Saccharomyces cerevisiae coq10 null mutants are responsive to antimycin A

Deletion of COQ10 in Saccharomyces cerevisiae elicits a respiratory defect characterized by the absence of cytochrome c reduction, which is correctable by the addition of exogenous diffusible coenzyme Q(2). Unlike other coq mutants with hampered coenzyme Q(6) (Q(6)) synthesis, coq10 mutants have near wild-type concentrations of Q(6). In the present study, we used Q-cycle inhibitors of the coenzyme QH(2)-cytochrome c reductase complex to assess the electron transfer properties of coq10 cells. Our results show that coq10 mutants respond to antimycin A, indicating an active Q-cycle in these mutants, even though they are unable to transport electrons through cytochrome c and are not responsive to myxothiazol. EPR spectroscopic analysis also suggests that wild-type and coq10 mitochondria accumulate similar amounts of Q(6) semiquinone, despite a lower steady-state level of coenzyme QH(2)-cytochrome c reductase complex in the coq10 cells. Confirming the reduced respiratory chain state in coq10 cells, we found that the expression of the Aspergillus fumigatus alternative oxidase in these cells leads to a decrease in antimycin-dependent H(2)O(2) release and improves their respiratory growth.

Highly Sensitive Fluorescent Method for the Detection of Cholesterol Aldehydes Formed by Ozone and Singlet Molecular Oxygen

Cholesterol oxidation gives rise to a mixture of oxidized products. Different types of products are generated according to the reactive species being involved. Recently, attention has been focused on two cholesterol aldehydes, 3 beta-hydroxy-5 beta-hydroxy-B-norcholestane-6 beta-carboxyaldehyde (1a) and 3 beta-hydroxy-5-oxo-5,6-secocholestan-6-al (1b). These aldehydes can be generated by ozone-, as well as by singlet molecular oxygen-mediated cholesterol oxidation. It has been suggested that 1b is preferentially formed by ozone and la is preferentially formed by singlet molecular oxygen. In this study we describe the use of 1-pyrenebutyric hydrazine (PBH) as a fluorescent probe for the detection of cholesterol aldehydes. The formation of the fluorescent adduct between la with PBH was confirmed by HPLC-MS/MS. The fluorescence spectra of PBH did not change upon binding to the aldehyde. Moreover, the derivatization was also effective in the absence of an acidified medium, which is critical to avoid the formation of cholesterol aldehydes through Hock cleavage of 5 alpha-hydroperoxycholesterol. In conclusion, PBH can be used as an efficient fluorescent probe for the detection/quantification of cholesterol aldehydes in biological samples. Its analysis by HPLC coupled to a fluorescent detector provides a sensitive and specific way to quantify cholesterol aldehydes in the low femtomol range.

Ultrasensitive Simultaneous Quantification of 1,N(2)-Etheno-2 `-deoxyguanosine and 1,N(2-)Propano-2 `-deoxyguanosine in DNA by an Online Liquid Chromatography-Electrospray Tandem Mass Spectrometry Assay

Exocyclic DNA adducts produced by exogenous and endogenous compounds are emerging as potential tools to study a variety of human diseases and air pollution exposure. A highly sensitive method involving online reverse-phase high performance liquid chromatography with electrospray tandem mass spectrometry detection in the multiple reaction monitoring mode and employing stable isotope-labeled internal standards was developed for the simultaneous quantification of 1,N(2)-etheno-2`-deoxyguanosine (1,N(2)-epsilon dGuo) and 1,N(2)-propano-2`-deoxyguanosine (1,N(2)-propanodGuo) in DNA. This methodology permits direct online quantification of 2`-deoxyguanosine and ca. 500 amol of adducts in 100 mu g of hydrolyzed DNA M the same analysis. Using the newly developed technique, accurate determinations of 1,N(2)-etheno-2`-deoxyguanosine and 1,N2-propano-2`-deoxyguanosine levels in DNA extracts of human cultured cells (4.01 +/- 0.32 1,N(2)-epsilon dGuo/10(8) dGuo and 3.43 +/- 0.33 1,N(2)-propanodGuo/10(8) dGuo) and rat tissue (liver, 2.47 +/- 0.61 1,N(2)-epsilon dGuo/10(8) dGuo and 4.61 +/- 0.69 1,N(2)-propanodGuo/108 dGuo; brain, 2.96 +/- 1.43,N(2)-epsilon dGuo/10(8) dGuo and 5.66 +/- 3.70 1,N(2)-propanoclGuo/10(8) dGuo; and lung, 0,87 +/- 0.34 1,N(2)-edGuo/ 10(8) dGuo and 2.25 +/- 1.72 1,N(2)-propanodGuo/10(8) dGuo) were performed. The method described herein can be used to study the biological significance of exocyclic DNA adducts through the quantification of different adducts in humans and experimental an with pathological conditions and after air pollution exposure.

Increased SOD1 association with chromatin, DNA damage, p53 activation, and apoptosis in a cellular model of SOD1-linked ALS

Mutations in the gene encoding cytosolic Cu,Zn-superoxide dismutase (SOD1) have been linked to familial amyotrophic lateral sclerosis (FALS). However the molecular mechanisms of motor neuron death are multifactorial and remain unclear. Here we examined DNA damage;p53 activity and apoptosis in SH-SY5Y human neuroblastoma cells transfected to achieve low-level expression of either wild-type or mutant Gly(93) --> Ala (G93A) SOD1, typical of FALS. DNA damage was investigated by evaluating the levels of 8-oxo-7,8-dihydro-2`-deoxyguanosine (8-oxodGuo) and DNA strand breaks. Significantly higher levels of DNA damage, increased p53 activity, and a greater percentage of apoptotic cells were observed in SH-SY5Y cells transfected with G93A SOD1 when compared to cells overexpressing wild-type SOD1 and untransfected cells. Western blot, FACS, and confocal microscopy analysis demonstrated that G93A SOD1 is present in the nucleus in association with DNA. Nuclear G93A SOD1 has identical superoxide dismutase activity but displays increased peroxidase activity when compared to wild-type SOD1. These results indicate that the G93A mutant SOD1 association with DNA might induce DNA damage and trigger the apoptotic response by activating p53. This toxic activity of mutant SOD1 in the nucleus may play an important role in the complex mechanisms associated with motor neuron death observed in ALS pathogenesis. (C) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved.

Metabolic oxidative stress elicited by the copper(II) complex [Cu(isaepy)(2)] triggers apoptosis in SH-SY5Y cells through the induction of the AMP-activated protein kinase/p38(MAPK)/p53 signalling axis: evidence for a combined use with 3-bromopyruvate in neuroblastoma treatment

We have demonstrated previously that the complex bis[(2-oxindol-3-ylimino)-2-(2-aminoethyl)pyridine-N,N`]copper(II), named [Cu(isaepy)(2)], induces AMPK (AMP-activated protein kinase)-dependent/p53-mediated apoptosis in tumour cells by targeting mitochondria. In the present study, we found that p38(MAPK) (p38 mitogen-activated protein kinase) is the molecular link in the phosphorylation cascade connecting AMPK to p53. Transfection of SH-SY5Y cells with a dominant-negative mutant of AMPK resulted in a decrease in apoptosis and a significant reduction in phospho-active p38(MAPK) and p53. Similarly, reverse genetics of p38(MAPK) yielded a reduction in p53 and a decrease in the extent of apoptosis, confirming an exclusive hierarchy of activation that proceeds via AMPK/p38(MAPK)/p53. Fuel supplies counteracted [Cu(isaepy)(2)]-induced apoptosis and AMPK/p38(MAPK)/p53 activation, with glucose being the most effective, suggesting a role for energetic imbalance in [Cu(isaepy)(2)] toxicity. Co-administration of 3BrPA (3-bromopyruvate), a well-known inhibitor of glycolysis, and succinate dehydrogenase, enhanced apoptosis and AMPK/p38(MAPK)/p53 signalling pathway activation. Under these conditions, no toxic effect was observed in SOD (superoxide dismutase)-overexpressing SH-SY5Y cells or in PCNs (primary cortical neurons), which are, conversely, sensitized to the combined treatment with [Cu(isaepy)(2)] and 3BrPA only if grown in low-glucose medium or incubated with the glucose-6-phosphate dehydrogenase inhibitor dehydroepiandrosterone. Overall, the results suggest that NADPH deriving from the pentose phosphate pathway contributes to PCN resistance to [Cu(isaepy)(2)] toxicity and propose its employment in combination with 3BrPA as possible tool for cancer treatment.

Conformational differences between the wild type and V30M mutant transthyretin modulate its binding to genistein: Implications to tetramer stability and ligand-binding

Transthyretin (TTR) is a tetrameric beta-sheet-rich transporter protein directly involved in human amyloid diseases. It was recently found that the isoflavone genistein (GEN) potently inhibits TTR amyloid fibril formation (Green et al., 2005) and is therefore a promising candidate for TTR amyloidosis treatment. Here we used structural and biophysical approaches to characterize genistein binding to the wild type (TTRwt) and to its most frequent amyloidogenic variant, the V30M mutant. In a dose-dependent manner, genistein elicited considerable increases in both mutant and TTRwt stability as demonstrated by high hydrostatic pressure (HHP) and acid-mediated dissociation/denaturation assays. TTR:GEN crystal complexes and isothermal titration calorimetry (ITC) experiments showed that the binding mechanisms of genistein to the TTRwt and to V30M are different and are dependent on apoTTR structure conformations. Furthermore, we could also identify potential allosteric movements caused by genistein binding to the wild type TTR that explains, at least in part, the frequently observed negatively cooperative process between the two sites of TTRwt when binding ligands. These findings show that TTR mutants may present different ligand recognition and therefore are of value in ligand design for inhibiting TTR amyloidosis. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

Aplicabilidade de custos numa indústria do setor farmacêutico

Em decorrência do cada vez maior acirramento da concorrência e conseqüente diminuição das margens de lucro, as empresas vêem-se obrigadas a revisar e aprimorar seus sistemas de custeio. Dentro deste contexto, o trabalho inicia pela identificação de um custo referencial, definido a partir dos preços regularmente praticados pelo mercado. Em seguida, apresenta uma base para conhecimento de custos e analisa os métodos de custeio, tanto os tradicionais quanto os modernos (métodos do custeio baseado em atividades - Activity-Based Costing (ABC), da Unidade de Esforço da Produção (UEP) e um método de custeio combinado). O trabalho conclui com um estudo de caso, fazendo uma aplicação dos métodos estudados numa indústria do setor farmacêutico, ao final do qual, faz comparações dos métodos de custeio.

Memórias de trabalhadores do Vital Brazil: um diálogo entre a saúde e a comunidade

O estudo teve como proposta identificar na comunidade do Morro do Vital Brazil referências que indicassem sentido de coletividade e continuidade. Essa comunidade, como pretendido apontar, teria sua origem, nas décadas de 1920 e 1930, no entorno do Instituto de Hygiene, Sorotherapia e Veterinária do Estado do Rio de Janeiro, hoje, Instituto Vital Brazil. Por ser fábrica farmacêutica, a produção necessitaria de mão-de-obra, que no caso estudado, passou a morar no morro atrás do Instituto, mas ainda em seu território. Dessa origem, surge uma comunidade com características de cooperação, união e associativismo. Com a prosperidade da fábrica, cresce o número de moradores e inicia-se um conjunto de domicílios e famílias também possuidores de aspectos em comum. Essas identidades possibilitam um encontro com o poder público na forma de políticos e políticas, como o Programa Médico de Família. Com esse último, interesse inicial da pesquisa, nasceu a relação entre a pesquisadora em questão, médica no posto PMF Vital Brazil, e evidenciou performances dos moradores que indicavam um pertencimento e lugar de fala diferenciado. O estudo apontou características da comunidade e dos atores que contribuíram na criação desse coletivo, utilizou como metodologia a história oral.

Protocolo clínico para a atenção básica do sus : análise dos conflitos e harmonias na percepção dos profissionais médicos

Objetivos: Descrever a opinião dos profissionais médicos que trabalham em unidades de atenção primária do Sistema Único de Saúde, dos municípios de Ponta Grossa – PR e Cuiabá - MT, com relação ao que estes apontam como importantes e, assim, compor a percepção destes profissionais sobre os conflitos e harmonias a que os protocolos clínicos usados na atenção primária estão expostos, quando levados para dentro da unidade. Método: Este trabalho é um estudo de caso do tipo levantamento realizado nos municípios de Ponta Grossa – PR e Cuiabá – MT, através de um questionário composto por perguntas abertas e fechadas. Resultados e Conclusões: As principais características apontadas pelos participantes são: Clareza nos passos a serem seguidos; Facilidade na consulta e compreensão; Capacidade da unidade em realizar as recomendações perante as demais atividades já existentes”; Vontade política do gestor em implantar o protocolo; Presença de mecanismos que permitam o acompanhamento e verificação da evolução do caso; Dificuldade em se mudar uma rotina que já existe há muito tempo no local; e Atividades econômicas do publico que será atendido. De acordo com as características os protocolos estão expostos a todos os conflitos dos Cs Cessantes, sendo, para os participantes, os mais importantes o Custo e o Cerceamento. Os cerceamentos mais citados são: Comportamentais, Tradicionais e Autoritários.

Mercado brasileiro de medicamentos genéricos: análise do desemprenho de uma subsidiária de laboratório estrangeiro

The pharmaceutical industry is a segment that is dominated by transnational companies. This characteristic is visible in Brazil, where there are only three domestic laboratories in the top ten pharmaceutical companies list. From the 1970s onwards, the world pharmaceutical market went through deep changes caused mainly to the increase of regulatory control and patent expiration that led to the advent of generic medicaments. In 1999, it was published the law that allowed the introduction of generic medicaments in Brazil, creating a new market that is currently dominated by domestic laboratories. This dissertation proposes to identify the reasons for a subsidiary of foreign laboratory does not achieve the leadership of this market. The literature is based on international political economy and international business concepts that means, relations between subsidiary and head office, domestic and foreign companies and government. Four propositions are presented and tested through multiple sources of evidences. The empirical research was mainly grounded in interviews with key persons and participant observation that allowed access to information, which would be not available for scientific investigation. The results indicate that the relationships considered in this study affect the subsidiary performance in generic medicament market in regard to its ability to make decisions, price competitiveness and wide portfolio creation. The respondents considered those three aspects as success critical factors. The results can be used for future research, aiming to wide the focus of the study about domestic laboratory dominance in generic medicament markets. Another suggestion is to follow this market evolution regarding to the internationalization process of domestic laboratories.

Sistema de informações em marketing farmacêutico

Descrição dos principais tópicos que caracterizam o marketing farmacêutico, tomando por base o composto de marketing, com exemplos do Brasil. Apresentação de um modelo descritivo de sistema de informações em marketing farmacêutico, construído com base em elementos identificados como geradores de informações de marketing, a partir de informações obtidas através de entrevistas com gerentes de marketing atuando em indústrias farmacêuticas no Brasil

O gerenciamento de pesquisas fármaco-clínicas no Brasil

O autor realiza revisão da literatura internacional e nacional sobre o tema, descreve as várias fases de desenvolvimento de uma nova droga e faz uma análise crítica da si t uaç;ão do gerenciamento das pesquisas fármaco-clínicas. Discute as posições da Farmacologia Clínica e da Medicina da indústria farmacêutica no exterior e no Brasil. Aponta as dificuldades para realizações e controle destas pesquisas e propõe uma nova abordagem gerencial para as pesquisas fármaco-clínicas. Após um periodo de doze anos, de 1975 a 1987, atuando nos diversos setores do departamento médico-Científico, de algumas indústrias farmacêuticas, com mais de 80% deste período dedicado ao planejamento, implantação, monitorização, conclusão e publicação de pesquisas fármaco-clínicas. Responsável pela publicação de nada menos do que quinze (15) ensaios. Tendo participado em, pelo menos, outras 24 estudos publicados, e mais outros 31 ainda não publicados (anexo 3, neste espaço de tempo. O autor após uma análise da situação, vem propor um método de gerenciamento destas pesquisas fármaco-clínicos realizadas no Brasil, de' forma que' todas as etapas necessárias para que estes ensaios se realizem, sejam metodotizadas, planejadas e devidamente avaliadas, podendo ainda permanecer armazenado e à disposição para pronta recuperação a qualquer tempo. Transformando-se desta forma em um excelente banco de dados, para as mais diversas informações, incluindo as de cunho oficial.

Atendimento ao cliente trade : um estudo de caso de atendimento ao cliente intermediário

Apresenta um estudo de caso de atendimento ao cliente intermediário em indústria farmacêutica. Considera as variáveis administração de vendas, relacionamento com o cliente interno e externo, o ambiente mercadológico, que influenciam no atendimento a este cliente

Avaliação ergonômica e melhoria das condições de trabalho e do processo produtivo de nutrição parenteral total em farmácias de manipulação : um estudo de caso

A produção farmacêutica de preparações estéreis, em especial de Nutrição Parenteral Total (NTP), atinge atualmente graus de importância devido ao grande volume de produção em escala de bancada. Tais características produtivas induzem os operadores a assumirem posturas desfavoráveis do ponto de vista músculo-esquelético, associadas a uma repetitividade importante. Desta forma, este estudo aborda, através de um estudo de caso, a melhoria das condições de trabalho e o resprojeto de uma linha de produção de NPT. Para tal, foi empregada uma metodologia abrangente do ponto de vista de análise postural para melhorar o processo produtivo. esta permitiu a comparação de indicadores anteriores e posteriores à transformação do processo, assegurando a visualização das boas práticas realizadas durante o estudo de melhorias. Como resultados principais, houve uma sensível diminuição das queixas de desconforto e dor de origem postural. Porém, no que concerne à repetitividade são necessários ainda ajustes relacionados com um melhor dimensionamento do processo.

Análise da cadeia de suprimentos do setor farmacêutico brasileiro quanto ao nível de colaboração entre laboratórios e operadores logísticos

O trabalho em questao analisa o nível de colaboraçao entre laboratórios e operadores logísticos do setor farmacêuico brasileiro tendo por base o Modelo de Parceria de Lambert, Emmelhaimz e Gardner (1999).