Análise da citotoxicidade do extrato do fruto de juçara (Euterpe oleracea Mart.) do Maranhão em células malignas humanas

A juçara, Euterpe oleracea Mart., fruta indígena da Amazônia Legal, é rica em fitoquímicos com atividades anti-oxidante, antiinflamatória e anti-câncer. Este estudo tem por objetivo analisar os efeitos do extrato hidroalcoólico da casca, caroço e fruto total da juçara em diferentes linhagens de células malignas humana. Os frutos foram coletados no Parque da Juçara, localizado no Maracanã, município de São Luís, seguida da confecção da excicata que se mantém registrada no Herbário Rosa Mochel do Núcleo de Estudos Biológicos da Universidade Estadual do Maranhão. Os extratos hidroalcoólicos da casca, caroço e fruto total foram extraidos no Laboratório de Farmacologia e Psicobiologia da UERJ. As linhagens celulares utilizadas nos ensaios foram MCF-7 (adenocarcinoma de mama), CACO-2 e HT-20 (adenocarcinoma colo retal) e adenocarcinoma na mama (MDA-MB-468). As linhagens foram tratadas com 10, 20 e 40g/mL dos extratos por 24 e 48 horas e feitas às análises. Células MCF-7 controle apresentaram núcleo proeminente com nucléolos evidentes. Após tratamento com o extrato hidroalcoólico da casca da juçara, as células mostraram morfologia arredondada com retração do citoplasma. O ensaio de viabilidade com MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)) demonstrou uma redução na viabilidade das células. Após 48 horas, o tratamento das células com 20g/mL do extrato da casca reduziu a viabilidade sendo que o efeito citotóxico do tratamento com 40g/mL do extrato da casca foi potencializado. Células tratadas com 10g/mL do extrato do caroço de juçara apresentavam-se arredondadas com consequente redução no volume celular. A concentração 20g/mL de extrato hidroalcoólico do caroço, causou severa redução no volume das células e ocasionou o surgimento de vacúolos intracelulares. O mesmo foi observado após tratamento com 40g/mL. O tratamento com 40g/mL do extrato hidroalcoólico do fruto total, modificou drasticamente a morfologia das células MCF-7 causando vacuolização e aparente lise com perda do conteúdo citoplasmático e o ensaio da viabilidade com MTT demonstrou redução na viabilidade das células MCF-7 tratadas com 20 e 40g/mL após 24 horas de tratamento. Análises por MET (Microscopia Eletrônica de Transmissão) demonstraram o surgimento de vesículas autofágicas, cuja comprovação deu-se com a identificação da expressão da proteína LC3BII na membrana do autofagossoma pela técnica de Western Blotting. Mediante o demonstrado pelos experimentos, com as linhagens MCF-7 e MDA-MB-468, confirma-se que as frações isoladas do extrato do caroço da juçara, promove modificações celulares indicativas de autofagia a partir de 10g/mL, em 24 horas. O núcleo permaneceu íntegro, não apresentando características de núcleo apoptótico. Os dados são conclusivos para ocorrência de morte celular por autofagia em linhagem celulares de carcinoma de mama MCF-7 quando tratadas com extrato hidroalcoólico da casca, caroço e fruto total da juçara do Maranhão, agente quimiopreventivo no câncer de mama estrogênio-dependente.

Efeitos do tratamento prolongado com isoflavonas de soja no útero, mamas, tecidos adiposo e ósseo de ratas ovariectomizadas

A menopausa, fenômeno fisiológico que ocorre em todas as mulheres, em média, aos 51 anos, é acompanhada em cerca de 80% dos casos de sintomas como fogachos, secura vaginal, irritabilidade e insônia, que interferem na qualidade de vida e na produtividade socioeconômica das mulheres, além de predispô-las a doenças crônico-degenerativas, como arteriosclerose, obesidade e distúrbios cardiovasculares. A terapia de reposição hormonal à base de estrógenos, que visa reduzir os incômodos da menopausa, está associada ao aumento do risco de câncer de mama e do endométrio, como foi demonstrado em estudos científicos. Considerando que as mulheres orientais, consumidoras de soja, apresentam doenças crônico-degenerativas e câncer em taxas inferiores às dos países ocidentais, as isoflavonas da soja têm sido testadas em estudos clínicos e experimentais, porém com obtenção de dados até contraditórios. O presente estudo investigou o efeito da administração crônica de isoflavonas de soja no útero, mamas e tecidos adiposo e ósseo de ratas ovariectomizadas. Quarenta ratas Wistar adultas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: a) ovariectomizadas: grupo ISO, recebendo isoflavonas de soja (100mg/kg/dia/v.o.); b) ovariectomizadas: grupo BE, recebendo benzoato de estradiol (10g/kg/dia/s.c.); c) ovariectomizadas: grupo OVX, recebendo salina (0,1ml/100g/dia/v.o.); d) controles: grupo FO, recebendo salina (0,1ml/100g/dia/v.o.). Antes e durante os 90 dias de tratamento, foram analisados os esfregaços vaginais, para acompanhamento do ciclo estral, determinação do peso corporal e do consumo de ração semanal. Após esse período, os animais foram anestesiados e o sangue coletado para análise de estradiol e progesterona séricos, por radioimunoensaio; e lipidograma e glicose, por espectrofotometria. Posteriormente, os animais foram sacrificados e necropsiados, coletando-se o útero, mamas, gordura intra-abdominal e fêmur para macroscopia e pesagem. Os tecidos selecionados para o estudo foram corados em HE, analisados por microscopia óptica e histomorfometria, visando investigar alterações do crescimento celular (software V.S NIH Image-J; imagens digitais-optronicos CCD). No grupo tratado com isoflavonas, o peso corporal diminuiu em relação OVX, no qual ocorreu aumento de peso em comparação aos animais falso-operados. O exame macroscópico revelou que o útero diminuiu de peso nas ratas do grupo ISO, semelhante às do OVX. Além disso, a histopatologia das glândulas endometriais não mostrou alterações entre os grupos ISO e OVX. Contudo, o grupo BE apresentou proliferação glandular, pseudoestratificação epitelial, frequentes mitoses típicas, metaplasia escamosa, infiltrado eosinofílico e hidrométrio. A concentração de estradiol no grupo ISO foi semelhante à do OVX. Porém, no grupo BE, o estradiol e o peso uterino apresentaram-se aumentados em relação ao OVX. Não foram observadas diferenças na histomorfometria mamária entre os grupos. Houve redução no peso do tecido adiposo abdominal no grupo ISO, comparado com o OVX, sem identificação de alterações morfológicas significativas, apenas hipotrofia celular, confirmada pela histomorfometria. Apesar de não ter havido diferenças na concentração de glicose, colesterol total e triglicerídeos, entre os grupos, o colesterol-HDL apresentou aumento no grupo ISO. Não houve diferença na densitometria do fêmur entre os grupos avaliados. Esses resultados indicam que o tratamento crônico com isoflavonas de soja, na dose testada, não induz mudanças significativas no útero, mamas e tecidos adiposo e ósseo, sugerindo segurança no tratamento, sem risco para o desenvolvimento de câncer.

Estudo paramétrico para um muro de gravidade submetido a carregamentos sísmicos.

A presente dissertação apresenta um estudo do comportamento de um muro de gravidade flexível submetido a carregamentos sísmicos. A influência do carregamento sísmico, e mais precisamente da variação da aceleração horizontal de pico é avaliada num estudo paramétrico, através da análise dos resultados obtidos para os deslocamentos e acelerações horizontais que ocorreram no paramento do muro de gravidade. Optou-se pela análise ao longo do tempo, introduzindo o carregamento sísmico ao modelo numérico do qual fazia parte o muro de gravidade através de 5 históricos temporais de acelerogramas horizontais normalizados em 0,05g, 0,10g, 0,15g, 0,20g e 0,25g. O evento sísmico de origem dos acelerogramas normalizados foi o terremoto ocorrido no Chile em 27 de fevereiro de 2010 e medido na estação em San Jose de Maipo, a 332,7km do epicentro do terremoto. Utiliza-se um software computacional aplicado à Geotecnia, o Plaxis, para a calibração de um modelo numérico em situação estática e posterior desenvolvimento das análises paramétricas em condições sísmicas. As análises realizadas para avaliação do comportamento do muro de gravidade em condição sísmica foram a verificação da influência da variação do acelerograma horizontal normalizada introduzido na base do modelo nos valores das acelerações e deslocamentos horizontais atuantes no muro e a verificação da influência do carregamento sísmico em comparação com a situação estática, comparando-se os valores dos deslocamentos horizontais obtidos na análise estática e nas análises dinâmicas. Os fatores que influenciam potencialmente nos resultados numéricos em condições sísmicas foram apresentados, destacando-se os aspectos relacionados à modelagem numérica em condição de sismo. Os modelos constitutivos oferecidos, a possibilidade de incorporação do carregamento sísmico na base do modelo e a possibilidade de consideração do amortecimento visco-elástico de Rayleigh nos materiais são as principais qualidades do Plaxis, utilizado na modelagem numérica. Avaliou-se positivamente a potencialidade do Plaxis, visto que o programa mostrou-se uma ferramenta capaz de simular o comportamento de muros de gravidade sujeitos a carregamentos sísmicos.

Perfil dos peptídeos gastrointestinais na obesidade programada pelo desmame precoce e após a terapia anti-obesidade com cálcio

O desmame precoce (DP) leva ao desenvolvimento tardio de obesidade e de resistência insulínica (RI), sendo essas alterações prevenidas quando os animais são suplementados com cálcio. Sabe-se que os peptídeos gastrointestinais (GI) atuam na regulação do apetite e em diversos outros processos, podendo ter um papel relevante no desenvolvimento da obesidade e RI. Uma vez que os animais programados pelo DP são obesos e hiperfágicos, investigamos o perfil plasmático e tecidual de GLP-1, CCK e PYY (anorexígenos) de grelina (orexígena) e de seus receptores, assim como o efeito da dieta rica em cálcio sobre estes peptídeos a fim de identificar algum distúrbio no controle do apetite. Ao nascimento das proles, ratas lactantes Wistar foram separadas em: grupo DP (desmame precoce, n=20), filhotes cujas mães tiveram as mamas enfaixadas, impedindo o acesso da prole ao leite nos últimos 3 dias de lactação; e grupo C (controle, n=10), filhotes com livre acesso ao leite materno. Aos 120 dias, as proles DP foram subdivididas em: grupo DP, alimentado com ração comercial padrão, e grupo DPCa, alimentado com ração suplementada com cálcio (10g de carbonato de cálcio/Kg de ração). Os animais foram sacrificados aos 21 e 180 dias de vida. Quantificamos: GLP-1, CCK, PYY, grelina e citocinas (IL-6, TNF-α e IL-10) plasmáticas por ELISA; o conteúdo de grelina no estômago por ELISA e imunohistoquímica; o conteúdo de GLP-1 (intestino), GLP1-R (intestino, TA e ARC) e GHSR-1a (estômago e ARC) por Western blotting. Dados significativos quando p<0,05. Aos 21 dias, a prole DP apresentou aumento de GLP-1 no plasma (+168%) e GLP1-R no tecido adiposo (+72%), embora menor conteúdo de GLP-1 (-59%) e GLP1-R (-58%) no intestino. Não observamos alterações plasmáticas de grelina, CCK e PPY e no conteúdo de GHSR-1a no estômago aos 21 dias. Aos 180 dias, não verificamos diferença em nenhum dos peptídeos GI no plasma na prole DP. Porém, observamos menor conteúdo intestinal de GLP-1 tanto no grupo DP (-33%) quanto no DPCa (-32%), e uma tendência da grelina (+20%) e do GHSR-1a (+31%) a estarem elevados no estômago do grupo DP. Além de menor conteúdo de GLP1-R no tecido adiposo no grupo DP (-59%) e maior conteúdo de GLP1-R no intestino da prole DPCa (+62%). Não encontramos diferença entre os grupos na expressão de GLP1-R e GHSR-1a no ARC. O grupo DP apresentou ainda um perfil pró-inflamatório caracterizado por maior TNF-α e menor IL-10 no plasma. O DP alterou o perfil dos peptídeos GI a curto e longo prazos, o que pode ter colaborado para o desenvolvimento da obesidade, hiperfagia e RI neste modelo, uma vez que o GLP-1, único peptídeo alterado no período de imprinting, possui um possível papel adipogênico. A suplementação com cálcio foi capaz de reverter todas as alterações produzidas pelo DP. Evidenciamos, então, a importância do aleitamento materno na formação do comportamento alimentar e do balanço metabólico, bem como o papel da suplementação com cálcio no tratamento da obesidade e seus distúrbios associados, inclusive nas alterações do apetite.

Efeito da suplementação dietética com cálcio sobre a plasticidade ontogenética no modelo de superalimentação pós-natal

A obesidade está relacionada com o desenvolvimento da diabetes, estresse oxidativo, esteatose hepática, alteração da sensibilidade hormonal e redução da capacidade termogênica pelo tecido adiposo marrom (TAM). Na obesidade, alterações do sistema dopaminérgico mesocorticolímbico podem levar ao vício por alimentos palatáveis. Todas estas características contribuem para o baixo gasto energético e o alto consumo alimentar. Para estudar os efeitos em longo prazo da obesidade infantil, utilizamos o modelo de redução do tamanho da ninhada. Para induzir a superalimentação neonatal, o tamanho da ninhada foi reduzido para 3 filhotes machos de PN3 21 (grupo SL). O grupo controle permaneceu com 10 filhotes (grupo NL). Em PN120, o grupo SL foi dividido em: SL que recebeu ração controle e SL-Ca que recebeu dieta controle suplementada com 10g/kg de CaCO3. Os sacrifícios ocorreram em PN120 e PN180. Durante todo o período experimental, avaliamos o consumo alimentar e peso corporal. Em PN175, avaliamos a preferência alimentar dos animais por uma dieta rica em açúcar ou em lipídio. Avaliamos os hormônios por ELISA, RIA e quimioluminescência; o conteúdo proteico por Western blotting no fígado, tecido adiposo branco (TAB) e marrom (TAM), adrenal e regiões cerebrais; as atividades enzimáticas no soro e no fígado por cinética enzimática. Em PN21, PN120 e PN180, avaliamos in vivo a atividade simpática do TAM. Ao desmame, os ratos SL apresentaram maior estado pró-oxidativo no fígado e plasma e menor sensibilidade às catecolaminas no TAB. Na idade adulta, a suplementação é capaz de melhorar o estado pró-oxidativo no fígado e plasma, a sensibilidade à insulina e a microesteatose no fígado. Tanto a alteração de metabolismo/ação da vitamina D e do glicocorticóide no tecido adiposo como a menor capacidade termogênica do TAM contribuem para a maior adiposidade dos animais do grupo SL. A suplementação com cálcio corrigiu parte dessas alterações. A superalimentação pós-natal levou a redução da via dopaminérgica e a maior preferencia por gordura, enquanto a suplementação com cálcio normalizou esta via apenas a nível hipotalâmico e corrigiu a preferência alimentar. Nossos dados destacam o impacto benéfico da suplementação dietética com cálcio, que pode ter um papel nutricional promissor para auxiliar a perda de peso e minimizar os distúrbios relacionados a obesidade e a síndrome metabólica dos animais obesos que foram superalimentados na lactação.

Growth performance evaluation of genetically improved silver barb (Barbonymus gonionotus Bleeker) in different agro-ecological zones in Bangladesh

On farm trials of silver barb with other carps were carried out in 40 ponds during May to October 2005 in four agro-ecological zones viz., Trishal, Muktagacha, Parbotipur and Paikgacha in Bangladesh. In Trishal and Muktagacha zones, ponds were stocked with silver barb, silver carp and common carp at the stocking density of 11,500 fish/ha, whereas in Parbotipur and Paikgacha zones, ponds were stocked with silver barb, rohu, catla and mrigal at the stocking density of 10,000/ha. Among the ponds, 50% (20 ponds) were stocked with BFRI improved stock of silver barb (Treatment-1) and rest of the 20 ponds stocked with local silver barb stock (Treatment-2). The harvest weight of BFRI improved silver barb were 149±16.01, 168±18.06, 198±14 and 230±9.25g in Trishal, Muktagacha, Paikgacha and Parbotipur, whereas the data obtained at 113±15.52, 136±20.66, 170±17.0 and 205±12.10g for local stock of silver barb, respectively. In all trials, the harvest weight of BFRI improved stock showed significantly higher growth performance (P<0.05) over the local stocks.

滇池水华蓝藻藻蓝蛋白的分离纯化与毒性研究

采用从昆明滇池机械收获的产毒水华蓝藻为材料,通过采用抽提、粗过滤、微滤、超滤脱毒(截留分子量100kDa)、低温静置离心、真空干燥等提取纯化方法,从1kg微囊藻粉中制备纯度(A620/A280)高达1.80的57g藻蓝蛋白干粉.小鼠急性毒性试验显示,纯化的藻蓝蛋白无毒性;LD50大于3.71g·kg-1,而对照原料藻粉的LD50为0.10g·kg-1.Ames试验结果显示,5个藻蓝蛋白剂量组回变菌落数均未超过阴性对照菌落数2倍,亦无剂量-效应关系,Ames实验结果阴性,初步通过食品安全性毒理学评价程序.

滇池水环境中微囊藻毒素的生物降解

利用从滇池蓝藻水华生物量中提取的微囊藻毒素试验溶液,接种滇池沉积物的微生物,研究其在有氧条件下的生物降解过程.结果表明,水体中的微囊藻毒素易被生物降解,其降解反应服从方程C=A/(1+Be-Ct).当温度在12~25℃,加入的沉积物量为1~10g时,藻毒素粗提液的平均降解反应速率为3.181.13d-1,平均半衰期t1/2为2.661.27d,且藻毒素的生物降解速度随反应温度和沉积物量的增加而提高.研究结果还表明,生物降解是去除滇池水环境中微囊藻毒素的一个重要机制.

六种鱼腥藻在大量培养中的生产率和适应性与营养成分比较

连续两年对鱼腥藻的六个品系进行了大量培养比较研究,在长江中下游气候条件下,HB1042和HB1105具有稳定的生产性能,5月下旬至九月中旬123d内,平均有效生长分别为114和100d;其次是HB1058,HB686和HB1017,平均有效生长天分别为73,58和71d;HB13适应性较差。生物量生产率在5月下旬、6月中旬至9月中旬较高,除HB13外,平均都在10g干重/m~2/d以上或接近10g/m~2/d。在不同的季节它们表现出了各自的最高生物量生产率。据此,提出了逐月逐旬采取藻种搭配生产,以获得最高

碱性染料砷钼杂多酸多元络合物显色反应的研究及其在光度分析中的应用

本论文“碱性染料砷钼杂多酸多元络合物显色反应的研究及其在光度分析中的应用”包括相互独立的两部分。I.在聚乙烯醇存在下，乙基紫－砷钼杂多酸缔合物分光光度法测定痕量砷的研究本文对乙基紫（EV）等8种碱染料和聚乙烯醇（PVA）等4种分散剂进行了筛选，详细地研究了在PVA存在下，乙基紫－砷钼杂多酸的显色反应的分光光度条件，用三种方法测定了缔合物的组成，建立了一种新的测砷方法，并对水样和Na_2SO_4等样品中微量砷进行了测定。结果表明，在PVA存在下，EV－AsM。杂多酸显色反应的最佳光度测定条件为：[H_2SO_4]=0.056 N，[MoO_4~-]=4.0*10~(-4)M, [EV]=8.0*10~(-5)M, 1% PVA 5ml/25ml，50℃水浴加热10分钟左右。在此最佳光度条件下，缔合物稳定性可达4小时以上，缔合物最大吸收波长为550nm，0－6μg As~(+5)/25ml符合比尔定律。表观摩尔吸光系数ε＝2.3*10~5在目前所发表的水相光度法测定微量砷的文献报导中，本法灵敏度最高。缔合物中，EV与砷钼杂多酸之比为3：1。测定样品时，回收率为98～102％，检测下限为2ppb（水样50ml），40ppb（Na_2SO_4, 10g）。方法灵敏度较高且操作步骤亦较简便、快速。II.乙基罗丹明B－砷钼杂多酸多元络合物显色反应的光光度研究本文研究了在PVA存在下，乙基罗丹阴B（ERhB）－砷，钼杂多酸络合物显色反应的分光光度条件，缔合物组成，可见红外光谱及反应历程。结果表明，在PVA存在下，ERhB-AsM。杂多酸显色反应的最佳光度测定条件为：[H_2SO_4]=0.68V, [MoO_4~2]=3.44*10~(-2)M, [ERhB]=3.79*10~(-5)M，1% PVA 5ml/25ml。在此条件下，本显色反应不需水浴加热，显色速度极快，显色液可稳定2小时，缔合物最大吸收波长为589nm，试剂空白最大吸收波长为557nm，0～5μg As~(+5)/25ml符合比尔定律，表观摩尔吸光系数ε=3.0*10~5。在测定砷所有水相光度法中本法灵敏度最高。缔合物中ERhB与砷钼杂多酸之比为3：1，ERhB与砷钼杂多酸是离子键缔合在一起的，ERhB在缔合物中结构并没有由于成络作用而发生变化。

光通信用10Gbit／s Transponder的设计

本文分析了在高速光模块设计中介质损耗和微带结构对信号的影响，并对PCB中信号串扰模型的参数进行了计算．解决了高速光模块设计的一些关键问题，设计出满足MSA的300-pin transponder，并对模块进行了一系列性能和指标测试．测试结果表明，该模块完全满足SDH／SONET（STM-64／OC-192）以及10G Ethemet应用要求．

一株放线菌发酵产物抗肿瘤活性的研究

本学位论文主要研究一株放线菌发酵产物的抗肿瘤活性。先对该株放线菌进行活化培养，然后进行大批量发酵，发酵液经过冷冻离心，对离心得到的沉淀和上清液用不同极性的有机溶剂进行萃取，得到六个浸膏样品。对六个样品进行初步抗肿瘤活性检测。 然后对活性浸膏进行分离纯化和活性跟踪。本论文主要进行了如下的工作： 1、对菌种进行活化培养，利用该菌株在280C，200r.min-1条件下进行发酵实验，发酵时间为72h,发酵总量为15L。发酵液经过离心得到上清液和沉淀两部分。 2、分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取沉淀和上清液，得到编号为1—6的六个浸膏样品，对六个浸膏样品进行初步的细胞毒性和抗HepG2肿瘤活性实验，得出结论为5号样品活性最高。在没有分离纯化的情况下GI50达到0.76µg/mL。 3、对5号样品进行TLC实验，找出能够较好分离5号样品中各组分的溶剂组合，最后得出在氯仿：甲醇=8：1时分离效果较好。然后利用氯仿：甲醇=8：1的溶剂组合作为洗脱剂对5号样品进行过硅胶柱分离纯化并进行活性跟踪分离。 4、对分离纯化后得到的样品进行活性跟踪和结构分析。分离后得到样品A，在其浓度为10µg/ml时，抗肿瘤实验细胞的生长率为73.5%。在浓度为1.0mg/ml时，抗单纯疱疹病毒率（HSVⅡ）为74.5%。结构分析得知其分子式最可能为C41H43N8O4. This dissertation studied about the anti-tumor activity of an actinomycete fermentation product. First, we cultured the actinomycete. Second, we fermented it in large quantities, and then centrifuged the fermentation fluid; the next step is that we extract sedimentation and supernatant in different polar organic solvents, in turn to obtained six samples, which were detected about anti-tumor activity. Last, we purified active sample and tracked activity of it. We carried out the following research work: 1. Activation, culture and screening of the actinomyces was carried on. We used the screening strain to carry on the fermentation when the conditions are 280C，200r.min-1,the fermentation time is 72h. Fermentation fluid volume is 15L.And we obtained sedimentation and supernatant after fermentation fluid was centrifuged. 2. We used Petroleum ether, ethyl acetate, n-butanol separately to extract sedimentation and supernatant, and obtained six samples that were numbered 1-6. From the preliminary cell toxicity and the anti-tumor（HepG2） bioactivity experiment, we found that No.5 sample has the highest activity in the samples; the GI50 was 0.76µg/ml which has not been purified. 3. We Carried on TLC experiment on the No.5 sample, found the solvent composition that can separate each component of the No.5 sample. At last, we found that when the proportions are tri-chloromethane: methyl alcohol = 8:1, the Separation result was the best, and then we used the Solvent composition which proportion are tri-chloromethane: methyl alcohol = 8:1 as eluant to Purify No.5 sample by silica gel column. 4. We tracked the activity of pure sample obtained from Purification and analyzed structure of these substances. We got a compound A after separation, and the cell growth rate was 73.5% when its concentration was 10µg/ml. The anti-virus（HSVⅡ） rate was 74.5% when its concentration was 1.0mg/ml. We analyzed the Structure of A, and informed its molecular formula that was the most likely for C41H43N8O4.

微生物法生成辅酶Q10的研究

本文根据我们实验室建立的发酵产物中辅酶Q10定性定量检测方法，筛选得到一株可以代谢产生较多辅酶Q10的野生菌株放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter No.50)。 为了提高放射形土壤杆菌的辅酶Q10的产量，本实验利用液体培养研究了单因素对菌株辅酶Q10产量的影响，并用正交法确定了最佳液态发酵条件。最佳发酵培养基是：葡萄糖20g,蔗糖40g, 硫酸铵10g,玉米浆30g, 酵母膏3g，K2HPO4 3g,MgSO4.7H2O 1g，蒸馏水1000mL,pH 7.0-7.2。最佳发酵条件是：转接斜面菌种到种子培养基, 转速220r/min、温度28。C培养24h后，转入发酵培养基(250mL三角拼装液量为50mL，pH 7.0), 接种量为10％，转速220r/min、温度28。C，培养120h。在此条件下，菌体湿重约为50g/L，辅酶Q10含量约为20mg/L。 本文以放射形土壤杆菌为出发菌株进行诱变育种，以期获得辅酶Q10高产菌。根据微生物育种原理、参照辅酶Q10的代谢调控机制，以野生型放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter No.50)为出发菌株，采用紫外线和亚硝基胍复合诱变技术，依次筛选得到菌体提取物M抗性菌ARM－7、烟草提取物T抗性菌株ARMT-26、Vk3抗性菌株ARMTV-25、链霉素抗性菌株ARMTVS-32，菌株ARMTVS-32产量达到了36.8mg/L，与原始出发菌株相比，产量提高了77％。 研究了茄尼醇、对羟基苯甲酸、橘子皮提取物D、胡萝卜提取物E、烟草提取物对ARMTVS-32合成辅酶Q10的影响，结果表明这些物质对菌体合成辅酶Q10有一定促进作用，添加0.2g/L茄尼醇时，辅酶Q10含量提高了17%，达到了40.7mg/L；添加1.2g/L橘子皮提取物D时，辅酶Q10含量提高了13.8%，达到了39.6mg/L；添加0.5g/L胡萝卜提取物E时，辅酶Q10含量提高了25.3% ，达到了43.6mg/L；添加8g/L烟草提取物时，辅酶Q10含量提高了12.6%，达到了39.2mg/L。 Production of Coenzyme- Q10 (CoQ10) by fermentation is considered as a process with broad prospects.Quantitative Analysis of CoQ10 in the culture of microbe by TLC—UV spectrophotometry was developed, by using this method we got the strain Agrobacterium radiobacter,which was isolated from forest soil of southwest of China. The effect of the single factor on CoQ10-production ability of the strain was examined by liquid cultured, and its best optimum cultivation conditions were established by orthogonal method. The results showed that the optimum fermentation conditions were as following: carbon sources glucose 20g/L,sucrose 40g/L; nitrongen sources (NH4)2SO4 10g/L,maize liquid 30g/L;yeast extract 3g; K2HPO4 3g/L,MgSO4.7H2O 1g/L; initial pH was 7 and volume of medium(medium volume vs flask volume) was 50mL/500mL, incubating for 120h on a rotary shaker at 220 rpm and 28℃.Under these conditions, the biomass and CoQ10 concentration reached 50g/L and 20mg/L respectively. According to the biosynthesis mechanism of CoQ10 and breeding theory, CoQ10 over-production strains were screened by UV--NTG. mutation using Agrobacterium radiobacter No.50 as parent strain. A microbe-juice resistant mutant ARMTVS-32, which also could resist tobacco-juice, VK3 and streptomycin, was screened out from an agar plate. The CoQ10 content of ARMTVS-32 reached 36.8mg/L, which was 77% higher than the initial strain. In addition, We discussed the effects of some organic substrates on the synthesis of CoQ10 in ARMTVS-32. The results showed that solanesol, orange juice D, carrot juice E and tobacco juice could promote the CoQ10 accumulation in the cells. The CoQ10 content of ARMTVS-32 reached 40.7mg/L when added 0.2g/L solanesol,it reached 39.6mg/L when added 1.2g/L orange juice D，it reached 43.6mg/L when added 0.5g/L carrot juice E. it reached 39.2mg/L when added 8g/L tobacco juice.

微生物法沥取重金属污泥中铬的研究

本文研究了两种微生物及其组合沥取、回收用微生物法治理电镀铬废水产生的铬污泥中的铬。铬污泥富含C、N、O，含铬量为13%， 经X-光电子能谱分析铬以三价态(氢氧化铬)存在。二种微生物分别从一酸性矿水和酸性污泥中分离筛选得到，经鉴定为硫杆菌属 (Thiobacillus Beijerinek)的两个不同种，一为氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillu ferrooxidans, TF), 另一为氧化硫硫杆菌 (Thiobacillus thiooxidans, TT)。研究并比较了不同微生物对污泥中铬的沥取能力，结果表明，TT菌沥取铬效率最高。振荡、动 态淋滤、静置等沥取方式经过研究表明动态淋滤为最佳，室温条件下(15-20℃)，污泥浓度为20g/L时，总铬沥出率达60%时所需时 间：动态淋滤为48.5h，振荡和静置方式分别为91.22，81.6h。研究了不同温度、不同起始PH、不同污泥浓度及非成熟菌液对微生 物沥取能力的影响：(1) 沥取前期，温度对铬的沥出影响较大；微生物沥取反应基本属一级反应；温度与反应速率的关系基本符合 Arrhenius方程，但沥取后期这一特点并不突出。(2) 沥取液最适起始PH为菌液自然PH；PH值的人为改变将使铬的沥出大大降低。 (3) 污泥浓度与铬的沥出呈正相关，但浓度高于30g/L时，铬的沥出量不再增加。(4) 非成熟菌液沥出铬的能力较差，但沥取液中 微生物生长繁殖较为活跃。总结微生物沥取反应最佳沥取条件为：TT成熟菌液、污泥浓度10g/L、温度25-36℃、动态淋滤方式，此 时铬几乎可100%从污泥中沥出。经扫描电镜分析，沥取开始时，微生物紧密吸附于污泥颗粒表面上，表面紧密吸附为微生物发挥功 能提供了基础。微生物沥取污泥中铬的反应机理推测为：硫细菌代谢产硫酸或氧化Fe2+成Fe3+，利用酸，Fe3+ 及自身氧化酶系统 氧化污泥中Cr3+为Cr6+,Cr6+溶出结晶为CrO3。This paper has studied bioleaching and recovery of Chronium(Cr)from electroplating sludge by two consortum of bacteria and their combination, with sludge produced by microbiological process treating electroplating wastewater containing Cr as material. The share of Cr is 13% and its state is Cr (OH)3 in the sludge. One of the bacteria in the paper was isolated from acid sewage sludge and the other was from acid mineral water. The former was tested and determined as Thiobacillus ferroxidans(TF) and the latter was Thiobacillus thiooxidans(TT). Different microorganisms, responsible for the metal leaching activity, have great influence on the efficiency of leaching. The results showed that TT has biggest power. Experiments were conducted to examined effects of three different ways of leaching(Shaking, Down-leaching, Static-leaching). When temperature was in-door's (15-20℃)and concentration of the sludge was 20g/L, the bioleaching time required to reach 60% of Cr solubilization with the above three ways were 91.2, 48.5, 81.6h respectively. Down-leaching was proved to be the most efficient. The influence of different temperature, initial PH, concentration of the sludge and non-mature inoculum had been studied. The results obtained reveal that: (1) The variation of temperature is important during the time from initial to middle of leaching. The reaction of bioleaching belongs to first-order. The relation between the bioleaching rate constant(In k)and temerature can be expressed by Arrhenius function. (2) The fittest initial PH is the nature PH of mature inoculum. Any alteration with it could cause clearly negative effection. (3) The concentration of the sludge can make strong influence on the bioleaching efficiency. But when the concentration is above 30g/L, the increasing of Cr in the solution is little. (4) If non-mature inoculum acts as the bioleachin microorganism, little quantity of Cr would be gained from the sludge. But the micormass in the solution is very active. The results from electron microscope showed that microorganisms adhered to the surface of the sludge and the adherence was the first stage of the bioleaching. Some salts of Cr can be obtained afer the water of the bioleaching solution being evaporated. By analysing the results of experiment with X-Ray spectroscopy, the salt was identified as CrO3. The recovery rate of Cr is 78.4%.

海洋胶红酵母、光合细菌、生化黄腐酸在海参育苗和养成中的应用效果

用二氧化氯(含量≥8%)日投量1g/m3水体两天处理一次水质,海洋胶红酵母(浓度为1×1010cfu/mL)日投量1～10mL/m3水体、光合细菌(浓度为2×1010cfu/mL)日投量1～10mL/m3水体、生化黄腐酸(含量≥60%)日投量5～10g/m3水体在海参育苗中应用。试验结果表明:与用恩诺沙星日投量1g/m3水体、EDTA螯合剂日投量2g/m3水体,及常规投饵方式进行比较,海参幼体烂边病发病率从20.0%降低到10.0%,烂胃病发病率从23.0%降低到10.0%。在海参养殖中应用海洋胶红酵母、光合细菌(球形红假单胞菌),可提高成参产量14.3%～16.4%。海洋胶红酵母、光合细菌和生化黄腐酸在海参育苗和养成中应用具有广阔前景。