Synthesis and anticancer activity of long-chain isonicotinic ester ligand-containing arene ruthenium complexes and nanoparticles

Arene ruthenium complexes containing long-chain N-ligands L1 = NC5H4-4-COO-C6H4-4-O-(CH2)9-CH3 or L2 = NC5H4-4-COO-(CH2)10-O-C6H4-4-COO-C6H4-4-C6H4-4-CN derived from isonicotinic acid, of the type [(arene)Ru(L)Cl2] (arene = C6H6, L = L1: 1; arene = p-MeC6H4Pr i , L = L1: 2; arene = C6Me6, L = L1: 3; arene = C6H6, L = L2: 4; arene = p-MeC6H4Pr i , L = L2: 5; arene = C6Me6, L = L2: 6) have been synthesized from the corresponding [(arene)RuCl2]2 precursor with the long-chain N-ligand L in dichloromethane. Ruthenium nanoparticles stabilized by L1 have been prepared by the solvent-free reduction of 1 with hydrogen or by reducing [(arene)Ru(H2O)3]SO4 in ethanol in the presence of L1 with hydrogen. These complexes and nanoparticles show a high anticancer activity towards human ovarian cell lines, the highest cytotoxicity being obtained for complex 2 (IC50 = 2 _6;M for A2780 and 7 _6;M for A2780cisR)

A non-interventional phase IV Belgian survey to assess the antiviral effectiveness of pegylated interferon-alpha-2b and ribavirin treatment according to the stage of liver fibrosis in previously untreated patients with genotype 1/4/5/6 chronic hepatitis C (PRACTICE).

BACKGROUND AND STUDY AIMS: This was an observational, non-interventional, multicenter, phase IV study, in patients with genotype 1/4/5/6 chronic hepatitis C (CHC). The primary objectives were to evaluate SVR in patients with no or minimal fibrosis (METAVIR F0-F1) versus well established fibrosis (F2-F4), and to estimate response on Weeks 12, 24 and 48 on treatment in previously untreated patients with genotypes 1/4/5/6 CHC. PATIENTS AND METHODS: 538 patients treated with pegylated interferon alfa 2b 1.5 mcg/kg in combination with ribavirin 800-1200 mg/day were enrolled in 55 sites in Belgium and Luxembourg, 505 being considered for the analysis. 40% of the patients were female and 60% male, the average age was 47.5 years, 10.5% were 65 or older. RESULTS: SVR was observed in 35% of the patients, EVR in 68%, of which pEVR in 33% and cEVR in 35%. SVR was observed in 43% of the low fibrosis group (F0, F1) and 30% of the high fibrosis group (F2, F3, F4) (p = 0.005). SVR rates were 34% for genotype 1, 37% for genotype 4, and 47% for genotype 5 (NS). Multivariate analysis showed that EVR and baseline METAVIR score are independent prognostic factors for SVR. CONCLUSIONS: This trial confirms that fibrosis stage and early viral response are the most important key-factors to predict sustained response, suggesting that the earlier patients are treated, the better the outcome. Non-invasive techniques enable us to closely monitor progression of fibrosis, allowing a better selection of patients for antiviral treatment in the DAA-era.

Controlled dynamic generation of standard 1,6-hexamethylene diisocyanate aerosols

A procedure for the dynamic generation of 1,6-hexamethylene diisocyanate (HDI) aerosol atmospheres of 70 micrograms m-3 (0.01 ppm) to 1.75 mg m-3 (0.25 ppm), based on the precise control of the evaporation of pure liquid HDI and subsequent dilution with air, was developed. The apparatus consisted of a home-made glass nebulizer coupled with a separation stage to exclude non-respirable droplets (greater than 10 microns). The aerosol concentrations were achieved by passing air through the nebulizer at 1.5-4.5 l. min-1 to generate dynamically 0.01-0.25 ppm of diisocyanate in an experimental chamber of 8.55 m3. The distribution of the liquid aerosol was established with an optical counter and the diisocyanate concentration was determined from samples collected in impingers by a high-pressure liquid chromatographic method. The atmospheres generated were suitable for the evaluation both of sampling procedures full scale, and of analytical methods: at 140 micrograms m-3 (0.02 ppm) they remained stable for 15-min provocation tests in clinical asthma, as verified by breath-zone sampling of exposed patients.

Impaired glutathione synthesis in schizophrenia: convergent genetic and functional evidence

Schizophrenia is a complex multifactorial brain disorder with a genetic component. Convergent evidence has implicated oxidative stress and glutathione (GSH) deficits in the pathogenesis of this disease. The aim of the present study was to test whether schizophrenia is associated with a deficit of GSH synthesis. Cultured skin fibroblasts from schizophrenia patients and control subjects were challenged with oxidative stress, and parameters of the rate-limiting enzyme for the GSH synthesis, the glutamate cysteine ligase (GCL), were measured. Stressed cells of patients had a 26% (P = 0.002) decreased GCL activity as compared with controls. This reduction correlated with a 29% (P < 0.001) decreased protein expression of the catalytic GCL subunit (GCLC). Genetic analysis of a trinucleotide repeat (TNR) polymorphism in the GCLC gene showed a significant association with schizophrenia in two independent case-control studies. The most common TNR genotype 7/7 was more frequent in controls [odds ratio (OR) = 0.6, P = 0.003], whereas the rarest TNR genotype 8/8 was three times more frequent in patients (OR = 3.0, P = 0.007). Moreover, subjects with disease-associated genotypes had lower GCLC protein expression (P = 0.017), GCL activity (P = 0.037), and GSH contents (P = 0.004) than subjects with genotypes that were more frequent in controls. Taken together, the study provides genetic and functional evidence that an impaired capacity to synthesize GSH under conditions of oxidative stress is a vulnerability factor for schizophrenia.

Hypotensive effect of the active fragment derived from factor XII is mediated by an activation of the plasma kallikrein-kinin system.

Plasma protein fraction (PPF) contaminated by factor XII active fragment (XIIf) may cause hypotensive reactions when infused to patients. This study was planned to assess in conscious normotensive rats whether the blood pressure response to the factor XIIf is mediated by an activation of the plasma kallikrein-kinin system or by stimulation of prostaglandin synthesis. To test whether the factor XIIf-induced blood pressure fall is due partially to an enhanced generation of vasodilating prostaglandins, the blood pressure effect of XIIf (1 microgram i.v.) was investigated 15 min after treatment with indomethacin (5 mg i.v.), an inhibitor of cyclo-oxygenase. Factor XIIf reduced mean blood pressure similarly in indomethacin- and vehicle-treated rats (-23 +/- 4 mmHg, n = 5, and -23 +/- 5 mmHg, n = 4, respectively). Other rats received factor XIIf 15 min after depletion of circulating prekallikrein by the administration of dextran sulfate. Thirty minutes after a 0.25 mg i.v. dose of this agent, plasma prekallikrein activity averaged 0.12 +/- 0.015 mumol/min/ml (n = 6) as compared to 2.48 +/- 0.31 mumol/min/ml in control rats (n = 4, P less than .001). Factor XIIf decreased mean blood pressure by only 4 +/- 2 mm Hg in rats pretreated with dextran sulfate. Thus, it was possible to blunt the acute hypotensive effect of factor XIIf by depleting circulating prekallikrein, but not by inhibiting prostaglandin production. This strongly suggests that the blood pressure effects of factor XIIf is mediated by a stimulation of the plasma kallikrein-kinin system.

Highly efficient DNA incorporation of intratumourally injected [125I]iododeoxyuridine under thymidine synthesis blocking in human glioblastoma xenografts.

Intratumoural (i.t.) injection of radio-iododeoxyuridine (IdUrd), a thymidine (dThd) analogue, is envisaged for targeted Auger electron- or beta-radiation therapy of glioblastoma. Here, biodistribution of [(125)I]IdUrd was evaluated 5 hr after i.t. injection in subcutaneous human glioblastoma xenografts LN229 after different intravenous (i.v.) pretreatments with fluorodeoxyuridine (FdUrd). FdUrd is known to block de novo dThd synthesis, thus favouring DNA incorporation of radio-IdUrd. Results showed that pretreatment with 2 mg/kg FdUrd i.v. in 2 fractions 0.5 hr and 1 hr before injection of radio-IdUrd resulted in a mean tumour uptake of 19.8% of injected dose (% ID), representing 65.3% ID/g for tumours of approx. 0.35 g. Tumour uptake of radio-IdUrd in non-pretreated mice was only 4.1% ID. Very low uptake was observed in normal nondividing and dividing tissues with a maximum concentration of 2.9% ID/g measured in spleen. Pretreatment with a higher dose of FdUrd of 10 mg/kg prolonged the increased tumour uptake of radio-IdUrd up to 5 hr. A competition experiment was performed in FdUrd pretreated mice using i.t. co-injection of excess dThd that resulted in very low tumour retention of [(125)I]IdUrd. DNA isolation experiments showed that in the mean &gt;95% of tumour (125)I activity was incorporated in DNA. In conclusion, these results show that close to 20% ID of radio-IdUrd injected i.t. was incorporated in tumour DNA after i.v. pretreatment with clinically relevant doses of FdUrd and that this approach may be further exploited for diffusion and therapy studies with Auger electron- and/or beta-radiation-emitting radio-IdUrd.

Caracterização mineralógica, potencial de reserva e sustentabilidade agrícola de alguns sítios florestais de eucalipto da região do Vale do Rio Doce (MG)

Foram estudados alguns solos da região do Vale do Rio Doce (MG) em 1991, nos municípios de Ipatinga, Nova Era e Guanhães, provenientes de áreas de reflorestamento de Eucalyptus grandis. Selecionaram-se oito sítios florestais com solos de diferentes classes taxonômicas, e uma detalhada caracterização mineralógica e avaliação do potencial de reserva de nutrientes foram desenvolvidas. Os solos estudados foram mineralogicamente classificados como: caulinítico não-sesquioxídicos (2 e 5); caulinítico-sesquioxídico (1); gibbsítico-sesquioxídicos (4, 6 e 7); hematítico (3) e gibbsítico (8). Os principais argilominerais e óxidos de ferro e alumínio presentes nesses solos são caulinita, gibbsita, hematita, goethita e maghemita. A reserva mineral de médio a longo prazo para potássio é praticamente inexistente, estando presente, embora com baixa magnitude, nos solos 2 e 5, na forma de micas e feldspatos. As relações Ca-trocável/Ca-total e Mg-trocável/Mg-total exprimem baixa capacidade de reposição desses nutrientes nos solos estudados. Sugere-se a adição de nutrientes de acordo com os níveis críticos exigidos na implantação e manutenção do ciclo do eucalipto, em virtude da ausência de sustentabilidade desses sítios florestais em termos de reserva de nutrientes a curto, médio e longo prazos.

Balanço da adubação nitrogenada sólida e fluida de cobertura na cultura de milho, em sistema plantio direto no Triângulo Mineiro (MG)

Foi desenvolvido um experimento com as fontes uréia e uran aplicadas superficialmente ou incorporadas (5-7 cm) na cobertura nitrogenada de milho, no sistema plantio direto, com o objetivo de efetuar, na colheita, um balanço do N-uréia (15N) e quantificar as perdas por volatilização de N-NH3 nesses tratamentos, assim como nos adicionais, testemunha e misturas de uréia + KCl (sólida) e uran + KCl (fluida), na formulação 6-0-9 (N-P2O5-K2O), aplicadas somente em superfície. Os tratamentos originaram-se de um fatorial 1 + (2 x 2) + 2, sendo a testemunha + o fatorial 2 x 2 (duas fontes; uréia e uran x duas formas de localização) + dois tratamentos adicionais, misturas uréia + KCl (sólida) e uran + KCl (fluida), dispostos em blocos casualizados com quatro repetições. O ensaio foi realizado em Latossolo Vermelho-Escuro muito argiloso fase cerrado relevo plano, no Centro de Pesquisa Novartis - Seeds do município de Uberlândia (MG). Cerca de 100 kg ha-1 de N foram aplicados no estádio fenológico de seis a oito folhas. Após 26 dias da adubação, as perdas acumuladas de N-NH3 nos tratamentos em superfície foram de 54, 41, 17 e 14% do N aplicado, para uréia, uréia + KCl, uran e uran + KCl, respectivamente. Quando a uréia e o uran foram incorporados ao solo, as perdas acumuladas de N-NH3 foram de 5,0 e 3,5% do N aplicado, respectivamente. Na colheita, o N da uréia absorvido pela planta (raízes + colmos + folhas + grãos) foi de 19,9 kg ha-1 (20,8% do N aplicado) e de 29,5 kg ha-1 (29,5% do N aplicado), quando aplicado na superfície e incorporado, respectivamente. O N-uréia do uran absorvido pela planta foi de 11,4 kg ha-1 (26,1% do N aplicado) e de 11,7 kg ha-1 (26,8% do N aplicado), quando aplicado na superfície ou incorporado, respectivamente. O N da uréia imobilizado na camada de 0-45 cm de profundidade foi, em média, de 9,9 kg ha-1 (10,0% do N aplicado), da aplicação superficial ou incorporada, e do N-uréia do uran foi de 3,3 kg ha-1 (7,6% do N aplicado). O N-mineral no solo derivado do N da uréia e do N-uréia do uran aplicados na superfície, no perfil de 0-150 cm, foi, respectivamente, de 2,4 e 3,2%, e de 5,9 e 2,5%, com as fontes incorporadas. No balanço global de N, em média, 13,7 e 50,3% do N da uréia não foram recuperados no sistema solo-planta, respectivamente, para a aplicação superficial ou incorporada; para o N-uréia do uran, obtiveram-se, respectivamente, 47,7 e 57,6%.

Prevention of vitamin K deficiency bleeding with three oral mixed micellar phylloquinone doses: results of a 6-year (2005-2011) surveillance in Switzerland.

In 2003, the Swiss guidelines to prevent vitamin K deficiency bleeding (VKDB) were adapted. As two oral doses (2 mg, hour/day 4) of mixed micellar VK preparation had failed to abolish late VKDB, a third dose (week 4) was introduced. This report summarizes the new guidelines acceptance by Swiss pediatricians and the results of a prospective 6-year surveillance to study their influence on the incidence of VKDB. The new guidelines acceptance by Swiss pediatricians was evaluated by a questionnaire sent to all pediatricians of the Swiss Society of Paediatrics. With the help of the Swiss Paediatric Surveillance Unit, the incidence of VKDB was monitored prospectively from July 1, 2005 until June 30, 2011. Over a 6-year period (458,184 live births), there was one case of early and four cases of late VKDB. Overall incidence was 1.09/10(5) (95 % confidence intervals (CI) 0.4-2.6). Late VKDB incidence was 0.87/10(5) (95 % CI 0.24-2.24). All four infants with late VKDB had an undiagnosed cholestasis at the time of bleeding; parents of 3/4 had refused VK prophylaxis, and in 1/4, the third VK dose had been forgotten. Compared with historical control who had received only two oral doses of mixed micellar VK (18 cases for 475,372 live births), the incidence of late VKDB was significantly lower with three oral doses (Chi(2),Yates correction, P = 0.007). CONCLUSION: VKDB prophylaxis with 3 × 2 mg oral doses of mixed micellar VK seems to prevent adequately infants from VKDB. The main risk factors for VKDB in breast-fed infants are parental VK prophylaxis refusal or an unknown cholestasis.

Indicadores de campo para solos hidromórficos na região de Viçosa (MG)

Indicadores locais são úteis para a identificação de ambientes. Na região de Viçosa, embora os solos encharcados ocorram sob vegetação de taboa (Thypha dominguensis), Gleissolos, de coloração típica acinzentada, são incomuns. A maioria dos solos com lençol freático alto é coberta pela taboa e as características gleizadas do solo são pouco pronunciadas, especialmente nos solos com mais altos teores de ferro. Não há clara conexão entre altura do lençol freático e deficiência de oxigênio. Como as relações entre altura do lençol freático, deficiência de oxigênio e cor do solo não são claras o bastante, hipotetizou-se que outros indicadores para as condições de redução poderiam ser encontrados nesses ambientes. Neste propósito, caracterizou-se o solo e trabalhou-se na sua relação com a vegetação. Estudaram-se os solos com várias intensidades de condições de drenagem em três áreas: Cajuri (Área 1), Viçosa (Área 2) e Coimbra (Área 3), todas pertencentes ao Planalto de Viçosa. Na avaliação das condições de redox dos solos (pH e pE a campo), utilizou-se um medidor digital adaptado a uma sonda de aço. Conquanto importante na identificação de indicadores de ambientes, a caracterização morfológica não se mostrou precisa o bastante para evidenciar o que os solos encharcados têm mais em comum: a deficiência de oxigênio por longos períodos. A cor, embora seja um bom e útil indicador para muitas das condições de drenagem do solo, não se mostrou também eficiente nessas áreas. De modo geral, os Gleissolos estudados apresentaram cromas maiores do que dois, o que supera o limite do critério para identificar horizonte glei no Sistema Brasileiro de Classificação de Solos, embora o teste indicador da presença de Fe2+ com alfa,alfa'-dipiridil tenha sido positivo. Por outro lado, a presença da taboa foi um bom indicador das condições de má drenagem. Nos locais dos povoamentos puros de taboa, os valores de pE foram mais baixos, embora estes tenham variado entre limites muito amplos. A presença do lençol freático acima de 60 cm foi um bom critério para avaliar o grau de gleização dos solos.

Adsorção de fósforo, superfície específica e atributos mineralógicos em solos desenvolvidos de rochas vulcânicas do Alto Paranaíba (MG)

Muitos solos tropicais com grau avançado de intemperismo, apesar de apresentarem teores totais de P relativamente elevados, mostram-se deficientes em P disponível, pela baixa solubilidade das principais formas de P encontradas. Neste trabalho, estudou-se o processo de adsorção de P em solos desenvolvidos de rochas vulcânicas básicas e ultrabásicas do Alto Paranaíba em Minas Gerais, algumas das quais ricas em apatita, estabelecendo-se relações com atributos de solo, como superfície específica (SE) e mineralogia. Foram estudados onze horizontes B diagnósticos de perfis de solos da região, por meio de análises químicas, físicas e mineralógicas; foram determinadas as capacidades máximas de adsorção do fósforo (CMAF), SE pelo método direto BET-N2 e indiretamente por cálculos, bem como foi feita a quantificação dos minerais de argila pelo método de alocação. Os valores da SE obtidos indiretamente de cada mineral, foram superestimados em relação à SE determinada pelo método BET-N2 na fração argila total. Nos Latossolos estudados, com texturas e materiais de origem variáveis, desde rochas básico-alcalinas até ultrabásicas, a proporção e a área superficial da gibbsita e goethita têm participação destacada na adsorção de P. A faixa de valores de CMAF TFSA encontrada está consistente com os valores na literatura reportados para Latossolos, embora os valores de CMAF TFSA e CMAF ARG corrigida, de 2,98 e 4,38 mg g-1, respectivamente, do Latossolo Vermelho-Amarelo de rocha ultrabásica (P6), sejam comparáveis àqueles de solos subtropicais alofânicos derivados de cinzas vulcânicas. A CMAF ARG corrigida para percentagem de argila evidenciou expressivos valores nos Cambissolos de rochas vulcânicas ultrabásicas (4,32 e 5,52), com valor menor naquele derivado do tufito (3,16 mg g-1). Os valores de substituição isomórfica de Al na goethita são mais elevados que nas hematitas. Em contraste com os Latossolos, os Cambissolos mostraram variações grandes nos atributos químicos, mineralógicos e na CMAF, em virtude da natureza diversificada de materiais de origem e do menor grau de intemperismo.

An index of 5-HT synthesis changes during early antidepressant treatment: α-[11C]methyl-l-tryptophan PET study

The antidepressant selective serotonin transporter inhibitors (SSRIs) are clinically active after a delay of several weeks. Indeed, the rapid increase of serotonin (5-HT) caused by SSRIs, stimulates the 5-HT1A autoreceptors, which exert a negative feedback on the 5-HT neurotransmission. Only when autoreceptors are desensitized, can SSRIs exert their therapeutic activity. The 5-HT1A receptor antagonist pindolol has been used to accelerate the clinical effects of antidepressant by preventing the negative feedback. Using the a-[11C]methyl-L-tryptophan/positron emission tomography (PET), the goal of the present double-blind, randomized study was to compare the changes in a-[11C]methyl-L-tryptophan trapping, an index of serotonin synthesis, in patients suffering from unipolar depression treated with the SSRI citalopram (20 mg/day) plus placebo versus patients treated with citalopram plus pindol (7.5 mg/day). PET and Hamilton depression rating scale (HDRS-17) were performed at baseline, and after 10 and 24 days of antidepressant treatment. Results show that the combination citalopram plus pindol, compared to citalopram alone shows a more rapid and greater increase of an index of 5-HT synthesis in prefrontal cortex (BA 9). This research is the first human PET study demonstrating that, after 24 days, the combination SSRIs plus pindolol produces a greater increase of the metabolism of serotonin in the prefrontal cortex, an area associated to depressive symptoms.

Estoques de carbono e nitrogênio em frações lábeis e estáveis da matéria orgânica de solos sob eucalipto, pastagem e cerrado no Vale do Jequitinhonha - MG

A substituição da vegetação nativa na região de Cerrado por florestas plantadas de eucalipto pode levar a mudanças nos estoques de C e N das diferentes frações da matéria orgânica do solo (MOS). Contudo, a intensidade e a direção da mudança nos teores de MOS dependem do tipo de solo, clima e manejo da área plantada. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito do plantio de eucalipto nos estoques de C e N em frações lábeis e estáveis da MOS em região de Cerrado no Vale do Jequitinhonha, MG. O estudo foi desenvolvido utilizando-se amostras de solos provenientes de povoamentos de Eucalyptus urophylla e de áreas adjacentes com vegetação natural de Cerrado e cultivo de pastagem. Para o plantio do eucalipto, a vegetação do Cerrado foi cortada, a lenha removida e os resíduos enleirados e queimados. As plantações de eucalipto com 20 anos apresentaram teores de carbono orgânico total (COT) similares aos da vegetação de Cerrado e pastagem. Nas frações ácido húmico e ácido fúlvico (FAH e FAF), os teores de C foram de 16,6 e 17,5 % maiores para o solo de eucalipto em comparação com os solos da pastagem, e 17,5 e 36,9 % com os solos do Cerrado, respectivamente. O cultivo do eucalipto não reduziu o estoque de C e N da biomassa microbiana do solo (BMS) em comparação com a do Cerrado e pastagem, e proporcionou incremento nas quantidades de C e N na matéria orgânica leve (MOL), o que contribuiu para o aumento da MOS. A contribuição do C derivado do eucalipto para a MOS, após 20 anos de cultivo, foi de 5 %. Isso indica uma baixa taxa de substituição do C nativo pelo C derivado do eucalipto, com uma média anual de 0,25 %. Assim, a substituição da vegetação nativa do Cerrado por eucalipto não resultou na diminuição do estoque de C nas frações FAH, FAF, MOL e BMS da MOS.

Contribution of humic substances from different composts to the synthesis of humin in a tropical soil

The contribution of humic substances of different composts to the synthesis of humin in a tropical soil was evaluated. Increasing doses (0, 13, 26, 52, and 104 Mg ha-1) of five different composts consisting of agroinpowderrial residues were applied to a Red-Yellow Latosol. These composts were chemically characterized and 13C NMR determined and the quantity of the functional alkyl groups of humic acids applied to the soil as compost was estimated. Thirty days after application of the treatments, organic matter samples were collected for fractionation of humic acids (HA), fulvic acids (FA) and humin (HU), from which the ratios HA/FA and (HA + FA)/HU were calculated. The application of the composts based on castor cake resulted in the highest HU levels in the soil; alkyl groups of the HA fraction of the composts were predominant in the organic components added to the HU soil fraction.

Estabilidade temporal do conteúdo de água em três condições de uso do solo, em uma bacia hidrográfica da região da Serra da Mantiqueira, MG

A descrição de processos hidrológicos é relativamente complexa, principalmente da variação do conteúdo de água no solo, devido à influência de fatores edáficos, topográficos, climáticos e de vegetação. Em condições de campo, a estimativa do conteúdo de água no solo requer um plano de amostragem adequado, considerando as variações no tempo e no espaço. Visando representar adequadamente o conteúdo de água no solo com reduzido esforço amostral e custo, o conceito de estabilidade temporal tem sido muitas vezes empregado. Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar a estabilidade temporal do conteúdo de água na camada superficial do solo (0-0,20 m de profundidade), sob diferentes usos do solo, em uma bacia hidrográfica experimental da região da Serra da Mantiqueira, Minas Gerais, nos períodos de estiagem e chuvoso, estimando os pontos mais representativos para essa determinação. Houve maior estabilidade temporal do conteúdo de água no solo na área de vegetação de várzea, menor na área ocupada por Mata Atlântica e intermediária na área de pastagem. Ocorreram, também, variações significativas da diferença relativa média entre os períodos de medição, concluindo-se que as características de cada área devem ser consideradas particularmente para escolha dos pontos. Na área de pastagem, foi possível identificar apenas um ponto para monitoramento tanto para o período chuvoso como para o de estiagem. Por outro lado, nas áreas de Mata Atlântica e vegetação de várzea foram identificados dois pontos, sendo um especificamente para o período chuvoso e outro para o período de estiagem, sendo recomendada uma análise individual específica para cada estação.