Altered regulatory response of Rab7a and Rab9 in MM1 and VV2 subtype of Creutzfeldt-Jakob disease

The present study was undertaken to identify proteins interacting with PrPC that could provide new insights into its physiological functions and pathological role. We performed a target search for lysosomal network protein, Rab7a and Rab9, in frontal cortex and cerebellum of human brain from patients with sCJD-MM1 and sCJD-VV2. The intracellular level of Rab7a was increased significantly, when compared with healthy age-matched control. Interactions of PrPC and Rab7a/Rab9 were further investigated by using confocal laser scanning microscopy. Immunofluorescence results suggested potential interactions of Rab7a and PrPC. siRNA against the Rab7a gene was used to knockdown the expression of Rab7a protein in primary cell culture of cortical neurons from wild type mice. This depleted Rab7a resulted an impairment of PrPC trafficking leading to an accumulation of PrPC in the endocytosis pathway. Furthermore, interactions of Tau and Rab7a were investigated by using western blot analysis and confocal laser scanning microscopy. Cell cultures of cortex of wildtype mice were treated with siRNA-Tau, siRNA-Rab7 and control siRNA followed by immunofluorescence. The results of immunofluorescence suggested potential interaction of Tau and Rab7a. Cells lines treated with siRNA-Tau, the intracellular levels of Rab7a and Rab9 significantly increases and their localization is also modified. When we transfected this cells lines with siRNA-rab7a the accumulation of Tau decreases in cytosolic region and their localization was also modified when compared with control cells. In conclusion, this study may help to understand and characterize the subtype specific disease progression in CJD cases. Furthermore, it could be a step ahead to development of new treatment strategies for diseases subtype specific manner.

Influence of substrates composition on immunomodulation by MSCs

Mesenchymal stem cells (MSCs) are non-hematopoietic multipotent stem cells capable to self-renew and differentiate along different cell lineages. MSCs can be found in adult tissues and extra embryonic tissues like the umbilical cord matrix/Wharton’s Jelly (WJ). The latter constitute a good source of MSCs, being more naïve and having a higher proliferative potential than MSCs from adult tissues like the bone marrow, turning them more appealing for clinical use. It is clear that MSCs modulate both innate and adaptive immune responses and its immunodulatory effects are wide, extending to T cells and dendritic cells, being therapeutically useful for treatment of immune system disorders. Mechanotransduction is by definition the mechanism by which cells transform mechanical signals translating that information into biochemical and morphological changes. Here, we hypothesize that by culturing WJ-MSCs on distinct substrates with different stiffness and biochemical composition, may influence the immunomodulatory capacity of the cells. Here, we showed that WJ-MSCs cultured on distinct PDMS substrates presented different secretory profiles from cells cultured on regular tissue culture polystyrene plates (TCP), showing higher secretion of several cytokines analysed. Moreover, it was also shown that WJ-MSCs cultured on PDMS substrates seems to possess higher immunomodulatory capabilities and to differentially regulate the functional compartments of T cells when compared to MSCs maintained on TCP. Taken together, our results suggest that elements of mechanotransduction seem to be influencing the immunomodulatory ability of MSCs, as well as their secretory profile. Thus, future strategies will be further explored to better understand these observation and to envisage new in vitro culture conditions for MSCs aiming at distinct therapeutic approaches, namely for immune-mediated disorders.

Differentiation of human pluripotent stem cells to the neuronal dopaminergic fate

Dissertação de Mestrado, Ciências Biomédicas, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2013

Using induced pluripotent stem cells to investigate the mechanistic link between Gaucher disease and Parkinson related synucleinopathies

Dissertação de Mestrado, Ciências Biomédicas, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2015

Germinação in vitro de camu-camuzeiro (Myrciaria dubia (H.B.K.) McVaugh).

O sucesso da aplicação das técnicas de cultura de tecidos é dependente do estabelecimento prévio da cultura que se quer estudar in vitro. Para a produção de plântulas assépticas, um dos principais problemas é o alto índice de contaminação de explantes obtidos diretamente de plantas de campo. Este trabalho objetivou avaliar a percentagem de germinação de sementes de camu-camuzeiro, em dois experimentos de germinação in vitro, visando a obtenção de plântulas assépticas. No primeiro experimento foram utilizadas cinco concentrações diferentes de ácido giberélico (AG3) combinadas a cinco tipos de explantes obtidos a partir de sementes maduras de camu-camuzeiro, em um delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 5x5. No segundo experimento, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x3x4, utilizando ausência e presença de carvão ativado a 3g.L-1, sementes em três estádios de maturação e quatro concentrações de AG3 (0; 1; 2 e 4mg.L-1). Os explantes foram inoculados em meio MS com pH 5,8, contendo 20g.L-' de sacarose e 2g.L-1 de phytagel. A incubação foi feita em uma sala com fotoperíodo de 16h/luz/dia e temperatura de 25° ± 2°C, e a característica avaliada foi a percentagem de germinação. Nos dois experimentos, o número de explantes germinados foi baixo e independente do estádio de maturação, da presença de AG3 e de carvão ativado no meio de cultura.

O uso de células-tronco na regeneração dos tecidos dentários e periodonto

Os estudos abordando a regeneração dos tecidos dentários ganharam uma nova perspectiva com a utilização das células-tronco. E novas perspectivas têm surgido com a bioengenharia tecidual e as terapias periodontais e pulpares regeneradoras. O objetivo deste trabalho foi desenvolver o modelo experimental de autotransplante em ratos visando compará-lo à técnica de reimplante e estudar a capacidade terapêutica das células da medula óssea em diferentes biomateriais utilizados como matriz para a terapia de células-tronco no reparo dos tecidos dentais. Foram utilizados 23 ratos Wistar divididos em grupos de 1, 3, 15 e 60 dias para as técnicas de reimplante e autotransplante. Os grupos com injeção de células-tronco (CT) foram: (1) grupo de 3 dias, combinado à técnica de reimplante; (2) grupo de 15 dias com ambas as técnicas. Blocos contendo os três dentes molares superiores de cada lado dos ratos foram removidos, feitas radiografias periapicais e as peças foram processadas para inclusão em parafina. Foram avaliadas a espessura do ligamento periodontal (LPD) comparada entre os diferentes grupos e a morfologia celular e matriz extracelular relacionadas à superfície radicular, ao osso alveolar e à porção média do LPD, além das células da polpa dental de cada grupo. As células isoladas a partir da medula-óssea foram incubadas por 24h, 48h, e 72h em placas de cultura contendo membranas de colágeno bovino tipo I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), enxerto ósseo - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Quimica e Farmaceutica LTDA, RJ, Brazil) ou um dente molar de rato. Os espécimes foram observados em um microscópio invertido para contagem de células e processadas para observação no microscópio eletrônico de varredura (MEV). Os grupos de 1 e 3 dias apresentaram medidas de LPD significativamente maiores para a técnica de autotransplante quando comparadas ao reimplante. O grupo de 3 dias com CT não apresentou alterações pulpares significativas, diferente do controle (sem CT) O grupo de 15 dias com CT apresentou as mesmas características histológicas do grupo sem injeção de CT. A observação ao MEV dos biomateriais revelou que as células apresentaram pouca adesão e proliferação no enxerto ósseo e no cemento dentário quando comparados à membrana colágena. A técnica de reimplante associada à injeção de células-tronco sugere alguma influência da terapia com as células-tronco sobre a polpa. As distâncias aumentadas no LPD com a técnica de autotransplante podem não influenciar tanto o sucesso da técnica. As células mesenquimais da medula óssea possuem grande potencial para colonizarem a membrana colágena CollaTape que mostrou vantagens sobre o enxerto ósseo Extra Graft XG-13 como biomaterial para a aderência e a proliferação de células mononucleares da medula óssea, permitindo a diferenciação destas células.

Desarrollo de nuevas técnicas histológicas para el marcaje de células basófilas en glándula digestiva de mejillón.

El objetivo de este proyecto es desarrollar y probar nuevas técnicas de tinción para observar lo mejor posible en el microscopio las células basofilas de la glándula digestiva de los mejillones. Con este experimento queremos comprobar cuál puede ser la técnica de tinción mas apropiada para diferenciar y detectar dichas células.

Técnicas de agricultura de precisão no diagnóstico de uma cultura de soja sob plantio direto em Carambeí, PR.

Avaliação espacial de algumas propriedades químicas de um solo sob sistema de palntio direto a três profundidades, visando estimar a necessidade de calagem para a soja e a aplicação a taxa variável de fertilizante fosfatado e potássico.

Recomendações técnicas para a cultura da soja no Parana 1987/88.

Melhoramento de soja para alimentacao humana; Manejo do solo; Clima; Cultivares; Populacao e densidade de semeadura; Epocas de semeadura; Instalacao da lavoura; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Controle de doencas; Colheita.

Recomendações técnicas para a cultura da soja na Região Central do Brasil 2000/01.

Agronegócio da soja no Brasil; Exigências climáticas; Rotação de culturas; Manejo do solo; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Cultivares; Cuidados na aquisição e na utilização de semente; Tratamento com fungicidas, aplicação de micronutrientes e inoculação de sementes de soja; Instalação da lavoura; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Doenças e medidas de controle; Retenção foliar (Haste verde); Colheita; Tecnologia de sementes.

Recomendações técnicas para a cultura da soja no Paraná 2000/01.

Agronegócio da soja no Brasil; Exigências climáticas; Rotação de culturas; Manejo do solo; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Cultivares; Cuidados na aquisição e na utilização de sementes; Tratamento com fungicidas, aplicação de micronutrientes e inoculação de sementes de soja; Instalação da lavoura; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Doenças e medidas de controle; Retençao foliar (Haste verde); Colheita; Tecnologia de sementes.

Recomendações técnicas para a cultura da soja no Paraná 1998/99.

Exigências climáticas; Rotação de culturas; Manejo do solo; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Cultivares; Cuidados na aquisição e na utilização de semente; Tratamento com fungicidas, aplicação de micronutrientes e inoculação de sementes de soja; Instalação da lavoura; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Doenças e medidas de controle; Retenção foliar (haste verde); Colheita; Tecnologia de sementes.

Recomendações técnicas para a cultura da soja na Região Central do Brasil 1998/99.

Situação mundial da soja; Exigências climáticas; Rotação de culturas; Manejo do solo; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Cultivares; Cuidados na aquisição e na utilização de semente; Tratamento com fungicidas, aplicação de micronutrientes e inoculação de sementes de soja; Instalação da lavoura; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Doenças e medidas de controle; Retenção foliar (haste verde); Colheita; Tecnologia de sementes.

Recomendações técnicas para a cultura da soja na Região Central do Brasil 1997/98.

Situação mundial da soja; Produção; Exportações / Importações; Esmagamento; Estoques finais; Farelo de soja; Óleo de soja; Balanço de oferta e demanda mundial de soja no período de 1993/94 e 1996/97; Exigências climáticas; Exigências hídricas; Exigências térmicas e fotoperiódicas; Rotação de culturas; Seleção de especies para rotação de culturas; Planejamento da propriedade; Rotação de culturas com soja no sul do Maranhão; Manejo do solo; Manejo de resíduos culturais; Preparo do solo; Alternância do uso de implementos no preparo do solo; Rompimento da camada compactada; Sistema de semeadura direta; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Acidez do solo; Calagem; Qualidade do calcário e condições de uso; Correção da acidez subsuperficial; Exigências minerais e adubação para a cultura da soja; Adubação; Cultivares; Cuidados na aquisição e na utilização de semente; Qualidade da semente; Armazenamento das sementes; Tratamento e inoculação de sementes; Instalação da lavoura; Cuidados relativos ao manuseio das sementes; Época da semeadura; Semeadura na entressafra; População de plantas e espaçamento; Calculo da quantidade de sementes; Controle de plantas daninhas; Informações importantes; Semeadura direta; Disseminação; Resistência; Manejo de pragas; Doenças e medidas de controle; Considerações gerais; Doenças identificadas no Brasil; Principais doenças e medidas de controle; Retenção foliar ("Haster Verde"); Colheita; Fatores que afetam a eficiência da colheita; Avaliação de perdas; Como evitar perdas; Tecnologia de sementes; Seleção do local; Avaliação da qualidade; Remoção de torrões para prevenir a disseminação do nematoide de cisto e do percevejo castanho.

Recomendações técnicas para a cultura da soja na região Central do Brasil 1996/97.

Situacao mundial da soja; Producao; Exportacoes/importacoes; Esmagamento; Estoques finais; Farelo de soja; Oleo de soja; Balanco de oferta e demanda mundial de soja; Recomendacoes tecnicas; Exigencias climaticas; Exigencias hidricas; Exigencias termicas e fotoperiodicas; Rotacao de culturas; Selecao de especies para rotacao de culturas; Planejamento da propriedade; Rotacao de culturas com a soja no sul do Maranhao; Manejo do solo; Manejo de residuos culturais; Preparo do solo; Alternancia do uso de implementos no preparo do solo; Rompimento da camada compactada; Sistema de semeadura direta; Correcao e manutencao da fertilidade do solo; Acidez do solo; Calagem; Qualidade do calcario e condicoes de uso; Correcao da acidez subsuperficial; Exigencias minerais e adubacao para a cultura da soja; Adubacao; Cultivares; Cuidados na aquisicao e na utilizacao da semente; Qualidade da semente; Armazenamento da sementes; Tratamento e inoculacao de sementes; Tratamento; Inoculacao; Preparo da semente; Instalacao da lavoura; Cuidados relativos ao manuseio das sementes; Epoca de semeadura; Semeadura na entressafra; Populacao de plantas e espacamento; Calculo da quantidade de sementes; Controle de plantas daninhas; Manejo de pragas; Doencas e medidas de controle; Consideracoes gerais; Doencas identificadas no Brasil; Principais doencas e demidas de controle; Retencao foliar "haste verde"); Colheita; Fatores que afetam a eficiencia da colheita; Avaliacao de perdas; Como evitar perdas; Tecnologia de sementes; Selecao do local; Avaliacao da qualidade; Remocoes de torroes para prevenir a disseminacao do nematoide de cisto.