Étude des tachykinines et de leurs dérivés peptidiques associés à la douleur neuropathique grâce à l’utilisation de modèles animaux et de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse

Thèse réalisée en co-tutelle avec l'Université Claude Bernard de Lyon 1, en France.

Étude du polymorphisme rs3846662 de l’HMGCR dans le cerveau et le système périphérique

Dans cette thèse, l’impact du polymorphisme rs3846662 sur l’épissage alternatif de la 3-hydroxy-3-méthylglutaryl coenzyme A réductase (HMGCR) a été investigué in vivo, chez des patients atteints d’hypercholestérolémie familiale (HF) ou de maladie d’Alzheimer (MA). Le premier manuscrit adresse la problématique de la normalisation de la quantification relative des ARNm par PCR quantitative. Les découvertes présentées dans ce manuscrit nous ont permis de déterminer avec un haut niveau de confiance les gènes de référence à utiliser pour la quantification relative des niveaux d’ARNm de l’HMGCR dans des échantillons de sang (troisième manuscrit) et de tissus cérébraux post-mortem (quatrième manuscrit). Dans le deuxième manuscrit, nous démontrons grâce à l’emploi de trois cohortes de patients distinctes, soit la population canadienne française du Québec et les deux populations nord américaines « Alzheimer’s Disease Cooperative Study (ADCS) » et « Alzheimer’s Disease Neuroimaging Initiative (ADNI) », que le génotype AA au locus rs3846662 confère à ces porteurs une protection considérable contre la MA. Les femmes porteuses de ce génotype voient leur risque de MA diminuer de près de 50% et l’âge d’apparition de leurs premiers symptômes retarder de 3.6 ans. Les porteurs de l’allèle à risque APOE4 voient pour leur part leurs niveaux de plaques séniles et dégénérescences neurofibrillaires diminuer significativement en présence du génotype AA. Enfin, les individus atteints de déficit cognitif léger et porteurs à la fois de l’allèle APOE4 et du génotype protecteur AA voient leur risque de convertir vers la MA chuter de 76 à 27%. Dans le troisième manuscrit, nous constatons que les individus atteints d’HF et porteurs du génotype AA ont, contrairement au modèle établi chez les gens normaux, des niveaux plus élevés de cholestérol total et de LDL-C avant traitement comparativement aux porteurs de l’allèle G. Le fait que cette association n’est observée que chez les non porteurs de l’APOE4 et que les femmes porteuses du génotype AA présentent à la fois une augmentation des niveaux d’ARNm totaux et une résistance aux traitements par statines, nous indique que ce génotype influencerait non seulement l’épissage alternatif, mais également la transcription de l’HMGCR. Comme une revue exhaustive de la littérature ne révèle aucune étude abondant dans ce sens, nos résultats suggèrent l’existence de joueurs encore inconnus qui viennent influencer la relation entre le génotype AA, l’épissage alternatif et les niveaux d’ARNm de l’HMGCR. Dans le quatrième manuscrit, l’absence d’associations entre le génotype AA et les niveaux d’ARNm Δ13 ou de protéines HMGCR nous suggère fortement que ce polymorphisme est non fonctionnel dans le SNC affecté par la MA. Une étude approfondie de la littérature nous a permis d’étayer cette hypothèse puisque les niveaux de HNRNPA1, la ribonucléoprotéine influencée par l’allèle au locus rs3846662, sont considérablement réduits dans la MA et le vieillissement. Il est donc proposé que les effets protecteurs contre la MA associés au génotype AA soient le résultat d’une action indirecte sur le processus physiopathologique.

A retrospective model of oocyte competence: global mRNA and housekeeping transcripts are not associated with in vitro developmental outcome

Oocyte developmental competence depends on maternal stores that support development throughout a transcriptionally silent period during early embryogenesis. Previous attempts to investigate transcripts associated with oocyte competence have relied on prospective models, which are mostly based on morphological. criteria. Using a retrospective model, we quantitatively compared mRNA among oocytes with different embryo development competence. A cytoplasm biopsy was removed from in vitro matured oocytes to perform comparative analysis of amounts of global polyadenylated (polyA) mRNA and housekeeping gene transcripts. After parthenogenetic activation of biopsied oocytes, presumptive zygotes were cultured individually in vitro and oocytes were classified according to embryo development: (i) blocked before the 8-cell stage; (ii) blocked between the 8-cell and morulae stages; or (iii) developed to the blastocyst stage. Sham-manipulated controls confirmed that biopsies did not alter development outcome. Total polyA mRNA amounts correlate with oocyte diameter but not with the ability to develop to the 8-cell and blastocyst stages. The last was also confirmed by relative quantification of GAPDH, H2A and Hprt1 transcripts. In conclusion, we describe a novel retrospective model to identify putative markers of development competence in single oocytes and demonstrate that global mRNA amounts at the metaphase II stage do not correlate with embryo development in vitro.

Caracterização da mutagênese por inserção do retrotransposon Tos17 em genótipos de arroz

O aumento do potencial produtivo da cultura de arroz via melhoramento genético está principalmente relacionado ao rendimento, a qualidade de grãos e a obtenção de plantas resistentes a doenças e pragas. Neste caso, deve ser explorada a variabilidade genética natural ou induzida através de agentes mutagênicos físicos, químicos ou biológicos. A vantagem do uso de mutagênicos biológicos, como os transposons e os retrotransposons, é que ao serem inseridos podem interrompem um gene causando uma mutação. Esta retrotransposição deixa uma marca que possibilita a identificação molecular do local de inserção. No presente trabalho, foi utilizada a estratégia de mutagênese insercional através de eventos de transposição do retrotransposon Tos17, induzido por cultura in vitro. A análise de diferentes genótipos de arroz é muito importante para avaliar se a transposição ocorre de forma similar em genótipos distintos. Foram avaliados calos embriogênicos de cultivares que têm um histórico de variabilidade genética em homozigose, linhagens obtidas através de cruzamentos com espécies silvestres e ecótipos de arroz vermelho, submetidos a 6 meses de cultura in vitro. O método escolhido para avaliar o número de cópias de Tos17 em calos embriogênicos foi a quantificação relativa por PCR em tempo real. A identificação dos genes mutados pela inserção do retrotransposon foi feita através do isolamento e amplificação das seqüências que flanqueiam os insertos de Tos17. O resultado deste experimento indica um aumento no número de cópias de Tos17 em 8 dos 21 genótipos avaliados. O seqüenciamento dos fragmentos de DNA que flanqueiam os insertos do retrotransposon Tos17, indicaram alta similaridade com seqüências genômicas não codificantes de arroz.

Expression of beta defensins 1, 3 and 4 in chorioamniotic membranes of preterm pregnancies complicated by chorioamnionitis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Expressão gênica dos REα, REβ e PR em tumores mamários de cadelas por meio do q-PCR

A expressão de receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) por meio da técnica de q-PCR foi avaliada em 26 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e cinco cadelas sem afecções mamárias (grupo controle). Os resultados mostraram que os três grupos de animais estudados - com tumor maligno ou benigno e controle - expressaram receptores de estrógeno alfa, beta e progesterona. A quantificação relativa mostrou tendência para uma expressão maior de receptores no grupo controle e menor no grupo de animais com neoplasias malignas. Além disso, observou-se expressão maior de ERα em relação ao ERβ, e as neoplasias malignas de origem mista apresentaram maiores concentrações dos receptores PR, ERα e ERβ que as neoplasias de origem epitelial.

Expression of annexin-A1 and galectin-1 anti-inflammatory proteins and mRNA in chronic gastritis and gastric cancer

Objective. The anti-inflammatory proteins annexin-A1 and galectin-1 have been associated with tumor progression. This scenario prompted us to investigate the relationship between the gene and protein expression of annexin-A1 (ANXA1/AnxA1) and galectin-1 (LGALS1/Gal-1) in an inflammatory gastric lesion as chronic gastritis (CG) and gastric adenocarcinoma (GA) and its association with H. pylori infection. Methods. We analyzed 40 samples of CG, 20 of GA, and 10 of normal mucosa (C) by the quantitative real-time PCR (qPCR) technique and the immunohistochemistry assay. Results. High ANXA1 mRNA expression levels were observed in 90% (36/40) of CG cases (mean relative quantification RQ = 4.26 ± 2.03) and in 80% (16/20) of GA cases (mean RQ = 4.38 ± 4.77). However, LGALS1 mRNA levels were high (mean RQ = 2.44 ± 3.26) in 60% (12/20) of the GA cases, while low expression was found in CG (mean RQ = 0.43 ± 3.13; P < 0.01). Normal mucosa showed modest immunoreactivity in stroma but not in epithelium, while stroma and epithelium displayed an intense immunostaining in CG and GA for both proteins. Conclusion. These results have provided evidence that galectin-1 and mainly annexin-A1 are overexpressed in both gastritis and gastric cancer, suggesting a strong association of these proteins with chronic gastric inflammation and carcinogenesis. © 2013 Yvana Cristina Jorge et al.

Análise da expressão gênica de MyoD, MRF4, miogenina e miostatina nos músculos Bíceps femoris e Gastrocnemius lateralis em duas linhagens de Gallus gallus (corte e postura)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Associação de polimorfismos nos genes TLR2 e TLR4 com risco de câncer colorretal esporádico e influência na expressão gênica

Pós-graduação em Genética - IBILCE

Expressão de genes envolvidos na resposta imune de indivíduos com síndrome de Down frente à doença periodontal

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação clínica, de progesterona e da expressão gênica de receptores esteróides dos tumores de mama em cadelas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Quantificação e seqüênciamento do gene da transcriptase reversa em gatos naturalmente infectados com vírus da imunodeficiência felina tratado com AZT

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Citotoxicidade, genotoxicidade e expressão gênica em células da polpa dental humana sensibilizadas por cimentos endodônticos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Expressão gênica e proteica e cinética celular no processo inflamatório induzido pela Helicobacter pylori antese após terapia de erradicação

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Deregulation of Annexin-A1 and Galectin-1 Expression in Precancerous Gastric Lesions: Intestinal Metaplasia and Gastric Ulcer

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)