977 resultados para Escherichia coli Proteins -- chemistry -- genetics -- isolation
Resumo:
Escherichia coli strains of serotype O51:H40 were studied with regard to the presence of several virulence properties and their genetic diversity and enteropathogenicity in rabbit ileal loops. This serotype encompasses potential enteropathogenic strains mostly classified as being atypical enteropathogenic E. coli (EPEC) strains, which are genetically closer to enterohemorrhagic E. coli than to typical EPEC strains.
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Crystal structures have been determined for free Escherichia coli hypoxanthine phosphoribosyltransferase (HPRT) (2.9 Angstrom resolution) and for the enzyme in complex with the reaction products, inosine 5'-monophosphate (IMP) and guanosine 5-monophosphate (GMP) (2.8 Angstrom resolution). Of the known 6-oxopurine phosphoribosyltransferase (PRTase) structures, E. coli HPRT is most similar in structure to that of Tritrichomonas foetus HGXPRT, with a rmsd for 150 Calpha atoms of 1.0 Angstrom. Comparison of the free and product bound structures shows that the side chain of Phe156 and the polypeptide backbone in this vicinity move to bind IMP or GMP. A nonproline cis peptide bond, also found in some other 6-oxopurine PRTases, is observed between Leu46 and Arg47 in both the free and complexed structures. For catalysis to occur, the 6-oxopurine PRTases have a requirement for divalent metal ion, Usually Mg2+ in vivo. In the free structure, a Mg2+, is coordinated to the side chains of Glu103 and Asp104. This interaction may be important for stabilization of the enzyme before catalysis. E. coli HPRT is unique among the known 6-oxopurine PRTases in that it exhibits a marked preference for hypoxanthine as substrate over both xanthine and guanine. The structures suggest that its substrate specificity is due to the modes of binding of the bases. In E. coli HPRT, the carbonyl oxygen of Asp 163 would likely form a hydrogen bond with the 2-exocyclic nitrogen of guanine (in the HPRT-guanine-PRib-PP-Mg2+ complex). However, hypoxanthine does not have a 2-exocyclic atom and the HPRT-IMP structure suggests that hypoxanthine is likely to occupy a different position in the purine-binding pocket.
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Aims: To examine the effects of acidified acidogenically fermented piggery effluent containing Volatile Fatty Acids (VFA) on shiga-toxigenic and resident strains of Escherichia coli (E. coli) as part of the development of a waste treatment process. Methods and Results: Four shiga-toxigenic E. coli strains (O157:H7, 091.H-, 0111.H-, and 0123.H-) and four non-toxic resident enzootic strains were all killed by 3 h treatment with fermented piggery effluent liquor (153 mmol l(-1) total VFA) at pH 4.3. The shiga-toxigenic strains showed greater sensitivity after 1 h of treatment. The fermented liquor at pH 6.8 was not inhibitory. Conclusions: The shiga-toxigenic strains were no more resistant to the toxic effects of VFA than the non-toxic strains tested. Significance and Impact of the Study: Shiga-toxigenic strains and resident enzootic non-toxigenic strains are equally susceptible to inactivation by this waste treatment process and by acidified VFA in general.
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There is very little human disease associated with enterohaemorrhagic Escherichia coli O157 in Australia even though these organisms are present in the animal population. A group of Australian isolates of E. coli O157:H7 and O157:H- from human and animal sources were tested for the presence of virulence markers and compared by XbaI DNA macrorestriction analysis using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Each of 102 isolates tested contained the gene eae which encodes the E. coli attaching and effacing factor and all but one carried the enterohaemolysin gene, ehxA, found on the EHEC plasmid. The most common Shiga toxin gene carried was stx(2c), either alone (16%) or in combination with stx(1) (74%) or stx(2) (3%) PFGE grouped the isolates based on H serotype and some clusters were source specific. Australian E. coli O157:H7 and H- isolates from human, animal and meat sources carry all the virulence markers associated with EHEC disease in humans therefore other factors must be responsible for the low rates of human infection in Australia.
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To examine the dissemination of Shiga-toxigenic Escherichia coli (STEC) within cattle groups, dairy calves on two farms utilizing different calf-rearing practices were exposed to a traceable STEC strain. Test strain dissemination differed significantly between farms, with a higher prevalence being associated with group penning. Pen floors and calf hides may be the main environmental mechanisms of transmission. Dairy calf husbandry represents a control point for reducing on-farm STEC prevalence.
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A diarreia a segunda causa de mortalidade em <5 anos e responsvel pela diminuio da produtividade na populao economicamente ativa. Dentre os agentes infecciosos envolvidos, seis patotipos diarreiognicos de Escherichia coli (DEC) merecem destaque: E. coli enteropatognica (EPEC), E.coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli enteroemorrgica ou produtora de toxina de Shiga (EHEC/STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli de aderncia difusa (DAEC). O objetivo deste estudo foi determinar a frequncia dos patotipos de DEC e caracterizar fenotpica e genotipicamente EAEC, DAEC, aEPEC e E. coli chain-like adhesion (CLA) isolados de fezes indivduos de todas as idades atendidos nas Unidades de Sade do municpio de Vitria, ES, entre janeiro de 2008 e junho de 2011. Os isolados de E. coli foram submetidos : (i) PCR para deteco dos genes eae, bfpA, aat, lt, st, ipaH, stx1 e stx2; (ii) hibridizao de colnia com as sondas eae, aat e daaC; (iii) adeso em cultura de clulas HEp-2 para evidenciar padro de aderncia agregativa (AA), difusa (DA) e chain-like adhesion (CLA). PCR para deteco de genes de virulncia foi realizado em isolados de EAEC, CLA, DAEC e aEPEC. Isolados de EAEC e CLA, foram submetidos a testes de formao de biofilme e de pelcula. Foram obtidos 328 espcimes fecais e E. coli foi isolada de 85,7%. Os seguintes patotipos foram identificados: EAEC (18,3%), DAEC (11%), aEPEC (2,6%), ETEC (0,7%). CLA foi identificada em 4,9% e EIEC, tEPEC e STEC no foram detectados. Dos 60 isolados de EAEC (AA) (25% aat+ por PCR e 35% por hibridizao), fmbrias de aderncia agregativa foram evidenciadas em baixa frequncia (aggA- 1,7%, aafA- 0%, agg3A- 11,7%, hdA- 8,3%). EAEC tpica correspondeu a 31,7% dos isolados de EAEC (aggR+), e foram significantes nestas a formao de biofilme, escore 3+ de produo de pelcula e presena dos genes aat, agg3A, hdA, aap, sat, pet, set1A e iucA. Todos os isolados CLA apresentaram o gene pet, 87,5%, foram aggR-, formaram pelcula e nenhum produziu biofilme. Dentre dos 42 isolados de DAEC (DA), a sonda daaC detectou 52,4%. PCR evidenciou adesinas afa/Dr (daaD e afa) em 59,5% e adesina AIDA-I no foi encontrada, sugerindo que outras adesinas estejam envolvidas na adeso da DAEC. Isolados de DAEC afa/Dr + foram estatisticamente mais isolados de <5 anos. Em aEPEC, os genes da ilha de patogenicidade OI-122 pesquisados, nleE, efa1/lifA e paa foram evidenciados em 30% dos isolados, todos provenientes de <5 anos. Caractersticas de virulncia de tEAEC e DAEC Afa/Dr sugerem que sejam subpopulaes relacionadas com diarreia. CLA no parece ser variante de EAEC.
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Foi realizado diagnstico etiolgico de casos de diarria aguda em 121 pacientes internados na Clnica Peditrica do Hospital da Santa Casa de So Paulo, Brasil. Foram utilizados os mtodos bacteriolgico clssico e de reao de imunofluorescncia direta para a identificao de cepas de Escherichia coli enteropatognicas: para estudo da sensibilidade das cepas de Escherichia coli isoladas, a diferentes antibiticos, foi usado o mtodo de Concentrao Inibitria Minima (CIM). Dos 56 casos positivos, 89,3% correspondiam a diferentes sorotipos enteropatognicos de Escherichia coli, quando utilizada a tcnica de imunofluorescncia direta. O mtodo bacteriolgico clssico revelou ainda, nos 121 casos examinados, 4 cepas de Salmonella e 2 de Shigella. No estudo da CIM verificou-se maior sensibilidade das cepas de Escherichia coli enteropatognicas estudadas Gentamicina e Amikacina, do que aos outros antibiticos.
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A gua um recurso escasso e indispensvel vida, podendo ser um importante veculo de microrganismos patognicos com origem fecal. A matria fecal tambm uma fonte de microrganismos resistentes a antimicrobianos e contribui para a sua disseminao e dos seus genes de resistncia no ambiente e entre as comunidades microbianas comensais e microrganismos patognicos humanos e animais. A qualidade microbiolgica da gua monitorizada recorrendo utilizao de bioindicadores como Escherichia coli, enterococos e microrganismos totais. O presente estudo apresentou como principal objetivo determinar a prevalncia de ESBLs e AmpCs e ainda avaliar a prevalncia de estirpes de enterococos com resistncia vancomicina (VRE) em guas do rio Douro e da orla costeira da cidade do Porto. As amostragens de gua foram realizadas em quatro locais localizados no esturio do rio Douro e orla costeira da cidade do Porto entre o ms de Abril e Julho. A deteo e quantificao dos bioindicadores foram realizadas pelo mtodo de filtrao por membrana. A suscetibilidade das estirpes de E. coli e enterococos foi testada pelo mtodo de difuso em disco relativamente a vrias classes de antimicrobianos. As contagens microbianas mais elevadas foram determinadas entre Abril e Junho e em amostras de gua doce. Foram isoladas 62 estirpes de E. coli e 49 estirpes de enterococos que apresentaram prevalncias de resistncia a antimicrobianos de 90,3% (56/62) e 83,7% (41/49), respetivamente. As estirpes de E. coli apresentaram altas frequncias de resistncia ampicilina (74,2%) e tetraciclina (61,3%). Nestas estirpes verificou-se ainda fentipos associados a multirresistncia a um mnimo de trs classes de antimicrobianos em 56,5% (35/62) dos isolados. Verificou-se que as estirpes de enterococos apresentaram altos nveis de resistncia rifampicina (34,7%) e azitromicina (40,8%), detetando-se ainda a manifestao de fentipo de resistncia vancomicina em 26,5% das estirpes. Observou-se uma prevalncia de 36,7% (18/49) de estirpes de enterococos associadas a fenmenos de multirresistncia antimicrobiana. Ana Martins vi Os resultados obtidos sugerem que o rio Douro e orla costeira, bem como os ambientes aquticos, constituem reservatrios de bactrias e genes de resistncia a antimicrobianos e possuem um papel preponderante na sua disseminao.
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A presso seletiva originada pelo uso excessivo de antimicrobianos na medicina humana e veterinria tem contribudo para a emergncia de estirpes bacterianas multirresistentes, sendo os estudos mais escassos relativamente sua presena nos animais de companhia. Porque os animais e os seus proprietrios partilham o mesmo espao habitacional, apresentando comportamentos de contacto prximo, existe uma hiptese elevada de transferncia microbiana inter-espcie. Ante esta possibilidade importante escrutinar o papel dos animais de companhia enquanto reservatrios de estirpes e de genes de resistncia, bem como a sua envolvncia na disseminao de estirpes bacterianas multirresistentes. Importa tambm, investigar o papel das superfcies e objetos domsticos partilhados por ambos, como potenciadores deste fenmeno. O objetivo deste trabalho foi, identificar o filogrupo e fazer a caracterizao molecular dos genes que conferem resistncia aos -lactmicos e s quinolonas, em quarenta isolados de Escherichia coli produtoras de -lactamases de espectro alargado (ESBL), obtidas em zaragatoas fecais de ces consultados no Hospital Veterinrio do ICBAS-UP. Complementarmente pretendeu-se inferir sobre a partilha de clones de Escherichia coli e Enterococcus spp. com elevadas resistncias, em cinco agregados familiares (humanos e seus animais de companhia) assim como avaliar a potencial disseminao de estirpes multirresistentes no ambiente domstico. Previamente foram recolhidas zaragatoas de fezes, pelo e mucosa oral dos animais e em alguns casos, dos seus proprietrios, e ainda do ambiente domstico. As zaragatoas foram processadas e as estirpes isoladas com base em meios seletivos. Foram realizados testes de suscetibilidade antimicrobiana de modo a estabelecer o fentipo de resistncia de cada isolado. O DNA foi extrado por varias metodologias e tcnicas de PCR foram utilizadas para caracterizao de filogrupos (Escherichia coli) e identificao da espcie (Enterococcus spp.). A avaliao da proximidade filogentica entre isolados foi efetuada por ERIC PCR e PFGE. No conjunto de quarenta isolados produtores de ESBL e/ou resistentes a quinolonas verificou-se que 47,5% pertenciam ao filogrupo A, havendo uma menor prevalncia do filogrupo D (25,0%), B1 (17,5%), e B2 (10,0%).A frequncia de resistncia nestes isolados factualmente elevada, sendo reveladora de uma elevada presso seletiva. Com exceo de dois isolados, os fentipos foram justificados pela presena de -lactamases. A frequncia da presena de genes foi: 47% blaTEM, 34% blaSHV, 24% blaOXA , 18% blaCTX-M-15, 8% blaCTX-M-2, 3% blaCTX-M-9. Nos isolados resistentes s quinolonas verificou-se maioritariamente a presena de mutaes nos genes cromossomais gyrA e parC, e em alguns casos a presena de um determinante de resistncia mediado por plasmdeo qnrS. Nos cinco agregados familiares (humanos e animais) estudados foi observada uma partilha frequente de clones de E. coli e Enterococcus faecalis com mltiplas resistncias, isolados em fezes e mucosa oral de ces e gatos e fezes e mos dos respetivos proprietrios, evidenciando-se assim uma possvel transferncia direta entre coabitantes (agregados A, C, D, E). Ficou tambm comprovado com percentagens de similaridade genotpica superiores a 94% que essa disseminao tambm ocorre para o ambiente domstico, envolvendo objetos dos animais e de uso comum (agregados A, E). Os resultados obtidos reforam a necessidade de um uso prudente dos antimicrobianos, pois elevados padres de resistncias tero um impacto no s na qualidade de vida dos animais mas tambm na sade humana. Adicionalmente importa sensibilizar os proprietrios para a necessidade de uma maior vigilncia relativamente s formas de interao com os animais, bem como para a adoo de medidas higinicas cautelares aps essa mesma interao.
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Dissertation presented to obtain a Ph.D. degree in Biology, speciality Microbiology, by Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Cincias e Tecnologia
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Foi realizada uma pesquisa na regio de Campinas, SP, Brasil, sobre a presena de Escherichia coli enterotoxignica (ETEC), rotavrus e Clostridium perfringens enterotoxignico em fezes diarricas de crianas com at 2 anos de idade. Dos 132 espcimens fecais examinados quanto presena de ETEC 27 (20,45%) foram positivos. Destes foram isoladas 41 amostras de ETEC, das quais 40 produziram apenas a enterotoxina termolbil (LT) detectada pelo teste de imuno hemlise radial modifi cado. Entre as 183 amostras de fezes examinadas para rotavrus, 29 (15,84%) foram positivas pelas tcnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) e ensaio imunoenzimtico (EIE), sendo que destas, 15 (51,7% ) foram provenientes de materiais coletados nos meses de inverno. Todas as amostras pertenciam ao grupo A e, atravs da tcnica de PAGE, pode-se observar que o tipo eletrofortico mais freqente (9 amostras) foi designado Ib, IIc, Illb, IVa, de acordo com a classificao por ns adotada. Apenas 113 amostras de fezes foram examinadas para a presena de C. perfringens enterotoxignico. Para a deteco da enterotoxina nos sobrenadantes das culturas foram utilizadas as tcnicas de hemaglutinao passiva reversa e inoculao intravenosa em camundongos, sendo encontradas 12 (10,61%) amostras entero-toxignicas. Diante destes resultados chamada a ateno sobre o valor apenas relativo de uma coprocultura convencional para fins de diagnstico, ressaltando-se a importncia da criao de mtodos simplificados que favoream a deteco e identificao dos grupos de agentes enteropatognicos estudados na presente pesquisa.
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A resistncia aos antibiticos em bactrias Gram-negativas pode ser aumentada pela extruso de antibiticos atravs de sistemas de efluxo. Em Escherichia coli, o principal sistema de efluxo o AcrAB-TolC o qual tem como principal fonte energtica a fora proto-motriz. Este trabalho pretendeu estudar alguns aspectos essenciais da bioenergtica na actividade de efluxo de E. coli usando trs estirpes bem caracterizadas genotipica e fenotipicamente. Foi utilizado um mtodo fluorimtrico semi-automtico no qual a fluorescncia do fluorocromo brometo de etdeo, substrato de bombas de efluxo foi seguida, permitindo a medio em tempo real da actividade de efluxo e acumulao de fluorocromo (inibio do efluxo). A utilizao de brometo de etdeo particularmente vantajosa pois emite baixa fluorescncia no exterior da clula bacteriana tornando-se extremamente fluorescente no seu interior. Este mtodo uma nova aplicao do termociclador em tempo real RotorGeneTM 3000 que permite o clculo da cintica de transporte reflectindo o balano entre acumulao de substrato por difuso passiva atravs da membrana e a sua extruso/efluxo, proporcionando uma deteco rpida e econmica de inibidores de efluxo. Os resultados obtidos mostram, para todas as estirpes, que a GLU e o pH afectam a acumulao e o efluxo do brometo de etdeo. De todos os inibidores de vias biossintticas testados, o ortovanadato de sdio, foi o que demonstrou maior actividade inibitria, a qual revertida na presena de GLU. Em concluso, este estudo mostra que a actividade de efluxo de E. coli depende no s da fosforilao oxidativa por via da fora proto-motriz mas tambm da energia proveniente da hidrlise de ATP pelas ATPases. O ortovanadato de sdio tem potencial para ser um novo inibidor de bombas de efluxo de largo espectro. A tecnologia utilizada neste trabalho demonstrou ser apropriada para a caracterizao bioenergtica da actividade de bombas de efluxo e permite a seleco de novos inibidores de bombas de efluxo em bactrias.
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The mannose-resistant hemagglutinating factor (HAF) was extracted and purified from a diffuse adherent Escherichia coli (DAEC) strain belonging to the classic enteropathogenic E. coli (EPEC) serotype (0128). The molecular weight of HAF was estimated to be 18 KDa by SDS-PAGE and 66 KDa by Sephadex G100, suggesting that the native form of HAF consists of 3-4 monomeric HAF. Gold immunolabeling with specific HAF antiserum revealed that the HAF is not a rigid structure like fimbriae on the bacterial surface. The immunofluorescence test using purified HAF on HeLa cells, in addition to the fact that the HAF is distributed among serotypes of EPEC, suggests that HAF is a possible adhesive factor of DAEC strains
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Diarrheagenics Escherichia coli are the major agents involved in diarrheal disease in developing countries. The aim of this study was to evaluate the time of appearance of the first asymptomatic infection by the different categories of diarrheagenic E. coli in 44 children since their birth and during the first 20 months of their lives. In all of the children studied, we detected at least one category of diarrheagenic E. coli through the 20 months of the study. 510 diarrheagenic E. coli (33.5%) were obtained from the 1,524 samples collected from the 44 children during the time of the study (31.4% EAggEC, 28.8% EPEC, 27.1% DAEC, and 12.7% ETEC). Neither EHEC nor EIEC were identified. The median age for diarrheagenic E. coli colonization was 7.5 months. The mean weaning period was 12.8 months and the mean age for introduction of mixed feeding (breast fed supplemented) was 3.8 months. A significantly lower incidence of diarrheal disease and asymptomatic infections was recorded among the exclusively breast-fed rather than in the supplemented and non breast-fed infants. For ETEC, EPEC and EAggEC the introduction of weaning foods and complete termination of breast-feeding were associated with an increase of asymptomatic infections.
