Culture of mouse peritoneal macrophages with mouse serum induces lipid bodies that associate with the parasitophorous vacuole and decrease their microbicidal capacity against Toxoplasma gondii

Lipid bodies [lipid droplets (LBs)] are lipid-rich organelles involved in lipid metabolism, signalling and inflammation. Recent findings suggest a role for LBs in host response to infection; however, the potential functions of this organelle in Toxoplasma gondii infection and how it alters macrophage microbicidal capacity during infection are not well understood. Here, we investigated the role of host LBs in T. gondii infection in mouse peritoneal macrophages in vitro. Macrophages cultured with mouse serum (MS) had higher numbers of LBs than those cultured in foetal bovine serum and can function as a model to study the role of LBs during intracellular pathogen infection. LBs were found in association with the parasitophorous vacuole, suggesting that T. gondii may benefit from this lipid source. Moreover, increased numbers of macrophage LBs correlated with high prostaglandin E2 (PGE2) production and decreased nitric oxide (NO) synthesis. Accordingly, LB-enriched macrophages cultured with MS were less efficient at controlling T. gondii growth. Treatment of macrophages cultured with MS with indomethacin, an inhibitor of PGE2 production, increased the microbicidal capacity against T. gondii. Collectively, these results suggest that culture with MS caused a decrease in microbicidal activity of macrophages against T. gondii by increasing PGE2 while lowering NO production.

Experimental infection with the Toxoplasma gondii ME-49 strain in the Brazilian BR-1 mini pig is a suitable animal model for human toxoplasmosis

Toxoplasma gondii causes toxoplasmosis, a worldwide disease. Experimentation with pigs is necessary for the development of new therapeutic approaches to human diseases. BR-1 mini pigs were intramuscularly infected with T. gondii with tachyzoites (RH strain) or orally infected with cysts (ME-49 strain). Haematology and serum biochemistry were analysed and buffy coat cells were inoculated in mice to determine tachyzoite circulation. No alterations were observed in erythrocyte and platelet values; however, band neutrophils increased seven days after infection with ME-49. Serology of the mice inoculated with pig blood leucocytes revealed circulating ME-49 or RH strain tachyzoites in the pigs' peripheral blood at two and seven or nine days post-infection. The tachyzoites were also directly observed in blood smears from the infected pigs outside and inside leucocytes for longer periods. Alanine-aminotransferase was high at days 21 and 32 in the RH infected pigs. After 90 days, the pigs were euthanised and their tissue samples were processed and inoculated into mice. The mice serology revealed the presence of parasites in the hearts, ileums and mesenteric lymph nodes of the pigs. Additionally, cysts in the mice were only observed after pig heart tissue inoculation. The infected pigs presented similar human outcomes with relatively low pathogenicity and the BR-1 mini pig model infected with ME-49 is suitable to monitor experimental toxoplasmosis.

Evaluation of the indirect fluorescent antibody test and modified agglutination test for detection of antibodies against Toxoplasma gondii in experimentally infected pigs

The study determined the sensitivity and specificity of the indirect fluorescent antibody test (IFAT) and modified agglutination test (MAT) for anti-Toxoplasma gondii antibody detection by analyzing sera from 46 experimentally infected pigs. Values for sensitivity were 95.7% (confidence interval 95%: 84.0-99.2%) and for specificity 97.8% (confidence interval 95%: 87.0-99.9%) in both tests. There was an optimum agreement of results between IFAT and MAT evidenced by a Kappa test of 0.86. These results validate these tests for the detection of T. gondii infection in pigs. IFAT and MAT despite methodologies with different characteristics and readings have similar accuracy in pig serum samples.

Perdas reprodutivas associadas com infecção por Toxoplasma gondii em caprinos no sul do Brasil

Infecção por Toxoplasma gondii foi associada com perdas reprodutivas em um rebanho caprino no Rio Grande do Sul, Brasil. Lesões macroscópicas foram observadas em dois de seis produtos caprinos enviados para diagnóstico e incluíram linfonodos mesentéricos pálidos e aumentados e pulmões com consistência firme e áreas claras intercaladas com vermelhas. Lesões histológicas, especialmente caracterizadas por infiltrados linfoplasmocitários no cérebro e pulmões, foram observadas em todos os fetos. Nefrite intersticial linfoplasmocitária, linfadenite necrosante e hepatite periportal linfoplasmocitária também foram observadas. Enquanto tanto o exame bacteriológico quanto o teste de imunofluorescência direta para Leptospira sp. foram negativos em todos os casos, a PCR e a imunoistoquímica resultaram positivamente para T. gondii em quase todas as amostras testadas. Anticorpos anti-T.gondii, em titulações de 1:512 a 1:2048, foram detectados nas amostras de soro sangüíneo das cabras que pariram natimortos (3), abortaram (1) ou cujos neonatos morreram (2). Este trabalho descreve os achados clínicos, patológicos, sorológicos, imunoistoquímicos e de PCR observados em um rebanho caprino infectado por T. gondii.

Toxoplasma gondii in semen of experimentally infected swine

Eight reproductive boars were divided into three groups and inoculated with Toxoplasma gondii [GI (n=3) 1.5x10(4) oocysts strain P; GII (n=3) 1.0x10(6) tachyzoites strain RH; and GIII (n=2) non-inoculated control]. Clinical, hematological, parasitemia and serological tests and studies of the parasite in the semen through bioassay and PCR, and in reproductive organs (Bioassay and immunohistochemical analyses) were conducted to evaluate the toxoplasmic infection. Blood and semen were collected on day -2, -1, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 and weekly up to 84 days post-inoculation (DPI). No clinical or hematimetric alteration was observed in the boars. Parasitemia was detected in one boar inoculated with oocysts at the 7th DPI and in another boar infected with tachyzoites (GII) at the 3rd and 49th DPI. Serological tests revealed antibodies against T. gondii in animals inoculated with oocysts or tachyzoites at the 7th DPI with dilutions of 1:256 and 1:64, which reached peaks of 1:4096 at day 11 and 9, respectively. The bioassays revealed the presence of the parasite in semen samples of a boar inoculated with oocysts (GI) at 3, 49 and 56 DPI and from two boars infected with tachyzoites (GII), one animal at 5 and two animals at 49 days DPI. Mice inoculated with semen from the control group (GIII) remained serologically negative. PCR analysis showed T. gondii DNA in the semen of Boar 1 and Boar 3 inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. The immuno-histochemical tests showed T. gondii in the reproductive organs of Boar 1 and Boar 2, inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. These findings suggest the possible occurrence of venereal transmission of T. gondii in swine.

Toxoplasma gondii: estudo soro-epidemiológico de suínos da região Sudoeste do Estado do Paraná

Avaliou-se a soroprevalência da toxoplasmose em suínos criados e abatidos para consumo humano, por meio da freqüência de anticorpos da classe IgG anti-Toxoplasma gondii em 408 animais provenientes de plantéis de 25 municípios da região Sudoeste do Estado do Paraná, Brasil. As amostras de soro foram examinadas por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foi encontrada a freqüência de 25,5% de soros positivos, com diluições iguais ou superiores a 1:64. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas quanto a sexo e a idade dos animais. O maior título observado foi de 4.096 (3,0%) e o mais freqüente foi 64 (74%) sugerindo que uma infecção crônica estava ocorrendo na população. A alta prevalência da infecção encontrada nos rebanhos suínos estudados sugere que estes possam servir de fonte de infecção para os consumidores que têm o hábito de consumir carne suína crua ou mal cozida.

Avaliação da ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, em soros de caprinos do estado de São Paulo, e associação com variáveis epidemiológicas, problemas reprodutivos e riscos à saúde pública

Objetivando avaliar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, em caprinos leiteiros do estado de São Paulo, e verificar possíveis associações com idade, sexo, presença de gatos, problemas reprodutivos e potenciais riscos à saúde pública, foram considerados soros de 923 caprinos, de ambos os sexos e idade acima de três meses, provenientes de 17 propriedades de diferentes municípios. Para o diagnóstico, utilizou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFIe"16) e, também, um inquérito sobre saúde, a fim de se coletarem informações epidemiológicas e de esfera reprodutiva de todos os capris. Os resultados foram discutidos no nível de 5% de significância. Do total das 17 propriedades, foram diagnosticados 15 focos de T. gondii, com positividade entre 2,70% e 81,25%. Não foram verificadas associações entre freqüência de soropositividade e sexo dos animais nem ocorrência de falhas reprodutivas, nos capris. Constatou-se influência positiva na taxa de anticorpos anti-T. gondii pelo aumento da idade dos caprinos e presença de gatos, nos capris. Além de a enfermidade encontrar-se amplamente difundida no estado de São Paulo, o risco eminente de transmissão de T. gondii à saúde pública também deve ser considerado, uma vez que se encontraram focos onde se comercializavam produtos "in natura", como leite e carne.

Toxoplasma gondii in experimentally infected Bos taurus and Bos indicus semen and tissues

Eighteen young steers were inoculated with Toxoplasma gondii and randomly distributed into three groups of six animals each: GI, 2.5x10(5) "P" strain oocysts, GII, 5.0x10(6) "RH" strain tachyzoites, and GIII (Control). Clinical, serological and parasitemia exams were realized. Parasite investigation by bioassay and PCR was realized on semen and fragments of skeletal musculature, lymph nodes, brain, retina, spleen, liver, lung, testicle, epididymis and seminal vesicle. Blood and semen samples were collected on days -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 and weekly thereafter, up to postinfection day (PID) 84. The inoculated steers (GI and GII) presented hyperthermia from PID 3 to 16. Antibodies against T. gondii were detected through the indirect fluorescence antibody test (IFAT) on PID 5 (1:16) in both inoculated groups (oocysts and tachyzoites), reaching peaks of 1:4096 on PID 7. Parasitemia outbursts occurred in all infected bovines, principally from PID 7 to 28, independent of the strain and inoculate used. Bioassays revealed the presence of parasites in semen samples of animals infected with oocysts (GI) and tachyzoites (GII) on several experimental days between PID 7 and 84. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed by bioassay and the PCR technique in several organ and tissue fragments. These findings suggest the possibility of sexual transmission of T. gondii in the bovine species.

Risk factors and presence of antibodies to Toxoplasma gondii in dogs from the coast of São Paulo State, Brazil

Toxoplasmosis is caused by the obligate intracellular protozoan parasite Toxoplasma gondii and affects warm-blooded vertebrates, including pets and man. Dogs are epidemio-logically important since they act as sentinels for the infection in humans. The present study aimed to determine the presence of antibodies to T. gondii in 205 serum samples from dogs in Ubatuba, Sao Paulo state, Brazil, through indirect immunofluorescence reaction (IFAT), as well as the risk factors related to toxoplasmosis in the animals such as breed, age, sex, access to outdoors, homemade food ingestion, access to untreated water, and contact with rodents. Toxoplasmosis-positive samples accounted for 52/205 (25.4%), with titers ranging from 16 to 256. The serological results presented significant association (P<0.05) with homemade food ingestion (45/118; 38.1%; CI95% 29.9%-47.2%) (OR=7.0; CI95% 3.0-16.6), and with access to outdoors where those that do not have access to the street were prevalent (37/121; 30.6%; CI95% 23.1%-39.3%) (OR=0.5; CI95% 0.2-1.0). These results show that toxoplasmosis in this region is related to problems of sanitary education, mainly concerning the appropriate cooking of foods, since most positive animals did not show significant association with the presence of rodents or untreated water consumption but showed, instead association with ingestion of homemade food. Thus, toxoplasmosis is a public health problem in the studied region, and sanitary measures are needed to control the infection due to the strict relationship between man and dog and the presented risk factors

Anticorpos IgG anti-Neospora caninum e Toxoplasma gondii em búfalas (Bubalus bubalis) criadas no estado do Pará

Para determinar a ocorrência de anticorpos IgG anti-Neospora caninum e Toxoplasma gondii em 14 unidades produtivas de búfalos, situadas em 13 municípios no estado do Pará, foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 374 fêmeas adultas. Os soros foram submetidos à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando-se os títulos 200 e 64, respectivamente como ponto de corte para N. caninum e T. gondii. Obteve-se 153 (40,9%) de animais soropositivos para N. caninum com 100% das propriedades com focos da infecção, enquanto que quatro búfalas (1,1%) foram soropositivas em quatro fazendas para T. gondii e uma búfala (0,27%) foi soropositiva para ambos parasitos. A presença de anticorpos é um indicativo da circulação desses protozoários em búfalos das propriedades estudadas, representando uma fonte de infecção para outros animais, assim como o possível envolvimento em distúrbios reprodutivos nessa espécie.

Effects of infection with Toxoplasma gondii oocysts on the intestinal wall and the myenteric plexus of chicken (Gallus gallus)

This paper aims to analyze the effects of the Toxoplasma gondii infection in the intestinal wall and myenteric plexus of chicken (Gallus gallus). Ten 36-day-old chickens were separated into two groups: control and experimental, orally inoculated with oocysts of the T. gondii strain M7741 genotype III. After 60 days the birds were submitted to euthanasia and had their duodenum removed. Part of the intestinal segments was submitted to histological routine, HE staining, PAS histochemical technique, and Alcian Blue. Qualitative analysis of the intestinal wall and comparative measurements among the groups with respect to total wall thickness, muscle tunic, mucosa, and tunica mucosa were carried out. Caliciform cells were quantified. The other part of the intestinal segments was fixed in formol acetic acid and dissected having the tunica mucosa and the tela submucosa removed. Neurons were stained with Giemsa, counted, and measured. Chickens from the experimental group presented diarrhea and inflammatory infiltrates in the tunica mucosa, thickness reduction of all the parameters assessed in the intestinal wall, and an increase of the number of caliciform cells. There was a ~70% reduction regarding the intensity of myenteric neurons; and the remaining cells presented a reduction of ~2.4% of the perikarion and ~40.5% of the nucleus (p<0.05). Chronic infection induced by T. gondii oocysts resulted in intestinal wall atrophy, mucin secretion increase, death and atrophy of chicken myenteric plexus neurons. Death and atrophy of myenteric plexus neurons may be related with the causes of diarrhea observed in chickens with toxoplasmosis.

Detecção de Toxoplasma gondii no sêmen de ovinos naturalmente infectados

O objetivo deste trabalho foi estudar a eliminação de Toxoplasma gondii no sêmen de carneiros naturalmente infectados. Foram utilizados 65 reprodutores submetidos inicialmente à pesquisa de anticorpos anti-T. gondii por meio da técnica de imunofluorescência indireta (IFI). Os carneiros sorologicamente positivos foram submetidos à colheita de sêmen para detecção do DNA de T. gondii. Na sorologia observaram-se 6/65 (9,2%) carneiros positivos, enquanto no PCR nested de sêmen 4/6 (66,6%) carneiros foram positivos. Conclui-se que a detecção, por meio da técnica da PCR nested, da forma proliferativa de T. gondii no sêmen de carneiros naturalmente infectados, reforça a necessidade de se pesquisar sobre a possibilidade da transmissão horizontal do parasito via sêmen na espécie ovina.

Fatores associados a soroprevalência de Neospora caninum e Toxoplasma gondii em rebanhos caprinos na região sul de Minas Gerais

Este estudo estabelece a soroprevalência de Neospora caninum e Toxoplasma gondii em rebanhos caprinos no Sul de Minas Gerais e verifica a sua associação com o desempenho reprodutivo dos rebanhos analisados, uma vez que não há dados sobre neosporose em caprinos neste Estado. Amostras de soro de 401 caprinos provenientes de 11 propriedades foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta anti-N. caninum e T. gondii. A prevalência média de animais positivos foi de 10,7% e 21,4%, respectivamente. Houve diferença significativa entre as faixas etárias. Neste quesito os maiores índices de positividade, para ambos os parasitas, foram observados nos caprinos acima de três anos de idade. Estes apresentaram uma probabilidade 2,6 e 4,8 maior, em relação aos animais de até um ano de idade, para N. caninum e T. gondii, respectivamente. No teste T não houve associação positiva entre as médias de prevalência de N. caninum (p=0,553) e T. gondii (p=0,098) com a ocorrência de problema reprodutivo nos rebanhos. Porém, propriedades com histórico de problemas reprodutivos apresentaram uma média de reagentes para N. caninum de 18,64%, se comparadas a 13,97% de criatórios que não relataram essas alterações. Quando os problemas reprodutivos foram separados em categorias a relação entre a ocorrência de aborto e a soroprevalência de N. caninum e de T. gondii foi significativa (p<0,05) por meio dos testes Exato de Fisher e Qui-quadrado. Não houve diferença (p>0,05) entre as médias de prevalência de T. gondii e o acesso de gatos ao rebanho no teste T. Entretanto, a média de prevalência nas propriedades em que os gatos tinham acesso foi de 31,01%, se comparada a 17,34% em criatórios onde não existiam gatos. Foi constatado o acesso de cães em 100% das propriedades. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que N. caninum e T. gondii infectam caprinos no Sul de Minas Gerais e que estes parasitas podem estar associados à ocorrência de abortos nessa espécie animal.

Prevalência e fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em granjas suinícolas tecnificadas no Estado de Alagoas

Objetivou-se com este estudo calcular a prevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em suínos criados em granjas tecnificadas no Estado de Alagoas, Brasil. Para compor a amostra do estudo de prevalência foram utilizados 342 suínos, sendo 312 matrizes e 30 varrões, oriundos de sete granjas de ciclo completo e distribuídas em cinco municípios do Estado de Alagoas. O exame sorológico para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi realizado através da técnica de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-se anticorpos anti-IgG-suíno conjugado ao isotiocianato de fluoresceína. A análise dos fatores de risco foi realizada por meio da aplicação de questionários constituídos por perguntas objetivas referentes ao criador, às características gerais da propriedade, ao manejo produtivo, reprodutivo e sanitário. Determinou-se uma prevalência de 26,9% (92/342) de suínos soropositivos. O fator associado à infecção foi a introdução de reprodutores nas granjas nos últimos cinco anos (p=0,014; OR=1,83; IC=1,13-2,96). Concluiu-se que a infecção por Toxoplasma gondii encontra-se disseminada em suínos criados em granjas tecnificadas no Estado de Alagoas, Brasil. Recomenda-se o controle da população de gatos, a realização de práticas de limpeza e higienização das instalações e realização de testes laboratoriais para diagnóstico da infecção por T. gondii nos animais a serem introduzidos no plantel como medidas de redução dos índices de infecção na região estudada.

Sparrows (Passer domesticus L.) as intermediary hosts of Toxoplasma gondii in poultry farms from the "agreste" region of Pernambuco, Brazil

This paper aimed to identify Toxoplasma gondii infection in house sparrows (Passer domesticus, Linneaus 1758) coming from poultry farms in the "agreste" region of the Brazilian state of Pernambuco. 151 sparrows (Passer domesticus) captured in eight broiler, egg layer and commercial laying poultry farms, were used. Indirect hemagglutination test was used to research anti-T. gondii antibodies. Animals that presented titration of 1:16 were destined to DNA research through Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, followed by Nested-PCR. It was observed that, from 151 analyzed samples. 91 (60.3%) were reagents and 60 (39.7%) were not reagents. It was verified, through analysis of the distribution of infected animals frequency per farm, that in only one farm (12.5%) no animal reagent to T. gondii was captured. It was also observed that three (30.00%) of the ten samples destined to DNA research for T. gondii were positive to PCR and four (40.00%) were positive to Nested-PCR. Anti-T gondii antibodies occurrence and the molecular identification of the agent confirmed natural T. gondii infection in sparrows from poultry farms in Brazil. Other studies must be carried out to highlight the real importance of these animals in the epidemiological chain and their efficiency in the transmission of the parasite to felines. Therefore, researches that use parasite isolation and molecular techniques to determine genomic profile of the agent present in these poultry farms are needed.