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Mutagenesi sito specifica in vitro del genoma virale. - Amplificazione, tramite PCR ed usando coppie di primers appositamente disegnate, del frammento del genoma virale in cui si desidera inserire la mutazione sito specifica. - Sostituzione del frammento mutato nel genoma virale tramite taglio enzimatico e reazione di ligasi. - Trasformazione di
cellule
di E. coli e selezione delle colonie contenenti il plasmide ricombinante. - Trascrizione in vitro dell’RNA virale. - Inoculo di piante test (C. quinoa) con gli RNA virali mutati. - Osservazione e discussione dei risultati ottenuti.
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