Prevalência e fatores de risco para brucelose suína em Mossoró-RN

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Serology for brucellosis in free-ranging crab-eating foxes (Cerdocyon thous) and brown-nosed coatis (Nasua nasua) from Brazilian Pantanal

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Busca de antígenos para diagnóstico da leishmaniose visceral canina: potencial uso e aplicação da proteína rLc36

Pós-graduação em Biotecnologia - IQ

Análise histopatológica de biópsia prostática guiada pelo ultrassom transretal com 10 e 12 fragmentos: ensaio clínico prospectivo controlado

Pós-graduação em Bases Gerais da Cirurgia - FMB

Expressão de SmNPP5a de Schistosoma mansoni em Pichia pastoris

A esquistossomose é causada pelo Schistosoma mansoni e é considerada uma importante doença parasitária que afeta mais de 200 milhões de pessoas em países em desenvolvimento. Estima-se ainda que aproximadamente 600 milhões de pessoas vivam em áreas de risco e que o número de mortes por ano devido a esta parasitose chegue a 200.000. O tratamento existente hoje é eficiente, mas não previne contra re-infecção e contra as formas jovens dos parasitas. O desenvolvimento de uma vacina utilizando antígenos do parasita produzidos de modo recombinantes é o anseio para o controle da esquistossomose. A fosfodiesterase-5 (SmNPP-5a) é uma enzima presente na interface parasita-hospedeiro e acessível ao sistema imune, sendo portanto considerada um potencial candidato vacinal, sua avaliação se faz necessária. A obtenção de uma SmNPP-5a recombinante enzimaticamente ativa é um passo fundamental no processo de avaliação da sua capacidade protetora e determinação da sua função fisiológica para o parasita. Utilizando o sistema de expressão baseados em leveduras metilotróficas, Pichia pastoris, a proteína recombinante pode ser expressa com as modificações pós traducionais necessárias para ter sua estrutura original mantida, característica fundamental para se obter uma proteína enzimáticamente ativa. Para clonagem e expressão da proteína recombinante utilizamos o vetor pPICZαA, pois este possui um sistema de expressão baseado no promotor álcool oxidase (AOX1 e AOX2). Ele possui ainda, a capacidade de adicionar um peptídeo sinal e uma cauda de histidina, com objetivo de secretar a proteína expressa e facilitar sua purificação, respectivamente. A triagem e confirmação dos clones positivos foram feitas por PCR. A análise das amostras de sobrenadantes coletadas com 24, 48 e 72h de estímulo com metanol foi feita por SDS-PAGE e Western blot para verificação da expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Prevalência da excreção e caracterização molecular do poliomavírus humano JC em amostras de urina de pacientes com aids sem leucoencefalopatia multifocal pro-gressiva

The human poliomavirus is the etiologic agente of Progressive multifocal leukoencephalopathy (PML), a disease characterized by focal lesions not expansives of the central nervous system that develops in imunocompromissed patients, specially people with aids. The main aim of the study was to evalute the prevalence of the JCV excretion in urine samples of patients with aids, without PML, to compare two JCV DNA detection techniques through of two diferents genomic regions and to evaluate the genotypic characterization of the positive samples. A total of 75 samples were colected in the Instituto de Infectologia Emílio Ribas, in Sao Paulo, Brazil, between may and november, 2009. To detect the JC virus it was made the DNA extraction and then the polimerase chain reaction (PCR). Firstly a fragment of 215 bp was amplified, which corresponds to the codifying gene of the strutural protein of de JC vírus capsid VP1. All the samples were later submitted to another PCR that uses a pair of primers complementaries to the early region of the JCV (T antigen) amplifying a fragment of 173 bp. Followed by the digestion of the amplified product with the restriction enzime BamH1, resulting in two smaller fragments (120 bp and 53 bp). The JC vírus was detected in 53 samples, for both techniques (70,7% for VP1 PCR, and the restriction enzime BamH1), 34/46 were men (73,9%) and 19/29 were women (65,5%). The JCV excretion was higher in individuals that were over 46 years old. Regarding the seven genotypes described in the literature, the ones that were more prevalent among the JC positive patients were 3B and 3A with 10 samples each (21,0%), the 2B with 9 samples (19,0%) and genotype 6, with six samples (13,0%). As in the brown patients as the white ones, the most prevalent genotype was 3B. In the present study it was observed a high prevalence of JCV DNA (70,7%) and the genotype 3 (43,0%)... (Complete abstract click electronic access below)

Síntese de pró-fármaco recíproco derivado do ácido micofenólico

O transplante de órgãos é um processo em que se transferem tecidos e/ou órgãos sólidos de um doador vivo ou cadavérico para um hospedeiro. A resposta imune aos aloantígenos, antígenos de um membro da mesma espécie, do doador, caracteriza o processo de rejeição de órgãos. As reações de hipersensibilidade são causadas por respostas imunes controladas inadequadamente, como na formação de complexos antígeno-anticorpo circulantes no Lúpus Eritematoso Sistêmico, ou direcionadas ao tecido do paciente, por resposta de anticorpos, como na Febre Reumática Aguda, e por resposta linfocitária, como na Esclerose Múltipla. A terapia farmacológica para transplantes de órgãos e para reações de hipersensibilidade se baseia na utilização de fármacos imunossupressores, como a prednisona, ciclosporina, anticorpos monoclonais, ácido micofenólico e azatioprina. A talidomida, fármaco com propriedades inibidoras da produção de Fator de Necrose Tumoral Alfa em monócitos, atua como imunossupressor e anti-inflamatório, com atividade de interesse para o tratamento destas condições. Nesse contexto, foi sintetizada, purificada e caracterizada a estrutura química de um novo pró-fármaco planejado para atuar com mecanismo duplo de ação a saber: inibição da inosina 5’-monofosfato desidrogenase e da produção do fator de necrose tumoral alfa.

Desenvolvimento de kit para quantificação enzimática de etanol

A dosagem do etanol durante a produção de medicamentos, bebidas e combustíveis tem se mostrado bastante importante para o aumento de rendimento dos processos e qualidade dos produtos. Embora existam vários métodos para determinar a concentração do etanol, os enzimáticos são os mais interessantes por serem rápidos, precisos, de fácil manuseio e baixo custo. O objetivo geral desse trabalho foi a elaboração de um Kit de quantificação enzimática de etanol, utilizando a enzima álcool desidrogenase I recombinante de S. cerevisiae (Adh1). Para isso, o gene codificador da enzima álcool desidrogenase I (ADH1) de levedura foi clonado no vetor pET28a para expressão em E. coli (BL21). Em seguida, a produção e solubilidade da enzima álcool desidrogenase I foi determinada, sendo definida uma condição ideal de produção e purificação da proteína recombinante por cromatografia de afinidade. A atividade enzimática da álcool desidrogenase I purificada foi determinada através de ensaios já padronizados na literatura (UV), bem como sua estabilidade em diversas condições de tempo e temperatura. Os resultados obtidos aqui demonstraram que a enzima obtida apresentou boa atividade biológica in vitro, com sensibilidade na detecção de no mínimo 2,3 x 10–4 g/L de etanol em 2 minutos. Além disso, a proteína purificada teve sua atividade preservada quando estocada a - 20°C durante 120 dias, características que possibilitarão que a enzima álcool desidrogenase I recombinante, purificada pela metodologia apresentada nesse trabalho, seja utilizada em um kit de quantificação enzimática de etanol rápido, preciso e de baixo custo

Histologia comparada de brânquias, fígado e sangue em peixes da espécie Prochilodus lineatus, expostos a águas contaminadas

Os estudos hematológicos das diferentes espécies de peixes são de interesse ecológico e fisiológico, auxiliando na compreensão da relação entre as características sanguíneas, a filogenia, a atividade física, o hábitat e a adaptabilidade dos peixes ao ambiente. No experimento realizado foram testados os efeitos de águas contaminadas em parâmetros hematológicos de peixes da espécie Prochilodus lineatus, em períodos de coleta de 7 e 20 dias, nos quais o sangue foi coletado com seringas heparinizadas, foram montadas lâminas de esfregaço , as quais foram coradas pelo corante de Leishman. Estas lâminas foram analisadas e fotografadas com o auxílio de um microscópio óptico Leica, no qual foram feitas contagens totais de células brancas e contagens diferenciais de trombócitos e leucócitos, para a análise estatística. O grupo exposto ao Lago Azul apresentou uma elevação no número de leucócitos e no total de células brancas, evidenciando que os contaminantes químicos do ambiente estavam atuando de forma semelhante a um antígeno no corpo do animal fazendo com que suas células de defesa se proliferassem. Quanto ao grupo exposto ao detergente, observou-se que após os vinte dias de experimento ocorreu uma diminuição no número de trombócitos. Tais resultados evidenciam que a variação no número de leucócitos apresentou-se como um indicador de poluição ambiental e que os detergentes biodegradáveis podem em certo tempo de exposição ocasionar um déficit em funções vitais de peixes como à coagulação e a prevenção contra infecções, eventos ligados diretamente com os trombócitos. A maioria dos vertebrados aquáticos possui brânquias, estruturas especializadas nas trocas gasosas e responsáveis por grande parte das trocas iônicas. Este órgão acaba por absorver grande parte das substâncias presentes na água, que ao caírem na...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Clonagem, Expressão e Purificação da Proteína Telomérica LaTRF em sistema bacteriano (pMAL)

As proteínas da família TRF2 (“TTAGGG repeat-binding factor 2”) fazem parte de complexos multiprotéicos responsáveis pela manutenção dos telômeros de alguns eucariotos. Elas apresentam domínios funcionais que a caracterizam como proteínas que interagem com DNA telomérico na forma de dupla fita. São eles, o domínio de interação com o DNA do tipo Myb-like, localizado na porção C-terminal, um domínio acídico N-terminal e um domínio de homodimerização TRFH (“TRF homology domain for homodimerization”). A proteína TRF2 também está envolvida na formação de estruturas teloméricas terminais denominadas “t-loops”. O intuito deste projeto é a clonagem, expressão em vetor bacteriano (pMAL) e a purificação de uma proteína homóloga as proteínas teloméricas TRFs humana em parasitas do gênero Leishmania, especificamente a espécie Leishmania amazonensis (LaTRF). Primeiramente foram desenhados iniciadores (primers) utilizados para a amplificação da sequência LaTRF por PCR. O(s) produto(s) de amplificação foram clonados em vetores de clonagem para produtos de PCR e sequenciados para análise. Uma vez obtida a seqüência da LaTRF, o inserto contendo o gene foi subclonado direcionalmente e na mesma fase de leitura do vetor de expressão bacteriano (pMAL-c5x, NEB) para obtenção e futura purificação da proteína recombinante. Verificou-se a expressão da proteína recombinante LaTRF utilizando SDS-PAGE e “Western Blot”. Pelos resultados obtidos na análise de expressão em pequena escala da proteína recombinante, foi observado possíveis indícios de que esta esteja sendo expressa. Com isso, torna-se possível a tentativa de uma expressão em grande escala utilizando esse mesmo sistema bacteriano (pMAL) a fim de se obter a proteína purificada que poderá ser futuramente utilizada para ensaios de “pull-down” dentre outras aplicações

Efeito da imunização com BCG no diabetes experimental induzido por estreptozotocina

O Bacilo de Calmette e Guérin (BCG) é utilizado em muitos países como profilaxia contra a tuberculose. Tem sido sugerido que esta vacina possa determinar, através de atividade imunomoduladora, proteção também contra outras patologias como alergia e doenças autoimunes. Entretanto, este assunto é ainda bastante controverso. A proposta desta investigação foi avaliar o efeito da imunização prévia com BCG no desenvolvimento do diabetes experimental do tipo I em camundongos C57BL/6. Para isto foram realizados três protocolos objetivando caracterizar a resposta imune desencadeada por BCG, padronizar o diabetes experimental tipo I e avaliar o efeito do BCG neste modelo de diabetes. A imunização desta cepa de camundongos com BCG determinou produção discreta de IFN- mas produção significativa de IL-10 após estímulo in vitro das culturas com hsp65 recombinante (rhsp65). Os ensaios de padronização indicaram que o protocolo de inoculação de streptozotocina adotado determinou um quadro de diabetes típico caracterizado por glicemia elevada e graus variáveis de insulite. A imunização com BCG antes da indução do diabetes não alterou de forma significativa o peso, os níveis glicêmicos e a intensidade do processo inflamatório. Os resultados obtidos sugerem que nas condições experimentais adotadas, o BCG não alterou o desenvolvimento do diabetes tipo I induzido por STZ em camundongos C57BL/6

Isoeritrólise neonatal eqüina

Equine neonatal isoerythrolysis is a neonatal foals’ illness. Results from the incompatibility of blood type between the foal and the mare and mediated by maternal antibody absorbed by the colostrum against foal’s red blood cells. Characterized by a type ll hypersensitivity reaction, where the exhibition of the organism to a strange antigen, that it takes the sensitization of the lymphocytes B that after the removal of the antigens by the reticule-endothelial system the production of immunoglobulin is decreased, with the formation of cellular immunological will cause the occurrence of the illness in foal of sensitized mares. The most important clinical signs are severe anemia and jaundice, and this illness should be differentiated of other as: hemolysis induced by bacterial toxins, diseases of the hepatobiliary system, disseminated intravascular coagulation and incompatibility in blood transfusions. Like the sensitization happens during the previous incompatible foal’s birth, most cases occur in foals of multiparous mares. However during the first pregnancy the mare can generate a foal with neonatal 7 isoerythrolysis if she have developed placental anomaly in the beginning of the pregnancy which blood cells in her circulation

Produção de vetores recombinantes para expressão de diferentes formas da proteína K1 do herpesvírus associado ao Sarcoma de Kaposi (KSHV)

Kaposi´s sarcoma associated herpesvirus (KSHV) or human herpesvirus 8 (HHV-8) is a gammaherpesvirus essential for the development of all forms of Kaposi´s sarcoma (KS). The KSHV’s life cycle is basically divided into latent and lytic phases, which have distinct viral gene expression profiles. Some important oncogenic products of KSHV are expressed during the lytic phase, including the viral K1 protein. As an effect of interfer-ence with intracellular signaling, K1 expression increases proliferation and survival of KSHV-infected cells. Due to its high level of genetic variability compared to other re-gions of the viral genome, the K1-encoding ORF (ORF-K1) is commonly evaluated for KSHV genotyping. It remains unclear whether different viral genotypes have particular biological effects that might modify the KSHV oncogenicity. The present study aimed to contribute to the establishment of an experimental in vitro model for evaluation of the K1 protein from common KSHV genotypes. Recombinant expression vectors with the ORF-K1 from KSHV genotypes A, B and C were prepared by genetic cloning. The recombi-nant vectors pKSHVOK1 obtained by cloning were sequenced for structural validation. After that, HEK293 cell line was transfected with the recombinant vectors, and proteins were extracted for expression analysis by Western blot technique, for K1 functional vali-dation. Results showed that ORF-K1 vectors containing KSHV ORF-K1 from the A, B and C genotypes were produced and structurally validated by DNA sequencing. The K1 expression at the protein level was also confirmed by immunoblots using an antibody for FLAG detection, an epitope from the vector that binds to K1. Based on presented re-sults, it´s possible to conclude that the recombinant vectors will be able to be used in future studies of K1 protein biological properties from distinct KSHV genotypes

Influência dos antígenos de histocompatibilidade na incidência de leucemia na região de Campinas, SP

Foi investigada a freqüência dos antígenos HLA-A, B, DR, DQ em 237 pacientes com vários tipos de leucemia, candidatos ao transplante de células tronco hematopoiéticas. O grupo controle foi constituído de 20.933 indivíduos saudáveis, tipados e cadastrados no Registro Brasileiro de Doadores Voluntários de Medula Óssea (REDOME), ou candidatos a doadores de órgãos, pertencentes ao mesmo grupo étnico e região geográfica que os pacientes. Para a determinação dos antígenos HLA foi definido o equivalente sorológico da genotipagem por Citometria de Fluxo PCR-SSO (Reação em cadeia da Polimerase – Oligonucleotídeo Seqüência Específica) com baixa resolução (One Lambda, Canoga Park, CA, US). Foram encontradas associações de suscetibilidade para os antígenos HLA-B70, HLA-B71, HLADR9 e HLA-DR10 associados a LMC (Leucemia Mielóide Crônica); HLA-A32 e HLA-B12 associados a LLC (Leucemia Linfóide Crônica); HLA-A19 e HLA-DR10 associados a LLA (Leucemia Linfóide Aguda). Associações de proteção foram encontradas para HLA-A19 associado a LMA (Leucemia Mielóide Aguda) e LMC; HLA-B44 e HLA-DR6 associados a LMC; HLA-DQ6 associado a LLC.

Avaliação do efeito terapêutico da associação proteoglicano /vitamina D3 na artrite experimental

A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória crônica de caráter autoimune que compromete as articulações. A maioria das terapias aprovadas para o tratamento desta e outras patologias autoimunes é baseada na inibição global da resposta imune, o que aumenta a susceptibilidade aos agentes infeciosos. O objetivo geral deste projeto foi definir se a associação de vitamina D (VitD3) com o antígeno proteoglicano (PG) é tolerogênica e serve como medida terapêutica. Para isso, utilizamos o modelo de artrite experimental obtido pela imunização de camundongos BALB/c com PG. Inicialmente, os animais foram imunizados com diferentes doses do antígeno específico (PG) na presença de VitD3 para determinação da dose tolerogênica. O potencial terapêutico da estratégia mais tolerogênica foi testado no período pré-clínico da doença, isto é, no período após o aparecimento do nível máximo de anticorpos anti-PG, mas antes das manifestações clínicas da artrite (eritema e edema articular). A eficácia terapêutica foi avaliada através da incidência de artrite e do escore clínico da doença. O possível mecanismo imunológico envolvido no efeito terapêutico foi estudado por avaliação dos níveis de citocinas (IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-10 e IL-17) produzidas por células esplênicas estimuladas in vitro com PG. Analisados em conjunto, os resultados obtidos mostraram que os três procedimentos (PG, VitD3 e PG+VitD3) determinaram efeito terapêutico. Entretanto, a análise mais detalhada, incluindo número de animais com escore clínico maior que oito (escore > 8), início dos sintomas clínicos e escore máximo atingido, sugere que o uso de PG50 (50μg de PG) associado à VitD3 ou o uso isolado de VitD3 foram os procedimentos terapêuticos mais eficazes. A produção mais elevada de IL-10 nestes dois grupos sugere contribuição desta citocina neste efeito terapêutico