SIXTEEN YEARS OF DERMATOMYCOSIS CAUSED BY Candida spp. IN THE METROPOLITAN AREA OF PORTO ALEGRE, SOUTHERN BRAZIL

The yeasts of the genus Candida infect skin, nails, and mucous membranes of the gastrointestinal and the genitourinary tract. The aim of this study was to determine the prevalence of dermatomycoses caused by Candida spp., and their etiological aspects in the metropolitan area of Porto Alegre, Brazil. A retrospective study with data obtained from tertiary hospital patients, from 1996 to 2011, was performed. The analyzed parameters were date, age, gender, ethnicity, anatomical region of lesions, and the direct examination results. For all the statistical analyses, a = 0.05 was considered. Among positive results in the direct mycological examination, 12.5% of the total of 4,815 cases were positive for Candida spp. The angular coefficient (B) was -0.7%/ year, showing a decrease over the years. The genus Candida was more prevalent in women (15.9% of women versus 5.84% of men), and in addition, women were older than men (54 versus 47 years old, respectively). There was no difference between ethnic groups. The nails were more affected than the skin, with 80.37% of the infections in the nails (72.9% in fingernails and 7.47% in toenails). Our study corroborates the literature regarding the preference for gender, age, and place of injury. Moreover, we found a decrease in infection over the studied period.

SEROVARS AND ANTIMICROBIAL RESISTANCE OF Salmonella spp. ISOLATED FROM TURKEY AND BROILER CARCASSES IN SOUTHERN BRAZIL BETWEEN 2004 AND 2006

Salmonella spp. causes diseases in fowls, when species-specific serovars (Salmonella Pullorum and S.Gallinarum) are present in flocks, and public health problems, when non-typhoid serovars are isolated, as well as possible bacterial resistance induced by the preventive and therapeutic use of antimicrobials in animal production. This study describes the serovars and bacterial resistance of 280Salmonella spp. strains isolated from turkey and broiler carcasses in Southern Brazil between 2004 and 2006. SalmonellaEnteritidis was the most prevalent serovar (55.7%), followed by Heidelberg (5.0%), Agona (4.3%), Bredeney (3.9%), Hadar (3.2%), and Typhimurium (2.9%). Tennessee and S. Enterica subspecies enterica(O: 4.5) were isolated only in turkeys, and Hadar (18.6%) was the most prevalent serovar in this species. Antimicrobial susceptibility tests were performed in 178 isolates (43 from turkeys and 135 from broilers). All isolates were sensitive to amoxicillin + clavulanic acid, polymyxin B, ciprofloxacin, and norfloxacin, and were resistant to bacitracin and penicillin. Broiler carcass isolates showed resistance to nalidixic acid (48.9%), nitrofurantoin (34.3%), neomycin (9.6%), tetracycline (5.2%), and kanamycin (8.9%); and turkey carcass isolates were resistant to nalidixic acid (62.8%), tetracycline (34.9%), and neomycin (30.2%), with a significant difference in turkeys when compared to broiler carcass isolates. These results indicate the need for judicious use of antimicrobials in livestock production, given that the serovars identified are potential causes of food poisoning.

HIGH PREVALENCE OF Blastocystis spp. INFECTION IN CHILDREN AND STAFF MEMBERS ATTENDING PUBLIC URBAN SCHOOLS IN SÃO PAULO STATE, BRAZIL

After a gastroenteritis outbreak of unknown etiology in the municipality ofSebastião da Grama, SãoPaulo, Brazil, we conducted a parasitological survey to establish the epidemiological profile of enteroparasitosis in children and staff members attending the public urban schools in operation in town. The cross-sectional study evaluated 172 children aged 11 months to 6 years old and 33 staff members aged 19 to 58 years old. Overall, 96 (55.81%) children and 20 (60.61%) staff members were mono-parasitized, while 58 (33.72%) children and 4 (12.12%) workers were poly-parasitized. Protozoa (88.37%; 72.73%) was more prevalent than helminthes (3.48%; 0%) in children and staff members respectively.Blastocystis spp. was the most prevalent parasite in children (86.63%) and staff members (66.67%). The age of 1 year old or less was found to be associated with increased prevalence of giardiasis [OR = 13.04; 95%CI 2.89-58.91; p = 0.00] and public garbage collection was identified as a protective factor against intestinal helminth infections [OR = 0.06; 95%CI 0.00-0.79; p = 0.03]. Although most of the children tested positive for Blastocystis spp. and also presented clinical signs/symptoms (62.2%), this association was not statistically significant [OR = 1.35; 95%CI 0.53-3.44; p = 0.51]. Intestinal parasites still represent a public health concern and this study underscores the importance of further investigations to better understand the pathogenic role ofBlastocystis spp.

PERFORMANCE OF CONVENTIONAL PCRs BASED ON PRIMERS DIRECTED TO NUCLEAR AND MITOCHONDRIAL GENES FOR THE DETECTION AND IDENTIFICATION OF Leishmania spp.

In visceral leishmaniasis, the detection of the agent is of paramount importance to identify reservoirs of infection. Here, we evaluated the diagnostic attributes of PCRs based on primers directed to cytochrome-B (cytB), cytochrome-oxidase-subunit II (coxII), cytochrome-C (cytC), and the minicircle-kDNA. Although PCRs directed to cytB, coxII, cytC were able to detect different species of Leishmania, and the nucleotide sequence of their amplicons allowed the unequivocal differentiation of species, the analytical and diagnostic sensitivity of these PCRs were much lower than the analytical and diagnostic sensitivity of the kDNA-PCR. Among the 73 seropositive animals, the asymptomatic dogs had spleen and bone marrow samples collected and tested; only two animals were positive by PCRs based on cytB, coxII, and cytC, whereas 18 were positive by the kDNA-PCR. Considering the kDNA-PCR results, six dogs had positive spleen and bone marrow samples, eight dogs had positive bone marrow results but negative results in spleen samples and, in four dogs, the reverse situation occurred. We concluded that PCRs based on cytB, coxII, and cytC can be useful tools to identify Leishmania species when used in combination with automated sequencing. The discordance between the results of the kDNA-PCR in bone marrow and spleen samples may indicate that conventional PCR lacks sensitivity for the detection of infected dogs. Thus, primers based on the kDNA should be preferred for the screening of infected dogs.

Avaliação das propriedades antioxidantes e antimutagénicas de diferentes cultivares Vaccinium spp.: Partiot, Bluecrop, Duke, Earlyblue e O’Neal, produzidas na Sub-região do Baixo Vouga

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Tecnologia e Segurança Alimentar

Osmo- and thermo-adaptation in hyperthermophilic Archaea: identification of compatible solutes accumulation profiles, and biosynthetic routes in Archaeoglobus spp.

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Biochemistry

Epidemiovigilância das infeções por Leishmania spp. no efetivo cinotécnico da Guarda Nacional Republicana e em mesocarnívoros silvestres

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

Evaluation of pathogenic potential of Aeromonas spp. strains using in vitro methodologies

Dissertation to obtain a Master Degree in Molecular Genetics and Biomedicine

Infecção por Cryptococcus limitada à próstata em paciente aidético com micobacteriose disseminada. Relato de necropsia

Relata-se caso de infecção criptocócica confinada à próstata, como achado de necropsia, em homem de 32 anos portador da síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA) com micobacteriose disseminada. Enfatiza-se a importância do achado incidental em necropsia e a persistência dessa infecção micótica na próstata.

Desenvolvimento de métodos moleculares para a deteção de Trypanosoma spp em glossinas (Diptera: Glossinidae) da República da Guiné Bissau

As moscas do género Glossina são vetores de patologias provocadas por várias espécies de parasita do género Trypanosoma, como a Tripanossomose Humana Africana e as Tripanossomoses Animais. A correta identificação destes tripanossomas é um ponto fulcral quando se procura determinar o risco de doença que determinadas populações de glossinas podem provocar. No presente trabalho foram utilizadas e adaptadas diversas metodologias de diagnóstico molecular, nomeadamente o PCR em tempo real e o PCR-RFLP, que permitiram, através da utilização de primers genéricos, a determinação da carga parasitária e a correta identificação dos tripanossomas presentes no vetor. Os primers denominados Tryp18SF e Tryp18SR foram desenvolvidos especificamente para serem utilizados na identificação das espécies de tripanossoma utilizando PCR em tempo real com metodologia SYBR® Green I e PCR-RFLP. Os primers denominados Tryp18S2F, Tryp18S2R e sonda Tryp18S2P foram desenvolvidos para a quantificação dos parasitas presentes nas amostras utilizando PCR em tempo real com metodologia Taqman®. Foi estudada uma amostra de 762 glossinas provenientes do território da República da Guiné-Bissau, zona atualmente considerada como estando livre de Tripanossomose Humana Africana, mas onde não são realizadas atividades de recenseamento de casos desde o final da ocupação portuguesa. Das 762 glossinas utilizadas, 241 estavam infetadas com tripanossomas, o que representa uma percentagem de infeção geral de 31,6 %. Destas glossinas, 28.63 % encontravam-se infetadas com Trypanosoma grayi, 14.11 % com Trypanosoma congolense, 7.05 % com Trypanosoma vivax e 0.83 % com Trypanosoma brucei brucei, tendo as infeções mistas representado 1.66 %. Não foi possível a identificação conclusiva ao nível da espécie em 48.13 % das amostras positivas, tendo estas ficado consideradas como Trypanosoma spp. Não foram identificados vetores infetados com tripanossomas responsáveis pelas patologias humanas. A utilização de primers genéricos para a identificação permitiu obviar o número de reações necessárias para identificar corretamente o parasita responsável pela infeção, e este trabalho é de resto a primeira descrição da utilização de primers genéricos que permitam a identificação de Trypanosoma grayi. Esta é também a primeira descrição da utilização de PCR em tempo real com metodologia Taqman® para quantificação de tripanossomas, e a sua utilização com primers genéricos aumenta a aplicabilidade em estudos epidemiológicos de grande escala. Palavras-chave: PCR em tempo real; PCR-RFLP; República da Guiné-Bissau; Glossina; Trypanosoma; Tripanossomose.

Contaminação, por ovos de Toxocara spp, de parques e praças públicas de Botucatu, São Paulo, Brasil

A freqüência de contaminação de parques e praças públicas de Botucatu, São Paulo, Brasil, por ovos de Toxocara spp foi estudada durante 12 meses, com colheitas mensais de amostras de solo de dez praças, que foram processadas pela técnica de concentração em solução decinormal de hidróxido de sódio. Das 120 amostras analisadas, 21 estavam contaminadas, correspondendo a 17,5%, em um total de seis praças. A maioria desses ovos porém apresentaram características de inviabilidade infectiva. Embora a chance de aquisição dessa zoonose nas praças estudadas seja pequena, existe o risco de infecção da população.

Tipagem molecular de isolados clínicos e ambientais do complexo de espécies de Cryptococcus neoformans através do gene fosfolipase B(PLB1) e avaliação da susceptibilidade antifúngica

Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada, presente em animais e humanos, que infecta tanto indivíduos imunocomprometidos como imunocompetentes. A criptococose é uma causa significativa de morbilidade e mortalidade em todo o mundo, sendo a meningoencefalite o sinal mais frequente da doença. Duas espécies estão incluídas no complexo de Cryptococcus neoformans: C. gattii (serotipos B e C) e C. neoformans. Por sua vez, C. neoformans é dividido em duas grandes variedades - var. grubii (serotipo A) e var. neoformans (serotipo D) –, além de incluir estirpes híbridas (serotipo AD). A técnica de RFLP tem sido usada para identificar facilmente os tipos moleculares dos isolados em estudos epidemiológicos. Oito tipos foram descritos: VNI, VNII (ambos correspondentes a estirpes C. neoformans var. grubii), VNIII (estirpes híbridas AD), VNIV (C. neoformans var. neoformans), e VGI-IV (correspondentes a C. gattii). Este trabalho teve como objectivo, caracterizar geneticamente uma colecção de isolados clínicos e ambientais, portugueses e estrangeiros, e avaliar a sua resistência a duas drogas antifúngicas, permitindo comparar os padrões epidemiológicos do complexo de espécies com os encontrados noutras regiões do mundo. A colecção possui 337 isolados de C. neoformans, provenientes de diversos hospitais e regiões, previamente identificados por métodos convencionais de diagnóstico. A determinação dos tipos moleculares foi realizada através do método de RFLP no gene PLB1. Dos 267 isolados analisados, o tipo mais abundante foi VN I (61,42%), seguido por VN III (24,34%). Menos abundantes foram VN IV (10,11%) e VN II (3%), enquanto que VG I foi raro (1,12%). Os restantes tipos moleculares de C. gattii não foram encontrados. Usando o método de difusão em disco, 98 destes isolados foram analisados quanto à susceptibilidade antifúngica. Foi registada resistência ao voriconazol em apenas 3,1% dos isolados testados. Foi encontrada resistência ao fluconazol num elevado número de isolados (32,7%) e susceptibilidade dependendo da dose em 15,3%. Este trabalho, também teve o intuito de correlacionar os resultados anteriores com o tipo molecular. Todavia não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre qualquer dos tipos moleculares e as CMIs correspondentes ao fluconazol. Porém, os resultados mostram que alguns tipos moleculares são menos susceptíveis do que outros em relação ao voriconazol: VN I e VN IV são mais resistentes do que VN II, e VN I e VN II são mais susceptíveis que VN III. Concluindo, a elevada frequência de VN I está de acordo com resultados obtidos em outros estudos em países Europeus e Sul-Americanos. É notável a abundância de VN III em Portugal, tal como relatado noutros países do Sul da Europa, mas também no Chile, contrariamente a outras regiões do globo. A elevada resistência ao fluconazol é compatível com os resultados documentados em estudos anteriores. Esta investigação é um importante passo na epidemiologia da criptococose e da ocorrência de C. neoformans em Portugal.

Cryptococcus neoformans isolados de pacientes com AIDS

Criptococose é considerada a infecção fúngica sistêmica oportunista mais comum em pacientes com AIDS. Nestes pacientes tem predominado como agente etiológico Cryptococcus neoformans var. neoformans, e muito raramente relata-se C. neoformans var. gattiii, mesmo nas regiões onde se verifica a sua prevalência. Foram estudados 50 pacientes com lesões de criptococose meningoencefálica associada com AIDS. Os isolados foram identificados através de características microscópicas e macroscópicas exibidas em meios de ágar Sabouraud, ágar niger e Christensen. As variedades de C. neoformans foram determinadas pela reação de coloração obtida em meio de L-canavanina glicina-azul de bromotimol (CGB). Em todos os pacientes examinados foram isolados C. neoformans, sendo identificados C. neoformans var. neoformans em 47 isolados e C. neoformans var. gattii em 3. Os resultados encontrados mostram que a criptococose em pacientes com AIDS pode também ser causada por C. neoformans var. gatti, apesar de haver predominância de C. neoformans var neoformans nesta população.