Modelo de suplementa����o nutricional com fatores hepatotr��ficos aumenta prolifera����o celular em f��gado de ratos sadios

Foram avaliados dois protocolos de administra����o, em ratos sadios, de uma solu����o de fatores hepatotr��ficos (FH), composta por amino��cidos, vitaminas, sais minerais, glicose, insulina, glucagon e triiodotironina (T3). A solu����o foi administrada durante 10 dias, 40mg/kg/dia, i.p., em duas, grupo 2xFH (n=15), ou tr��s doses, grupo 3xFH (n=15), di��rias. Foram observados os efeitos na prolifera����o celular dos hepat��citos, na angiog��nese e na matriz extracelular hep��tica, assim como as poss��veis rea����es adversas. Os animais dos grupos 2xFH e 3xFH apresentaram aumento da massa hep��tica de 30,1% e 22,5%, respectivamente, em rela����o ao grupo-controle (CT; n=15). O ��ndice de prolifera����o hepatocelular foi maior nos grupos 2xFH (1,4%) e 3xFH (1,2%) em rela����o ao grupo CT (0,53%), e a densitometria relativa do fator de crescimento do endot��lio vascular pelo imunoblot n��o revelou diferen��a estat��stica entre os tr��s grupos. Nos grupos 2xFH e 3xFH, houve redu����o do col��geno intersticial em rela����o ao grupo CT. A solu����o de FH estimulou o crescimento hep��tico e reduziu o volume de col��geno perissinusoidal. A administra����o em tr��s doses di��rias resultou em mortalidade de 26,7%, possivelmente pelo excessivo estresse da manipula����o e pela menor adapta����o fisiol��gica dos ratos, o que n��o ocorreu nos grupos 2xFH e CT. Para esse tipo de abordagem em ratos, o procedimento experimental mais apropriado, seguro, com melhor chance de adapta����o dos animais e com resultados significativos �� a aplica����o dos FH em duas doses di��rias.

An��lise da fibrose do tecido adiposo de mulheres submetidas �� abdominoplastia e cirurgia bari��trica

A fibrose �� um ac��mulo demasiado de matriz extracelular, resultante de um desequil��brio entre a s��ntese e a degrada����o dos seus componentes. �� associada ��s altera����es metab��licas do tecido adiposo, contudo sua ocorr��ncia nos diferentes dep��sitos e repercuss��es cl��nicas ainda n��o s��o totalmente compreendidas. O objetivo deste estudo foi analisar a fibrose no tecido adiposo em rela����o �� presen��a de obesidade, localiza����o do dep��sito [tecido adiposo subcut��neo abdominal (TASA) e visceral (TAV)] e sua associa����o a vari��veis cl��nicas. Amostras de gordura do TASA e TAV foram obtidas de 21 mulheres submetidas �� cirurgia bari��trica (IMC>40Kg/m2) e 25 amostras de TASA das submetidas �� abdominoplastia (IMC<30Kg/m2). As amostras foram processadas para histologia convencional. O corante picrosirius foi utilizado para avalia����o das fibras col��genas totais. As imagens obtidas foram analisadas no ADIPOSOFT��. O percentual de fibrose no TASA e no TAV foi analisado com testes estat��sticos n��o param��tricos, adotando-se um valor de p<0,05. A fibrose no TASA foi maior em mulheres com obesidade (p<0.0006). A fibrose entre os dep��sitos de TASA e de TAV foi observada apenas em mulheres pardas e negras com obesidade (p<0,012). A fibrose no TASA n��o foi correlacionada com as vari��veis cl��nicas nas mulheres sem obesidade. No entanto, nas submetidas �� cirurgia bari��trica, foram observadas correla����es da fibrose no TASA com ��ndice de Massa Corp��rea (IMC), hemoglobina glicada (A1c), LDL e triglicer��deos; e no TAV com porcentagem de perda gordura pr��-operat��rio, % de perda de gordura total, % de massa magra pr��, Taxa Metab��lica Basal (TBM) e Gasto Energ��tico Basal (GEB). Os par��metros metab��licos e de perfil antropom��trico antes da cirurgia bari��trica foram associados �� fibrose no TASA, enquanto os par��metros ap��s a cirurgia foram associados �� fibrose no TAV.

Caracteriza����o imuno-histoqu��mica de les��o h��brida de ameloblastoma desmopl��sico e convencional

O ameloblastoma �� uma neoplasia odontog��nica benigna comumente encontrada nos ossos maxilares. Histologicamente, mostra diversos padr��es, incluindo a ameloblastoma plexiforme e folicular. Quando estes padr��es histol��gicos coexistem com um ameloblastoma que exibe abundante desmoplasia, s��o ent��o denominados de les��o ��h��brida" de ameloblastoma desmopl��sico e convencional. No presente trabalho, nos propomos a relatar um caso de les��o h��brida de ameloblastoma desmopl��sico e convencional destacando os aspectos imuno-histoqu��micos relativos a express��o das prote��nas da matriz extracelular (tenascina, fibronectina e col��geno I).

Repercuss��es cr��nicas nas vias a��reas da hiper��xia neonatal : modelo experimental

RESUMO: O objectivo deste trabalho foi avaliar se a exposi����o cr��nica neonatal �� hiper��xia mo-derada induz altera����es funcionais e estruturais persistentes nas vias a��reas. Desenvolveu-se um modelo animal, no rato, a partir do qual se retiraram implica����es para a compreens��o das repercuss��es cr��nicas da hiper��xia neonatal sobre as vias a��reas de displasia broncopulmonar (DBP), em duas fases distintas: imediatamente ap��s a exposi-����o neonatal a 50%O2 (grupo 50%O2) e ap��s tr��s semanas de recupera����o em ar ambiente (grupo 50%O2+Ar).Compararam-se os resultados da resposta do m��sculo liso de traqueia (MLT) �� esti-mula����o in vitro com metacolina e salbutamol e avaliaram-se as altera����es quantitativas da ��rea de MLT, bem como as altera����es qualitativas da estrutura da traqueia. Demonstrou-se que a exposi����o a 50% de oxig��nio n��o tinha repercuss��es imediatas sobre a resposta in vitro do MLT �� estimula����o colin��rgica, mas que induzia um aumento do relaxamento em resposta ao salbutamol. A contractilidade do MLT em resposta �� estimula-����o com metacolina no grupo 50%O2+Ar foi significativamente superior �� do grupo de con-trolo da mesma idade e tamb��m superior �� observada no grupo 50%O2, enquanto que a resposta ao salbutamol se voltou a aproximar dos valores de controlo ap��s a recupera����o em norm��xia. N��o se observaram diferen��as estatisticamente significativas na ��rea de MLT entre os grupos experimental e de controlo, o que se deve provavelmente ao n��mero reduzido de amostras avaliadas e �� variabilidade deste par��metro no grupo de controlo; contudo, verifi-cou-se um aumento m��dio de 15% imediatamente ap��s a exposi����o �� hiper��xia que persis-tiu ap��s o per��odo de recupera����o.As altera����es qualitativas sobre a arquitectura da traqueia, avaliadas por microscopia ��ptica, revelaram no grupo 50%O2 aumentos da espessura da matriz extracelular e da den-sidade de mast��citos desgranulados na submucosa e advent��cia vizinhas do MLT, sem outras altera����es relativamente ao grupo de controlo com 15 dias. As altera����es da matriz extrace-lular foram revers��veis ap��s a recupera����o em ar ambiente. A densidade de mast��citos per-maneceu superior �� do grupo de controlo de 36 dias de idade, apresentando-se em maior contiguidade com o MLT relativamente ao grupo 50%O2. Em s��ntese, demonstrou-se que a hiper��xia neonatal cr��nica em n��veis moderados in-duz altera����es da resposta contr��ctil do MLT e da estrutura da traqueia que podem ter ex-press��o funcional ap��s a exposi����o ter cessado. Assim, o contributo original do presente trabalho foi o desenvolvimento de um modelo animal que permite avaliar os mecanismos pelos quais a hiper��xia �� capaz de induzir, isoladamente, altera����es cr��nicas da contracti-lidade, do relaxamento do ML e da estrutura das vias a��reas que podem ser respons��veis pela HRB persistente em doentes sujeitos a oxigenioterapia neonatal.-------------ABSTRACT: The aim of this work was to evaluate whether chronic neonatal exposure to hyperoxia in-duces persistent structural and functional airway changes. An animal model was developed, using neonatal rats, in order to understand the chronic effects of neonatal hyperoxia on the airways, in bronchopulmonary dysplasia, in two distinct phases: immediately after neonatal exposure to 50%O2 (50%O2 group) and after three weeks of recovery at ambient air (50%O2+Ar group).The results from the tracheal smooth muscle (TSM) response to in vitro stimulation with metacholine and salbutamol were compared and quantitative changes in TSM area, as well as qualitative changes in tracheal structure were evaluated. It was demonstrated that while exposure to 50% oxygen had no immediate effects on in vitro TSM response to cholinergic stimulation, it induced an increase in relaxation as a result of salbutamol administration. TSM contractility as a result of methacholine administration in the 50%O2 + Ar group was significantly higher than that of the same-age control group, and also higher than the one observed in the 50%O2 group, whereas the response to salbutamol admini-stration was once again closer to the control values after recovery in normoxia. There were no statistically significant differences in the TSM area between the experi-mental and control groups, which is most likely due to the reduced number of samples evalu-ated and to the variability of this parameter in the control group. However, there was an aver-age increase of 15% immediately after exposure to hyperoxia, which persisted after the recov-ery period. Qualitative changes in tracheal architecture, evaluated by optic microscopy, revealed that the 50%O2 group suffered an increase in the thickness of the extracellular matrix and degranu-lated mast cell density in the submucosa and adventitia adjacent to the TSM, without further changes when compared with the control group at 15 days of age. The changes in extracellular matrix were reversible after recovery in ambient air. Mast cell density remained higher than that of the control group at 36 days of age, and more contiguous to TSM than the 50%O2 group. In conclusion, it has been demonstrated that moderate levels of chronic neonatal hyperoxia in-duce changes in TSM contractile response and tracheal structure, which may be functionally ex-pressed after discontinuation of exposure. Therefore, the original contribution of the present work was the development of an animal model which allows the evaluation of the mechanisms through which hyperoxia alone can induce chronic changes in contractility and relaxation of SM and also in airway structure that can be responsible for the persistent airway hyperrespon-siveness found in patients who were submited to neonatal oxygen therapy.

Matrizes de policaprolactona e quitosano para aplica����o em engenharia de tecidos

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Biom��dica

Analysis of outcome and cancer stem cells status in patients with resectable pancreatic adenocarcinoma

RESUMO: Actualmente, a ��nica possibilidade de cura para doentes com adenocarcinoma do p��ncreas (PDAC) �� a ressec����o cir��rgica, no in��cio deste estudo, perguntamo-nos se os predictores cl��nico-patol��gicos cl��ssicos de prognostico poderiam ser validados em uma grande cohort de doentes com cancro do p��ncreas ressec��vel e se outros predictores cl��nicos poderiam ter um papel na decis��o de que doentes beneficiariam de ressec����o cir��rgica. No cap��tulo 2, observamos que at�� 30% dos doentes morrem no primeiro ano ap��s a ressec����o cir��rgica, pelo que o nosso objectivo foi determinar factores pr��-operat��rios que se correlacionam com mortalidade precoce ap��s resseca����o cir��rgica com recurso a um instrumento estatisticamente validado, o Charlson-Age Comorbidity Index (CACI), determinamos que um CACI score superior a 4 foi preditivo de internamentos prolongados (p <0,001), complica����es p��s-operat��rias (p = 0,042), e mortalidade em 1 ano p��s- ressec����o cir��rgica (p <0,001). Um CACI superior a 6 triplicou a mortalidade no primeiro ano p��s-cirurgia e estes doentes t��m menos de 50% de probabilidade de estarem vivos um ano ap��s a cirurgia. No cap��tulo 3, o nosso objectivo foi identificar uma prote��na de superf��cie que se correlacionasse estatisticamente com o prognostico de doentes com adenocarcinoma do p��ncreas e permitisse a distin����o de subgrupos de doentes de acordo com as suas diferen��as moleculares, perguntamo-nos ainda se essa prote��na poderia ser um marcador de c��lulas-estaminais. No nosso trabalho anterior observamos que as c��lulas tumorais na circula����o sangu��nea apresentavam genes com caracter��sticas bifenot��pica epitelial e mesenquimal, enriquecimento para genes de c��lulas estaminais (ALDH1A1 / ALDH1A2 e KLF4), e uma super-express��o de genes da matriz extracelular (colag��nios, SPARC, e DCN) normalmente identificados no estroma de PDAC. Ap��s a avalia����o dos tumores prim��rios com RNA-ISH, muitos dos genes identificados, foram encontrados co-localizando em uma sub-popula����o de c��lulas na regi��o basal dos ductos pancre��ticos malignos. Al��m disso, observamos que estas c��lulas expressam o marcador SV2A neuroend��crino, e o marcador de c��lulas estaminais ALDH1A1/2. Em compara����o com tumores negativos para SV2, os doentes com tumores SV2 positivos apresentaram n��veis mais baixos de CA 19-9 (69% vs. 52%, p = 0,012), tumores maiores (> 4 cm, 23% vs. 10%, p = 0,0430), menor invas��o de g��nglios linf��ticos (69% vs. 86%, p = 0,005) e tumores mais diferenciados (69% vs. 57%, p = 0,047). A presen��a de SV2A foi associada com uma sobrevida livre de doen��a mais longa (HR: 0,49 p = 0,009) bem como melhor sobrevida global (HR: 0,54 p = 0,018). Em conjunto, esta informa����o aponta para dois subtipos diferentes de adenocarcinoma do p��ncreas, e estes subtipos co-relacionam estatisticamente com o prognostico de doentes, sendo este subgrupo definido pela presen��a do clone celular SV2A / ALDH1A1/2 positivo com caracter��sticas neuroend��crinas. No Cap��tulo 4, a express��o de SV2A no cancro do p��ncreas foi validado em linhas celulares prim��rias. Demonstramos a heterogeneidade do adenocarcinoma do p��ncreas de acordo com caracter��sticas clonais neuroend��crinas. Ao comparar as linhas celulares expressando SV2 com linhas celulares negativas, verificamos que as linhas celulares SV2+ eram mais diferenciadas, diferindo de linhas celulares SV2 negativas no que respeita a muta����o KRAS, prolifera����o e a resposta �� quimioterapia. No cap��tulo 5, perguntamo-nos se o clone celular SV2 positivo poderia explicar a resist��ncia a quimioterapia observada em doentes. Observamos um aumento absoluto de clones celulares expressando SV2A, em m��ltiplas linhas de evid��ncia - doentes, linhas de c��lulas prim��rias e xenotransplantes. Embora, tenhamos sido capazes de demonstrar que o adenocarcinoma do p��ncreas �� uma doen��a heterog��nea, consideramos que a caracteriza����o gen��tica destes clones celulares expressando SV2A �� de elevada import��ncia. Pretendemos colmatar esta limita����o com as seguintes estrat��gias: Ap��s o tratamento com quimioterapia neoadjuvante na nossa coorte, realizamos microdisseca����o a laser das amostras primarias em parafina, de forma a analisar muta����es gen��ticas observadas no adenocarcinoma pancre��tico; em segundo lugar, pretendemos determinar consequ��ncias de knockdown da express��o de SV2A em nossas linhas celulares seguindo-se o tratamento com gemicitabina para determina����o do papel funcional de SV2A; finalmente, uma vez que os nossos esfor��os anteriores com um promotor - rep��rter e SmartFlare ��� falharam, o pr��ximo passo ser�� realizar RNA-ISH PrimeFlow��� seguido de FACS e RNA-seq para caracteriza����o deste clone celular. Em conjunto, conseguimos provar com v��rias linhas de evid��ncia, que o adenocarcinoma pancre��tico �� uma doen��a heterog��nea, definido por um clone de c��lulas que expressam SV2A, com caracter��sticas neuroend��crinas. A presen��a deste clone no tecido de doentes correlaciona-se estatisticamente com o prognostico da doen��a, incluindo sobrevida livre de doen��a e sobrevida global. Juntamente com padr��es de prolifera����o e co-express��o de ALDH1A1/2, este clone parece apresentar um comportamento de c��lulas estaminais e est�� associado a resist��ncia a quimioterapia, uma vez que a sua express��o aumenta ap��s agress��o qu��mica, quer em doentes, quer em linhas de c��lulas prim��rias.----------------------------- ABSTRACT: Currently, the only chance of cure for patients with pancreatic adenocarcinoma is surgical resection, at the beginning of my thesis studies, we asked if the classical clinicopathologic predictors of outcome could be validated in a large cohort of patients with early stage pancreatic cancer and if other clinical predictors could have a role on deciding which patients would benefit from surgery. In chapter 2, we found that up to 30% of patients die within the first year after curative intent surgery for pancreatic adenocarcinoma. We aimed at determining pre-operative factors that would correlate with early mortality following resection for pancreatic cancer using a statistically validated tool, the Charlson-Age Comorbidity Index (CACI). We found that a CACI score greater than 4 was predictive of increased length of stay (p<0.001), post-operative complications (p=0.042), and mortality within 1-year of pancreatic resection (p<0.001). A CACI score of 6 or greater increased 3-fold the odds of death within the first year. Patients with a high CACI score have less than 50% likelihood of being alive 1 year after surgery. In chapter 3 we aimed at identifying a surface protein that correlates with patient���s outcome and distinguishes sub-groups of patients according to their molecular differences and if this protein could be a cancer stem cell marker. The most abundant class of circulating tumor cells identified in our previous work was found to have biphenotypic features of epithelial to mesenchymal transition, enrichment for stem-cell associated genes (ALDH1A1/ALDH1A2 and KLF4), and an overexpression of extracellular matrix genes (Collagens, SPARC, and DCN) normally found in the stromal microenvironment of PDAC primary tumors. Upon evaluation of matched primary tumors with RNA-ISH, many of the genes identified were found to co-localize in a sub-population of cells at the basal region of malignant pancreatic ducts. In addition, these cells expressed the neuroendocrine marker SV2A, and the stem cell marker ALDH1A1/2. Compared to SV2 negative tumors, patients with SV2 positive tumors were more likely to present with lower CA 19-9 (69% vs. 52%, p = 0.012), bigger tumors (size > 4 cm, 23% vs. 10%, p= 0.0430), less nodal involvement (69% vs. 86%, p = 0.005) and lower histologic grade (69% vs. 57%, p = 0.047). The presence of SV2A expressing cells was associated with an improved disease free survival (HR: 0.49 p=0.009) and overall survival (HR: 0.54 p=0.018) and correlated linearly with ALDH1A2. Together, this information points to two different sub-types of pancreatic adenocarcinoma, and these sub-types correlated with patients��� outcome and were defined by the presence of a SV2A/ ALDH1A1/2 expressing clone with neuroendocrine features. In Chapter 4, SV2A expression in cancer was validated in primary cell lines. We were able to demonstrate pancreatic adenocarcinoma heterogeneity according to neuroendocrine clonal features. When comparing SV2 expressing cell lines with SV2 negative cell lines, we found that SV2+ cell lines were more differentiated and differ from SV2 negative cell lines regarding KRAS mutation, proliferation and response to chemotherapy. In Chapter 5 we aimed at determining if this SV2 positive clone could explain chemoresistance observed in patients. We found an absolute increase in SV2A expressing cells, with multiple lines of evidence, in patients, primary cell lines and xenografts. Although, we have been able to show evidence that pancreatic adenocarcinoma is a heterogeneous disease, our findings warrant further investigation. To further characterize SV2A expressing clones after treatment with neoadjuvant chemotherapy in our cohort, we have performed laser capture microdissection of the paraffin embedded tissue in this study and will analyze the tissue for known genetic mutations in pancreatic adenocarcinoma; secondly, we want to know what will happen after knocking down SV2A expression in our cell lines followed by treatment with gemcitabine to determine if SV2A is functionally important; finally, since our previous efforts with a promoter ��� reporter and SmartFlare��� have failed, we will utilize a novel PrimeFlow��� RNA-ISH assay followed by FACS and RNA sequencing to further characterize this cellular clone. Overall our data proves, with multiple lines of evidence, that pancreatic adenocarcinoma is a heterogeneous disease, defined by a clone of SV2A expressing cells, with neuroendocrine features. The presence of this clone in patients��� tissue correlates with patient���s disease free survival and overall survival. Together with patterns of proliferation and ALDH1A1/2 co-expression, this clone seems to present a stem-cell-like behavior and is associated with chemoresistance, since it increases after chemotherapy, both in patients and primary cell lines.

Bacterial cellulose as a novel substrate for retinal pigment epithelium cells transplantation in age-related macular degeneration

Tese de Doutoramento em Engenharia Qu��mica e Biol��gica.

Comparing different methods to measure biofilm thickness: the techniques are: optical coherence tomography, confocal laser scanning microscopy and low load compression test

Disserta����o de mestrado integrado em Engenharia Biom��dica (��rea de especializa����o em Engenharia Cl��nica)

Development of hyaluronic acid, dextrin and extracellular matrix hydrogels for cell expansion

Disserta����o de mestrado integrado em Engenharia Biom��dica (��rea de especializa����o em Engenharia Cl��nica)

Biomaterials for cartilage tissue engineering under mechanical stimulus

Tese de Doutoramento em Ci��ncias (Especialidade de F��sica)

Synthesis of new peptide derivatives that self-assemble into nanostructured hydrogels for biomedical applications

Tese de Doutoramento em Ci��ncias (��rea de especializa����o em Qu��mica)

Activity of carvacrol against Coagulase-negative Staphylococci biofilm related infections

Disserta����o de mestrado em Bioengenharia

Implante de stent elu��do com batimastat para o tratamento da doen��a arterial coronariana: resultados do estudo piloto brasileiro

OBJETIVO: Os excelentes resultados obtidos com os stents elu��dos com sirolimus (rapamicina) na preven����o da reestenose motivaram a avalia����o de outras subst��ncias que tamb��m apresentassem esta propriedade. O batimastat �� um bloqueador de alta efic��cia da enzima metaloproteinase, com potencial para reduzir a degrada����o da matriz extracelular e inibir a migra����o das c��lulas musculares lisas, com conseq��ente capacidade de controlar a reestenose coronariana. M��TODOS: De outubro/2001 a abril/2002, foram selecionados prospectivamente, 34 pacientes com les��es "de novo", em art��ria coron��ria nativa, >50% e < 100%, pass��veis de tratamento com stents de 3 a 4 mm de di��metro e de 18 mm de comprimento. O desfecho prim��rio do estudo foi verificar a ocorr��ncia de eventos cardiovasculares maiores (morte de origem card��aca, infarto agudo do mioc��rdio e necessidade de revasculariza����o do vaso alvo) aos 30 dias e aos 4 meses e o secund��rio avaliar a taxa de reestenose coronariana ap��s 4 meses do implante e de trombose subaguda aos 30 dias. RESULTADOS: A taxa de sucesso do procedimento foi de 97,1%. O desfecho prim��rio ocorreu em 2,9% e 27,2% dos pacientes aos 30 dias e aos 4 meses respectivamente. A taxa de reestenose bin��ria ao estudo angiogr��fico foi de 39,3%. N��o houve epis��dio de trombose subaguda. A an��lise comparativa entre os grupos que apresentaram ou n��o reestenose n��o mostrou diferen��as significativas entre ambos, exceto na perda luminal tardia, maior no G-I. CONCLUS��O: Os stents elu��dos com batimastat apresentaram bom perfil de seguran��a, entretanto, n��o se mostraram efetivos no controle da reestenose coronariana.

Expresi��n y rol del SLPI (Secretory leukocyte protease inhibitor) en la inmunidad innata del ojo asociado a procesos inflamatorios e infecciosos oculares

En la terapia antimicrobiana, se pretende comprender y desarrollar sinergia con los mecanismos de defensa innatos del hu��sped, en el ��rea oftalmol��gica, los relacionados a procesos oculares infecciosos tanto espec��ficos como no espec��ficos. Conservando y estimulando la presencia de los p��ptidos antimicrobianos, se obtendr��a una prevenci��n e inhibici��n de los microorganismos responsables de los principales procesos infecciosos e inflamatorios oculares, que permitir�� un tratamiento r��pido y eficaz en el control del proceso patol��gico. De esta forma se podr�� evitar secuelas devastadoras de dichas complicaciones que en un gran porcentaje llevan a la ceguera del paciente asociadas al diagn��stico tard��o, inespec��fico o asociado a resistencia a los antibi��ticos actuales. Los p��ptidos antimicrobianos y anti-inflamatorios prometen ser un m��todo terap��utico eficaz, natural, libre de efectos secundarios y adversos en la terapia antimicrobiana e inmuno moduladora futura. Basados en estudios publicados realizados en animales, estosp��ptidos con capacidad antibacteriana se expresar��an en tejidos oculares normales actuando como agentes antimicrobianos de la inmunidad innata del ojo y as�� tambi��n como regulador de la actividad inflamatoria. Estos p��ptidos antimicrobianos ��� anti inflamatorios podr��an utilizarse para la prevenci��n y tratamiento de procesos infecciosos oculares, en formulaciones simples o combinadas a otras sustancias antibi��ticas antimicrobianas en forma sin��rgica. Secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI), terminolog��a anglosajona que se utiliz�� para definir a una prote��na de 12 kDa de peso molecular cuya ��nica funci��n conocida hasta hace unos a��os era la de ser secretada por leucocitos para inhibir proteasas de la matriz extracelular. El objetivo es estudiar la presencia del p��ptido antimicrobiano SLPI en relaci��n con el remodelado cicatrizal de la matriz extracelular de la cornea y otras estructuras intra oculares, como as�� tambi��n su expresi��n en relaci��n a procesos inflamatorios e infecciosos del ojo como agente antimicrobiano de la inmunidad innata del hu��sped.

Participaci��n de las c��lulas de la cresta neural en el desarrollo de anomal��as inducidas por agentes ex��genos (s��ndrome fetal alcoh��lico y embriopat��a por ��cido retinoico)

En la etapa embrionaria temprana de los vertebrados, las c��lulas de la cresta neural (CCN) se segregan del tubo neural y se distribuyen con patrones temporales y espaciales muy precisos, contribuyendo a la formaci��n de muchos derivados: neuronas y gl��a del sistema nervioso perif��rico, parte del sistema end��crino, sistema pigmentario y la mayor parte de los tejidos cr��neo-faciales. Las bases morfogen��ticas de esta movilizaci��n de las CCN se asocian con la disponibilidad de componentes de la matriz extracelular, con fen��menos de apoptosis selectiva, y con la expresi��n de genes home��ticos, de prote��nas transportadoras de retinoides y de receptores de ��cido retinoico (AR). En consecuencia, el mecanismo que define el comportamiento de las CCN migratorias asume una especial importancia, desde que cualquier fallo producido en estos "reguladores topogr��ficos" podr�� alterar la ordenada traslocaci��n de CN, induciendo una dismorfog��nesis. (...) Objetivos: 1) Analizar el comportamiento din��mico de la etapa migratoria temprana de las CCN de niveles cef��lico y troncal expuestas a etanol o AR in vitro. 2) Evaluar la posible reversibilidad de los efectos del etanol y del AR sobre la morfolog��a y din��mica migratoria de las CCN de niveles cef��lico y troncal in vitro. 3) Analizar los componentes del citoesqueleto asociados con los cambios de forma y motilidad celular en CCN de niveles cef��lico y troncal expuestas a etanol y AR in vitro. Los resultados del proyecto permitir��n aportar al conocimiento de los mecanismos b��sicos que regulan la movilidad de poblaciones celulares de gran importancia para el desarrollo humano. Los datos obtenidos servir��n de base para futuros enfoques de biolog��a molecular tendientes a innovar aspectos del diagn��stico, pron��stico y prevenci��n de patolog��as humanas de creciente prevalencia provocadas por el etanol (FAS) y los retinoides (RAE).