920 resultados para Óxido nítrico sintase Teses


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Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq)

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Ps-graduao em Cirurgia Veterinria - FCAV

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq)

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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)

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Ps-graduao em Odontologia - FOA

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Ps-graduao em Cincias Biolgicas (Farmacologia) - IBB

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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)

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The visual system is a potential target for methylmercury (MeHg) intoxication. Nevertheless, there are few studies about the cellular mechanisms of toxicity induced by MeHg in retinal cells. Various reports have indicated a critical role for nitric oxide synthase (NOS) activation in modulating MeHg neurotoxicity in cerebellar and cortical regions. The aim of the present study is to describe the effects of MeHg on cell viability and NOS activation in chick retinal cell cultures. For this purpose, primary cultures were prepared from 7-day-old chick embryos: retinas were aseptically dissected and dissociated and cells were grown at 37C for 7-8 days. Cultures were exposed to MeHg (10 M, 100 M, and 1 mM) for 2, 4, and 6 h. Cell viability was measured by MTT method and NOS activity by monitoring the conversion of L-[H3]-arginine to L-[H3]-citrulline. The incubation of cultured retina cells with 10 and 100 M MeHg promoted an increase of NOS activity compared to control (P < 0.05). Maximum values (P < 0.05) were reached after 4 h of MeHg incubation: increases of 81.6 5.3 and 91.3 3.7%, respectively (data are reported as mean SEM for 4 replicates). MeHg also promoted a concentration- and time-dependent decrease in cell viability, with the highest toxicity (a reduction of about 80% in cell viability) being observed at the concentration of 1 mM and after 4-6 h of incubation. The present study demonstrates for the first time the modulation of MeHg neurotoxicity in retinal cells by the nitrergic system

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O Óxido Nítrico (NO-) uma molcula de sinalizao celular que regula o desenvolvimento embrionrio pr-implantacional. Ns investigamos o papel do NO- no cultivo de embries bovinos produzidos in vitro, atravs do uso de N-Nitro-L-Arginina Metil Ester (L-NAME), um inibidor da produo de NO-, e L-arginina (ARG), um precursor de NO-, em diferentes perodos de cultivo (ativao do genoma embrionrio e compactao). Foram avaliados seus efeitos sobre as taxas de desenvolvimento, cintica do desenvolvimento, qualidade embrionria, e expresso gnica. Os embries foram produzidos por maturao e fertilizao in vitro de ocitos aspirados de ovrios provenientes de abatedouro frigorfico. No experimento 1, as taxas de desenvolvimento foram avaliadas em SOFaa na presena de L-NAME em diferentes perodos: do 1 ao 4 dia de cultivo (LN1-4), do 4 ao 8 (LN4-8) e do 1 ao 8 dia de cultivo (LN1-8). A inibio foi prejudicial a partir do 4 dia de cultivo (grupos LN4-8 e LN1-8), ao reduzir as taxas de ecloso (17,3%13,44 e 13,7% 14,51, respectivamente, p<0,05). Entretanto, o efeito mais negativo ocorreu do 1 ao 8 dia (LN1-8) em que a taxa de blastocisto foi significativamente menor comparada ao controle (29,4%3,72 vs 47,8%11,34, respectivamente, p<0,05). Por isso no experimento 2, a ARG (1, 10 e 50mM) foi adicionada desde o 1 dia de cultivo. As taxas de blastocisto usando 1 e 10mM de ARG foram similares ao controle (48%13,03 e 34,2%3,92 vs 49,4%4,82, respectivamente, p>0,05), mas 50mM prejudicou a taxa de desenvolvimento embrionrio (10,7%7,24, p<0,001). No experimento 3, ARG a 1mM foi adicionada do 5 ao 8 dia de cultivo. Foram observadas taxas de desenvolvimento similares ao grupo GLN (somente com glutamina). Mas comparada ao controle (sem ambos os aminocidos), rendeu melhores taxa de ecloso (54,8%6,9 vs 41,4%11,47, respectivamente, p<0,05) e qualidade embrionria (84,8%2,63 vs 52%8,62, respectivamente, p<0,05), mas no de taxa de blastocisto (49,4%6,5 vs 49,4%4,8, respectivamente, p>0,05). Neste perodo a produo de NO- foi positivamente correlacionada com a taxa de ecloso (R=96,4%, p<0,001) e a qualidade embrionria (R=75,5%, p<0,05). Adicionalmente, embries foram cultivados na presena de L-NAME e ARG simultaneamente (grupo ARG/LN), do 5 ao 8 dia de cultivo, e os transcritos de OCT-4 e INT-t foram quantificados por PCR tempo real. Foi encontrada expresso similar de OCT-4 (p>0,05), mas reduo de 1,8x e 1,5x de INT-t em relao aos grupos controles ARG e GLUT (p<0,05), respectivamente. Esses dados fornecem evidncias da contribuio do NO-, principalmente no perodo entre os estgios de mrula e blastocisto, para a melhoria da ecloso e qualidade embrionria. A produo de NO- requerida para o desenvolvimento pr-implantacional de embries bovinos produzidos in vitro, e pode ser mediada pela suplementao do meio de cultivo com ARG.