Purification of post-translationally modified proteins from bacteria: homologous expression and purification of histidine-tagged pilin from Neisseria meningitidis

Until recently, glycosylation of proteins in prokaryotes was regarded as uncommon and thought to be limited to special cases such as S-layer proteins and some archeal outer membrane proteins. Now, there are an increasing number of reports of bacterial proteins that are glycosylated. Pilin of pathogenic Neisseria is one of the best characterised post-translation ally modified bacterial proteins, with four different types of modifications reported, including a novel glycosylation. Pilin monomers assemble to form pilus fibres, which are long protein filaments that protrude from the surface of bacterial cells and are key virulence factors. To aid in the investigation of these modifications, pure pilin is required. A number of pilin purification methods have been published, but none are appropriate for the routine purification of pilin from many different isolates. This study describes a novel, rapid, and simple method of pilin purification from Neisseria meningitidis C311#3, which facilitates the production of consistent quantities of pure, native pilin. A 6 x histidine tag was fused to the C-terminus of the pilin subunit structural gene, pilE, via homologous recombination placing the 6 x histidine-tagged allele in the chromosome of N. meningitidis C311#3. Pilin was purified under non-denaturing conditions via a two-step process using immobilised metal affinity chromatography (IMAC), followed by dye affinity chromatography. Analysis of the purified pilin confirmed that it retained both of the post-translational modifications examined. This novel approach may prove to be a generally applicable method for purification and analysis of post-translationally modified proteins in bacteria. (C) 2003 Elsevier Science (USA). All rights reserved.

Bridgehead arylation: A direct route to advanced intermediates for the synthesis of C-20 diterpene alkaloids

[GRAPHICS] Rapid access to the ABCE ring system of the C-20 diterpene alkaloids was achieved by silver(I)-promoted intramolecular Friedel-Crafts arylation of a functional group-specific 5-bromo-3-azabicyclo[3.3.1]nonane derivative.

Modified logit life table system: Principles, empirical validation, and application

Despite its widespread use, the Coale-Demeny model life table system does not capture the extensive variation in age-specific mortality patterns observed in contemporary populations, particularly those of the countries of Eastern Europe and populations affected by HIV/AIDS. Although relational mortality models, such as the Brass logit system, can identify these variations, these models show systematic bias in their predictive ability as mortality levels depart from the standard. We propose a modification of the two-parameter Brass relational model. The modified model incorporates two additional age-specific correction factors (gamma(x), and theta(x)) based on mortality levels among children and adults, relative to the standard. Tests of predictive validity show deviations in age-specific mortality rates predicted by the proposed system to be 30-50 per cent lower than those predicted by the Coale-Demeny system and 15-40 per cent lower than those predicted using the original Brass system. The modified logit system is a two-parameter system, parameterized using values of l(5) and l(60).

Modelo de gest??o do ambiente de TI aplicado ao IBGE

A arquitetura de inform??tica do IBGE busca refletir a evolu????o das Tecnologias da Informa????o e de Comunica????o (TIC) e vem sendo modificada ao longo dos anos, de maneira a manter - se um equil??brio entre os anseios e diretrizes institucionais e governamentais. A partir do aprendizado e do sucesso obtidos no Censo Demogr??fico 2010, o IBGE inova agora na forma de administrar sua ??rea de TIC, baseado em software especialista adquirido.O IBGE se beneficia da administra????o dos bens de inform??tica, da responsabilidade sobre contratos, da gest??o do patrim??nio, do uso otimizado dos softwares comerciais, da agilidade de obten????o de informa????es sobre o parque computacional instalado, do monitoramento on-line dos servi??os oferecidos pela TI, da economia de gastos com viagens para suporte t??cnico dentro dos estados e entre os mesmos, da reeduca????o de funcion??rios quanto ao uso de tecnologias, da forma organizada e planejada de trabalho e, portanto, da gest??o p??blica das TIC

M??dulo 1- plano diretor de TI: curso elabora????o do Plano Diretor de Tecnologia da Informa????o (PDTI)

Esse documento trata de: Plano Diretor de TI; Fase de prepara????o do PDTI; Aprovar o Plano de Trabalho do PDTI

M??dulo 2 - fase de diagn??stico: avaliando o uso e a gest??o da TI: curso elabora????o do Plano Diretor de Tecnologia da Informa????o (PDTI)

Esse documento trata de: fase de diagn??stico; os resultados do Planejamento de TI anterior; o Relat??rio de Resultados do Planejamento de TI anterior; o Referencial Estrat??gico da ??rea de TI; a Organiza????o da TI; an??lise SWOT da TI

M??dulo 1 - planejamento das contrata????es de TI na APF e documento de oficializa????o da demanda: curso planejamento da contrata????o de TI (PCTI)

Esse documento trata de: Raz??es para contratar servi??os de TI; Fundamentos legais da contrata????o de Solu????es de TI; Contrata????o de servi??os de TI na APF: O estado da arte; No????es de Planejamento; Planejamento de TI; Rela????o entre planejamento e contrata????o; Modelo de Contrata????o de TI na vis??o da SLTI/MP; IN 04/2008 x IN 04/2010; Instru????o Normativa n?? 04/2010 - Vis??o Geral; Guia Pr??tico para Contrata????o de solu????es de TI; Quadro Referencial Normativo; Planejamento da Contrata????o de Tecnologia da Informa????o; O Documento de Oficializa????o da Demanda ??? DOD; Equipe de Planejamento da Contrata????o

M??dulo 2 - an??lise de viabilidade da contrata????o e plano de sustenta????o: curso planejamento da contrata????o de TI (PCTI)

Esse documento trata de: An??lise de Viabilidade da Contrata????o; Requisitos do Demandante; Requisitos Tecnol??gicos; Requisitos adicionais; Avalia????o das necessidades de adequa????o do ambiente do ??rg??o; Plano de Sustenta????o; Prazo das contrata????es p??blicas; Recursos materiais e humanos necess??rios ?? continuidade do neg??cio; Continuidade do fornecimento da Solu????o em caso de interrup????o contratual; Transi????o contratual e encerramento do contrato; Estrat??gia de independ??ncia em rela????o ?? contratada

M??dulo 3 - estrat??gia da contrata????o e an??lise de riscos: curso planejamento da contrata????o de TI (PCTI)

Esse documento trata de: estrat??gia da contrata????o e an??lise de riscos; estrat??gia da contrata????o; indica????o dos termos contratuais; or??amento detalhado; termos de compromisso e de ci??ncia; crit??rios de julgamento das propostas; evolu????o do direito de prefer??ncia nas contrata????es de TI; licita????es do tipo t??cnica e pre??o; an??lise de riscos; conceito de risco; riscos no processo de sele????o do fornecedor e na gest??o contratual; riscos de que a solu????o de TI n??o atenda ??s necessidades; probabilidades e danos

M??dulo 4 - termo de refer??ncia: curso Planejamento da Contrata????o de TI (PCTI)

Esse documento trata de: termo de refer??ncia; fundamentos legais do termo de refer??ncia; quem ?? respons??vel pela elabora????o do Termo de Refer??ncia; conte??do do Termo de Refer??ncia; parcelamento da contrata????o; termo de Refer??ncia para dispensa, inexigibilidade e ades??o a ata de registro de pre??os; consulta e audi??ncia p??blica; encerramento da fase de planejamento da contrata????o

Planejamento da contrata????o de TI (PCTI)

Esse documento trata de: oficializa????o da demanda; an??lise de viabilidade da contrata????o;plano de sustenta????o;estrat??gia da contrata????o;an??lise de riscos;elabora????o do Termo de Refer??ncia

M??dulo 1 - contextualiza????o e planejamento das contrata????es de TI: curso sele????o de fornecedores de TI (SFTI)

Esse documento trata de: solu????es de Tecnologia da Informa????o nos ??rg??os p??blicos; fundamentos legais da sele????o de fornecedores de TI na APF; rela????o entre as ??reas de neg??cio, administrativa e de tecnologia da informa????o; conex??es com o PDTI e PCTI; vis??o geral do processo; gest??o or??ament??ria; c??rculo or??ament??rio; etapas da despesa or??ament??ria;despesas com TI

M??dulo 2 - conceitos, princ??pios e boas pr??ticas da licita????o p??blica aplicadas ?? SFTI: curso sele????o de fornecedores de TI (SFTI)

Esse documento trata de: conceito de licita????o p??blica e princ??pios; finalidades; princ??pios b??sicos; modalidades de licita????o; tipos de Licita????o; preg??o; bens e servi??os comuns; sistema de registro de pre??os; ades??o ao registro de pre??o (O Carona); inten????o ao registro de pre??o - Decreto N?? 7892/13; contrata????o direta; fases da licita????o; or??amento estimado; pre??o m??ximo; consulta ou audi??ncia p??blica; comiss??o de licita????o e pregoeiro; questionamentos, impugna????es e controle social; proibi????o de Participar; boas pr??ticas de licita????o; projeto b??sico e Termo de Refer??ncia; edital e Termo de Refer??ncia; prazos do ato convocat??rio; impugna????es ao edital; boas pr??ticas de licita????o

M??dulo 3: divulga????o do instrumento convocat??rio, habilita????o dos licitantes, propostas, encerramento: cautelas e boas pr??ticas: curso sele????o de fornecedores de TI (SFTI)

Esse documento trata de: habilita????o; processamento da licita????o; qualifica????o t??cnica (art. 30 da Lei 8.666/93; dilig??ncias; recursos administrativos; posicionamento da ??rea de TI; coer??ncia Estrita com o Edital; modelo de sele????o de Fornecedores; crit??rios de julgamento; capacidade t??cnico-operacional; capacidade t??cnico-profissional; parecer t??cnico para subsidiar o pregoeiro ou a comiss??o; an??lise de pre??o; amostra ou prot??tipo; adjudica????o e homologa????o

Sele????o de fornecedores de TI (SFTI)

Esse documento trata de: contextualiza????o e planejamento das contrata????es de TI; conceitos, princ??pios e boas pr??ticas da licita????o p??blica aplicadas ?? SFTI; divulga????o do instrumento convocat??rio, habilita????o dos licitantes, propostas, encerramento: cautelas e boas pr??ticas