Detection of Paracoccidioides spp. in environmental aerosol samples

Taking into account that paracoccidioidomycosis infection occurs by inhalation of the asexual conidia produced by Paracoccidioides spp. in its saprobic phase, this work presents the collection of aerosol samples as an option for environmental detection of this pathogen, by positioning a cyclonic air sampler at the entrance of armadillo burrows. Methods included direct culture, extinction technique culture and Nested PCR of the rRNA coding sequence, comprising the ITS1-5.8S-ITS2 region. In addition, we evaluated one armadillo (Dasypus novemcinctus) as a positive control for the studied area. Although the pathogen could not be isolated by the culturing strategies, the aerosol sampling associated with molecular detection through Nested PCR proved the best method for discovering Paracoccidioides spp. in the environment. Most of the ITS sequences obtained in this investigation proved to be highly similar with the homologous sequences of Paracoccidioides lutzii from the GenBank database, suggesting that this Paracoccidioides species may not be exclusive to mid-western Brazil as proposed so far. © 2013 ISHAM.

Molecular and morphological data support the existence of a sexual cycle in species of the genus Paracoccidioides

The genus Paracoccidioides includes the thermodimorphic species Paracoccidioides brasiliensis and P. lutzii, both of which are etiologic agents of paracoccidioidomycosis, a systemic mycosis that affects humans in Latin America. Despite the common occurrence of a sexual stage among closely related fungi, this has not been observed with Paracoccidioides species, which have thus been considered asexual. Molecular evolutionary studies revealed recombination events within isolated populations of the genus Paracoccidioides, suggesting the possible existence of a sexual cycle. Comparative genomic analysis of all dimorphic fungi and Saccharomyces cerevisiae demonstrated the presence of conserved genes involved in sexual reproduction, including those encoding mating regulators such as MAT, pheromone receptors, pheromone-processing enzymes, and mating signaling regulators. The expression of sex-related genes in the yeast and mycelial phases of both Paracoccidioides species was also detected by realtime PCR, with nearly all of these genes being expressed preferentially in the filamentous form of the pathogens. In addition, the expression of sex-related genes was responsive to the putative presence of pheromone in the supernatants obtained from previous cocultures of strains of two different mating types. In vitro crossing of isolates of different mating types, discriminated by phylogenetic analysis of the α-box (MAT1-1) and the high-mobility-group (HMG) domain (MAT1-2), led to the identification of the formation of young ascocarps with constricted coiled hyphae related to the initial stage of mating. These genomic and morphological analyses strongly support the existence of a sexual cycle in species of the genus Paracoccidioides. © 2013, American Society for Microbiology.

Microplate alamarblue assay for paracoccidioides susceptibility testing

CLSI method M27-A3 is not available for use with dimorphic fungi, such as those of the Paracoccidioides genus. In this study, we developed a microdilution method and added the alamarBlue reagent to test the responses of Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii against amphotericin B and itraconazole antifungals. The test proved to be sensitive, practical, and inexpensive and can be used to monitor the activity of low-growth microorganisms and their response to various drugs. © 2013, American Society for Microbiology.

Expressão gênica das adesinas e fatores de virulência da fase miceliar e leveduriforme do complexo paracoccidioides e de sua interação com células epiteliais e fagócitos

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Detecção de Paracoccidioides sp. em amostras ambientais aerossóis

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação por métodos fenotípicos e proteômicos de galatos de alquila com atividade anti-complexo Paracoccidioides

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Espécies crípticas em Paracoccidioides brasiliensis: diferenciação antigênica e de resposta a fatores estressantes

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Determinação de genes/proteínas endossomais em Paracoccidioides brasiliensis e em macrófagos infectados e não infectados

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Clonagem e caracterização da proteína 14-3-3 de Paracoccidioides brasiliensis durante sua interação com células epiteliais

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudos cromossômicos em anuros das famílias Hylidae rafinesque, 1815 e Leptodactylidae werner, 1896 (Amphibia: Anura)

Embora exista uma grande diversidade de complementos cromossômicos em Leptodactylidae (2n = 18 a 2n = 26) e Hylidae (2n = 20 a 2n = 32), a elevada fragmentação de dados limita o acesso a informações sobre as origens e os mecanismos responsáveis por esta diversidade. Isto provavelmente tem influenciado que os dados citogenéticos tenham sido principalmente utilizados na caracterização do status de espécies mais do que incluídos amplamente em análises filogenéticas. Este trabalho aborda, por meio de dados citogenéticos, aspectos evolutivos de três grandes grupos de anuros de ampla distribuição na região Neotropical. O gênero Leptodactylus é agrupado com Hydrolaetare, Paratelmatobius e Scythrophrys na família Leptodactylidae. Os antecedentes cromossômicos neste gênero indicam variações nos números diplóides de 2n = 18 a 2n = 26, assim como variações nos números fundamentais (número de braços autossômicos, NF) e nas posições das Regiões Organizadoras do Nucléolo (NOR). Os resultados das análises de 26 espécies de Leptodactylus empregando diversas técnicas representa, provavelmente, a análise citogenética mais inclusiva realizada no gênero Leptodactylus até o momento, e os resultados constituem um marco para a proposição de hipóteses consistentes de evolução cromossômica no gênero. A tribo Lophyiohylini agrupa atualmente 81 espécies distribuídas em 10 gêneros. A informação citogenética é escassa e restrita apenas a 12 espécies. São aqui apresentados comparativamente dados citogenéticos em espécies dos gêneros Argenteohyla, Itapotihyla, Phyllodytes, Trachycephalus e Osteocephalus. Os resultados indicam que, com exceção de O. buckleyi (2n = 26; NF = 50) e P. edelmoi (2n = 22; NF = 44), todas as demais espécies analisadas coincidem com os dados citogenéticos disponíveis, que indicam um 2n = 24 (NF = 48) na maioria das espécies cariotipadas, com NOR e constrições secundarias (CS) localizadas no par 11. Entretanto, em Phyllodytes edelmoi e Argentohyla siemersi pederseni, essas regiões localizam-se nos pares 2 e 5, respectivamente. Blocos heterocromáticos foram associados às CS adicionais (sítios frágeis) em Osteocephalus, mas não em Trachycephalus. Dados citogenéticos nos gêneros Nyctimantis e Tepuihyla, assim como técnicas com maior poder de resolução e estudos mais inclusivos, são necessários para compreender melhor a evolução cromossômica da tribo. A tribo Dendropsophini atualmente agrupa os gêneros Scinax, Pseudis, Scarthyla, Sphaenorhynchus, Xenohyla e Dendropsophus. Os dados citogenéticos registrados em todos os gêneros revelaram uma elevada diversidade cariotípica com grandes variações nos números diplóides (2n = 22 em Scarthyla; 2n = 24 em Scinax e Xenohyla; 2n = 24, 24 +1-2B e 26 em Sphaenorhynchus; 2n = 24 e 28 em Pseudis; e, 2n = 30 em Dendropsophus). O 2n = 24 observado em X. truncata indica que o 2n = 30constitui uma sinapomorfia do gênero Dendropsophus. A localização das NOR no par 7 é uma característica compartilhada por espécies dos gêneros Scarthyla, Xenohyla, Pseudis e Sphaenorhynchus, com algumas exceções nos dois últimos (P. caraya e S. carneus). Entretanto, o gênero Dendropsophus exibe uma interessante diversidade em relação a número e localização das NOR. Por outro lado, a distribuição de heterocromatina apresentou padrões variáveis, particularmente gênero Pseudis. Embora exista uma excepcional variação cromossômica neste grupo, a informação fragmentária em alguns gêneros dificulta a formulação de hipóteses consistentes sobre o papel dos cromossomos na evolução do grupo.

Cryptic species of Paracoccidioides brasiliensis: impact on paracoccidioidomycosis immunodiagnosis

We aimed to evaluate whether the occurrence of cryptic species of Paracoccidioides brasiliensis, S1, PS2, PS3 and Paracoccidioides lutzii, has implications in the immunodiagnosis of paracoccidioidomycosis (PCM). Small quantities of the antigen gp43 were found in culture filtrates of P. lutzii strains and this molecule appeared to be more variable within P. lutzii because the synonymous-nonsynonymous mutation rate was lower, indicating an evolutionary process different from that of the remaining genotypes. The production of gp43 also varied between isolates belonging to the same species, indicating that speciation events are important, but not sufficient to fully explain the diversity in the production of this antigen. The culture filtrate antigen AgEpm83, which was obtained from a PS3 isolate, showed large quantities of gp43 and reactivity by immunodiffusion assays, similar to the standard antigen (AgB-339) from an S1 isolate. Furthermore, AgEpm83 was capable of serologically differentiating five serum samples from patients from the Botucatu and Jundiaí regions. These patients had confirmed PCM but, were non-reactive to the standard antigen, thus demonstrating an alternative for serological diagnosis in regions in which S1 and PS2 occur. We also emphasise that it is not advisable to use a single antigen preparation to diagnose PCM, a disease that is caused by highly diverse pathogens.

Análise funcional da proteína 14-3-3 de Paracoccidioides brasiliensis e prospecção de alvos terapêuticos inibidores da interação de P. brasiliensis à pneumócitos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Identificação de Neutrophil Extracellular Traps em lesões tegumentares de pacientes com Paracoccidiodomicose e análise da formação de NETs in vitro por neutrófilos humanos desafiados com Paracoccidioides brasiliensis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Caracterização e identificação de moléculas de superfície presentes em Paracoccidioides spp

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Paracoccidioides brasiliensis interferes on dendritic cells maturation by inhibiting PGE(2) production

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)