999 resultados para Óxido nítrico sintase Teses
Resumo:
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)
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Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)
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Ps-graduao em Odontologia - FOA
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Ps-graduao em Cincias Biolgicas (Farmacologia) - IBB
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Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Ps-graduao em Gentica - IBILCE
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The visual system is a potential target for methylmercury (MeHg) intoxication. Nevertheless, there are few studies about the cellular mechanisms of toxicity induced by MeHg in retinal cells. Various reports have indicated a critical role for nitric oxide synthase (NOS) activation in modulating MeHg neurotoxicity in cerebellar and cortical regions. The aim of the present study is to describe the effects of MeHg on cell viability and NOS activation in chick retinal cell cultures. For this purpose, primary cultures were prepared from 7-day-old chick embryos: retinas were aseptically dissected and dissociated and cells were grown at 37C for 7-8 days. Cultures were exposed to MeHg (10 M, 100 M, and 1 mM) for 2, 4, and 6 h. Cell viability was measured by MTT method and NOS activity by monitoring the conversion of L-[H3]-arginine to L-[H3]-citrulline. The incubation of cultured retina cells with 10 and 100 M MeHg promoted an increase of NOS activity compared to control (P < 0.05). Maximum values (P < 0.05) were reached after 4 h of MeHg incubation: increases of 81.6 5.3 and 91.3 3.7%, respectively (data are reported as mean SEM for 4 replicates). MeHg also promoted a concentration- and time-dependent decrease in cell viability, with the highest toxicity (a reduction of about 80% in cell viability) being observed at the concentration of 1 mM and after 4-6 h of incubation. The present study demonstrates for the first time the modulation of MeHg neurotoxicity in retinal cells by the nitrergic system
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O Óxido Nítrico (NO-) uma molcula de sinalizao celular que regula o desenvolvimento embrionrio pr-implantacional. Ns investigamos o papel do NO- no cultivo de embries bovinos produzidos in vitro, atravs do uso de N-Nitro-L-Arginina Metil Ester (L-NAME), um inibidor da produo de NO-, e L-arginina (ARG), um precursor de NO-, em diferentes perodos de cultivo (ativao do genoma embrionrio e compactao). Foram avaliados seus efeitos sobre as taxas de desenvolvimento, cintica do desenvolvimento, qualidade embrionria, e expresso gnica. Os embries foram produzidos por maturao e fertilizao in vitro de ocitos aspirados de ovrios provenientes de abatedouro frigorfico. No experimento 1, as taxas de desenvolvimento foram avaliadas em SOFaa na presena de L-NAME em diferentes perodos: do 1 ao 4 dia de cultivo (LN1-4), do 4 ao 8 (LN4-8) e do 1 ao 8 dia de cultivo (LN1-8). A inibio foi prejudicial a partir do 4 dia de cultivo (grupos LN4-8 e LN1-8), ao reduzir as taxas de ecloso (17,3%13,44 e 13,7% 14,51, respectivamente, p<0,05). Entretanto, o efeito mais negativo ocorreu do 1 ao 8 dia (LN1-8) em que a taxa de blastocisto foi significativamente menor comparada ao controle (29,4%3,72 vs 47,8%11,34, respectivamente, p<0,05). Por isso no experimento 2, a ARG (1, 10 e 50mM) foi adicionada desde o 1 dia de cultivo. As taxas de blastocisto usando 1 e 10mM de ARG foram similares ao controle (48%13,03 e 34,2%3,92 vs 49,4%4,82, respectivamente, p>0,05), mas 50mM prejudicou a taxa de desenvolvimento embrionrio (10,7%7,24, p<0,001). No experimento 3, ARG a 1mM foi adicionada do 5 ao 8 dia de cultivo. Foram observadas taxas de desenvolvimento similares ao grupo GLN (somente com glutamina). Mas comparada ao controle (sem ambos os aminocidos), rendeu melhores taxa de ecloso (54,8%6,9 vs 41,4%11,47, respectivamente, p<0,05) e qualidade embrionria (84,8%2,63 vs 52%8,62, respectivamente, p<0,05), mas no de taxa de blastocisto (49,4%6,5 vs 49,4%4,8, respectivamente, p>0,05). Neste perodo a produo de NO- foi positivamente correlacionada com a taxa de ecloso (R=96,4%, p<0,001) e a qualidade embrionria (R=75,5%, p<0,05). Adicionalmente, embries foram cultivados na presena de L-NAME e ARG simultaneamente (grupo ARG/LN), do 5 ao 8 dia de cultivo, e os transcritos de OCT-4 e INT-t foram quantificados por PCR tempo real. Foi encontrada expresso similar de OCT-4 (p>0,05), mas reduo de 1,8x e 1,5x de INT-t em relao aos grupos controles ARG e GLUT (p<0,05), respectivamente. Esses dados fornecem evidncias da contribuio do NO-, principalmente no perodo entre os estgios de mrula e blastocisto, para a melhoria da ecloso e qualidade embrionria. A produo de NO- requerida para o desenvolvimento pr-implantacional de embries bovinos produzidos in vitro, e pode ser mediada pela suplementao do meio de cultivo com ARG.
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Ps-graduao em Biocincias e Biotecnologia Aplicadas Farmcia - FCFAR
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A atrofia uma resposta imediata do msculo em situaes de tenso e carga reduzida e caracteriza-se por mudanas morfolgicas, aumento da protelise muscular, perda de massa e reduo da rea da fibra que esto implicadas em dficits funcionais, afetando assim a qualidade de vida dos indivduos. Rupturas tendneas ocasionam atrofia muscular devido intrnseca relao funcional existente entre ambas as estruturas, msculos-tendes. Considerando a injria tendnea, trabalho prvio do nosso grupo identificou que a inibio da sntese de xido nítrico localmente a injria acelerou a recuperao histolgica no tendo e a melhora funcional em animais tenotomizados. Desta forma, a proposta do trabalho avaliar os efeitos da inibio nitrrgica local no tendo em relao ao padro de regenerao muscular. Portanto, para gerar atrofia muscular esqueltica, o trabalho utiliza o modelo experimental de ruptura do tendo calcneo com posterior sutura. Os grupos foram divididos em controle, ruptura, ruptura+veculo (Salina 0,9%) e ruptura+L-nitro-arginina-metil-ster (L-NAME, 5mM). As amostras foram coletadas 14 e 21 dias seguintes ao procedimento cirrgico experimental. Objetivando avaliar a dosagem de protenas, o mtodo de Bradford foi utilizado. As amostras tambm foram reservadas para processamento histolgico qualitativo e quantitativo da rea da fibra muscular e presena de leses de ncleo central. Assim como no trabalho prvio de nosso grupo, acreditamos que a ao da droga restringiu-se ao local, pois no ocasionou fortes influncias em relao ao peso corporal dos animais, que foi medido nos dias 0, 7, 14 e 21. O grupo tratado com L-NAME apresentou diminuio significativa no nmero de leses de ncleo central no 14 dia ps-operatrio e aumento nos nveis de protena e rea da fibra no 21 dia. Em conjunto, nossos resultados sugerem que houve efeito benfico da inibio local da NOS aps a ruptura com relao atenuao da atrofia, contribuindo para acelerar a regenerao muscular.
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Os parasitos do gnero Leishmania apresentam variaes de infectividade intra e inter especficas. Entretanto, so escassas as informaes a respeito da infectividade das espcies de Leishmania do Novo Mundo, principalmente, daquelas encontradas na regio Amaznica brasileira, onde, at o presente momento so conhecidas seis espcies pertencentes ao subgnero Viannia causadoras de LTA. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi investigar, in vitro, o comportamento da infectividade de 5 espcies de Leishmania do subgnero Viannia em macrfagos peritoneais de camundongos BALB/c e sua correlao com a produo de xido nítrico pelos macrfagos infectados. Trinta cepas de Leishmania foram distribudas em seis grupos iguais, de acordo com as espcies seguintes: I- L. (V) braziliensis/LCL, II- L. (V) braziliensis/LCM, III- L. (V) guyanensis, IV- L. (V) shawi, V -L. (V) naiffi e VI- L. (V) lainsoni. As cepas foram cultivadas em meio RPMI suplementado com 10% de soro bovino fetal e 1% de penicilina-gentamicina, at atingir a fase estacionria de cultivo, quando foram usadas para infectar macrfagos na proporo de 4 parasitos/macrfago. As culturas foram incubadas a 35C e 5% de CO2 e aps 24h, as lamnulas foram coradas com Giemsa para contagem do nmero de parasitos e determinao do ndice de infeco, enquanto a concentrao de NO (nitrito) foi calculada pelo mtodo de Griess. Observou-se que as cepas de L. (V) braziliensis/LCM apresentaram o maior ndice de infeco (385), sendo este significativamente maior (P<0,005) que as cepas de L. (V) braziliensis/LCL (264), L. (V) naiffi (215) e L. (V) lainsoni (272), porm, no significativamente maior que os ndices das espcies L. (V) shawi (292) e L. (V) guyanensis (300). Quanto aos nveis de NO (nitrito), detectou-se maior concentrao para a espcie L. (V) naiffi (4,1M e menor concentrao para as cepas de L. (V) braziliensis/LCM (2,15M). As demais espcies tiveram concentraes de: L. (v:) lainsom (3,14M), L. (V) shawi (2,96M), L. (V) guyanensis (2,76M) e cepas de L. (V) braziliensis/LCL (3,1M). Diante do exposto, conclumos que cepas de L. (V) braziliensis/LCM so mais infectivas do que as demais espcies estudadas e, tambm, mais infectivas que cepas homlogas isoladas de casos clnicos de LCL. Alm disso, observou-se menor infectividade da espcie L. (V) naiffi. Desse modo, notou-se que os nveis de NO produzidos pelos macrfagos infectados foram inversamente proporcionais ao grau do parasitismo.