Caracterização da dose letal mínima por irradiação gama para Penicillium citrinum

O uso das radiações ionizantes na destruição de microrganismos responsáveis pela deterioração de alimentos ou causadores de infecções ou toxinfecções alimentares, constituiu-se aplicação da energia nuclear, para fins verdadeiramente pacíficos. Penicillium citrinum é um fungo produtor de micotoxinas, responsáveis por intoxicações em humanos e animais que se utilizam de alimentos contaminados. Há escassez de informações sobre a resistência do P. citrinum à irradiação gama; assim esta pesquisa objetivou determinar a dose letal por irradiação gama para esse microrganismo. Foram irradiadas 76 suspensões, contendo aproximadamente 100.000 esporos por mililitro, com doses entre 0,2 e 2,2 KGy (KiloGray), sendo os sobreviventes re-irradiados com doses até 3,0 KGy. O fungo foi totalmente destruído com dose de 2,2 KGy. P. citrinum descendentes dos sobreviventes de 2,0 KGy, quando re-irradiados também foram totalmente destruídos com dose de 2,2 KGy. Observou-se um aumento da resistência às doses mais baixas em relação ao fungo não irradiado

Utilização do resíduo líquido de indústria de processamento de suco de laranja como meio de cultura de Penicillium citrinum: depuração biológica do resíduo e produção de enzima

Penicillium citrinum grown in orange juice processing wastes medium under continuous agitation was studied in order to establish optimal conditions (incubation period, incubation temperature, initial pH and nitrogen addition) for biomass and ribonuclease production, as well as, biological depuration of the wastes. Nitrogen addition to wastes medium increased the biomass and ribonuclease production and provides COD reduction. The soy meal shows to be the best nitrogen source. The conditions for a more favorable enzyme and biomass production and COD reduction were initial pH 6.0 and temperature of 27°C. The maximum value obtained for these parameters on optimal conditions of cultivation was 11 U/mL of enzyme, 4 mg/mL of biomass (dry matter) and 55% of COD reduction, in 96 hours of incubation.

Synthesis of FimH receptor-active manno-oligosaccharides by reverse hydrolysis using alpha-mannosidases from Penicillium citrinum, Aspergillus phoenicis and almond

Recombinant Penicillium citrinum alpha-1,2-mannosidase, expressed in Aspergillus oryzae, was employed to carry out regioselective synthesis of alpha-D-mannopyranosyl-(1-->2)-D-mannose. Yields (w/w) of 16.68% disaccharide, 3.07% trisaccharide and 0.48% tetrasaccharide were obtained, with alpha1-->2 linkages present at 98.5% of the total linkages formed. Non-specific alpha-mannosidase from almond was highly efficient in reverse hydrolysis and oligosaccharide yields of 45-50% were achieved. The products of the almond mannosidase were a mixture of disaccharides (30.75%, w/w), trisaccharides (12.26%, w/w) and tetrasaccharides (1.89%, w/w) with 1-->2, 1-->3 and 1-->6 isomers. alpha-1,2-linkage specific mannosidase from P. citrinum and alpha-1,6-linkage-specific mannosidase from Aspergillus phoenicis were used in combination to hydrolyse the respective linkages from the mixture of isomers, resulting in alpha-D-mannopyranosyl-(1-->3)-D-mannose in 86.4% purity. The synthesised oligosaccharides can potentially inhibit the adhesion of pathogens by acting as 'decoys' of receptors of type-1 fimbriae carried by enterobacteria.

Utilização do resíduo líquido de indústria de processamento de suco de laranja como meio de cultura de Penicillium citrinum: depuração biológica do resíduo e produção de enzima

Penicillium citrinum grown in orange juice processing wastes medium under continuous agitation was studied in order to establish optimal conditions (incubation period, incubation temperature, initial pH and nitrogen addition) for biomass and ribonuclease production, as well as, biological depuration of the wastes. Nitrogen addition to wastes medium increased the biomass and ribonuclease production and provides COD reduction. The soy meal shows to be the best nitrogen source. The conditions for a more favorable enzyme and biomass production and COD reduction were initial pH 6.0 and temperature of 27°C. The maximum value obtained for these parameters on optimal conditions of cultivation was 11 U/mL of enzyme, 4 mg/mL of biomass (dry matter) and 55% of COD reduction, in 96 hours of incubation.

Biosynthesis of Two Dihydropyrrole-Polyketides from a Marine-Derived Penicillium citrinum

Feeding experiments with C-13-labeled precursors were performed in order to establish the biosynthesis of two N-acylated dihydropyrroles, (8E)-1-(2,3-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-2- methyldec-8-ene-1,3-dione (1) and 1-(2,3-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-2- methyldecane-1,3-dione (2), isolated from the cultures of a marine-derived Penicillium citrinum. The biosynthesis of both, 1 and 2, involves the incorporation of acetate, methionine and ornithine.

Biosynthesis of two dihydropyrrole-polyketides from a marine-derived Penicillium citrinum

Feeding experiments with 13C-labeled precursors were performed in order to establish the biosynthesis of two N-acylated dihydropyrroles, (8E)-1-(2,3-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-2-methyldec8-ene-1,3-dione (1) and 1-(2,3-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-2-methyldecane-1,3-dione (2), isolated from the cultures of a marine-derived Penicillium citrinum. The biosynthesis of both, 1 and 2, involves the incorporation of acetate, methionine and ornithine.

Imobilização do fungo Penicillium citrinum CBMAI 1186 e lipase de Pseudomonas fluorescens em biopolímeros para aplicações em biocatálise

Diversos biomateriais podem ser aplicados como suportes na imobilização de células totais de fungos filamentosos ou enzimas isoladas, visando a manutenção e o prolongamento da atividade enzimática em processos biocatalíticos. Exemplos promissores de biomateriais são a fibroína da seda e o alginato de sódio. A fibroína é um material protéico com alta estabilidade térmica, elasticidade, resistência à tensão, não sofre ataque microbiano, baixo custo de purificação e alta tenacidade, o alginato é um biopolímero versátil, devido a suas propriedades gelificantes em soluções aquosas. Assim, neste trabalho empregou-se micélios do fungo derivado de ambiente marinho, Penicillium citrinum CBMAI 1186, livres e imobilizados em biopolímeros (fibra de algodão, fibra de fibroína da seda e fibra de paina) na biorredução quimiosseletiva, regiosseletiva e enantiosseletiva da ligação α,β-C=C de enonas α,β-, α,β,γ,δ- e di-α,β-insaturadas previamente sintetizados pela a reação de condensação aldólica. Foi possível a utilização do fungo P. citrinum CBMAI 1186 na redução quimiosseletiva, regiosseletiva e enantiosseletiva da ligação dupla carbono-carbono de sistemas α,β-insaturados. A imobilização do fungo P. citrinum CBMAI 1186 em biopolímeros (algodão, fibroína da seda, paina e quitosana) permitiu a prolongamento da atividade celular do fungo. O protocolo desenvolvido foi capaz de obter compostos até então descritos apenas por síntese clássica. Também foi realizado reações de resolução enzimática de derivados de haloidrinas por diferentes lipases microbianas de: Pseudomonas fluorescens, Candida cylindracea, Rhizopus niveus e Aspergillus niger. A lipase de P. fluorescens foi imobilizada em esferas de fibroína do bicho da seda (método 1, via adsorção) e em blenda com alginato de cálcio (método 2, via encapsulação) em diferentes condições, tais como, variação de solvente, variação da quantidade de enzima imobilizada e tempo de reação. As condições otimizadas foram empregadas em diferentes haloidrinas, rendendo elevados excessos enantioméricos (ee > 99%) e alta razão enanantiomérica (E > 200) para os produtos acetilados. Foi possível desenvolver um protocolo simples, barato e prático para a síntese enantiosseletiva de haloidrina reforçando a versatilidade da fibroína e do alginato como suportes de imobilização para catalisadores heterogêneos. Também foi possível utilizar a lipase imobilizada (método 2) na reação de transesterificação para obtenção do biodiesel etílico. As melhores condições para o bom funcionamento do biocatalisador foram: 30% do biocatalisador, 20% de n-hexano, relação óleo e etanol de 1:4 a 32 ºC por 48 h em agitação magnética (400 rpm). Essas condições permitiram a formação de 42% de rendimento do biodiesel etílico. O biocatalisador apresentou algumas limitações reacionais, tais como, fragilidade frente a elevadas temperaturas (> 32 ºC) e prolongado tempo de agitação magnética. Porém, permaneceu apto no meio por 4 ciclos consecutivas. Conclui-se que os biomateriais (fibroína, alginato e quitosana) podem ser utilizados como alternativas versáteis na imobilização de micélios de fungos filamentoso e de enzimas isoladas para aplicações em biocatalíticas.

Purification, characterization, and specificity determination of a new serine protease secreted by penicillium waksmanii

The purpose of this work was to purify a protease from Penicillium waksmanii and to determine its biochemical characteristics and specificity. The extracellular protease isolated that was produced by P. waksmanii is a serine protease that is essential for the reproduction and growth of the fungus. The protease isolated showed 32 kDa, and has optimal activity at pH 8.0 and 35 C towards the substrate Abz-KLRSSKQ-EDDnp. The protease is active in the presence of CaCl2, KCl, and BaCl, and partially inhibited by CuCl2, CoCl2 and totally inhibited by AlCl3 and LiCl. In the presence of 1 M urea, the protease remains 50 % active. The activity of the protease increases 60 % when it is exposed to 0.4 % nonionic surfactant-Triton X-100 and loses 10 % activity in the presence of 0.4 % Tween-80. Using fluorescence resonance energy transfer analysis, the protease showed the most specificity for the peptide Abz-KIRSSKQ-EDDnp with k cat/K m of 10,666 mM-1 s-1, followed by the peptide Abz-GLRSSKQ-EDDnp with a k cat/K m of 7,500 mM -1 s-1. Basic and acidic side chain-containing amino acids performed best at subsite S1. Subsites S2, S3, S′ 2, and S′ 1, S ′ 3 showed a preference for binding for amino acids with hydrophobic and basic amino acid side chain, respectively. High values of k cat/K m were observed for the subsites S2, S3, and S′ 2. The sequence of the N-terminus (ANVVQSNVPSWGLARLSSKKTGTTDYTYD) showed high similarity to the fungi Penicillium citrinum and Penicillium chrysogenum, with 89 % of identity at the amino acid level. © 2012 Springer Science+Business Media New York.

C25 steroid epimers produced by Penicillium janthinellum, a fungus isolated from fruits Melia azedarach

O fungo Penicillium janthinellum, obtido de Melia azedarach, produziu ergosterol, ergosterol 5a,8a-peróxido e uma mistura de esteróides C25 epiméricos de ocorrência restrita na natureza. Os esteróides C25, denominados neociclocitrinóis, possuem o mesmo sistema tetracíclico de anéis presente no ciclocitrinol, o qual foi isolado do fungo Penicillium citrinum, associado a uma esponja, com o mesmo esqueleto biciclo[4:4:1] nos anéis A/B, mas com cadeias laterais diferentes. O P. janthinellum isolado de M. azedarach, foi cultivado sobre milho branco e os três esteróides foram isolados por vários procedimentos cromatográficos e identificados por cuidadosa análise dos dados de RMN, principalmente correlações ¹H – ¹³C em duas dimensões bem como COSY e TOCSY ¹H – ¹H. A origem biossintética dos ciclocitrinóis é discutida.

Evaluation of potential biocontrol agents against Claviceps africana in vitro and in vivo

Undiluted culture filtrates of two commercial products of Trichoderma spp., Trichopel and Trichoflow, and two isolates of Penicillium citrinum completely inhibited the conidial germination of macroconidia of Claviceps africana , the cause of ergot or sugary disease of sorghum (Sorghum bicolor) in vitro . Similarly, Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia cepacia completely inhibited macroconidial germination, with the former being more effective at high dilutions. In contrast, these bacterial isolates failed to inhibit infection in vivo in glasshouse tests with ergot-inoculated sorghum, but all fungal biocontrol agents (including an isolate of Epicoccum nigrum) reduced the severity of disease (percentage of infected spikelets per panicle), in some cases completely inhibiting the development of ergot. In a second glasshouse trial, optimum control was achieved when the biocontrol agents were applied 3-7 days before inoculation with conidia of C. africana .

Enzyme glycation influences product yields during oligosaccharide synthesis by reverse hydrolysis

Possible evidence is presented for Maillard glycation of enzymes during oligosaccharide synthesis by reverse hydrolysis. In 70% (w/v) mannose solutions, 1,2-alpha-mannosidase from Penicillium citrinum lost 40% and alpha-mannosidase from almonds lost 60% activity at 55 degreesC over 2 weeks. Oligosaccharide yields were 15 and 45% respectively. Higher molecular weight glycation adducts were formed in a time-dependent manner as seen by MALDI-TOF. Inhibitors of the Maillard. reaction were able to partially alleviate these effects resulting in reduced loss of enzyme activity and oligosaccharide yield increases of 27-53% relative to the control. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

Comunidades de fungos em jardins de formigas cortadeiras com diferentes hábitos de forrageamento

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Investigação química e biológica dos metabólitos secundários derivados de macroalgas marinhas e microrganismos associados

Pós-graduação em Química - IQ

Perfil enzimático e potencial biotecnológico de fungos isolados de jardins das formigas cortadeiras

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)