercial antibody and to apply it in the analysis of human plasma samples.After modification and validation of the protocol for both antibodies, samples of two groups were analyzed: apparently healthy obese (n=62) and non-obese controls (n=15). Although the detected absolute values of HNE-protein adducts were different, depending on the antibody used, both ELISA methods showed significantly higher values of HNE-protein adducts in the obese group. © 2013 The Authors.

A rapid ELISA for the diagnosis of intravascular catheter related sepsis caused by coagulase negative staphylococci

Aim: To develop and evaluate a rapid enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for the diagnosis of intravascular catheter related sepsis caused by coagulase negative staphylococci. Methods: Forty patients with a clinical and microbiological diagnosis of intravascular catheter related sepsis and positive blood cultures, caused by coagulase negative staphylococci, and 40 control patients requiring a central venous catheter as part of their clinical management were recruited into the study. Serum IgG responses to a previously undetected exocellular antigen produced by coagulase negative staphylococci, termed lipid S, were determined in the patient groups by a rapid ELISA. Results: There was a significant difference (p = < 0.0001) in serum IgG to lipid S between patients with catheter related sepsis and controls. The mean antibody titre in patients with sepsis caused by coagulase negative staphylococci was 10 429 (range, no detectable serum IgG antibody to 99 939), whereas serum IgG was not detected in the control group of patients. Conclusions: The rapid ELISA offers a simple, economical, and rapid diagnostic test for suspected intravascular catheter related sepsis caused by coagulase negative staphylococci, which can be difficult to diagnose clinically. This may facilitate treatment with appropriate antimicrobials and may help prevent the unnecessary removal of intravascular catheters.

Estrategias para la mejora del diagnóstico serológico de la besnoitiosis bovina

Besnoitia besnoiti es un protozoo apicomplejo formador de quistes responsable de la besnoitiosis bovina, una enfermedad crónica y debilitante que origina importantes pérdidas económicas en el ganado bovino a nivel mundial. En la actualidad, no existen tratamientos ni vacunas disponibles y, por tanto, las medidas de control se deben basar en la detección de animales infectados para reducir la prevalencia en zonas endémicas y evitar la entrada de la enfermedad en zonas libres a través de la compra de animales infectados. Los principales retos en la investigación sobre este parásito son, por un lado, la mejora de las técnicas serológicas para realizar un diagnóstico preciso y, por otro lado, el empleo de las nuevas pruebas diagnósticas desarrolladas para determinar el impacto de la enfermedad mediante estudios de prevalencia e incidencia. Dada la rápida diseminación de la besnoitiosis bovina en Europa, se han desarrollado numerosas técnicas de diagnóstico serológico. Sin embargo, éstas no han sido validadas en estudios comparativos y, por ello, los datos epidemiológicos descritos por los diferentes laboratorios, no son comparables. Además, no se ha establecido una prueba de referencia, lo cual es de vital importancia para el establecimiento de un protocolo de diagnóstico común entre los países afectados. Por otra parte, se ha puesto de manifiesto la necesidad de mejorar la sensibilidad (Se) de las pruebas para detectar a los animales infectados durante la fase aguda, así como los infectados durante la fase crónica que presentan niveles bajos de anticuerpos, los cuales en diversas ocasiones se encuentran por debajo del punto de corte de las técnicas diagnósticas. Además, también es necesario mejorar su especificidad (Esp), ya que las actuales pruebas ELISA, que se emplean de forma rutinaria en el diagnóstico de la infección, pueden dar lugar a un elevado número de resultados falsos-positivos que pueden repercutir de forma negativa en la eficacia de los planes de control...

Caracterización de la citología de impresión corneal en la especie canina y su aplicación en el diagnóstico de la queratoconjuntivitis seca (QCS)

La citología de impresión corneal es una técnica atraumática, simple, rápida y carente de efectos secundarios que permite estudiar las capas celulares más externas de la superficie ocular, posibilitando el diagnóstico de enfermedades de la misma y su monitorización durante y después del tratamiento. Los objetivos de la presente Tesis Doctoral han sido normalizar la técnica de obtención y procesamiento de muestras obtenidas por citología de impresión corneal en la especie canina, determinar los parámetros morfológicos y morfométricos fisiológicos de las células epiteliales corneales en perros sanos y establecer las alteraciones celulares corneales en el transcurso de la QCS canina. Además, se ha estudiado la existencia de una correlación entre las alteraciones del epitelio corneal y la producción lagrimal valorada mediante la prueba lagrimal de Schirmer I (PLS I). En este estudio se han incluido 60 perros de diferentes razas que han sido divididos en dos poblaciones: el grupo I, formado por pacientes sanos, con unos valores en la prueba lagrimal de Schirmer I (PLS I) iguales o superiores a 15 mm/min y el grupo II, formado por pacientes diagnosticados de QCS con unos valores en la PLS I comprendidos entre 0 y 14 mm/min. Los ojos de los animales del grupo II han sido categorizados a su vez en 3 subgrupos, estableciendo la gravedad de la enfermedad en función de los resultados obtenidos en la PLS I como grave, moderada o leve. Para facilitar la recogida y el manejo de las muestras, adecuar la técnica para su empleo en animales y disminuir al mínimo cualquier tipo de lesión iatrogénica sobre la superficie ocular se ha utilizado un dispositivo simple y eficaz, diferente a los que se han venido empleando tradicionalmente en oftalmología humana y veterinaria. La valoración morfométrica de las células se ha realizado atendiendo a los criterios de celularidad de la muestra, separación intercelular, morfología de las células, tinción citoplasmática, área celular, área nuclear, ratio núcleo/citoplasma (ratio N:C) y alteraciones nucleares...

La inmigración como una prueba social y los márgenes legales del desencuentro. Políticas públicas, prácticas sociales y construcción de la persona

La redacción de las directrices y los procedimientos administrativos que hacen virtualmente posible la inmigración, contribuyen a construir no sólo los itinerarios personales sino también el imaginario social sobre la alteridad. El principal objetivo de este artículo es poner de relieve —mediante el análisis discursivo de las Hojas informativas publicadas en la WEB del Ministerio de Empleo y Seguridad Social— cómo la construcción social del emigrante/inmigrante y el proyecto migratorio topan con unas representaciones y envites, instituidos y refrendados en y por la propia formulación de la reglamentación, pero no del todo explícitos. Entendiendo el texto como una acción que genera otras acciones, se examinan las consecuencias que tiene sobre la práctica social de los inmigrantes. En suma, se trata de vislumbrar los elementos (terminología, fórmulas, esquemas y prácticas inducidas) que van constituyendo al inmigrante como agente social subordinado a micro-procesos y relaciones que se le escapan en gran parte, y van marcando su propia capacidad de acción. En conclusión y retomando la distinción sugerida por Foucault entre ‘principio de diferencia’ y ‘principio de indiferencia’, se muestra que mientras el primero rige las cláusulas generales, el segundo articula las específicas.

Détection du virus de l'anémie aviaire par réaction de polymérisation en chaîne (pcr) couplée à un test Elisa

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Lope de Vega y la representación de la mujer en la escena de debate : entre misoginia y feminismo en La prueba de los ingenios y La doncella Teodor

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Détection du virus de l'anémie aviaire par réaction de polymérisation en chaîne (pcr) couplée à un test Elisa

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Lope de Vega y la representación de la mujer en la escena de debate : entre misoginia y feminismo en La prueba de los ingenios y La doncella Teodor

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Prueba piloto para la elaboración perfil epidemiológico de discapacidad en el municipio de Madrid

A pesar de los esfuerzos para implementar estrategias que permitan determinar la frecuencia de discapacidad en Colombia, aún persisten problemáticas metodológicas y de recolección de la información. Lo anterior implica una necesidad creciente de implementar sistemas de vigilancia en salud pública en los que la discapacidad sea considerada como una condición de interés. En alianza con el Centro Ambulatorio Gustavo EscallónCayzedo-Madrid Fundación Santa Fe de Bogotá (Cagec) y la Secretaría de Desarrollo Social del municipio de Madrid (Cundinamarca), se diseñó una guía metodológica y una ficha de recolección de información para la población con discapacidad, bajo los lineamientos de la Clasificación Internacional del Funcionamiento, de la Discapacidad y la Salud (CIF).

Relaciones conceptuales y prácticas entre la evaluación del aprendizaje en el aula con la prueba saber 11º en dos instituciones educativas de Yopal, Casanare

Tesis (Maestría en Docencia Yopal).-- Universidad de La Salle. Facultad de Ciencias de la Educación. Maestría en Docencia Yopal, 2014

El resultado de la prueba del ICFES como predictor del rendimiento academico

Este estudio muestra la relación que existe entre la prueba del Estado en Colombia, ICFES, y el rendimiento académico de los estudiantes de la Universidad del Rosario, facultad de Terapia Ocupacional y la Fundación Educativa de Estudios Superiores, hoy Fundación Universitaria Manuela Beltrán en la misma facultad. Realiza una revisión de la literatura sobre la problemática de los Exámenes de Estado, mostrando en contraste, la discusión teórica de diferentes autores, sobre el rendimiento académico y la dificultad de su valoración; así como la relación de las pruebas de Estado como predictores del rendimiento académico. El estudio seleccionó una población de estudiantes de las dos nstituciones mencionadas, para cada una de las cuales se obtuvo el puntaje individual general y por área alcanzado en el examen del Instituto Colombiano de Educación Superior y los promedios generales obtenidos por cada estudiante en el programa académico de la carrera. Para el análisis estadístico de los resultados se empleó el análisis de correlación y regresión mediante el paquete estadístico SAS (sistema de análisis estadístico). Los datos más sobresalientes encontrados fueron la existencia de una correlación predictiva entre el puntaje del ICFES y el rendimiento académico en las dos entidades; tanto en los promedios generales como en los identificados por área a excepción de la de ciencias sociales lo que se explica por un error de agrupación.