Immunoperoxidase technique in experimental chronic chagasic myocarditis

Chagas'disease has been described as the commonest form of chronic myocarditis. An immunologic pathogenesis has been discribed for this form of the disease. So far, no immunoperoxidase technique has been used for the detection of immunological deposits in chronic experimental Chagas'myocardiopathy. Forty-one Swiss mice, three months old were inoculated intraperitoneally with doses between 10 and 10(5) Tulahuen trypomastigotes. Mice were reinoculated one month after with doses between 10² and 10(5) and sacrificed at 6 (n=21) and 9 months (n=9) after the first inoculation. ECGs were recorded before sacrifice. Immunoperoxidase technique (peroxidase-antiperoxidase method), immunofluorescence (direct and indirect) as well as histological studies were performed in myocardiums and skeletal muscles of the surviving animals. The most sensitive methods for detecting chronic chagasic infection were the routine histologic studies (73%) and the ECGs 83% and 89% on 6 and 9 mo. post-infected mice, respectively. Myocardial involvement varied from interstitial mild focal lymphocyte infiltrates up to replacement of myocytes by loose connective tissue. Atrial myocardiums (21/23, 91%) were more affected than ventricles (9/23, 39%). Typical chagasic nests were rarely found. Skeletal muscle involvement (11/18 and 7/9) varied from mild to extensive lymphocyte and plasmacell infiltrates, and necrotic fibers. The involved antigen were shown in skeletal muscles by the immunoperoxidase technique as diffusely arranged granular intracytoplasmatic deposit for both IgC and total immunoglobulins. The coincidence between this technique and histologic muscle lesions was 11/18 (61(%) in 6 mo. and 6/8 (75%) at 9 mo. post-infection. In heart, delicate granular deposits of total immunoglobulins were seen diffusely arranged within the ventricular myocytes; coincidence between immunoperoxidase technique anl histologic involvement increased from 36 to 66% in animals sacrifeced 6 and 9 mo. post-infection. This strongly stressed the increase of immunologic phenomena with the chronification of infection. Concerning sensitivity, immunoperoxidase and direct immunofluorescence were highly sensitive in skeletal muscle (100%, p < 0.01). Conversely, direct immunofluorescence technique showed poor results in heart while immunoperoxidase increased its sensitivity from 21.4% (at 6 mo.) to 66.6% (at 9 mo.) post-infection (p < 0.001). Considering the necessity of obtaining an adequate vaccine in order to prevent this disease an experimental model like this, rendering immunological reactions as revealed by the immunoperoxidase technique, would be useful.

Coral snake venoms: mode of action and pathophysiology of experimental envenomation

Coral snakes, the New World Elapidae, are included in the genera Micniroides and Micrurus. The genus Mlcrurus comprises nearly all coral snake species and those which are responsible for human snake-bite accidents. The following generalizations concerning the effects induced by their venoms, and their venom-properties can be made. Coral snake venoms are neurotoxic, producing loss of muscle strenght and death by respiratory paralysis. Local edema and necrosis are not induced nor blood coagulation or hemorrhages. Proteolysis activity is absent or of very low grade. They display phospholipase A2 activity. Nephrotoxic effects are not evoked. The main toxins from elapid venoms are postsynaptic and presynaptic neurotoxins and cardiotoxins. Phospholipases A2 endowed with myonecrotic or cardiotoxin-like properties are important toxic components from some elapid venoms. The mode of action of Micrurus frontalis, M. lemniscatus, M. corallinus and M. fulvius venoms has been investigated in isolated muscle preparations and is here discussed. It is shown that while M. frontalis and M. lemniscatus venoms must contain only neurotoxins that act at the cholinergic end-plate receptor (postsynaptic neurotoxins), M. corallinus venom also inhibits evoked acetylcholine release by the motor nerve endings (presynaptic neurotoxin-like effect) and M. fulvius induces muscle fiber membrane depolarization (cardiotoxin-like effect). The effects produced by M. corallinus and M. fulvius venoms in vivo in dogs and M. frontalis venom in dogs and monkeys are also reported.

Use of saprophytic leptospira strains in the serodiagnosis of experimental leptospirosis in guinea-pigs (Cavia sp)

The efficiency of four Leptospira biflexa strains (Buenos Aires, Patoc 1, Rufino and São Paulo) as single antigen in the serodiagnosis in guinea-pigs experimentally infected with seven Leptospira interrogans serovars (canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, pomona, tarassovi and wolffi) was evaluated by the microscopic agglutination test. The four saprophytic strains were not able to reveal antibody titres in sera of guinea-pigs experimentally infected with Leptospira interrogans. Serological cross-reactions were observed between strains Patoc 1 and São Paulo and between serovars wolffi and hardjo.

Therapy of the experimental infection by Strongyloides venezuelensis in rats with injectable ivermectin or levamizole

For the therapy of human strongyloidiasis, are necessary effective drugs to eliminate both larvae and adult worm parasitism, which may also be used by parenteral route, to obviate the particular conditions presented by many patients. A study based on the experimental infection by Strongyloides venezuelensis in rats was done, administering injectable ivermectin or levamizole. Both drugs were shown to be active, when used in single doses of 0.2 to 0.5 mg/kg of ivermectin, or 26 mg/kg for levamizole. Ivermectin was slightly more effective as far as larval stage of the infection is concerned, and the same happened for levamisole for the adult worm stage. Promising perspectives are visualized to improve the therapy of patients with serious disseminated infection by Strongyloides stercoralis.

El ciclo evolutivo experimental de Diphyllobothrium erinaceieuropei en Paracyclops fimbriatus, larvas de Bufo arenarum y caninos

El objetivo del trabajo fue lograr la reproducción experimental del ciclo evolutivo de Diphyllobothrium erinaceieuropei Rudolphi 1819 (Cestoda, Pseudophyllidea) con la intervención de Paracyclops fimbriatus y larvas de Bufo arenarum como hospedadores intermediarios y caninos como hospedadores definitivos. Los huevos del parásito se obtuvieron de heces de caninos infectados naturalmente y se conservaron refrigerados en agua. Se incubaron 7 días a 25°C para que desarrollaran los coracidios y se pusieron en recipientes que contenían a los copépodos mencionados. Al cabo de 12 días a 22,6°C (promedio) se hallaron procercoides maduros en ellos y se agregaron 10 renacuajos de Bufo arenarum. Estos se examinaron por disección 22, 23, 61 y 107 días después, hallándose en todos 1 o más plerocercoides (Temperatura promedio: 24,9°C). El día 23, de 6 renacuajos se obtuvieron 49 plerocercoides, de los cuales se administraron 28, por vía oral, a una perra. El día 107, 3 de 11 plerocercoides obtenidos de un renacuajo se le dieron a otra perra por la misma vía. Se hallaron huevos del cestode en las heces del primer canino a partir del día 22 posterior a la infección (p.i.) y a los 30 días p.i., segmentos de estróbila. En el segundo canino se hallaron huevos a los 30 días p.i..

Eosinophil levels in the acute phase of experimental chagas' disease

Eosinophil dynamics, in bone marrow, blood and peritoneal exudate, of resistant C57B1/6 (C57) and susceptible A/Snell (A/Sn) mice was comparatively studied during the acute phase of infection by Trypanosoma cruzi Y strain. A decline was observed in bone marrow eosinophil levels in A/Sn, but not in C57 mice, soon after infection, those of the former remaining significantly below those of the latter up to the 4th day of infection. Bone marrow eosinophil levels of C57 mice declined subsequently to levels comparable to those of A/Sn mice, the number of these cells in this compartment remaining 50% those of non infected controls, in both strains, up to the end of the experiment on the 14th day of infection. The fluctuations in eosinophil levels in blood and peritoneal space were similar in both mice strains studied. Concomitantly with depletion of eosinophils in the marrow, depletion in blood and a marked rise of these cells in the peritoneal space, initial site of infection, occurred in both strains. The difference in eosinophil bone marrow levels, between C57 and A/Sn mice, observed in the first four days of infection, suggests a higher eosinopoiesis capacity of the former in this period, which might contribute to their higher resistance to T. cruzi infection.

Chronic myocardial damage in experimental T. cruzi infection of a new world primate, Cebus sp. monkey

Eighteen Cebus apella monkeys, (juvenile and adult of both sexes) were inoculated five years ago, with three Trypanosoma cruzi strains (CA1, n = 10; Colombian, n=4 and Tulahuen, n=4), either by conjunctival or intraperitoneal route, once or repeatedly. Parasitological, hematological, serological, enzymatic, radiographic, electro and echocardiographic findings have been peviously published15 and they are similar to those observed in human pathology. The most frequent electrocardiographic alteration was right branch bundle block. Six animals, chosen at random, were sacrificed. Those sacrificed 20 to 25 months post-first inoculation showed focal accumuli of leukocytes with myocytolysis. Foci of diffuse interstitial fibrosis with mild infiltrate of leukocytes among fibers were observed in the animals sacrificed 36 to 47 months post-inoculation. No parasites were seen. The lesions were more prominent in the ventricular walls and the septum. The fact that the infiltrates were predominant in the animals sacrificed at a shorter time after first inoculation and that fibrosis was more severe in those sacrificed at a longer time suggests that there is a progression of the infiltrative lesions to fibrosis, with a leukocytic activity indicative of a chronic phase. These lesions are similar to those described in human chronic Chagas' disease. This would demonstrate that this model is useful in evaluating a progress in the knowledge of the pathogenesis which is still a controversial issue, immunology, immunogenesis and chemotherapeutic agents of the chronic and indeterminate phases of this disease.

Avaliação da atividade terapêutica do albendazol sobre infecções experimental e humana pela Hymenolepis nana

Com o intuito de demarcar convenientemente o espectro de atividade do albendazol, no que diz respeito às helmintíases intestinais, foram efetuadas observações referentes à himenolepíase causada por Hymenolepis nana. Nesse contexto, duas ordens de investigações tiveram lugar: a) tratamento de camundongos, renovado depois de transcorridos dez dias, por meio de doses únicas de 25 mg/kg ou 50 mg/kg, sendo que 25 mg/kg de praziquantel e animais que não receberam os antiparasitários, serviram como controles; b) tratamento de crianças e adultos mediante uso de 400 mg cotidianamente, em três oportunidades consecutivas, com repetição após intervalo com duração de dez dias. O estudo concernente aos animais revelou ineficácia do albendazol, pois sistematicamente houve verificação da persistência de vermes vivos no intestino. Por seu turno, só 10% dos indivíduos medicados puderam ser considerados curados. Portanto, pelo menos de acordo com a maneira como procedemos, o albendazol não se afigurou capaz de debelar satisfatoriamente a himenolepíase.

Comportamiento experimental del Sporothrix schenckii y la Leishmania mexicana en el hamster

La descripción macroscópica del proceso de patogénesis en hamsters inoculados subcutáneamente en nariz con Sporothrix schenckii ó Leishmania mexicana spp. proporcionó bases para diferenciar estos dos microorganismos en un modelo animal utilizado comunmente para estudiarlos. Observaciones secuenciales durante 150 días permitieron afirmar que en las infecciones causadas por estos patógenos se presentaron edema y eritema como signos primarios, seguidos de alopecia, necrosis y ulceración. La producción de pus fué una característica distintiva para el S. schenckii. Estos signos clínicos se observaron más temprano en la esporotricosis que en la infección por L. mexicana, mostrando diferencias estadísticas significantes en días promedio de aparición. El presente trabajo muestra que las lesiones producidas tanto por el S. schenckii como la L. mexicana en este modelo experimental comparten signos clínicos, pero el tiempo de aparición de los mismos y su frecuencia relativa permiten diferenciarlas. Las condiciones de inoculación como: cepa de los microorganismos, dosis del inóculo, sitio y vía de inoculación, deben tenerse presentes en la evaluación de su comportamiento experimental.

Leishmaniose cutânea experimental. III- Aspectos histopatológicos do comportamento evolutivo da lesão cutânea produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (Viannia) lainsoni, L. (V.) braziliensis e L. (Leishmania) amazonensis

Estudaram-se os aspectos histopatológicos relativos à evolução da infecção experimental produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (V.) lainsoni, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis. O exame microscópico de biópsias seqüênciais, obtidas dos animais a intervalos definidos de tempo (a primeira, às 48 ou 72 horas após a inoculação, e as seguintes, a cada 30 dias), mostrou que o desenvolvimento das lesões, independentemente da espécie de Leishmania inoculada, passa por uma seqüência de etapas a nível tecidual - 1) infiltrado inespecífico crônico; 2) nódulo macrofágico (com numerosos parasitas); 3) necrose das células parasitadas; 4) granuloma epitelióide; 5) absorção da área necrosada (às vezes formando granuloma de corpo estranho); 6) infiltrado inespecífico crônico residual); e 7) cicatrização - que representaria a formação e a resolução das lesões. Discutiram-se também os prováveis mecanismos imunopatológicos que determinam esta seqüência de eventos e sua possível semelhança com a evolução das lesões na leishmaniose tegumentar humana.

Efeitos de imunopotenciadores não específicos na infecção experimental pelo Schistosoma mansoni: I. levamisole

Os efeitos do levamisole nas alterações histopatológicas, resistência do hospedeiro e quimiotaxia "in vivo" foram estudados na infecção experimental pelo Schistosoma mansoni em camundongos da linhagem C57B1/10. O tratamento profilático resultou em um aumento no número de vermes adultos obtidos pela perfusão e também em uma taxa de mortalidade maior (p < 0,05). As alterações histopatológicas (fígado e intestino) foram similares em todos os grupos. Uma redução significante da quimiotaxia "in vivo" ocorreu em camundongos controles infectados, assim como naqueles submetidos a tratamento profilático com levamisole. A atividade quimiotática atingiu os mesmos níveis dos camundongos controles normais (não-infectados e não-tratados com levamisole), quando o esquema curativo foi usado. O levamisole parece aumentar a susceptibilidade de camundongos da linhagem C57B1/10 à infecção pelo S. mansoni quando administrado antes da infecção e normaliza a atividade quimiotática, quando dado após a infecção.

Novo processo para triagem de medicamentos na infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi

É proposto processo para a triagem da capacidade terapêutica de medicamentos na infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi. O método tem base no emprego de triatomíneos parasitados que se alimentam, decorridos períodos diferentes para haver compatibilização com níveis sangüíneos, em camundongos aos quais foi administrado o fármaco sob apreciação; assim, o tubo digestivo do hemíptero participará como estrutura propícia à avaliação. Em observação inicial, ocorreu utilização do benzonidazol, que se mostrou apenas parcialmente ativo, pelo menos de acordo com a maneira de execução do novo procedimento.

Isolamento do Toxoplasma gondii de exsudato peritoneal e órgãos de camundongos com infecção experimental

Foram examinados exsudatos peritoneais e órgãos (cérebro, coração, pulmão e músculo estriado) de 53 camundongos infectados experimentalmente pelo Toxoplasma gondii, sendo 21 na fase aguda e 32 na crônica. Camundongos albinos, machos, de cerca de 25 g e 2 meses de idade foram inoculados, por via intraperitoneal, com 0,5 ml de exsudato peritoneal (taquizoitas) ou macerado de cérebro (cistos) de camundongos previamente infectados. O exame a fresco foi feito no exsudato peritoneal, entre 3 e 12 dias após inoculação e no cérebro, após 10 dias. Foram realizadas inoculações de macerados de órgãos em novos camundongos (repiques) para a recuperação do parasita no exsudato ou no cérebro. Na infecção aguda as positividades foram, ao exame a fresco: exsudato peritoneal 19/19, pulmão 12/14, músculo 6/9, coração 4/9 e cérebro 1/3. Após inoculação: exsudato peritoneal 5/5, cérebro 2/2, coração 19/19, pulmão 13/13 e músculo 14/17. Após estes últimos resultados foram registrados 9 novos órgãos positivos. A positividade final (igual à recuperação do parasita) foi: exsudato peritoneal 19/19 (100%), coração 15/17 (88,5%), músculo 12/14 (85,7%), pulmão 14/14 (100%) e cérebro 2/3 (66,6%). Na infecção crônica, que transcorreu entre 10 e 495 dias, as positividades foram, ao exame a fresco: cérebro 28/32, coração 0/4 e músculo 0/4. Após repique: cérebro 6/6, coração 14/29 e músculo 16/26. Neste exame foi revelado um novo camundongo positivo elevando para 29 o total de camundongos positivos ou 90,6%. O resultado final foi: cérebro 28/32 (87,5%), músculo 16/28 (57,15%) e coração 14/31 (45,1%). No fim da pesquisa, aos 495 dias, o cérebro apresentava grandes cistos ao exame a fresco e coração e músculo mostravam-se positivos através da inoculação. Conclusões: 1º) nos camundongos o toxoplasma persistiu por 495 dias no cérebro, coração e músculo estriado; 2º) o exame a fresco do pulmão pode substituir ou confirmar o do exsudato peritoneal; 3º) a inoculação de órgãos é necessária pois pode revelar novos casos positivos; 4º) a atividade dos cistos foi demonstrada pelo aumento gradual do seu tamanho e pela recuperação do toxoplasma no cérebro, coração e músculo, após o longo tempo de infecção.

Avaliação da atividade terapêutica do itraconazol nas infecções crônicas, experimental e humana, pelo Trypanosoma cruzi

Alguns pesquisadores demonstraram que o intraconzol, "in vitro" e na infecção aguda de animais, possui atividade antiparasitária referente ao Trypanosoma cruzi. Diante dessas observações, decidimos empreender estudo sobre e etapa crônica da parasitose devida a esse protozoário, considerando que ela é mais proeminente sob o ponto de vista médico-assistencial. A propósito, efetuamos apreciações baseadas em modelo composto por camundongos infectados e, também, relacionadas com indivíduos acometidos de doença de Chagas. Usamos 100 mg/kg/dia, por meio de sonda gástrica, durante três meses, e 100 ou 200 mg/dia, pela via oral, respectivamente, no decurso de igual período, sem evidenciarmos efeitos benéficos, pelo menos conforme a metodologia adotada

Experimental life cycle of Lagochilascaris minor Leiper, 1909

The life cycle of Lagochilascaris minor was studied using material collected from human lesion and applying the experimental model: rodents (mice, hamsters), and carnivorae (cats, dogs). In mice given infective eggs, orally, hatch of the third stage larvae was noted in the gut wall, with migration to liver, lungs, skeletal musculature and subcutaneous tissue becoming, soon after, encysted. In cats infected with skinned carcasses of mice (60 to 235 days of infection) it was observed: hatch of third stage larvae from the nodules (cysts) in the stomach, migration through the oesophagus, pharynx, trachea, related tissues (rhino-oropharynx), and cervical lymphonodes developing to the mature stage in any of these sites on days 9-20 post inoculation (P.I.). There was no parasite development up to the mature stage in cats inoculated orally with infective eggs, which indicates that the life cycle of this parasite includes an obligatory intermediate host. In one of the cats (fed carcass of infected mice) necropsied on day 43 P.I., it was observed the occurence of the self-infective cycle of L. minor in the lung tissues and in the cervical region which was characterized by the finding of eggs in different stages of development, third stage larvae and mature worms. It's believed that some component of the carnivorae gastrointestinal tracts may preclude the development of third stage larvae from L. minor eggs what explains the interruption of the life cycle in animals fed infective eggs. It's also pointed out the role of the intermediate host in the first stages of the life cycle of this helminth.