Mitochondrial DNA synthesis studied autoradiographically in various cell types in vivo

It is generally accepted that mitochondria are able to proliferate even in postmitotic cells due to their natural turnover and also to satisfy increased cell energy requirements. However, no detailed studies are available, particularly with respect to specific cell types. Since [3H]-thymidine is incorporated not only into nuclear (n) DNA but also into the DNA of cytoplasmic mitochondria, an autoradiographic approach was developed at the light microscopy level in order to study basic questions of mitochondrial (mt) proliferation in organs of rodents in situ via the cytoplasmic incorporation of [3H]-thymidine injected into the animals 1 h before sacrifice. Experiments carried out on mice after X-irradiation showed that cytoplasmic labeling was not due to a process such as unscheduled nuclear DNA synthesis (nUDS). Furthermore, half-lives of mitochondria between 8-23 days were deduced specifically in relation to cell types. The phase of mtDNA synthesis was about 75 min. Finally, mt proliferation was measured in brain cells of mice as a function of age. While all neurons showed a decreasing extent of mtDNA synthesis during old age, nUDS decreased only in distinct cell types of the cortex and hippocampus. We conclude that the leading theories explaining the phenomenon of aging are closely related, i.e., aging is due to a decreasing capacity of nDNA repair, which leads to unrepaired nDNA damage, or to an accumulation of mitochondria with damaged mtDNA, which leads to a deficit of cellular energy production

Estudo de família brasileira portadora de deficiência auditiva sensorioneural não-sindrômica com herança mitocondrial

O presente estudo teve como objetivo descrever os achados audiológicos e genéticos de nove membros de uma família brasileira que apresenta a mutação no DNA mitocondrial. Todos os nove membros realizaram estudo genético, avaliação foniátrica e audiológica (audiometria tonal e logoaudiometria). O estudo genético revelou a presença de mutação mitocondrial A1555G no gene 12S rRNA (MT-RNR-1) do DNA mitocondrial em todos os sujeitos. Oito sujeitos apresentaram deficiência auditiva e somente um apresentou limiares auditivos normais até o término da realização do estudo. Os resultados audiológicos apontaram para perdas auditivas bilaterais, com prevalência das simétricas, de configurações e graus variados (de moderado a profundo) e pós-linguais. Progressão da perda auditiva foi observada em dois irmãos afetados. Não foi possível afirmar a época do início da perda auditiva por falta de informação dos sujeitos, no entanto, observou-se manifestação da perda em crianças e adultos. As mutações no DNA mitocondrial representam uma causa importante de perda auditiva, sendo imprescindível a realização do diagnóstico etiopatológico, a fim de retardar o início ou evitar a progressão da surdez.

A descentralização da vigilância sanitária no município de Várzea Grande, MT (1998-2005)

O município de Várzea Grande, MT, se habilitou à gestão plena da atenção básica e posteriormente à gestão básica ampliada, assumindo, em relação à vigilância sanitária (Visa), as ações de baixa e média complexidades. Este artigo descreve e analisa o processo de descentralização da Visa no município, a partir de um estudo de abordagem qualitativa, com análise de documentos e entrevistas. Dada a organização do serviço de Visa, observaram-se: deficiências estruturais; pouca evolução qualiquantitativa e pouco investimento em recursos humanos; desconhecimento acerca do uso dos recursos financeiros; desenvolvimento de ações desvinculado da condição de gestão; ausência de planejamento e de avaliação das atividades realizadas. Em Várzea Grande, os efeitos esperados da descentralização, no que tange à Visa, ainda são pouco visíveis, e embora o trabalho tenha enfocado um município de porte médio do interior do Brasil, acredita-se que os resultados encontrados reproduzam-se amplamente nas centenas de municípios de porte semelhante. A situação observada realça a necessidade de maior apoio técnico e político da Visa estadual e da Anvisa, além de controle social, para alavancar os serviços locais de vigilância sanitária.

Avaliação dos serviços de saúde do Município de Cáceres, MT (Brasil): contribuições à programação local

São analisadas informações sobre a oferta dos serviços de saúde do Município de Cáceres, MT (Brasil), que permitirá fomentar discussões com os órgãos gerenciadores do setor, tendo em vista a reformulação dos planos e programas de saúde. Com a utilização do instrumento da técnica CENDES/OPS, foram coletados dados referentes à estrutura nosológica da demanda atendida, distribuição e utilização dos recursos humanos e capacidade física dos serviços de saúde do Município, no período de 1981 a 1984. Verificou-se que o perfil da morbidade registrado manteve-se constante, com predomínio das Demais Doenas Infecciosas e Parasitárias e Doenças Agudas do Aparelho Respiratório. Constatou-se melhora quantitativa quanto à capacidade física e recursos humanos para o setor saúde, especialmente na rede pública. Acredita-se que estas não foram acompanhadas por alterações significativas na qualidade dos serviços oferecidos.

Detecção de DNA de Leishmania braziliensis em pacientes de leishmaniose tegumentar americana

Foi realizado diagnóstico para leishmaniose tegumentar americana a partir de sangue de pacientes residentes em dois municípios endêmicos do estado de Pernambuco. O DNA de 119 amostras de sangue foi extraído e submetido a reação em cadeia da polimerase. Utilizaram-se primers do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante em Pernambuco, cuja seqüência-alvo gera um fragmento de 750 pares de bases. No total 58 (48,7%) indivíduos apresentaram amplificação positiva e 61 (51,3%) negativa. Das amostras positivas para a PCR, 37 (≅ 64%) pertenciam a indivíduos tratados e sem lesão. Conclui-se que a técnica de PCR é eficaz para identificar o DNA de leishmânia em material de biópsias e em sangue venoso.

Comportamento de violência e fatores associados entre estudantes de Barra do Garças, MT

OBJETIVO: Estimar a prevalência de violência entre adolescentes e jovens adultos e identificar fatores associados. MÉTODOS: Estudo transversal com amostragem aleatória sistemática de 699 estudantes do ensino fundamental e médio da rede pública urbana de Barra do Garças, MT, em 2008. Questionário autopreenchível foi aplicado em sala de aula sem a presença do professor. O desfecho "comportamento violento" foi definido como (1) uso de arma de fogo ou branca, e/ou (2) agressões contra si e ou terceiros, e/ou (3) tentativa de suicídio. As variáveis independentes analisadas foram idade, gênero, condição socioeconômica, uso de álcool, uso de drogas psicoativas, atividade sexual e relacionamento com os pais. Foram realizadas análises univariadas e regressão múltipla ajustada para efeito de agregado. RESULTADOS: A prevalência de violência foi de 18,6%, variando segundo a idade: de 10,1% no grupo de dez e 11 anos; 20,2% dos 12 aos 19 anos; e 4,5% dos 20 e 21 anos. Os fatores associados ao comportamento de violência foram uso de álcool (RP = 2,51, IC95% 1,22;5,15), uso de drogas psicoativas (RP = 2,10, IC95%1,61;2,75), gênero masculino (RP = 1,63, IC95% 1,13;2,35) e relações insatisfatórias entre os pais (RP = 1,64, IC95% 1,25;2,15). CONCLUSÕES: Os resultados indicam alta prevalência de violência entre os adolescentes na faixa etária de 12 a 19 anos, sobretudo entre os usuários de álcool e drogas, do sexo masculino, de família cujos pais não possuem relações satisfatórias. Embora sem significância estatística no modelo final de regressão, a defasagem escolar e nível socioeconômico devem ser considerados em ações educativas de prevenção ao comportamento de violência entre estudantes.

Anemia em pessoas da cidade de Caceres/MT e suas relações com renda per capita

Foram estudadas a anemia e suas relações com a renda per capita em 1178 pessoas na cidade de Cáceres, Maio Grosso, Brasil nas faixas etárias de 6 a 14 anos (ambos os sexos), 15 a 45 anos do sexo feminino e 15 a 45 anos do sexo masculino. Encontrou-se maior prevalência de pessoas anêmicas nas faixas de renda < 1/4 do salário mínimo e 1/4 - 1/2 do salário mínimo nas três faixas etárias estudadas. Observou-se associação estatística entre a renda per capita e as médias de hemoglobina para as três faixas etárias.

Hipertensão arterial e medidas de controle referidos na população urbana de Cáceres/MT

Em inquérito realizado na zona urbana de Cáceres (Mato Grosso, Brasil) foram estudados 485 homens e 766 mulheres maiores de 10 anos de idade. Neles a prevalência de Hipertensão arterial foi de 12,2%. Os critérios utilizados foram os propostos pela OMS. As mulheres apresentaram prevalência maior que a dos homens, e em ambos os sexos a prevalência aumenta com a idade. Dentre os hipertensos poucos tinham consciência de seu estado e raros estavam em tratamento.

Fluxo migratório de casos de malária em Cuiabá/MT, 1986

Foram estudadas 2.406 pessoas que procuraram a SUCAM/Cuiabá para diagnóstico e tratamento da malária. Destes, 1.151 tiveram lâminas positivas através da gota espessa: 720 P. vivax, 421 P. falciparum e 10 forma mista; 1.255 foram negativos à pesquisa de hematozoários. As entrevistas foram realizadas através de questionário padronizado onde procurou-se categorizar as pessoas conforme o sexo, idade, profissão, naturalidade, renda mensal, procedência e destino. Da análise efetuada vimos que os casos de malária originaram-se mais da micro-região Norte-Matogrossense para a Baixada Cuiabana (56,5%), colocando em risco toda a população desta micro-região, que encontra-se com borrificaçâo suspensa (DDT) na maioria das localidades. É também importante o fluxo de casos de malária do Estado de Rondônia (20,6%) e para os Estados da região Sul e Sudeste (4,4%) do país. Concluímos que medidas urgentes devam ser tomadas para a reformulação da campanha de controle da malária, planejando a intervenção nos aspectos sociais, políticos e econômicos.

Comparison of serum hepatitis B virus replication markers in patients with chronic hepatitis B: studies on HBeAg/Anti-HBe system, viral dna polymerase and HBV-DNA

The detection of HBV-DNA in serum by molecular hybridization is the most sensitive and specific marker of replication and infectivity of hepatitis B virus and currently is proposed as a routine diagnostic technique in the follow-up of HBV - related diseases. Comparing different techniques already described, we found that direct spotting of serum samples on nitrocellulose membranes under vacuum filtration, followed by denaturing and neutralizing washes is more practical, simple, sensible and reproducible. DNA polymerase assay using phosphonoformic acid as specific viral inhibitor has shown 86.8% of concordance with HBV-DNA detection, and so, it is an useful alternative in the follow-up of hepatitis B chronic patients. We found 19.2% HBeAg positive samples with no other markers of viral replication and no anti-HBe positive sample had detectable HBV-DNA. Discordance between the 2 systems have been extensively described, and we confirm this for the first time in our country. Molecular biological techniques are essential to determine the replication status of chronic hepatitis B patients.

Potential infectivity of blood from HBsAG asymptomatic carriers due to the presence of HBV-DNA and comparison with other markers of hbv infection

Serum samples from 356 HBsAg positive asymptomatic carriers, which were titrated by reverse passive hemagglutination, were analysed for the presence of HBV-DNA, HBsAg and IgM anti-HBc. The samples were divided in three classes, according to the titers of HBsAg and IgM anti-HBc and the distribution of HBV-DNA and HBsAg among these classes was studied. In the high titer class of HBsAg, 65% of samples have one or both markers against only 19% in the low titer class. From the total of 356 samples, 121 gave positive results for IgM anti-HBc (33.9%). From these, 38.9% of HBV-DNA and 47.9% of HBeAg were observed, whereas in samples with absence of IgM anti-HBc, 18.3% and 16.6% were respectively found. A higher frequency of agreement between all these markers was found in the class of high titers of HBsAg; however, HBV-DNA was detected in the low titer class of HBsAg and little or no IgM anti-HBc, showing potential blood infectivity even in HBsAg positive borderline samples.

Human papillomavirus detection in cervical dysplasias or neoplasias and in condylomata acuminaata by in situ hybridization with biotinylated DNA probes

Specimens from cervical dysplasias or carcinomas and genital condylomata acuminata were retrospectively analysed by in situ hybridization (ISH) with bioti-nylated DNA probes for human papillomavirus (HPV) types 6, 11, 16 and 18. In the control group no case was positive for HPV DNA. In mild/moderate dysplasias, 4 cases (14%) were positive for HPV 6 or 11 and 2 cases (7%), for HPV 16. In the severe dysplasia/in situ carcinoma group, 9 cases (31%) showed presence of DNA of HPV types 16 or 18. Six invasive carcinomas (20%) were positive for HPV type 16 or 18. Among condylomata acuminata, 22 cases (73%) were positive for HPV types 6 or 11. In all ISH-positive cases only one viral type was detected. No correlation between HPV DNA positivity and histological findings of HPV infection was observed. Although less sensitive than some other molecular biology techniques, in situ hybridization with biotinylated DNA probes proved to be simple and useful for detecting and typing HPV in samples routinely received for histopathological analysis.

Immunization aganist hepatitis B in children from endemic zone: evaluation of the antibody response against the DNA recombinant vaccine (Engerix B-20 mcg)

A previous seroepidemiological study in the rural zone of Vargem Alta (ES) SouthEast of Brazil, showed a prevalence of up to 9% of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in some areas. One hundred susceptible children aging 1 to 5 years old were selected and immunized with a recombinant DNA hepatitis B vaccine (Smith-Kline 20 mcg) using the 0-1-6 months vaccination schedule. Blood samples were collected at the time of the first vaccine dose (month 0) in order to confirm susceptible individuals and 1,3,6 and 8 months after the first dose , to evaluate the antibody response. Our results showed that two and five months after the second dose, 79% and 88% of children seroconverted respectively, reaching 97% after the third dose. The levels of anti-HBs were calculated in milli International Units/ml (mIU/ml) and demonstrated the markedly increase of protective levels of antibodies after the third dose. These data showed a good immunogenicity of the DNA recombinant hepatitis B vaccine when administered in children of endemic areas.

Detection of hepatitis B virus DNA by the polymerase chain reaction in anti-HBE positive chronic hepatitis B patients

Detection of HBV-DNA by PCR was compared with other serological markers (HBsAg, HBeAg and anti-HBe) in a series of49 Chronic Hepatitis B patients, including 12 with a spontaneous clearance of HBsAg. None of these HBsAg negative cases were PCR positive, but 33/37 (89.2%) HBsAg positive cases were PCR positive (p < 0.0001). Among HBsAg positive samples, nine cases were HBeAg positive and anti-HBe negative, all of them PCR positive. Other 3 patients were HBeAg and anti-HBe positive and these cases were also found PCR positive. A third group included 21 patients anti-HBe positive and HBeAg negative: 19 of them were PCR positive and 2 were PCR negative. The last 4 cases were HBeAg and anti-HBe negative, two of them were PCR positive. The detection of anti-HBe viremic cases in the present series suggest that preC variants could occur in our country. In conclusion, the integrated phase o f chronic hepatitis B seems to be less frequent than it was assumed, when only HBeAg or dot blot hybridization techniques were used. The new term "low replication phase" might favorably replace the former "integrated phase".

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Lutzomyia longipalpis laboratory populations

The phlebotomine sand fly Lutzomyia longipalpis has been incriminated as a vector of American visceral leishmaniasis, caused by Leishmania chagasi. However, some evidence has been accumulated suggesting that it may exist in nature not as a single but as a species complex. Our goal was to compare four laboratory reference populations of L. longipalpis from distinct geographic regions at the molecular level by RAPD-PCR. We screened genomic DNA for polymorphic sites by PCR amplification with decamer single primers of arbitrary nucleotide sequences. One primer distinguished one population (Marajó Island, Pará State, Brazil) from the other three (Lapinha Cave, Minas Gerais State, Brazil; Melgar, Tolima Department, Colombia and Liberia, Guanacaste Province, Costa Rica). The population-specific and the conserved RAPD-PCR amplified fragments were cloned and shown to differ only in number of internal repeats.