Transforming growth factor beta signaling is essential for the autonomous formation of cartilage-like tissue by expanded chondrocytes.

Cartilage is a tissue with limited self-healing potential. Hence, cartilage defects require surgical attention to prevent or postpone the development of osteoarthritis. For cell-based cartilage repair strategies, in particular autologous chondrocyte implantation, articular chondrocytes are isolated from cartilage and expanded in vitro to increase the number of cells required for therapy. During expansion, the cells lose the competence to autonomously form a cartilage-like tissue, that is in the absence of exogenously added chondrogenic growth factors, such as TGF-βs. We hypothesized that signaling elicited by autocrine and/or paracrine TGF-β is essential for the formation of cartilage-like tissue and that alterations within the TGF-β signaling pathway during expansion interfere with this process. Primary bovine articular chondrocytes were harvested and expanded in monolayer culture up to passage six and the formation of cartilage tissue was investigated in high density pellet cultures grown for three weeks. Chondrocytes expanded for up to three passages maintained the potential for autonomous cartilage-like tissue formation. After three passages, however, exogenous TGF-β1 was required to induce the formation of cartilage-like tissue. When TGF-β signaling was blocked by inhibiting the TGF-β receptor 1 kinase, the autonomous formation of cartilage-like tissue was abrogated. At the initiation of pellet culture, chondrocytes from passage three and later showed levels of transcripts coding for TGF-β receptors 1 and 2 and TGF-β2 to be three-, five- and five-fold decreased, respectively, as compared to primary chondrocytes. In conclusion, the autonomous formation of cartilage-like tissue by expanded chondrocytes is dependent on signaling induced by autocrine and/or paracrine TGF-β. We propose that a decrease in the expression of the chondrogenic growth factor TGF-β2 and of the TGF-β receptors in expanded chondrocytes accounts for a decrease in the activity of the TGF-β signaling pathway and hence for the loss of the potential for autonomous cartilage-like tissue formation.

A TEMPERATURE-SENSITIVE DEFECT IN THE EXPRESSION OF A SARCOMA VIRUS TRANSFORMING GENE

The viral proteins synthesized by a Moloney murine sarcoma virus (Mo-MuSV) with a temperature-sensitive mutation in a function required for the maintenance of the transformed state (ts110) were examined. Normal rat kidney cells (NRK) were infected with the ts110 virus and a non-virus-producing cell clone, termed 6m2, was isolated. This cell clone had a malignant phenotype at 33(DEGREES), the permissive temperature, but changed to a normal phenotype at 39(DEGREES).^ Two viral proteins were detected in 6m2 cells. A 58,000 dalton protein (P58) was detected at both 33(DEGREES) and 39(DEGREES) and contained only core protein (gag) coded sequences. An 85,000 dalton protein (P85) was detected only at 33(DEGREES) and contained sequences of viral core proteins p15, pp12, and part of p30 as well as protein sequences attributed by peptide mapping to P23 and P38, two candidate viral mouse src (v-mos) gene products. These results provide good evidence that P85 is a gag-mos polyprotein. As expected for a functional mos-gene product, P85 synthesis preceded parameters characteristic of the transformed state, including changes in cell morphology, in the cytoplasmic microtubule complex (CMTC) and in the rate of hexose uptake.^ Other studies were conducted to ascertain the defect which prohibited the synthesis of P85 at 39(DEGREES), the non-permissive temperature. When 6m2 cells were treated with actinomycin D at 39(DEGREES) and shifted to 33(DEGREES), the cells were unable to synthesize P85, but P58 continued to be made. P85 mRNA, active at 33(DEGREES), continued to be translated for two to three hours after shifting to 39(DEGREES) as judged by pulse-labeling experiments. Virus harvested at 33(DEGREES) from ts110 MuSV producer cells packaged both P85 and P58 coding RNAs while virus harvested at 39(DEGREES) was deficient in the amount of P85 coding RNA. Agarose gel electrophoresis of 6m2 cellular RNA showed that RNA harvested at 33(DEGREES) contained the 4.0 and 3.5 kb RNAs. Similar experiments on cells maintained at 39(DEGREES) have detected only the 4.0 kb RNA, suggesting that the 3.5 kb RNA codes for P85. The defect appeared to be in the long term stability of the P85 coding RNA at 39(DEGREES), since, in shift-up experiments (33(DEGREES) (--->) 39(DEGREES)), P85 was translated for only three hours at 39(DEGREES), while P58 was synthesized for at least eight hours. However, at 33(DEGREES) in the presence of actinomycin D, the ratio of P85 and P58 synthesis at hourly intervals was similar throughout a 12 hour period. ^

Dielectrophoresis-based analyte separation and analysis

Dielectrophoresis—the tendency of a material of high dielectric permittivity to migrate in an electrical field gradient to a region of maximum field strength—provides an ideal motive force for manipulating small volumes of biological analytes in microfluidic microsystems. The work described in this thesis was based on the hypothesis that dielectrophoresis could be exploited to provide high-resolution cell separations in microsystems as well as a means for the electrically-controllable manipulation of solid supports for molecular analysis. To this end, a dielectrophoretic/gravitational field-flow-fractionation (DEP/G-FFF) system was developed and the separation performance evaluated using various types and sizes of polystyrene microspheres as model particles. It was shown that separation of the polystyrene beads was based on the differences in their effective dielectrophoretic properties. The ability of an improved DEP/G-FFF system to separate genetically identical, but phenotypically dissimilar cell types was demonstrated using mixtures of 6m2 mutant rat kidney cells grown under transforming and non-transforming culture conditions. Additionally, a panel of engineered dielectric microspheres was designed with specific, predetermined dielectrophoretic properties such that their dielectrophoretic behaviors would be controllable and predictable. The fabrication method involved the use of gold-coated polystyrene microsphere cores coated with a self-assembled monolayer of alkanethiol and, optionally, a self-assembled monolayer of phospholipid to form a thin-insulating-shell-over-conductive-interior structure. The successful development of the DEP/G-FFF separation system and the dielectrically engineered microspheres provides proof-of-principle demonstrations of enabling dielectrophoresis-based microsystem technology that should provide powerful new methods for the manipulation, separation and identification of analytes in many diverse fields. ^

The role of transforming growth factor beta signaling in cardiac hypertrophy and fibrosis in heart failure

Objective. To determine whether transforming growth factor beta (TGF-β) receptor blockade using an oral antagonist has an effect on cardiac myocyte size in the hearts of transgenic mice with a heart failure phenotype. ^ Methods. In this pilot experimental study, cardiac tissue sections from the hearts of transgenic mice overexpressing tumor necrosis factor (MHCsTNF mice) having a phenotype of heart failure and wild-type mice, treated with an orally available TGF-β receptor antagonist were stained with wheat germ agglutinin to delineate the myocyte cell membrane and imaged using fluorescence microscopy. Using MetaVue software, the cardiac myocyte circumference was traced and the cross sectional area (CSA) of individual myocytes were measured. Measurements were repeated at the epicardial, mid-myocardial and endocardial levels to ensure adequate sampling and to minimize the effect of regional variations in myocyte size. ANOVA testing with post-hoc pairwise comparisons was done to assess any difference between the drug-treated and diluent-treated groups. ^ Results. There were no statistically significant differences in the average myocyte CSA measured at the epicardial, mid-myocardial or endocardial levels between diluent treated littermate control mice, drug treated normal mice, diluent-treated transgenic mice and drug-treated transgenic mice. There was no difference between the average pan-myocardial cross sectional area between any of the four groups mentioned above. ^ Conclusions. TGF-β receptor blockade using oral TGF-β receptor antagonist does not alter myocyte size in MHCsTNF mice that have a phenotype of heart failure. ^

Beyond Bullying: Transforming the Culture of Peer Abuse

Bullying needs to be understood and positioned as a form of child abuse – peer abuse. For too many people, bullying is a benign term. This article will include information collected from a wide-range of researchers and discussions with over 50,000 students that I have facilitated during the past twenty years. The content will focus on new morbidities related to bullying such as depression and suicide, obesity, eating disorders, food allergies, juvenile diabetes, truancy, and substance and alcohol abuse. Making a cultural change in our society will require identified Change Agents, along with recommendations for collaboration, policies, projects and legislation.

Why the Village is so Hard to Find: Challenging Ourselves, Transforming Our Helping Systems

Keynote address presented by Roger Friedman, PhD, LCSW at the Family Preservation Institute Annual Conference, San Antonio, Texas, September 9, 2004. Looking at Language and Concepts Looking closely at certain language that we use helps us understand how we think about our work and our world—and ultimately, it helps us understand ourselves better. The term "village " as used in the title of the paper and in many of our professional conversations is worthy of such an inquiry

Exilio, migración, destierro? : Los trabajadores chilenos que se asentaron en el Nor Este de Chubut a partir de Septiembre de 1973. Memorias, historias e implicancias

En este trabajo abordamos el análisis de experiencias exiliares de trabajadores chilenos que se radicaron en el Noreste de la Provincia de Chubut, en Patagonia Argentina, después de producido el golpe de estado contra el presidente democrático Salvador Allende Gossens, en Septiembre de 1973. Cuando revisé la factibilidad de la investigación, y en mérito a los escasos repositorios documentales, decidí, dando continuidad a indagaciones previas, trabajar con historia oral. Esta metodología o práctica, involucra una dimensión personal, subjetiva y afectiva, que supone una constante relación entre los sujetos que participan, lo que implica una cualitativa diferencia en relación a las fuentes más tradicionales. No minimizo el valor de la estadística, pero hago una opción por nombrar y conocer a quienes han compartido con nosotros vivencias y experiencias, explicitando nuestra inscripción en la construcción de la información documental, no objetivándonos. El trabajo desarrollado se halla en la encrucijada entre la historia del pasado reciente y la memoria; con una perspectiva "desde abajo", buscando conjugar la no uniformidad de la experiencia humana, con la pretensión de generalidad y explicación de la ciencia social. Las narraciones o testimonios obtenidos las he revisado, procurando develar las representaciones que subyacen, y comprendiendo el modo en que actuaron. Las memorias tienen un carácter subjetivo y en permanente transformación, lo que en cierto sentido puede singularizarlas, pero como historiadores debemos inscribirlas en un contexto histórico global, para procurar esclarecer las causas, las condiciones, y las estructuras, aportando a una historia total. Hemos rescatado prácticas, percepciones, y discursos; develando la importancia del trabajo como factor organizador y estabilizador, al dotar a estos sujetos, de un sitio en la sociedad receptora, y permitiéndoles "ir desarmando sus valijas", es decir, ir superando la transitoriedad. Al caracterizar al exilio chileno, en el contexto internacional y local; y atendiendo a las escasas producciones que dan cuenta del universo obrero en estas experiencias traumáticas, han sido evidentes los límites que supone una estricta separación entre exilio, y migración económica o política; ya que dicha conceptualización encierra una mirada que invisibiliza derroteros que en principio, o superficialmente, pueden ser leídos como poco organizados. La aplicación del análisis de red, por cierto contribuyó a hacerlos visibles, transformándolos en actores racionales, con objetivos que se movilizaron a partir de los recursos de que dispusieron; tratando de superar el paradigma que hacía de ellos seres desesperados: fueron mujeres y hombres que eligieron un destino posible, siempre atendiendo al doble carácter de la experiencia en que estuvieron inmersos: la salida de su país por un lado los liberó, pero también los privó; asociando indisolublemente sentimientos de dolor por el desprendimiento de lo propio -de los afectos personales y colectivos-, agravados por los efectos de la derrota y la incertidumbre. Son sujetos que pusieron su identidad en riesgo. Pretendemos lograr que esta investigación, no sea sólo un estudio de caso, sino que pueda inscribirse a partir de su especificidad, en tanto exilio obrero, en una perspectiva comparativa, superando una definición espacial específica, en el Nor Este de Chubut.

Exilio, migración, destierro? : Los trabajadores chilenos que se asentaron en el Nor Este de Chubut a partir de Septiembre de 1973. Memorias, historias e implicancias

En este trabajo abordamos el análisis de experiencias exiliares de trabajadores chilenos que se radicaron en el Noreste de la Provincia de Chubut, en Patagonia Argentina, después de producido el golpe de estado contra el presidente democrático Salvador Allende Gossens, en Septiembre de 1973. Cuando revisé la factibilidad de la investigación, y en mérito a los escasos repositorios documentales, decidí, dando continuidad a indagaciones previas, trabajar con historia oral. Esta metodología o práctica, involucra una dimensión personal, subjetiva y afectiva, que supone una constante relación entre los sujetos que participan, lo que implica una cualitativa diferencia en relación a las fuentes más tradicionales. No minimizo el valor de la estadística, pero hago una opción por nombrar y conocer a quienes han compartido con nosotros vivencias y experiencias, explicitando nuestra inscripción en la construcción de la información documental, no objetivándonos. El trabajo desarrollado se halla en la encrucijada entre la historia del pasado reciente y la memoria; con una perspectiva "desde abajo", buscando conjugar la no uniformidad de la experiencia humana, con la pretensión de generalidad y explicación de la ciencia social. Las narraciones o testimonios obtenidos las he revisado, procurando develar las representaciones que subyacen, y comprendiendo el modo en que actuaron. Las memorias tienen un carácter subjetivo y en permanente transformación, lo que en cierto sentido puede singularizarlas, pero como historiadores debemos inscribirlas en un contexto histórico global, para procurar esclarecer las causas, las condiciones, y las estructuras, aportando a una historia total. Hemos rescatado prácticas, percepciones, y discursos; develando la importancia del trabajo como factor organizador y estabilizador, al dotar a estos sujetos, de un sitio en la sociedad receptora, y permitiéndoles "ir desarmando sus valijas", es decir, ir superando la transitoriedad. Al caracterizar al exilio chileno, en el contexto internacional y local; y atendiendo a las escasas producciones que dan cuenta del universo obrero en estas experiencias traumáticas, han sido evidentes los límites que supone una estricta separación entre exilio, y migración económica o política; ya que dicha conceptualización encierra una mirada que invisibiliza derroteros que en principio, o superficialmente, pueden ser leídos como poco organizados. La aplicación del análisis de red, por cierto contribuyó a hacerlos visibles, transformándolos en actores racionales, con objetivos que se movilizaron a partir de los recursos de que dispusieron; tratando de superar el paradigma que hacía de ellos seres desesperados: fueron mujeres y hombres que eligieron un destino posible, siempre atendiendo al doble carácter de la experiencia en que estuvieron inmersos: la salida de su país por un lado los liberó, pero también los privó; asociando indisolublemente sentimientos de dolor por el desprendimiento de lo propio -de los afectos personales y colectivos-, agravados por los efectos de la derrota y la incertidumbre. Son sujetos que pusieron su identidad en riesgo. Pretendemos lograr que esta investigación, no sea sólo un estudio de caso, sino que pueda inscribirse a partir de su especificidad, en tanto exilio obrero, en una perspectiva comparativa, superando una definición espacial específica, en el Nor Este de Chubut.

Exilio, migración, destierro? : Los trabajadores chilenos que se asentaron en el Nor Este de Chubut a partir de Septiembre de 1973. Memorias, historias e implicancias

En este trabajo abordamos el análisis de experiencias exiliares de trabajadores chilenos que se radicaron en el Noreste de la Provincia de Chubut, en Patagonia Argentina, después de producido el golpe de estado contra el presidente democrático Salvador Allende Gossens, en Septiembre de 1973. Cuando revisé la factibilidad de la investigación, y en mérito a los escasos repositorios documentales, decidí, dando continuidad a indagaciones previas, trabajar con historia oral. Esta metodología o práctica, involucra una dimensión personal, subjetiva y afectiva, que supone una constante relación entre los sujetos que participan, lo que implica una cualitativa diferencia en relación a las fuentes más tradicionales. No minimizo el valor de la estadística, pero hago una opción por nombrar y conocer a quienes han compartido con nosotros vivencias y experiencias, explicitando nuestra inscripción en la construcción de la información documental, no objetivándonos. El trabajo desarrollado se halla en la encrucijada entre la historia del pasado reciente y la memoria; con una perspectiva "desde abajo", buscando conjugar la no uniformidad de la experiencia humana, con la pretensión de generalidad y explicación de la ciencia social. Las narraciones o testimonios obtenidos las he revisado, procurando develar las representaciones que subyacen, y comprendiendo el modo en que actuaron. Las memorias tienen un carácter subjetivo y en permanente transformación, lo que en cierto sentido puede singularizarlas, pero como historiadores debemos inscribirlas en un contexto histórico global, para procurar esclarecer las causas, las condiciones, y las estructuras, aportando a una historia total. Hemos rescatado prácticas, percepciones, y discursos; develando la importancia del trabajo como factor organizador y estabilizador, al dotar a estos sujetos, de un sitio en la sociedad receptora, y permitiéndoles "ir desarmando sus valijas", es decir, ir superando la transitoriedad. Al caracterizar al exilio chileno, en el contexto internacional y local; y atendiendo a las escasas producciones que dan cuenta del universo obrero en estas experiencias traumáticas, han sido evidentes los límites que supone una estricta separación entre exilio, y migración económica o política; ya que dicha conceptualización encierra una mirada que invisibiliza derroteros que en principio, o superficialmente, pueden ser leídos como poco organizados. La aplicación del análisis de red, por cierto contribuyó a hacerlos visibles, transformándolos en actores racionales, con objetivos que se movilizaron a partir de los recursos de que dispusieron; tratando de superar el paradigma que hacía de ellos seres desesperados: fueron mujeres y hombres que eligieron un destino posible, siempre atendiendo al doble carácter de la experiencia en que estuvieron inmersos: la salida de su país por un lado los liberó, pero también los privó; asociando indisolublemente sentimientos de dolor por el desprendimiento de lo propio -de los afectos personales y colectivos-, agravados por los efectos de la derrota y la incertidumbre. Son sujetos que pusieron su identidad en riesgo. Pretendemos lograr que esta investigación, no sea sólo un estudio de caso, sino que pueda inscribirse a partir de su especificidad, en tanto exilio obrero, en una perspectiva comparativa, superando una definición espacial específica, en el Nor Este de Chubut.

An Oka principle for equivariant isomorphisms

Let G be a reductive complex Lie group acting holomorphically on normal Stein spaces X and Y, which are locally G-biholomorphic over a common categorical quotient Q. When is there a global G-biholomorphism X → Y? If the actions of G on X and Y are what we, with justification, call generic, we prove that the obstruction to solving this local-to-global problem is topological and provide sufficient conditions for it to vanish. Our main tool is the equivariant version of Grauert's Oka principle due to Heinzner and Kutzschebauch. We prove that X and Y are G-biholomorphic if X is K-contractible, where K is a maximal compact subgroup of G, or if X and Y are smooth and there is a G-diffeomorphism ψ : X → Y over Q, which is holomorphic when restricted to each fibre of the quotient map X → Q. We prove a similar theorem when ψ is only a G-homeomorphism, but with an assumption about its action on G-finite functions. When G is abelian, we obtain stronger theorems. Our results can be interpreted as instances of the Oka principle for sections of the sheaf of G-biholomorphisms from X to Y over Q. This sheaf can be badly singular, even for a low-dimensional representation of SL2(ℂ). Our work is in part motivated by the linearisation problem for actions on ℂn. It follows from one of our main results that a holomorphic G-action on ℂn, which is locally G-biholomorphic over a common quotient to a generic linear action, is linearisable.

Testing the Weak Equivalence Principle with an antimatter beam at CERN

The goal of the AEgIS experiment is to measure the gravitational acceleration of antihydrogen – the simplest atom consisting entirely of antimatter – with the ultimate precision of 1%. We plan to verify the Weak Equivalence Principle (WEP), one of the fundamental laws of nature, with an antimatter beam. The experiment consists of a positron accumulator, an antiproton trap and a Stark accelerator in a solenoidal magnetic field to form and accelerate a pulsed beam of antihydrogen atoms towards a free-fall detector. The antihydrogen beam passes through a moir ́e deflectometer to measure the vertical displacement due to the gravitational force. A position and time sensitive hybrid detector registers the annihilation points of the antihydrogen atoms and their time-of-flight. The detection principle has been successfully tested with antiprotons and a miniature moir ́e deflectometer coupled to a nuclear emulsion detector.