Angiostrongylus costaricensis and the intermediate hosts: observations on elimination of L3 in the mucus and inoculation of L1 through the tegument of mollucs

Human accidental infection with Angiostrongylus costaricensis may result in abdominal disease of varied severity. Slugs from the Veronicellidae family are the main intermediate hosts for this parasitic nematode of rodents. Phyllocaulis variegatus, Phyllocaulis soleiformis and Phyllocaulis boraceiensis were experimentally infected to describe the kinetics of L3 elimination in the mucus secretions of those veronicelid species. A maximum of 2 L3/g/day was found in the mucus, while the number of L3 isolated from the fibromuscular tissues varied from 14 to 448. Productive infection was established by inoculations in the hyponotum or in the body cavity, through the tegument. Intra-cavity injection is a less complex procedure and permits a better control of inocula. A preliminary trial to titrate the infective dosis for P. variegatus indicated that inocula should range between 1000 and 5000 L1. The data also confirmed the importance of P. variegatus as an intermediate host of A. costaricensis.

L1 sequence of a new human papillomavirus type-58 variant associated with cervical intraepithelial neoplasia

The present study on molecular characterization of a human papillomavirus (HPV) isolated in Central Brazil describes the L1 gene sequence from a new variant of HPV-58, the isolate Bsb-02. The sample was from a smear obtained from a woman with cervical intraepithelial neoplasia grade II. The whole L1 gene from isolate Bsb-02 was sequenced automatically, showing 99.1% nucleotide identity with the gene from the HPV-58 reference. The clustering between Bsb-02 and HPV-58 reference sequence was also supported by phylogenetic analysis. Fourteen nucleotide substitutions were observed: eight were synonymous and six were associated with amino acid substitutions. A10V and V144I have not been previously described. At GenBank, the only complete L1 sequence from HPV-58 in addition to the HPV-58 reference one is that of Bsb-02. These data provide information that may be relevant to HPV diagnosis and to rational vaccine strategies. HPV variants may also be associated with host immune responses and with the risk of cervical neoplasia.

Production of L1 protein from different types of HPV in Pichia pastoris using an integrative vector

Human papillomavirus (HPV) infection is the most common sexually transmitted disease in the world and is related to the etiology of cervical cancer. The most common high-risk HPV types are 16 and 18; however, the second most prevalent type in the Midwestern region of Brazil is HPV-33. New vaccine strategies against HPV have shown that virus-like particles (VLP) of the major capsid protein (L1) induce efficient production of antibodies, which confer protection against the same viral type. The methylotrophic yeast Pichia pastoris is an efficient and inexpensive expression system for the production of high levels of heterologous proteins stably using a wild-type gene in combination with an integrative vector. It was recently demonstrated that P. pastoris can produce the HPV-16 L1 protein by using an episomal vector associated with the optimized L1 gene. However, the use of an episomal vector is not appropriate for protein production on an industrial scale. In the present study, the vectors were integrated into the Pichia genome and the results were positive for L1 gene transcription and protein production, both intracellularly and in the extracellular environment. Despite the great potential for expression by the P. pastoris system, our results suggest a low yield of L1 recombinant protein, which, however, does not make this system unworkable. The achievement of stable clones containing the expression cassettes integrated in the genome may permit optimizations that could enable the establishment of a platform for the production of VLP-based vaccines.

Estudo da audição de crianças de gestantes expostas ao ruído ocupacional: avaliação por emissões otoacústicas - produto de distorção

OBJETIVO: Detectar precocemente uma possível perda auditiva em crianças de mulheres expostas ao ruído ocupacional durante o período de gestação e verificar se há diferença nos resultados das amplitudes de resposta das emissões otoacústicas - produto de distorção - entre as crianças de mães expostas ao ruído ocupacional e as crianças de mães não-expostas ao ruído ocupacional. MÉTODOS: Crianças de mulheres expostas ao ruído ocupacional durante a gestação e crianças de mulheres não-expostas foram avaliadas através das emissões otoacústicas - produto de distorção -, usando o equipamento GSI 60 DPOEA SYSTEM e empregando a razão de F2/F1 igual a 1,2 e a média geométrica de 2F1-F2. As intensidades das freqüências primárias mantiveram-se fixas, com valores de L1=65 dBNPS e L2=55 dBNPS para F1 e F2, respectivamente. Utilizou-se o teste t-Student em amostras emparelhadas e amostras independentes e o teste não-paramétrico de Wilcoxon. RESULTADOS: Não houve diferença nos valores das medidas das médias das amplitudes de resposta do produto de distorção entre os grupos controle e estudo. Também não houve diferença estatisticamente significante entre os sexos masculino e feminino nas amplitudes de respostas para os grupos controle e estudo, nem entre as orelhas direita e esquerda de cada grupo. CONCLUSÃO: Não foi observado prejuízo auditivo nas crianças de mães expostas ao ruído ocupacional durante a gestação em comparação as crianças de mães não-expostas. Não houve diferença entre as orelhas direita e esquerda e entre os sexos masculino e feminino de cada grupo.

Características agronômicas do feijão caupi inoculado em função de lâminas de irrigação e de níveis de nitrogênio

Objetivou-se, com este trabalho, estudar o efeito de diferentes lâminas de irrigação e doses de nitrogênio sobre as características agronômicas do feijão caupi inoculado. O experimento foi montado em parcelas subdivididas, tendo nas parcelas os níveis de nitrogênio e, nas subparcelas, as lâminas de irrigação, no delineamento em blocos ao acaso, com duas repetições. As lâminas de irrigação corresponderam a 578 mm (L1), 512 mm (L2), 429 mm (L3), 299 mm (L4) e 240 mm (L5) e, os níveis de nitrogênio, a 0, 30, 60 e 90 kg ha-1 de N. Os níveis de nitrogênio apresentaram respostas significativas nos componentes de produção de feijão caupi. As lâminas de irrigação proporcionaram efeitos significativos na produtividade do feijão caupi, sendo a lâmina de 426,21 mm a estimada para obtenção da produtividade máxima de 2820,03 kg ha-1.

Estratégias de predição e efeitos de ambientes na avaliação de populações segregantes de feijão

RESUMOO objetivo deste trabalho foi verificar a consistência da predição, dos potenciais de populações de feijão quanto ao diâmetro do hipocótilo (DH) e à produtividade de grãos (PROD), em duas safras, pelas metodologias de Jinks & Pooni e das estimativas de m + a'e de d. Para isso, foram avaliadas 48 populações segregantes, nas safras de inverno de 2009 (gerações F2e F3, simultaneamente) e de seca de 2010 (gerações F3e F4, simultaneamente), além de 16 testemunhas. Pela metodologia de Jinks e Pooni, verificou-se que apenas quatro e duas populações foram coincidentes entre as 12 melhores nas duas safras, para DH e PROD, respectivamente. A correlação entre (inverno) x (seca) foi significativa e de magnitude razoável para os dois caracteres, enquanto, para (inverno) x (seca), foi inexpressiva, indicando maior influência dos efeitos ambientais nas estimativas de variância do que das médias. Constatou-se baixa correlação entre os pares m + a'(inverno) x m + a'(seca) e d(inverno) x d(seca) para ambos os caracteres, evidenciando que essas estimativas também sofrem grande efeito de ambientes. As populações mais promissoras, considerando-se o DH e a PROD, simultaneamente, foram IPR Uirapuru x L1, BRS Valente x VC6 e CNFC 9466 x VC6, pela metodologia de Jinks & Pooni e CNFC 9466 x L3, BRS Horizonte x VC6 e IPR Uirapuru x BRSMG Madrepérola, pelo método de m + a'e de d. Assim, essas metodologias são complementares na predição do potencial de populações segregantes de feijoeiro.

Suscetibilidade de planorbídeos da região metropolitana de Belo Horizonte, MG (Brasil) ao Angiostrongylus costaricensis (Nematoda, Angiostrongylidae

Lotes de Biomphalaria glabrata (controle), B. tenagophila e B. straminea (com respectivamente 139, 77 e 149 exemplares) criados em laboratório a partir de espécimes coletados na região metropolitana de Belo Horizonte, MG (Brasil), foram infectados experimentalmente com larvas L1 de Angiostrongylus costaricensis. Decorridos aproximadamente 25 dias, os moluscos foram digeridos individual e artificialmente para exame. De 87 B. glabrata examinadas, 62 (71,3%) estavam positivas e apresentaram de uma a 61 larvas L3; de 42 B. tenagophila, 21 (50,0%) possuíam de uma a cinco L3; e de 89 B. straminea, 69 (77,5%), de uma a 72 L3. As três espécies de planorbídeos mostraram-se suscetíveis à infecção pelo A. costaricensis, sendo a B. glabrata e a B. straminea as mais eficientes para manutenção do ciclo do nematódeo em laboratório.

IMMUNOGENICITY OF LOW-DOSE INTRAMUSCULAR AND INTRADERMAL VACCINATION WITH RECOMBINANT HEPATITIS B VACCINE

The study is a randomized trial using recombinant DNA vaccine to determine whether an intramuscular 10 µg dose or intradermal 2 µg induces satisfactory anti-HBs levels compared to the standard dose of intramuscular 20 µg. participants were 359 healthy medical and nurse students randomly allocated to one of the three groups: Group I - IM 20 µg; Group II - IM 10 µg; Group III - ID 2 µg at 0, 1 and 6 months. Anti-HBs titres were measured after complete vaccine schedule by ELISA/Pasteur. Baseline variables were similar among groups and side effects were mild after any dose. Vaccinees in the IM-10 µg group had seroconversion rate and geometric mean titre (GMT 2344 IU L-1), not significant different from the IM-20 µg group (GMT 4570 IU L-1). On the contrary, 21.4% of the ID - 2 µg recipients mount antibody concentration below 10 IU L1 and GMT of 91 IU L-1, a statiscally significant difference compared with the standard schedule IM-20 µg (p < 0.001). A three dose regimen of half dosse IM could be considered an appropriate schedule to prevent hepatitis B in young health adults which is of relevance to the expansion of hepatitis B vaccine programme

dogs may be a reservoir host for Angiostrongylus costaricensis

Angiostrongylus costaricensis is a parasitic nematode of wild rodents. Several other vertebrate species including man may become infected by ingestion of the third stage larvae produced by the intermediate hosts, usually slugs from the family Veronicellidae. There is a report of the diagnosis of abdominal angiostrongyliasis in Canis familiaris with lesions resembling those found in human disease. As a preliminar evaluation of the adequacy of a canine model for pathogenetic studies, a dog was inoculated with 75 L3 of A. costaricensis. Infection was established and fist stage larvae were found in feces up to 88 days post infection, sometimes in very large numbers (9.5 x 10(4) L1/g). No clinical manifestations or significant lesions were detected. These are indications that dog may play a role as a reservoir host for A. costaricensis.

Expression of circulating leucocytes before, during and after myiasis by Dermatobia hominis in experimentally infected rats

Expression of circulating white blood cells was investigated in rats (Rattus norvegicus) experimentally infected with larvae of Dermatobia hominis, the human bot fly. Leucocytes were counted prior to infection (control group) as well as at 6, 10, 15, 20 and 28 days post-infection (dpi) and at 7, 15, 30 and 60 days post-larval emergence (dple). Total leucocyte numbers did not differ markedly among the groups. Significant differences were registered when values from control and animals harboring each larval stage of D. hominis were compared; with crescent rank: L1-, L2-, control and L3-infected groups. Leucocyte numbers were significantly higher in the control, 15, 20 or 28 dpi groups than in the 6 dpi animals. Higher counts were observed in control, L2- or L3-infected rats than L1-infected animals. Neutrophils, eosinophils and both large and small lymphocytes were also counted and analyzed. Basophils and monocytes were insufficient in number to permit statistical studies. These results stimulate the continuity of the studies about the host-parasite relationship in the dermatobiosis.

Ovos e órgãos reprodutores de fêmeas de Angiostrongylus costaricensis são reconhecidos mais intensamente por soros humanos de fase aguda na angiostrongilíase abdominal

O Angiostrongylus costaricensis é um nematódeo intra-arterial de roedores. O homem acidentalmente pode se infectar ao ingerir alimentos ou água contaminados. Nosso objetivo foi o de descrever as estruturas do parasita que são reconhecidas por soros humanos das fases aguda e convalescente da angiostrongilíase abdominal. O método de imunofluorescência indireta foi empregado para estudar a reatividade sobre ovos íntegros e cortes de vermes fêmeas e de larvas de primeiro estágio (L1). L1 também foram estudadas íntegras e depois de tratamento por sonicação. Fluorescência sempre mais intensa com soros de fase aguda foi detectada na superfície dos ovos inteiros e nos fragmentos de L1 e não estava presente nem nas L1 inteiras, nem em seus cortes. Uma reatividade inespecífica foi detectada na borda cuticular da cavidade geral e sobre os órgãos reprodutores. Os dados indicam que estes órgãos são fonte importante de antigenicidade.

Atividade larvicida do extrato bruto enzimático do fungo Duddingtonia flagras sobre larvas de primeiro estádio de Angiostrongylus vasorum

INTRODUÇÃO: Angiostrongylus vasorum é um nematóide que parasita cães domésticos e eventualmente o homem. MÉTODOS: O objetivo deste trabalho foi observar a atividade predatória in vitro do extrato bruto enzimático do fungo Duddingtonia flagrans sobre larvas de primeiro estádio A. vasorum em condições laboratoriais no meio ágar-água 2%. RESULTADOS: Ao final do experimento, os percentuais de redução das L1 de A. vasorum observados foram de: 53,5% (24h) e 71,3% (48h) CONCLUSÕES: O extrato bruto enzimático do fungo D. flagrans destruiu in vitro as L1, podendo ser utilizado como controle biológico desse nematóide.

In vitro predatory activity of conidia of fungal isolates of the Duddingtonia flagrans on Angiostrongylus vasorum first-stage larvae

INTRODUCTION: Angiostrongylus vasorum is a nematode that parasitizes molluscs, dogs, and even man. METHODS: The objective was to evaluate the predatory activity of the conidia of two fungal isolates of Duddingtonia flagrans (AC001 and CG722) on first-stage larvae (L1) of A. vasorum in laboratory conditions. RESULTS: At the end of the experiment, there were significant reductions (p<0.01) of 74.5% and 63.2%, on average, in the A. vasorum L1 recovered in the AC001 and CG722 treatment conditions, respectively. CONCLUSIONS: The two isolates of fungi were efficient in the capture and destruction of A. vasorum L1.

Normal bone density in male pseudohermaphroditism due to 5alpha- reductase 2 deficiency

Bone is an androgen-dependent tissue, but it is not clear whether the androgen action in bone depends on testosterone or on dihydrotestosterone. Patients with 5alpha-reductase 2 deficiency present normal levels of testosterone and low levels of dihydrotestosterone, providing an in vivo human model for the analysis of the effect of testosterone on bone. OBJECTIVE: To analyze bone mineral density in 4 adult patients with male pseudohermaphroditism due to 5alpha-reductase 2 deficiency. RESULTS: Three patients presented normal bone mineral density of the lumbar column (L1-L4) and femur neck, and the other patient presented a slight osteopenia in the lumbar column. CONCLUSION: Patients with dihydrotestosterone deficiency present normal bone mineral density, suggesting that dihydrotestosterone is not the main androgen acting in bone.

Ocorrência de papilomavírus humano na cérvice uterina de mulheres da região ocidental da Amazônia Brasileira

A ocorrência do papiloma vírus humano (HPV) é um problema de saúde pública, pois tem sido associado ao câncer. O objetivo da pesquisa foi identificar a ocorrência de papilomavírus humano na cérvice uterina de mulheres da região ocidental da Amazônia Brasileira. O estudo foi realizado na capital de Rondônia, Porto Velho. Foram identificados os tipos de HPV e resultados moleculares foram correlacionados com aqueles os testes colpocitológicos de amostras provenientes de 334 mulheres que realizaram exames preventivos no Sistema Único de Saúde. Obteve-se o material genético viral do papilomavírus humano (DNA-HPV) e o fragmento de 450 pb da região conservada do gene L1 amplificado e submetido à análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição (RFLP). Das 334 amostras analisadas, 31% foram confirmados com a presença de material viral (DNA-HPV). Confirmou-se a existência dos tipos: HPVS-16, 18, 33, 53 e 58, que identificam o grupo de alto risco oncogênico com 72% (74/103) de ocorrência, bem como os HPVS-11, 42 e 44 pertencentes ao grupo de baixo risco oncogênico com 28% de ocorrência. Os perfis recorrentes durante o desenvolvimento da análise foram do HPV-16 e -18 com 17% e 16%, respectivamente. Os resultados da pesquisa indicam que mais de 80% das amostras analisadas e que continham material viral não apresentavam nenhuma alteração celular no teste citológico, o que reforça a necessidade de se difundir o uso das técnicas moleculares em diagnósticos convencionais.