A strategy for the identification of proteins targeted by thioredoxin

Thioredoxins are 12-kDa proteins functional in the regulation of cellular processes throughout the animal, plant, and microbial kingdoms. Growing evidence with seeds suggests that an h-type of thioredoxin, reduced by NADPH via NADP-thioredoxin reductase, reduces disulfide bonds of target proteins and thereby acts as a wakeup call in germination. A better understanding of the role of thioredoxin in seeds as well as other systems could be achieved if more were known about the target proteins. To this end, we have devised a strategy for the comprehensive identification of proteins targeted by thioredoxin. Tissue extracts incubated with reduced thioredoxin are treated with a fluorescent probe (monobromobimane) to label sulfhydryl groups. The newly labeled proteins are isolated by conventional two-dimensional electrophoresis: (i) nonreducing/reducing or (ii) isoelectric focusing/reducing SDS/PAGE. The isolated proteins are identified by amino acid sequencing. Each electrophoresis system offers an advantage: the first method reveals the specificity of thioredoxin in the reduction of intramolecular vs. intermolecular disulfide bonds, whereas the second method improves the separation of the labeled proteins. By application of both methods to peanut seed extracts, we isolated at least 20 thioredoxin targets and identified 5—three allergens (Ara h2, Ara h3, and Ara h6) and two proteins not known to occur in peanut (desiccation-related and seed maturation protein). These findings open the door to the identification of proteins targeted by thioredoxin in a wide range of systems, thereby enhancing our understanding of its function and extending its technological and medical applications.

Feedback from luminosity horizontal cells mediates depolarizing responses of chromaticity horizontal cells in the Xenopus retina.

It has been proposed that the depolarizing responses of chromaticity horizontal cells (C-HCs) to red light depend on a feedback signal from luminosity horizontal cells (L-HCs) to short-wavelength-sensitive cones in the retinas of lower vertebrates. In this regard we studied the C-HCs of the Xenopus retina. C-HCs and L-HCs were identified by physiological criteria and then injected with neurobiotin. The retina then was incubated with peanut agglutinin, which stains red-but not blue-sensitive cones. Electron microscopic examination revealed that L-HCs contact all cone classes, whereas C-HCs contact only blue-sensitive cones. Simultaneous recordings from C-HC/L-HC pairs established that when the L-HC was saturated by a steady bright red light, C-HCs alone responded to a superimposed blue stimulus. In response to red test flashes, the C-HC response was delayed by approximately 30 msec with respect to the L-HC response. Isolated HCs of both subtypes were examined by whole-cell patch clamp. Both responded to kainate with sustained inward currents and to quisqualate or alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) with desensitizing currents from a negative holding potential; i.e., both have AMPA-type glutamate receptors. gamma-Aminobutyric acid or glycine opened a chloride channel in the L-HC, whereas the C-HC was unresponsive to either inhibitory amino acid. Since glycine has been shown to abolish selectively the depolarizing response of the C-HC, this finding and other pharmacological data strongly implicate the L-HC in the underlying circuit. Moreover, because the C-HC does not respond to gamma-aminobutyric acid, the neurotransmitter of the L-HC, by elimination, a feedback synapse from L-HC to blue cone is the most plausible mechanism for the creation of depolarizing responses in C-HCs.

Avaliação de fatores virológicos associados ao desenvolvimento de carcinoma hepatocelular (CHC) em pacientes com hepatite B crônica

O objetivo principal deste estudo foi avaliar fatores virais associados com a evolução para o carcinoma hepatocelular (CHC) em pacientes com hepatite B crônica. Para tanto caracterizamos os subgenótipos do HBV, investigamos a ocorrência de mutações nos genes pré-core/core do HBV associadas à presença de CHC avaliamos por análise filogenética a associação de linhagens virais com a ocorrência de CHC e por fim a associação de outros fatores de risco com o desenvolvimento de CHC. Foram incluídos 119 amostras de soro de pacientes com infecção crônica pelo HBV, destas amostras 60 pertencem ao grupo 1 (CHC), que são pacientes com diagnóstico confirmado de carcinoma hepatocelular e 59 amostras pertencem ao grupo 2 (sem CHC) que são pacientes com hepatite crônica sem detecção prévia de nódulos hepáticos. Foram obtidas informações acerca da idade, sexo e naturalidade. Além disso, os pacientes responderam a um questionário sobre fatores de riscos associados ao desenvolvimento de CHC. Foram realizados exames bioquímicos, sorológicos, determinação da carga viral, e amplificação por nested PCR e sequenciamento das regiões S/polimerase e pré-core/core do genoma viral para posterior caracterização dos genótipos/subgenótipos do HBV e pesquisa de mutações associadas com evolução da doença hepática. Em relação à idade e sexo não houve grande variação entre os grupos. Quanto à naturalidade a maioria era procedente da região sudeste, seguido pela região nordeste; e por fim seis pacientes eram procedentes de outros países. Com base no sobrenome dos pacientes avaliou-se também a frequência de etnia oriental na casuística estudada, que foi similar nos 2 grupos. O perfil sorológico HBeAg negativo foi o mais frequente nos dois grupos de pacientes, assim como níveis de carga viral abaixo de 2.000 UI/mL. Em relação aos exames bioquímicos foram observadas diferenças estatisticamente significantes nos níveis séricos de AFP (p= 0,0013), FA (p= 0,0003) e GGT (p= 0,005). Dentre os fatores de risco analisados neste estudo, o consumo de amendoim foi o único que apresentou significância estatística (p= 0,003). A região S/pol foi amplificada e sequenciada com sucesso em 58 amostras (28 do grupo 1 e 30 do grupo 2). Entre as 58 amostras analisadas 4 genótipos e 8 subgenótipos do HBV foram identificados, sendo o subgenótipo A1 o mais frequente nos dois grupos. Não se observou diferença estatisticamente significante na distribuição dos subgenótipos entre os dois grupos de pacientes. Na topologia da árvore filogenética construída com sequências do HBV isoladas dos pacientes incluídos neste estudo e sequências disponíveis no GenBank não se observou padrões de agrupamento associados com o perfil clinico do paciente (com e sem CHC). Foram obtidas sequências de boa qualidade da região précore/ core em 44 amostras, sendo 20 amostras do grupo 1 e 24 do grupo 2. Diversas das mutações investigadas foram identificadas na região précore/ core, as quais foram avaliadas estatisticamente para verificar a existência de diferença na frequência das mesmas entre os grupos de pacientes estudados. Entre as mutações identificadas se destacaram com significância estatística as seguintes mutações: T1768A (p= 0,006), a combinação das mutações C1766T + T1768A (p= 0,043) e G1888H (p= 0,05). Na análise de regressão logística simples foi possível identificar que a chance de um paciente do grupo 2 desenvolver CHC aumenta 14,7 vezes na presença de infecção por cepas do HBV com a mutação T1768A, enquanto que a infecção com cepas do HBV que albergam a mutação G1888H reduz tal chance 2,5 vezes

Potencial de fitorremediação de diferentes plantas em solo contaminado por 14C-tebuthiuron

Este trabalho teve como objetivo avaliar a tolerância e a capacidade de fitorremediação de crotalária (Crotalaria spectabilis), sorgo (Sorghum bicolor), nabo forrageiro (Raphanus sativus), amendoim (Arachis hypogaea) e alfafa (Mendicago sativa) a solos contaminados por tebuthiuron. Para determinar a tolerância das plantas ao herbicida estas foram submetidas a 5 diferentes doses (300, 600, 1200, 2400 e 4800 gramas de ingrediente ativo por hectare gi.a. ha-1) e comparadas com uma testemunha que não recebeu aplicação do herbicida. Crotalária, Nabo forrageiro e alfafa se mostraram sensíveis ao herbicida, mesmo na menor dose de aplicação, enquanto sorgo se mostrou tolerante ao herbicida até a dose de 600 gi.a. ha-1 tendo apresentado fitointoxicação de 80% na dose de 1200 gi.a. ha-1 e amendoim foi tolerante até a dose de 4800 gi.a. ha-1 para a qual apresentou apenas 40% de fitointoxicação. Plantas de amendoim e sorgo foram submetidas a dose de contaminação de 600 gi.a. ha-1 aplicada por meio de uma solução de trabalho contendo 17,47kBq (Quilobecquerels) de 14C-tebuthiuron. As duas plantas foram capazes de remediar o solo, no entanto amendoim se mostrou mais eficiente reduzindo a contaminação em 75,8% enquanto sorgo retirou do solo 44,49% do herbicida contaminante

Extração, determinação da composição fenólica e avaliação do potencial de desativação de espécies reativas de oxigênio e da atividade anti-inflamatória de resíduos de amendoim, pimenta-rosa e pimenta-do-reino

O setor agroindustrial tem se expandido muito nos últimos anos, levando o país a um aumento na geração de resíduos agroindustriais, sendo que a maior parte deles ainda é descartada no meio ambiente, sem tratamento adequado, ou utilizada na alimentação animal, destinos que a priori, não geram ganhos econômicos para a agroindústria além de representarem gargalos logísticos e ambientais na sua disposição. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivos otimizar o processo de extração de compostos bioativos, avaliar in vitro as atividades antioxidante, por meio da desativação de espécies reativas de oxigênio, e anti-inflamatória, bem como determinar a composição fenólica dos resíduos agroindustriais a saber: película de amendoim (Arachis hypogaea) (cultivares IAC886 e IAC505), pimenta-rosa (Schinus terebinthifolius Raddi) e pimenta-do-reino (Piper Nigrum L). O processo de otimização da extração de compostos antioxidantes foi realizado utilizando dois processos de extração, extração convencional e subcrítica, em delineamento composto central rotacional, utilizando como variáveis a temperatura e tempo e a pressão e temperatura, respectivamente, com os solventes etanol 80%, água e propilenoglicol 80%. Durante o processo de otimização a atividade antioxidante foi avaliada pelo método de sequestro do radical ABTS. Os melhores resultados foram obtidos para a extração convencional com os solventes etanol 80%, água e propilenoglicol 80%. A película de amendoim (IAC505) apresentou as maiores atividades antioxidantes (1.396,67, 580,44 e 859,89 μmol.g-1 em equivalentes de trolox, para os solventes etanol 80%, água e propilenoglicol 80%, respectivamente). A partir dos resultados obtidos para os solventes testados, utilizando a extração convencional, foram feitas outras análises de atividade antioxidante considerando o tempo e temperatura ideal de extração. Foram realizadas análises de avaliação da capacidade de redução de Folin-Ciocalteau e potencial de desativação dos radicais livres sintéticos (DPPH e ABTS) e espécies reativas de oxigênio (radicais peroxila, superóxido e ácido hipocloroso). O solvente de extração que apresentou melhores resultados em todos os ensaios foi o etanol 80%, sendo, portanto o solvente utilizado nas análises subsequentes. A partir da definição do melhor sistema extrator foram realizadas análises da composição fenólica, por meio das técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência em modo analítico (HPLC-RP), cromatografia gasosa acoplada com espectrometria de massas (GC-MS), e avaliação in vitro da atividade anti-inflamatória. Foram identificados nos resíduos estudados procianidinas B1 e B2, ácido p-cumárico, miricetina, ácido ferúlico, ácido siríngico, ácido sinápico, epicatequina e catequina. A pimenta-do-reino diminui significativamente os níveis de TNF-α e nitritos, reduzindo assim o processo inflamatório gerado. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que estes resíduos agroindústrias possuem grande potencial biológico, podendo assim ser melhores aproveitados tanto pela indústria de alimentos quanto pela indústria farmacêutica.

Polissensibilização alimentar : um caso clínico

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014

Woman's Club cook book /

Includes samples of menus; household hints; recipes for Turkish, Cuban, French, Italian, and Spanish dishes; some recipes include wine or liquor as an ingredient. Sample recipes: Torto frutas, Peanut-butter browned sweet potatoes, Veal loaf.

Modern school store.

Ceased publication.

Virginia pamphlets

A collection of miscellaneous pamphlets.

ASCIA guidelines for prevention of food anaphylactic reactions in schools, preschools and child-care centres

These guidelines have been developed by the anaphylaxis working party of the Australasian Society of Clinical Immunology and Allergy to provide advice for minimizing the risk of food-induced anaphylaxis in schools, preschools and child-care centres. The guidelines outline four steps for the prevention of food anaphylactic reactions in children at risk and food policy measures specific to school age and preschool age children.

Resistance of three different populations of mulberry silkworm (Bombyx mori L.) to Bacillus thuringiensis

The relative resistance levels of three different populations of mulberry silkworm, Bombyx mori L. to Bacillus thuringiensis (Bt) has been studied. All three populations (two Australian and one Indonesian) were observed for similar characteristics including 3rd instar larval mortality at 24, 48, 72 and 96 h after treatment (HAT), LD50 ratio and probit mortality. Among the Australian two populations, the QuBill (yellow coloured, oval shaped cocoon) population showed higher larval mortality to Bt toxicity compared to the QuBite (white coloured, oval shaped cocoon) population. When all the populations were compared, the Insab (Indonesian population with white Coloured, peanut shaped cocoon) showed lower larval mortality and highest LD50 ratio up to 48 HAT. The Insab population also showed a 24 It longer incubation/latent period prior to the start Of Mortality.

Cashew nut allergy is associated with a high risk of anaphylaxis

Cashew allergy is an evolving clinical problem. A retrospective chart review of 213 children with peanut or tree nut allergy was undertaken over a 42 month period. Anaphylaxis to cashew nut was more common than to peanut ( 74.1% v 30.5%). Children with cashew allergy are at risk of anaphylaxis.

A novel process for the production of castor oil by direct solvent extraction

This research was undertaken to: develop a process for the direct solvent extraction of castor oil seeds. A literature survey confirmed the desirability of establishing such a process with emphasis on the decortication, size, reduction, detoxification-deallergenization, and solvent·extraction operations. A novel process was developed for the dehulling of castor seeds which consists of pressurizing the beans and then suddenly releasing the pressure to vaccum. The degree of dehulling varied according to the pressure applied and the size of the beans. Some of the batches were difficult-to-hull, and this phenomenon was investigated using the scanning electron microscope and by thickness and compressive strength measurements. The other variables studied to lesser degrees included residence time, moisture, content, and temperature.The method was successfully extended to cocoa beans, and (with modifications) to peanuts. The possibility of continuous operation was looked into, and a mechanism was suggested to explain the method works. The work on toxins and allergens included an extensive literature survey on the properties of these substances and the methods developed for their deactivation Part of the work involved setting up an assay method for measuring their concentration in the beans and cake, but technical difficulties prevented the completion of this aspect of the project. An appraisal of the existing deactivation methods was made in the course of searching for new ones. A new method of reducing the size of oilseeds was introduced in this research; it involved freezing the beans in cardice and milling them in a coffee grinder, the method was found to be a quick, efficient, and reliable. An application of the freezing technique was successful in dehulling soybeans and de-skinning peanut kernels. The literature on the solvent extraction, of oilseeds, especially castor, was reviewed: The survey covered processes, equipment, solvents, and mechanism of leaching. three solvents were experimentally investigated: cyclohexane, ethanol, and acetone. Extraction with liquid ammonia and liquid butane was not effective under the conditions studied. Based on the results of the research a process has been suggested for the direct solvent extraction of castor seeds, the various sections of the process have analysed, and the factors affecting the economics of the process were discussed.