Vergleichende Analyse der Gene und der Genomstruktur der geschlechtsbestimmenden Chromosomenregion von Chironomus und Camptochironomus

Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurde ein Bereich aus der geschlechtsbestimmenden Chromosomenregion, der ���Contig SDR���, von C. tentans mit einer Gr����e von ~87 kb untersucht. Zur Erstellung des Contigs wurden 8 BAC-Klone aus C. tentans isoliert, teilweise subkloniert und sequenziert. Innerhalb des Contigs SDR konnten insgesamt 13 Gene sowie ein Teilbereich des Gens rpS5-like im distalen Bereich des Contigs SDR identifiziert werden. Hierbei handelt es sich um dieselben Gene, welche schon im Contig SDR von C. thummi identifiziert werden konnten. Ein Vergleich der beiden Contigs zeigt, dass die Abfolge der Gene zwischen den beiden Arten C. thummi und C. tentans identisch ist. Weiterhin konnten im Contig SDR von C. tentans sechs Bereiche lokalisiert werden, in denen repetitive oder transposable Elemente zu finden sind. Ein Vergleich der larvalen Transkripte (L4-Stadium) von 11 Genen des Contigs SDR aus C. thummi ��� und C. thummi ��� per RT-PCR und Hochdurchsatz-Sequenzierung zeigte mit Ausnahme der Gene luc7(p)-like sowie fs(1)K10-like bislang keine weiteren geschlechtsspezifischen Unterschiede. Im Gen luc7(p)-like konnte in C. thummi ��� und C. piger ��� ein alternativ gesplei��tes Intron im eigentlichen Exon 2 identifiziert werden. Bei fs(1)K10-like konnte in C. thummi ��� eine Duplikation des Gens nachgewiesen werden. Weiterhin wurden mit Hilfe des RACE-Verfahrens die 5���UTR- und 3���UTR-Bereiche der Transkripte analysiert. Hierdurch konnten differentielle Splei��produkte identifiziert werden, welche jedoch nicht geschlechtsspezifisch auftreten. Die bioinformatische Bearbeitung der von den Genen der SDR kodierten Proteine auf konservierte Dom��nen zeigt vier Proteine, die m��glicherweise als Transkriptions- oder Splei��faktoren wirken k��nnen. Hierbei handelt es sich um die Proteine der Gene mi-er1-like, luc7(p)-like, polyhomeotic-like sowie rpn5-like. F��r das auf Grund der m��nnchenspezifischen Duplikation in C. thummi in den Fokus geratene Genprodukt von fs(1)K10-like konnten keine Dom��nen vorhergesagt werden. Somit kann nicht gesagt werden, ob das Protein im Rahmen der Geschlechtsdetermination eine Funktion haben k��nnte. Die Sequenzidentit��t der abgeleiteten AS-Sequenz liegt f��r alle Gene au��er mi-er1-like (87,6 %) zwischen den beiden Arten C. tentans und C. thummi bei 93,3 %.

Sozio��konomische Modernisierung und Demokratie in postkommunistischen Transformationsstaaten : eine quantitativ-empirische Analyse zwischen 1996 und 2009 unter Einbezug von Globalisierung

Die vorliegende Arbeit untersucht, in wie weit sich sozio��konomische Entwicklung und die Einbindung in Globalisierungsprozesse verantwortlich f��r die demokratische Entwicklung postkommunistischer Transformationsstaaten zeigen. Zu diesem Zweck wird ein theoretisches Modell hergeleitet, welches die klassische Modernisierungstheorie um neuere Ans��tze erweitert und um Aspekte der Globalisierungsforschung erg��nzt. Die empirischen Resultate basieren auf einer quantitativen Betrachtung von 19 postkommunistischen Staaten im Zeitraum zwischen 1996 und 2009. Die Ergebnisse zeigen, dass sich sozio��konomische Entwicklung und ��konomische Aspekte der Globalisierung positiv auf die Demokratieentwicklung auswirken; eine ungleiche Verteilung von Einkommen in der Bev��lkerung sowie soziale Globalisierungsaspekte hingegen weisen lediglich marginale Effekte auf.

Soziale Rebellion oder kriminelles Banditentum? : eine Analyse der kolumbianischen Guerillaorganisation FARC-EP

Unter Pr��sident ��lvaro Uribe V��lez und dem Einfluss neuer Str��mungen innerhalb der Friedens- und Konfliktforschung ��nderte sich nach Abbruch der Friedensgespr��che zwischen kolumbianischer Regierung und linksgerichteter Guerillaorganisation FARC-EP im Jahr 2002 zunehmend die Perzeption des seit Jahrzehnten andauernden internen Konflikts. Dieser Wandel zeichnete sich vor allem durch eine Klassifizierung der noch aktiven Guerillaorganisationen als vorrangig kriminelle Akteure aus. Doch inwieweit wird diese neue Sicht der Dinge der kolumbianischen Realit��t gerecht?rnrnIm Zentrum dieser Arbeit steht der Versuch die illegale kolumbianische Guerillaorganisation FARC-EP f��r den Zeitraum zwischen 2002 und 2009 zu klassifizieren. Als empirische Grundlage der Analyse dienen dabei heterogene Dokumente der FARC-EP sowie Interviews mit Kommandanten und ehemaligen Mitliedern der Organisation.rn

Charakterisierung einer pflanzlichen Variante des Cytoskelettproteins gamma-Tubulin durch Strukturmodellierung, ��berexpression und Analyse der Interaktionspartner

Wie alle Eukaryoten besitzen auch h��here Pflanzen ein mikrotubul��res Cytoskelett. Einige Funktionen dieses Cytoskeletts sind relativ stark konserviert, andere dagegen scheinen sehr pflanzenspezifisch zu sein. Dies betrifft insbesondere charakteristische mikrotubul��re Netzwerke, die bei der Neubildung und der Verst��rkung der Zellw��nde wichtige Rollen ��bernehmen. Wie der Aufbau dieser Netzwerke kontrolliert wird, ist bisher relativ unklar. Typische Mikrotubuli organisierende Zentren (MTOC), insbesondere Centrosomen oder Spindelpolk��rper, sind bei h��heren P���anzen nicht beobachtet worden. Von pilzlichen und tierischen Organismen wei�� man, dass gamma-Tubulin (gTUB) mit seinen assoziierten Proteinen in den MTOC bei der Nukleation von Mikrotubuli eine Schl��sselfunktion hat. Dieses Mitglied der Tubulin-Superfamilie wird aber auch in P���anzen gefunden, dessen genaue Funktion bisher unbekannt ist. Zu Beginn der Arbeit wurden mittels in silico Berechnungen Strukturmodelle des p���anzlichen gTUBs aus Nicotiana tabacum erarbeitet, da die Struktur, die zu einem Verst��ndnis der p���anzlichen Wachstumsregulation beitragen k��nnte, bisher unbekannt ist. Auf Grundlage der bioinformatischen Daten konnte f��r weitere Studien eine notwendige gTUB-Deletionsmutante entwickelt werden. F��r R��ntgendi���raktionsstudien und gTUB-Interaktionspartneranalysen war die Verf��gbarkeit verh��ltnism����ig gro��er Proteinmengen notwendig. Die Expression der gTUB-Volll��ngensequenz in gel��ster und aktiver Form stellte einen immanent wichtigen Zwischenschritt dar. Das Escherichia coli T7/lacO-Expressionssystem lieferte, trotz vielversprechender Erfolge in der Vergangenheit, kein gel��stes rekombinantes gTUB. So wurden zwar verh��ltnism����ig hohe Expressionsraten erzielt, aber das rekombinante gTUB lag quantitativ als Inclusion bodies vor. Eine Variationen der Expressionsparameter sowie umfangreiche Versuche mittels verschiedenster Konstrukte sowie potentiell die L��slichkeit erh��henden Tags gTUB in gel��ster Form in E. coli zu exprimieren blieben erfolglos. Eine Denaturierung der Inclusion bodies und R��ckfaltung wurde aufgrund der wohl bei der Tubulinfaltung notwendigen komplexeren Chaperone sowie thermodynamischer ��berlegungen ausgeschlossen. Die h��her evolvierte Chaperonausstattung war ein Hauptgrund f��r die Verwendung der eukaryotischen Hefe-Expressionssysteme K. lactis und des S. cerevisiae-Stammes FGY217 zur gTUB-Expression. So konnten nach der Selektion nur transgene Hefe-Zellen dokumentiert werden, die die gTUB-Expressionskassette nachweislich an der vorgesehenen Zielposition in ihrem Genom integrierten, aber keine dokumentierbare Expression zeigten. Die wahrscheinlichste Begr��ndung hierf��r ist, dass ein erh��hter intrazellul��rer gTUB-Titer mit dem Zellwachstum und der Zellteilung dieser eukaryotischen Organismen interferierte und durch R��ckkopplungen die rekombinante gTUB-CDS aus N. tabacum ausgeschaltet wurde. Der Versuch einer transienten gTUB-��berexpression in di���erenzierten Blattgeweben h��herer P���anzen war eine logische Konsequenz aus den vorherigen Ergebnissen und lieferte, wenn auch nicht die f��r eine Proteinkristallisation notwendigen Mengen, gel��stes gTUB. Bestrebungen einer stabilen Transfektion von A. thaliana oder BY-2-Zellkulturen mit einer gTUB-CDS lieferten keine transgenen Organismen, was starke Interferenzen der rekombinanten gTUB-CDS in den Zellen vermuten lies. Transfektionsversuche mit nur GFP tragenden Konstrukten ergaben hingegen eine hohe Anzahl an transgenen Organismen, die auch verh��ltnism����ig starke Expressionsraten zeigten. Die erzielten Proteinmengen bei der transienten gTUB-��berexpression in N. benthamiana Blattgeweben, in Co-Expression mit dem Posttransriptional Gene Silencing-Suppressorprotein p19, waren f��r einen Pull-Down sowie eine massenspektroskopische Analyse der Interaktionspartner ausreichend und ergaben Befunde. Eine abschlie��ende Auswertung des erarbeiteten massenspektroskopischen Datensatzes wird jedoch erst dann m��glich sein, wenn das Tabak-Proteom vollst��ndig sequenziert ist. Die Erweiterung der bestehenden p���anzlichen Vergleichsdatenbanken um das bisher bekannte Tabak-Proteom vervielfachte die Anzahl der in dieser Studie identi���zierten gTUB-Interaktionspartner. Interaktionen mit dem TCP1-Chaperon untermauern die Hypothese der zur Faltung p���anzlichen gTUBs notwendigen Chaperone. Beobachtete gTUB-Degradationsmuster in Verbindung mit Interaktionen des 26S-Proteasoms deuten auf eine Gegenregulationen bei erh��htem gTUB-Titer auf Proteinebene hin. Da Blattgewebe selbst nur noch ��ber eine sehr geringe und inhomogene Teilungsaktivit��t verf��gen ist diese Regulation hoch spannend. Auch konnte durch Co-Expression des PTGS-Suppressorproteins p19 gezeigt werden, dass bei der gTUB-Expression eine Regulation auf RNA-Ebene erfolgt.

Die politische Integration der zweiten Migrantengeneration in der Bundesrepublik Deutschland : eine quantitativ-empirische Analyse der politischen Partizipation auf Grundlage des European Social Surveys

Vor dem Hintergrund der demokratiegef��hrdenden Folgen, die eine strukturell verursachte Ungleichheit politischer Partizipation nach sich zieht, hat sich die Partizipationsforschung verst��rkt der Frage zugewandt, ob zwischen partizipierenden B��rgern und ihren politisch passiven Mitb��rgern systematische Unterschiede hinsichtlich ihrer Ausstattung mit partizipationsrelevanten Ressourcen bestehen. Der Fokus bisheriger empirischer Untersuchungen richtet sich jedoch ausschlie��lich auf die US-amerikanische Gesellschaft. Allerdings setzen sich auch die deutsche Gesellschaft aus einer Vielzahl von Einwanderergruppen zusammen, die unter der Bezeichnung ���Personen mit Migrationshintergrund' subsummiert werden k��nnen. Laut Mikrozensus besitzen zum gegenw��rtigen Zeitpunkt 19,6 Prozent der deutschen Bev��lkerung einen Migrationshintergrund. Der Ursprung dieser Einwanderungsbewegung liegt in der sogenannten Gastarbeiterphase, in der zwischen 1952 und 1973 ausl��ndische Arbeitskr��fte zur Unterst��tzung der deutschen Wirtschaft angeworben wurden. W��hrend dieser ��ra herrschte in der deutschen Gesellschaft die Annahme, die Arbeitsmigranten w��rden sp��testens nach zwei Jahren aufgrund eines gesetzlich vorgeschriebenen Rotationsverfahrens in ihre Heimatl��nder zur��ckkehren. Vor diesem Hintergrund wurde die Frage nach der politischen Integration der Arbeitsmigranten und ihrer Nachkommen in der Integrationsforschung weitgehend vernachl��ssigt ��� eine politische Beteiligung der Arbeitsmigranten war gesellschaftlich nicht erw��nscht. Obwohl die Mehrheit der Arbeitsmigranten tats��chlich in ihre Heimatl��nder zur��ckkehrte, entschied sich ein Teil der Gastarbeiter, ihren Lebensmittelpunkt dauerhaft nach Deutschland zu verlagern und einen Nachzug ihrer Familienangeh��rigen zu arrangieren. Da aus den Gastarbeitern bleibende Mitb��rger geworden sind und ihre in Deutschland geborenen und aufgewachsenen Nachkommen immer zahlreicher werden, kann die Integrationsforschung die Frage nach ihrer politischen Mitwirkung ��� insbesondere die der zweiten Migrantengeneration ��� nicht l��nger ignorieren. In Ankn��pfung an die demokratiegef��hrdenden Folgen, die eine strukturell bedingte, ungleiche Wahrnehmung der politischen Partizipationsrechte nach sich zieht, soll im Rahmen der Magisterarbeit die Frage gekl��rt werden: Sind in Deutschland geborene Personen der zweiten Migrantengeneration politisch integriert, d.h. weisen sie ein ��hnliches Partizipationsverhalten auf wie Deutsche ohne Migrationshintergrund?

Unterst��tzung der Demokratie in wirtschaftlichen Krisenzeiten : eine empirische Analyse am Beispiel der Wirtschaftskrise in Argentinien 2001/02

��konomische Krisen stellen eine Gefahr f��r junge demokratische Staaten dar, da das ��berleben eines demokratischen Regimes am Anfang stark mit seiner Leistungsf��higkeit zusammenh��ngt. In der Forschung wird politische Unterst��tzung als wichtiger Faktor f��r die Erhaltung eines bestimmten Systemtypus diskutiert. Im Fokus dieser Studie steht der Zusammenhang zwischen (diffuser) politischer Unterst��tzung und der wirtschaftlichen Performanz vor dem Hintergrund einer schweren Wirtschaftskrise in dem jungen demokratischen Regime Argentiniens. In empirischen Analysen werden die Einstellungen der argentinischen Bev��lkerung zum demokratischen System sowie deren Akteuren untersucht, um diesen Zusammenhang zu ��berpr��fen.

Funktionelle Analyse der Plasmamembran-Ca 2+-ATPase 2 -PMCA2- in Modellen der Neurodegeneration

Calcium (Ca2+) ist ein ubiquit��r vorkommendes Signalmolek��l, das an der Regulation zahlreicher zellul��rer Prozesse, von der Proliferation bis zum programmierten Zelltod, beteiligt ist. Daher m��ssen die intrazellul��ren Ca2+-Spiegel streng kontrolliert werden. Ver��nderungen der Ca2+-Hom��ostase w��hrend der altersassoziierten Neurodegeneration k��nnen dazu beitragen, dass Neuronen vulnerabler sind. So wurden erh��hte Ca2+-Konzentrationen in gealterten Neuronen, begleitet von einer erh��hten Vulnerabilit��t, beobachtet (Hajieva et al., 2009a). Weiterhin wird angenommen, dass der selektive Untergang von dopaminergen Neuronen bei der Parkinson Erkrankung auf eine erh��hte Ca2+-Last zur��ckzuf��hren sein k��nnte, da diese Neuronen einem st��ndigen Ca2+-Influx,rnaufgrund einer besonderen Isoform (CaV 1.3) spannungsgesteuerter Ca2+-Kan��le des L-Typs, ausgesetzt sind (Chan et al., 2007). Bislang wurden die molekularen Mechanismen, die einem Ca2+-Anstieg zu Grunde liegen und dessen Auswirkung jedoch nicht vollst��ndig aufgekl��rt und daher in der vorliegenden Arbeit untersucht. Um Ver��nderungen der Ca2+-Hom��ostase w��hrend der altersassoziiertenrnNeurodegeneration zu analysieren wurden prim��re Mittelhirnzellen aus Rattenembryonen und SH-SY5Y-Neuroblastomazellen mit dem Neurotoxin 1-Methyl-4-Phenyl-Pyridin (MPP+), das bei der Etablierung von Modellen der Parkinson-Erkrankung breite Anwendung findet, behandelt. Ver��nderungen der intrazellul��ren Ca2+-Konzentration wurden mit einem auf dem gr��n fluoreszierenden Protein (GFP)-basierten Ca2+-Indikator,rn���Cameleon cpYC 3.6��� (Nagai et al., 2004), ermittelt. Dabei wurde in dieser Arbeit gezeigt, dass MPP+ die Abregulation der neuronenspezifischen ATP-abh��ngigen Ca2+-Pumpe der Plasmamembran (PMCA2) induziert, die mit der Ca2+-ATPase des endoplasmatischen Retikulums (SERCA) und dem Na+/Ca2+-Austauscher (NCX) das zellul��re Ca2+-Effluxsystem bildet, was zu einer erh��hten zytosolischen Ca2+-Konzentration f��hrt. Die PMCA2-Abnahme wurde sowohl auf Transkriptionsebene als auch auf Proteinebene demonstriert, w��hrend keine signifikanten Ver��nderungen der SERCA- und NCX-Proteinmengen festgestellt wurden. Als Ursache der Reduktion der PMCA2-Expression wurde eine Abnahme des Transkriptionsfaktors Phospho-CREB ermittelt, dessen Phosphorylierungsstatus abh��ngig von der Proteinkinase A (PKA) war. Dieser Mechanismus wurde einerseits unter MPP+-Einfluss und andererseits vermittelt durch endogene molekulare Modulatoren gezeigt. Interessanterweise konnten die durch MPP+ induzierte PMCA2-Abregulation und der zytosolische Ca2+-Anstieg durch die Aktivierung der PKA verhindert werden. Parallel dazu wurde eine MPP+-abh��ngige verringerte mitochondriale Ca2+-Konzentration nachgewiesen, welche mit einer Abnahme des mitochondrialen Membranpotentials korrelierte. Dar��ber hinaus kam es als Folge der PMCA2-Abnahme zu einem verminderten neuronalen ��berleben.rnVer��nderungen der Ca2+-Hom��ostase wurden auch w��hrend der normalen Alterung inrnprim��ren Fibroblasten und bei M��usen nachgewiesen. Dabei wurden verringerte PMCA und SERCA-Proteinmengen in gealterten Fibroblasten, einhergehend mit einem Anstieg der zytosolischen Ca2+-Konzentration demonstriert. Weiterhin wurden verringerte PMCA2-Proteinmengen im Mittelhirn von gealterten M��usen (C57B/6) detektiert.rnDer zellul��re Ca2+-Efflux ist somit sowohl im Zuge der physiologischen Alterung als auch in einem altersbezogenen Krankheitsmodell beeintr��chtigt, was das neuronale ��berleben beeinflussen kann. In zuk��nftige Studien soll aufgekl��rt werden, welche Auswirkungen einer PMCA2-Reduktion genau zu dem Verlust von Neuronen f��hren bzw. ob durch eine PMCA2-��berexpression neurodegenerative Prozesse verhindert werden k��nnen.

Analyse humaner regulatorischer T-Zellen im humanisierten Mausmodell

Regulatorische T-Zellen sind essentiell f��r die Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz. Hierbei sorgen diese hocheffektiven Suppressorzellen f��r ein immunologisches Gleichgewicht, indem sie Immunantworten gegen Autoantigene sowie harmlose Nahrungs- und Umweltantigene verhindern. Andererseits k��nnen diese bei chronischen Infekten Immunantworten reduzieren sowie effektive Antitumor-Immunantworten hemmen. Aufgrund ethischer Erw��gungen ist die Erforschung regulatorischer T-Zellen und deren Rolle bei der Tumorentwicklung weitestgehend auf Mausmodelle oder humane in vitro oder ex vivo Analysen beschr��nkt. Um diese Limitationen zu ��berwinden und translationale immunologische Experimente zu erm��glichen, wurde hier ein humanisiertes Mausmodell verwendet. T- und B-Zell-defiziente NOD-scid IL2Rgammanull (NSG) M��use wurden mit humanen CD34+ h��matopoetischen Stammzellen aus Nabelschnurblut rekonstituiert. Aus diesen Stammzellen entstanden in den Tieren vielf��ltige humane Immunzellen. Im murinen Thymus der NSG Tiere entwickelten sich CD4+ und CD8+ einzelpositive T-Zellen, welche als funktionelle Effektorpopulationen in die Peripherie auswanderten. Humane regulatorische T-Zellen (CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127-) entwickelten sich ebenfalls im murinen Thymus der Tiere und machten ca. 10% der humanen peripheren CD4+ T-Zellen in den M��usen aus. Diese humanen regulatorischen T-Zellen zeigten vorwiegend einen HLA-DR+ Ph��notyp, welcher mit h��chster Suppressivit��t assoziiert ist. Weiter verhielten sich die regualtorischen T-Zellen anergisch und bewiesen ihre Funktionalit��t unter anderem durch die Inhibition der Proliferation von Effektor-T-Zellen in vitro. rnSubkutan injizierte Tumorzellen eines humanen undifferenzierten pleomorphen Sarkoms wurden in den humanisierten M��usen nicht abgesto��en und der Tumor konnte, trotz Infiltration humaner Immunzellen, ungehindert wachsen. Als m��gliche Ursache hierf��r zeigte sich die selektive Akkumulation regulatorischer T-Zellen im Tumor. Zusammen mit dem erh��hten Anteil humaner regulatorischer T-Zellen in der Peripherie, weisen diese Beobachtungen deutliche Parallelen mit Befunden aus humanen Patienten auf. Dies bietet somit erstmalig die Option in vivo die Rolle humaner regulatorischer T-Zellen im undifferenzierten pleomorphen Sarkom zu analysieren. Die hier gezeigten Daten machen deutlich, dass es das humanisierte Mausmodell erm��glicht, die Entstehung und Funktion humaner regulatorischer T-Zellen in vivo zu analysieren, deren Bedeutung in klinisch relevanten Modellen zu charakterisieren und somit innovative Therapien zu etablieren.

Das aktuelle Debattenbuch im politischen Feld : eine Analyse anhand von Fallbeispielen /// Arbeitsbl��tter f��r die Sachbuchforschung ; 19

Diese Forschungsarbeit zeigt erstmalig anhand von drei Fallbeispielen [���Lob der Disziplin. Eine Streitschrift��� von Bernhard Bueb, ���Das Methusalem-Komplott��� von Frank Schirrmacher und ���Deutschland schafft sich ab��� von Thilo Sarrazin] und aufbauend auf Bourdieus Theorie des politischen Feldes welche Wirkung s. g. Debattenb��cher auf das gesellschaftliche Diskursfeld, die Politik und die Wissenschaft haben k��nnen. Die Arbeit gliedert sich in drei Teile. In einem ersten Schritt werden Unterschiede und Gemeinsamkeiten der Autoren und Werke herausgearbeitet. Es wird gezeigt welche Inszenierungsstrategien vorliegen und wie diese den Autor auf das Kr��ftemessen im politischen Feld vorbereiten. Im Anschluss wird im zweiten Schritt gekl��rt, wie sich der Autor im politischen Feld positioniert und welchen Einfluss er auf das bestehende Kr��fteverh��ltnis politischer Akteure aus��bt. Im letzten Schritt wird diesem Einfluss abstrahierend auf das gesellschaftliche Wirkungspotenzial von Debattenb��chern geschlossen. Unter Zuhilfenahme von Zeitungsartikeln, die bis zu 6 Monaten nach Erscheinungstermin des jeweiligen Titels, in Der Spiegel, Die Zeit und der Frankfurter Allgemeine Sonntagszeitung ver��ffentlicht wurden, wurde klar, dass Debattenb��cher dann erfolgreich sind, wenn sie eine Meinung, die kontr��r zum gesellschaftlichen Konsens steht, provokativ und emotional aufbereiten und der Autor bereit ist, als Meinungstr��ger seine Thesen in der ��ffentlichen Debatte zu vertreten. So gestaltet regt das Debattenbuch ��� auch wenn es langfristig keinen Effekt auf das zentrale gesellschaftliche Diskursfeld hat - zur ���Selbstfindung durch Emotionen��� an. Auf vermeintliche Sachlichkeit anspielend wirkt es, weil es den Lesern gesellschaftliche Konfliktherde auf emotionalem Wege bewusst werden l��sst und so Impulse zur Ver��nderung setzt.

Etablierung eines humanisierten Mausmodells zur In-vivo-Analyse von DC-adressierenden Nanopartikeln

In dieser Arbeit wurde zun��chst ein humanisiertes Mausmodell entwickelt f��r die Analyse von humanen DCs in vivo. Dar��ber hinaus wurden erste Versuche mit Nanopartikelbeladenen DCs durchgef��hrt, mit der Intention, durch diese Kombination humane DCs zu untersuchen. Es wurden immunsupprimierte NOD/LtSz-scid IL2R (NSG) M��use verwendet und mit humanen CD34+ PBSCs transplantiert. Es wurden insgesamt 14 Modelle getestet, mit einer durchschnittlichen Humanisierungsrate von 76 %. In allen Modellen konnten ab Woche sechs nach Transplantation humane CD45+ Zellen sowie humane Bund NK-Zellen und CD14+ Monozyten gefunden werden. Dar��ber hinaus waren myeloide DC-Vorl��uferzellen, konventionelle HLA DR CD11c DCs (cDCs) und plasmazytoide DCs (pDCs) vorhanden. Humane T-Zellen konnten nicht vor Woche 18 nach Transplantation beobachtet werden. Neben der Rekonstitution humaner DCs in peripheren Organen, wurde ebenfalls nach gewebsst��ndigen DCs, insbesondere den Langerhans Zellen (LCs) der Epidermis geschaut. Waren humane LC vorhanden, konnten diese ab Woche zw��lf nach Transplantation in der murinen Epidermis detektiert werden. Diese waren konstant bis in Woche 30 nach Transplantation nachweisbar. In Hinblick auf die Etablierung der DCs in diesem humanisierten Mausmodells wurden verschiedene Einflussgr����en getestet. IL-7 f��hrte zu keiner ver��nderten H��matopoese, wohingegen Flt3L zu einer Zunahme von CD14+ Monozyten und cDCs f��hrte. Dar��ber hinaus konnte eine drastische Abnahmernhumaner B-Zellen beobachtet werden. Es zeigte sich, dass der Zeitpunkt der Flt3LrnApplikation einen entscheidenen Faktor f��r den Effekt von Flt3L auf die Rekonstitution humaner Zellen darstellt. F��r die in dieser Arbeit durchgef��hrten funktionellen in vivo Studien, wurden humanisierten M��usen alloreaktive CD8+ T-Zellen appliziert. Somit sollte die Funktionalit��t der rekonstituierten humanen APCs getestet werden. Es wurde deutlich, dass Monozyten und DCs ihre Funktionalit��t erst ab Woche 14 nach Transplantation zu entwickeln schienen,rnwohingegen B-Zellen bereits zu fr��heren Zeitpunkten als Zielzellen f��r die alloreaktiven T-Zellen dienten. Dies wurde durch den R��ckgang der jeweiligen Zellen nach Applikation der T-Zellen sichtbar. Zu erw��hnen ist, dass das Anwachsen einer humanen H��matopoese stark spenderabh��ngig ist und somit keine allgemeing��ltigen Aussagen hinsichtlich der in vivo Funktion getroffen werden k��nnen. Um im Gewebe verbliebende APCs zu manipulieren gibt es verschiedene M��glichkeiten. Im Rahmen dieser Arbeit wurden auf Polystyren-basierende Nanopartikel getestet. Die verwendeten Partikel hatten eine Gr����e von 80 bis 160 nm und waren unfunktionalisiert oder mit Amino- bzw. Carboxy-Gruppen versehen. Zus��tzlich wurden die Partikel mit BODIPY (Durchflusszytometrie und kLSM-Messungen), einem Infrarotnahem Farbstoff IR 780 (BFI-Messungen) und Platin (in vivo Messungen) beladen. Der Carboxy-funktionalisierte Partikel zeigte den geringsten Einfluss auf die Vitalit��t von humanen DCs, wohingegen der Amino-funktionalisierte Partikel bei steigender Konzentration toxisch wirkte. Bei unfunktionalisierten Partikeln stieg die Toxizit��t bei zunehmender Konzentration. Hinsichtlich der Expression diverser DC spezifischer Oberfl��chenmolek��le nach Beladung mit Nanopartikeln zeigte sich, dass allein der unfunktionalisierte, mit Lutensol AT50 hergestellte Partikel zu einer leichten Hochregulation von MHC-Klasse-II Molek��len f��hrte. Die Expression von CD86 wurde im Gegenzug nur durch die Beladung mit den Amino-, bzw. Carboxy funktionalisierten Partikeln und dem unfunktionalisierten, mit SDS hergestellten Partikel leicht gesteigert. Trotz der teilweise leicht ver��nderten Expression von Oberfl��chenmarkern, konnte mit Hilfe von IFN-g ELISpots keine Beeinflussungrnder Funktion als APCs von Nanopartikel-beladenen DCs beobachtet werden. In den in vivo Untersuchungen zeigten alle vier Partikel eine konstante Zirkulation imrnOrganismus und konnten bis 96 h nach Applikation nachgewiesen werden. Alle Partikel konnten prim��r in der Leber detektiert werden, wobei der unfunktionalisierte, mit Lutensol AT50 hergestelle Partikel das weiteste Verbreitungsmuster zeigte. Erste Versuche im humanisierten Mausmodell zeigten keine Beeinflussung der Verteilung und Kinetik von Nanopartikeln durch die humane H��matopoese. Mit dem in dieser Arbeit etablierten humanisierten Mausmodell ist es m��glich, die Entwicklung, Differenzierung, Aktivierung und Funktionalit��t humaner DCs in vivo zu untersuchen. Dar��ber hinaus kann das gezielte Adressieren von DCs in vivo analysiert werden, was sowohl die M��glichkeit der Manipulation von DCs zur Vermeidung einer akuten GvHD bietet als auch Verwendung in anderen DC-vermittelten Therapien (z.B.Vakzinationsstudien) findet.

Molekulare Analyse des Kolumnar-Gens beim Apfel (Malus x domestica)

Das Kolumnarwachstum beim Apfel (Malus x domestica) geht auf eine in den fr��hen 1960er Jahren entdeckte Zufallsmutation zur��ck. Die daraus resultierende Sprossmutante ist von gro��em wirtschaftlichem Interesse, da diese sehr kompakte Wuchsform unter anderem zu einer enormen Ertragssteigerung durch eine hohe Pflanzdichte der B��ume f��hrt. Das Ziel der Arbeit ist die Entschl��sselung der molekularen Ursache dieser Mutation, die bisher weitgehend ungekl��rt ist. Die Analyse wurde durch die Erstellung einer Referenzsequenz der Co-Zielregion einer kolumnaren Apfelsorte sowie durch die Konstruktion eng gekoppelter molekularer Marker realisiert. Durch die Konstruktion von genomischen Apfel-BAC-Bibliotheken mit mehrfacher Genomabdeckung und die Erstellung geeigneter Sonden wurde die Co-Region kloniert und deren Sequenz bestimmt. In Kombination zu dieser klassischen positionellen Klonierungsstrategie wurden genomische Illumina ���mate pair���-Bibliotheken erstellt, sequenziert und bioinformatisch analysiert, um die genomische Region vollst��ndig zu annotieren. Somit wurde eine vollst��ndige genomische Referenz der Co-Region einer kolumnaren Apfelsorte erstellt, die die Grundlage f��r weitere Analysen bildet. Auf Basis dieser Referenz konnte die Co-Mutation in Form der Integration des LTR-Retrotransposons Gypsy-44 im kolumnaren Chromosom an Position 18,79 Mbp auf Chromosom 10 lokalisiert werden. Dar��ber hinaus konnten Transposon-basierende molekulare Marker erstellt werden, die eine verl��ssliche Genotypisierung von Apfelb��umen in Bezug auf das Kolumnarwachstum erm��glichen und dies unabh��ngig von der verwendeten Apfelsorte. Der genaue Wirkmechanismus von Gypsy-44, der zur Auspr��gung dieses extremen Ph��notyps f��hrt, ist bislang unklar. Zusammenfassend l��sst sich sagen, dass die molekulare Ursache f��r das kolumnare Wachstum aufgekl��rt werden konnte und zudem die ersten molekularen Marker erstellt wurden, die eine sortenunabh��ngige Differenzierung zwischen kolumnaren und nicht kolumnaren Apfelb��umen erm��glichen.

Charakterisierung und funktionelle Analyse verschiedener Isoformen von Clusterin (Apolipoprotein J)

Clusterin (CLU), auch bekannt unter dem Namen Apolipoprotein J (ApoJ), wird von Zellen als hetreodimeres Glykoprotein exprimiert und in den extrazellul��ren Raum sezerniert. Es wird daher auch als sezerniertes CLU (sCLU) bezeichnet. Neben sCLU sind auch nicht-sezernierte Isoformen von CLU bekannt, die in der vorliegenden Arbeit erforscht wurden. Ziel dabei war es, die Expression, die Biogenese, sowie die Funktion dieser Proteine zu ergr��nden. Nicht-sezernierte CLU-Formen werden ausschlie��lich von Zellen exprimiert, die zuvor einer Stresssituation ausgesetzt wurden. Dies konnte insbesondere durch Kultur verschiedener Zelllinien bei erh��hter Temperatur oder durch Behandlung mit dem Proteasominhibitor MG 132 demonstriert werden, worauf neben sCLU auch 50���kDa bzw. 45���kDa gro��e, nicht-sezernierte CLU-Proteine in geringen Mengen exprimiert wurden. Bez��glich der Biogenese dieser Proteine wurden mehrere Hypothesen bzw. Mechanismen diskutiert und in dieser Arbeit untersucht: alternative Translationsstartpunkte auf verschiedenen mRNAs, alternatives Splicing einzelner mRNAs sowie Retrotranslokation oder Mistranslokation von sCLU-Vorl��uferproteinen. Um die Hypothesen eruieren zu k��nnen, musste zuerst eine Expressionsanalyse der bekannten CLU-mRNAs durchgef��hrt werden. ��ber 5���-RACE, semi-quantitative und quantitative PCRs wurde die Expression von vier CLU-mRNAs sowie deren Induktion auf Zellstress hin festgestellt. Variante 1 (BP211675) ist die dominante CLU-mRNA und macht ��ber 99,5���% an CLU-mRNA in unbehandelten sowie in gestressten Zellen aus. Des Weiteren sind geringste Mengen der mRNA-Varianten 2 und 3 (NR_038335.1 und NR_045494.1) detektiert worden, deren Sequenzen sich lediglich in ihrem alternativen Exon 1 von Variante 1 unterscheiden. Schlie��lich konnte die Expression von Variante 1 [��ex2] festgestellt werden, welcher durch alternatives Splicing, i.e. Exon-skipping, das Exon 2 mit der ER-Signalsequenz-codierenden Region (SSCR) fehlt. HEK 293-Zellen, die transient mit je einer der rekombinanten CLU-mRNAs in Form rekombinanter cDNA transfiziert wurden, exprimierten neben gro��en Mengen sCLU auch geringe Mengen an den nicht-sezernierten CLU-Isoformen. Die anschlie��end durchgef��hrten in vitro Mutagenesen belegen, dass alle Isoformen ausgehend von distinkten Translationsstartpunkten aus synthetisiert werden. CLU1-449 (50���kDa) wird als pr��-Proprotein von sCLU ausgehend von einem Startcodon auf Exon 2 unmittelbar vor der SSCR translatiert. Unter Zellstress-Bedingungen kann es zu einer Mistranslokation w��hrend der co-translationalen Translokation kommen, sodass Teile von CLU1-449 im Cytosol akkumulieren. CLU21-449 (50���kDa) wird ausgehend von einem CUG-Startcodon downstream der SSCR ��ber interne Translationsinitiation gebildet. Analoges gilt f��r CLU34-449 (45���kDa), welches von einem AUG-Startcodon auf Exon 3 translatiert wird. CLU34-449 ist au��erdem die einzige CLU-Form die von Variante 1 [��ex2] codiert wird. Somit konnten drei der in der Literatur postulierten Mechanismen zur Ent-stehung nicht-sezernierter CLU-Isoformen in gestressten Zellen verifiziert werden. Die Mistranslokation von sCLU-Vorl��uferproteinen, welche entscheidend zum Auftreten der nicht-sezernierten CLU-Formen beitr��gt, die Alternative Translationsinitiation an distinkten Startcodons sowie das alternative Splicing von CLU-mRNA-Variante 1. Weiterf��hrende Experimente best��tigten, dass alle nicht-sezernierten CLU-Isoformen im Cytosol der Zellen lokalisiert sind und keine Glykosylierungen tragen. Somit konnte ein weiterer, in der Literatur kontrovers diskutierter Punkt bez��glich dieser Proteine gekl��rt werden. Abschlie��end wurde die physiologische Funktion der einzelnen CLU-Isoformen analysiert. Dabei zeigte sich, dass ausschlie��lich sCLU eine Chaperonaktivit��t zukommt, die es erm��glicht, durch Hitze denaturierte Zielproteine in L��sung zu halten. Diese Funktion konnte nicht f��r die cytosolischen Iso��formen best��tigt werden. Weiterhin konnte keine Auswirkung einzelner CLU-Formen auf die intrinsische Apoptose oder auf den NF ��B-vermittelten Signaltransduktionsweg festgestellt werden, obgleich entsprechende Einfl��sse von anderen Arbeitsgruppen postuliert wurden. Die hier gemachten Beobachtungen werfen daher die Frage auf, ob den nicht-sezernierten, cytosolischen CLU-Isoformen ��berhaupt eine physiologische Funktion zukommt und stellen aktuelle Hypothesen bez��glich der Rolle von CLU bei pathophysiologischen Prozessen infrage.

R��ckschritt nach dem Beitritt? : eine empirische Analyse der Qualit��t der Demokratie in Bulgarien nach dem EU-Beitritt

Die vorliegende Arbeit geht der Frage nach, ob die Qualit��t der Demokratie in Bulgarien nach dem EU-Beitritt nachgelassen hat und wenn ja, in welchen Bereichen. Ausgangspunkt f��r die Formulierung dieser Frage sind Medienberichte, denen zufolge Bulgarien nach dem Beitritt zur Europ��ischen Union R��ckschritte in seiner Demokratieentwicklung, vor allem im Bereich der Rechtsstaatlichkeit, gemacht habe. Theoretische Grundlage f��r die Analyse ist das Konzept der defekten Demokratie von Wolfgang Merkel, Hans-J��rgen Puhle, Aurel Croissant, Claudia Eicher und Peter Thiery. Die Ver��nderungen des Demokratiegehalts f��r die Jahre des Untersuchungszeitraums (2006 bis 2011) werden anhand des Index Defekter Demokratie erfasst. Die Ergebnisse der Analyse zeigen, dass die Qualit��t der Demokratie in Bulgarien nach dem EU-Beitritt tats��chlich abgenommen hat. Die deutlichste Zunahme von Defekten ist dabei auf der Dimension des liberalen Rechts- und Verfassungsstaates festzustellen, was vor allem auf den Anstieg der Korruption w��hrend des Untersuchungszeitraums zur��ckzuf��hren ist.

Analyse der intrazellul��ren Freisetzung von Wirkstoffmodellen via konfokaler Laser-Raster-Mikroskopie

In der vorliegenden Arbeit wurde gezeigt, wie man das Potential nanopartikul��rer Systeme, die vorwiegend via Miniemulsion hergestellt wurden, im Hinblick auf ���Drug Delivery��� ausnutzen k��nnte, indem ein Wirkstoffmodell auf unterschiedliche Art und Weise intrazellul��r freigesetzt wurde. Dies wurde haupts��chlich mittels konfokaler Laser-Raster-Mikrokopie (CLSM) in Kombination mit dem Bildbearbeitungsprogramm Volocity�� analysiert.rnPBCA-Nanokapseln eigneten sich besonders, um hydrophile Substanzen wie etwa Oligonukleotide zu verkapseln und sie so auf ihrem Transportweg in die Zellen vor einem etwaigen Abbau zu sch��tzen. Es konnte eine Freisetzung der Oligonukleotide in den Zellen aufgrund der elektrostatischen Anziehung des mitochondrialen Membranpotentials nachgewiesen werden. Dabei war die Kombination aus Oligonukleotid und angebundenem Cyanin-Farbstoff (Cy5) an der 5���-Position der Oligonukleotid-Sequenz ausschlaggebend. Durch quantitative Analysen mittels Volocity�� konnte die vollst��ndige Kolokalisation der freigesetzten Oligonukleotide an Mitochondrien bewiesen werden, was anhand der Kolokalisationskoeffizienten ���Manders��� Coefficients��� M1 und M2 diskutiert wurde. Es konnte ebenfalls aufgrund von FRET-Studien doppelt markierter Oligos gezeigt werden, dass die Oligonukleotide weder beim Transport noch bei der Freisetzung abgebaut wurden. Au��erdem wurde aufgekl��rt, dass nur der Inhalt der Nanokapseln, d. h. die Oligonukleotide, an Mitochondrien akkumulierte, das Kapselmaterial selbst jedoch in anderen intrazellul��ren Bereichen aufzufinden war. Eine Kombination aus Cyanin-Farbstoffen wie Cy5 mit einer Nukleotidsequenz oder einem Wirkstoff k��nnte also die Basis f��r einen gezielten Wirkstofftransport zu Mitochondrien liefern bzw. die Grundlage schaffen, eine Freisetzung aus Kapseln ins Zytoplasma zu gew��hrleisten.rnDer vielseitige Einsatz der Miniemulsion gestattete es, nicht nur Kapseln sondern auch Nanopartikel herzustellen, in welchen hydrophobe Substanzen im Partikelkern eingeschlossen werden konnten. Diese auf hydrophobe Wechselwirkungen beruhende ���Verkapselung��� eines Wirkstoffmodells, in diesem Fall PMI, wurde bei PDLLA- bzw. PS-Nanopartikeln ausgenutzt, welche durch ein HPMA-basiertes Block-Copolymer stabilisiert wurden. Dabei konnte gezeigt werden, dass das hydrophobe Wirkstoffmodell PMI innerhalb k��rzester Zeit in die Zellen freigesetzt wurde und sich in sogenannte ���Lipid Droplets��� einlagerte, ohne dass die Nanopartikel selbst aufgenommen werden mussten. Daneben war ein intrazellul��res Abl��sen des stabilisierenden Block-Copolymers zu verzeichnen, welches rn8 h nach Partikelaufnahme erfolgte und ebenfalls durch Analysen mittels Volocity�� untermauert wurde. Dies hatte jedoch keinen Einfluss auf die eigentliche Partikelaufnahme oder die Freisetzung des Wirkstoffmodells. Ein gro��er Vorteil in der Verwendung des HPMA-basierten Block-Copolymers liegt darin begr��ndet, dass auf zeitaufwendige Waschschritte wie etwa Dialyse nach der Partikelherstellung verzichtet werden konnte, da P(HPMA) ein biokompatibles Polymer ist. Auf der anderen Seite hat man aufgrund der Syntheseroute dieses Block-Copolymers vielf��ltige M��glichkeiten, Funktionalit��ten wie etwa Fluoreszenzmarker einzubringen. Eine kovalente Anbindung eines Wirkstoffs ist ebenfalls denkbar, welcher intrazellul��r z. B. aufgrund von enzymatischen Abbauprozessen langsam freigesetzt werden k��nnte. Somit bietet sich die M��glichkeit mit Nanopartikeln, die durch HPMA-basierte Block-Copolymere stabilisiert wurden, gleichzeitig zwei unterschiedliche Wirkstoffe in die Zellen zu bringen, wobei der eine schnell und der zweite ��ber einen l��ngeren Zeitraum hinweg (kontrolliert) freigesetzt werden k��nnte.rnNeben Nanokapseln sowie ���partikeln, die durch inverse bzw. direkte Miniemulsion dargestellt wurden, sind auch Nanohydrogelpartikel untersucht worden, die sich aufgrund von Selbstorganisation eines amphiphilen Bock-Copolymers bildeten. Diese Nanohydrogelpartikel dienten der Komplexierung von siRNA und wurden hinsichtlich ihrer Anreicherung in Lysosomen untersucht. Aufgrund der Knockdown-Studien von Lutz Nuhn konnte ein Unterschied in der Knockdown-Effizienz festgestellt werden, je nach dem, ob 100 nm oder 40 nm gro��e Nanohydrogelpartikel verwendet wurden. Es sollte festgestellt werden, ob eine gr����enbedingte, unterschiedlich schnelle Anreicherung dieser beiden Partikel in Lysosomen erfolgte, was die unterschiedliche Knockdown-Effizienz erkl��ren k��nnte. CLSM-Studien und quantitative Kolokalisationsstudien gaben einen ersten Hinweis auf diese Gr����enabh��ngigkeit. rnBei allen verwendeten nanopartikul��ren Systemen konnte eine Freisetzung ihres Inhalts gezeigt werden. Somit bieten sie ein gro��es Potential als Wirkstofftr��ger f��r biomedizinische Anwendungen.rn

Welche Typen von Autokratien sind leistungsf��higer und warum? : eine empirische Analyse auf Grundlage der Selektoratstheorie = Which type of autocracy performs better, and why?

Performanzunterschiede zwischen verschiedenen Autokratietypen wie Monarchien, Milit��r-, Ein-Parteien- und begrenzten Mehr-Parteien-Regimen sind bis auf wenige Ausnahmen bisher relativ unerforscht. Deshalb widmet sich diese Arbeit folgenden Forschungsfragen: Gibt es Performanzunterschiede zwischen verschiedenen Autokratietypen? Wenn ja, wie gestalten sich diese und wie lassen sie sich erkl��ren? Auf Grundlage der Selektoratstheorie von Bueno de Mesquite et al. wird die Hypothese aufgestellt, dass die Performanz politischer Regime mit der Gr����e der Winning Coalition steigt. Da verschiedene Autokratietypen unterschiedlich gro��e Winning Coalitions haben, wird angenommen, dass es deutliche Performanzunterschiede zwischen diesen Typen gibt. Als Performanzkriterien dienen in dieser Arbeit wirtschaftlicher Wohlstand, soziale Sicherheit und ��kologische Nachhaltigkeit. Aus diesen drei Kriterien wird zus��tzlich ein Indikator allgemeiner Performanz gebildet. Die empirische Untersuchung erfolgt mit den Daten des Quality-of-Governement-Datensatzes und erstreckt sich ��ber 140 autokratische L��nder im Zeitraum von 1972 bis 2010. Die Daten werden mittels Time-Series-Cross-Section-Regressionen analysiert. Die Ergebnisse der Analysen entsprechen nur teilweise den Erwartungen. Die Gr����e der Winning Coalition wirkt positiv auf die wirtschaftliche Wohlfahrt und die soziale Sicherheit und damit auch auf die allgemeine Performanz aus. Entgegen den Erwartungen sinkt die ��kologische Performanz jedoch mit steigender Gr����e der Winning Coalition. Auch die Befunde bez��glich der Performanz verschiedener Autokratietypen entsprechen nicht den Erwartungen. So sind Ein-Parteien-Regime insgesamt leistungsf��higer als Mehr-Parteien-Regime, Milit��r-Regime und Monarchien. Milit��r-Regime sind leistungsf��higer als Monarchien und tendenziell auch als Mehr-Parteien-Regime.