Approach toward an efficient inoculum preparation stage for suspension BHK-21 cell culture

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Transient expression of rabies virus G-glycoprotein using BHK-21 cells cultured in suspension

Objective To assess the expression of rabies virus G-glycoprotein (RVGP) expression using Semliki Forest virus as a vector in combination with BHK-21 cells cultured in suspension. Results A multilevel factorial design was used to quantify effects of temperature (33–37 C), fresh medium addition after the viral adsorption step (100–200 % with respect to the initial cell suspension volume before infection) and harvest time (8–40 h) on RVGP production. Experimental runs were performed in 24-well cell culture plates at a multiplicity of infection (MOI) of 16. An additional experiment in spinner-flask was performed at MOI of 9, using the optimal conditions determined in cell culture plates. Values for temperature, fresh medium addition and harvest time of 33 C, 100 % and 16 h, respectively, ensured the optimal RVGP production in culture plates. The volumetric yield (239 ng ml-1 ) in these conditions was higher than that reported previously for adherent cell culture. In spinner-flasks, the volumetric yield was improved (559 ng ml-1 ). Conclusion These results establish the basis for designing bioprocess to produce RVGP.

Whistle variability in South Atlantic spinner dolphins from the Fernando de Noronha Archipelago off Brazil

A series of quali- and quantitative analyses were conducted to evaluate the variability of spinner dolphin whistles from the Fernando de Noronha Archipelago off Brazil. Nine variables were extracted from each whistle contour, and the whistle contours shapes were classified into the seven categories described in Driscoll (1995). The analysis showed mean beginning and ending frequencies values of 10.78 and 12.74 kHz, respectively. on average, whistle duration was relatively short, with mean values around 0.495 s (N=702). Comparative analyses were also conducted to investigate the relationship between the obtained results and those presented in previous studies. When comparing averages, the results of the study of Oswald et al. (2003) in the Tropical Eastern Pacific (TEP) presented less significant differences in relation to this study; only whistle duration differed significantly between both works. The results of multivariate classification tests also pointed TEP population as the closest related to the population studied here. The similarities between such disjunct populations might be attributed to a more recent isolation event (the closing of the Panama Isthmus) than the divergence that has driven North and South Atlantic populations apart. (c) 2006 Acoustical Society of America.

Isolation and characterization of microsatellite DNA markers for spinner dolphin (Stenella longirostris)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

The cetacean offal connection: Feces and vomits of spinner dolphins as a food source for reef fishes

At Fernando de Noronha Archipelago, southwest Atlantic, reef fishes associated with spinner dolphins (Stenella longirostris) were recorded when the cetaceans congregated in a shallow inlet. In the reef waters the dolphins engaged in several behaviors such as resting, aerial displays and other social interactions, as well as eliminative behaviors such as defecating and vomiting. Twelve fish species in seven families were recorded feeding on dolphin offal. The black durgon (Melichthys niger) was the most ubiquitous waste-eater, and its group size was positively and significantly correlated with dolphin group size. The durgons recognized the postures a dolphin adopts prior to defecating or vomiting, and began to converge to an individual shortly before it actually voided. Offal was quickly fed upon, and the fishes concentrated in the area occupied by the dolphins until the latter left the shallows. Since all the recorded offal-feeding species feed on plankton or drifting algae, feeding on cetacean droppings may be regarded as a switch from foraging on drifting organisms to foraging on drifting offal, a predictable food source in the inlet. Further instances of this cetacean-fish association are predicted to occur at sites where these mammals congregate over reefs with clear water and plankton-eating fishes.

Método simples e acessível para determinar amônia liberada pela cama aviária

A amônia é um gás altamente irritante e causador de estresse às aves confinadas, o que leva à perda de peso, podendo até causar a morte. Por esse motivo, existe grande interesse em se determinar a quantidade de amônia liberada por diferentes camas aviárias e de diferentes condições, bem como os fatores que influenciam a produção desta substância. Assim, idealizou-se o presente trabalho com o objetivo de desenvolver e padronizar uma metodologia simples, acessível, exeqüível para avaliar camas de frangos submetidas a diferentes condições (diferentes tratamentos, tempos de confinamento e temperatura) e capaz de determinar a potencialidade da liberação de amônia pela cama de frangos nos galpões. A metodologia baseou-se na adaptação do método da microdifusão, que consta da incubação da cama em um frasco de vidro com capacidade de 500 mL. Sobre a superfície do material incubado coloca-se um béquer de 50 mL contendo 10 mL de solução de ácido bórico 2% (m/v) para fixar a amônia exalada pela cama aviária. Esse sistema é fechado e incubado por 15 horas a 30°C e, após, a solução fixadora é retirada e titulada com ácido sulfúrico 0,05 N, usando como indicador uma mistura de verde de bromocresol e alaranjado de metila. O método proposto apresenta precisão para ser usado em experimentos e utiliza material barato e reagentes facilmente encontrados nos laboratórios.

Avaliação da decomposição de plantas aquáticas no solo através da liberação de CO2

O objetivo deste trabalho foi avaliar a decomposição de três espécies de plantas aquáticas imersas, incorporadas ao solo, provenientes do controle mecânico, em reservatórios de usinas hidrelétricas. O estudo foi realizado em casa de vegetação, localizada no Núcleo de Pesquisas Avançadas em Matologia (NUPAM) da FCA/Unesp-Botucatu. A avaliação foi conduzida em vasos contendo 14 kg de solo, com três incorporações de 50 e 100 t MF de plantas ha-1, sob duas condições de solo: seco e úmido. Com a simulação de descarte da biomassa coletada e incorporada ao solo, pôde-se conhecer, através da liberação de CO2, a degradação de três espécies de macrófitas aquáticas submersas. Para quantificação do CO2 liberado, em cada vaso foi acondicionado um frasco com solução de NaOH, sendo, logo após, lacrados e incubados por 24 horas; em seguida, foram titulados com HCl. Para ajuste e interpolação dos dados, estes foram analisados seguindo modelo de Mitscherlich, com algumas modificações. As liberações acumuladas em solo úmido foram de 1.294 e 1.582 kg CO2 ha-1, sendo 6,2 e 5,6 vezes superiores ao ocorrido em solo seco, para 50 e 100 t MF ha-1, respectivamente, observando-se que cerca de 55% da liberação de CO2 ocorreu nos primeiros 30 dias. Pode-se concluir que o solo seco é a melhor condição para descarte e incorporação da biomassa, porém deverá existir um sistema de irrigação para que o processo de degradação da biomassa incorporada seja acelerado.

Tensão superficial estática de soluções aquosas com óleos minerais e vegetais utilizados na agricultura

O trabalho teve como objetivo avaliar a tensão superficial estática de soluções aquosas com formulações de óleos minerais e vegetais emulsionáveis utilizados como adjuvantes na agricultura. Os óleos minerais e vegetais, quando adicionados aos produtos fitossanitários, podem imprimir características desejáveis à calda de pulverização, como reduzir a tensão superficial em soluções aquosas, possibilitar maior contato da calda com a superfície vegetal ou reduzir o potencial de deriva durante as pulverizações. Foram testados os seguintes produtos comerciais: óleos minerais (Assist, Attach, Dytrol, Iharol, Mineral Oil, Spinner, Sunspray-E e Triona) e óleos vegetais (Agrex'oil Vegetal, Crop Oil, Natur'l Óleo, Óleo Vegetal Nortox e Veget Oil), todos com registro de uso na agricultura. A tensão superficial das soluções aquosas foi avaliada em 11 concentrações para cada produto (0,025; 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0% v/v). Essa propriedade dos óleos minerais e dos óleos vegetais foi estimada medindo-se a massa das gotas formadas na extremidade de uma bureta. Ao conjunto de dados obtidos para cada produto, na avaliação da tensão superficial, foram determinadas as análises de variância e de regressão, ajustando-se os dados ao Modelo de Mitscherlich. Entre os óleos minerais, destacaram-se os produtos: Assist, Dytrol, Iharol e Mineral Oil por apresentarem as menores tensões superficiais mínimas estimadas pelo Modelo, respectivamente, 29,255; 28,442; 26,097 e 28,584 mN m-1. Os óleos vegetais que apresentaram os menores valores de tensão superficial mínima estimados pelo Modelo, foram: Agrex' oil Vegetal (27,716 mN m-1), Natur'l óleo (28,216 mN m-1), Veget Oil (27,308 mN m-1) e Crop Oil (29,964 mN m-1).

Meios de cultura no desenvolvimento de ápices caulinares de mamoneira (Ricinus communis L.) in vitro

A pesquisa da composição do meio de cultura mais adequado à espécie vegetal e ao tipo de explante empregado é o fator de maior relevância da cultura de tecidos. O cultivo de ápice caulinar com recuperação da planta matriz é uma técnica de grande impacto para a propagação de plantas in vitro, regeneração de plantas livres de vírus, conservação de germoplasma e modificação genética. Objetivou-se, neste trabalho, avaliar composições do meio de cultivo para organogênese direta in vitro a partir de ápices caulinares pertencentes à população FCA-UNESP-PB de mamoneira (Ricinus communis L.), com vistas à propagação clonal de genótipos elite. Foram testadas quatro formulações: MS básico (T1), MS modificado 1 (T2), MS modificado 2 (T3) e WPM (T4), em delineamento experimental inteiramente casualizado, com 20 repetições em cada tratamento, sendo a repetição 1 ápice caulinar/frasco. O T3 apresentou-se superior e diferiu significativamente dos outros tratamentos apresentando 35% dos ápices caulinares diferenciados e desenvolvidos; seguiu-se o T2 com 10% e os tratamentos T1 e T4 não apresentaram diferenciação de tecidos. Os resultados permitiram concluir que os balanceamentos de sais minerais nos meios de cultura avaliados, especialmente a relação NO3 / NH4 e ausência de FeSO4.7H2O, indicaram grande influência no desenvolvimento de ápices caulinares de mamoneira.

ESTUDO da RETENÇÃO ENTRE RESINA ACRÍLICA PARA BASE DE DENTADURA E DENTES DE RESINA ACRÍLICA

Foi avaliada a resistência de união entre dentes e base de dentadura, ambos de resina acrílica. Os dentes foram incluídos em blocos cilíndricos de resina e, posteriormente, torneados, para se obterem cilindros de 5mm de diâmetro. Sobre a extremidade do dente, era adaptado um padrão de cera de mesmo diâmetro, que, após inclusão na mufla, era substituído por resina acrílica termicamente ativada pelo método de processamento convencional de base de dentadura. Como variáveis, usaram-se duas marcas de dentes, duas fases de inclusão (plástica e borrachóide) e aplicação ou não de detergente e monômero sobre os dentes. Os corpos-de-prova, antes dos ensaios de ruptura por tração, foram armazenados em água destilada, a 37ºC, por 2 semanas. Os resultados mostraram que: marca de dente e fase de condensação não influíram nos resultados; somente o uso de detergente ou de monômero aumenta a retentividade e o seu uso conjunto apresenta efeito acumulativo.

Influence of Different Base Thicknesses on Maxillary Complete Denture Processing: Linear and Angular Graphic Analysis on the Movement of Artificial Teeth

Objective: The purpose of this study was to compare the dental movement that occurs during the processing of maxillary complete dentures with 3 different base thicknesses, using 2 investment methods, and microwave polymerization.Methods: A sample of 42 denture models was randomly divided into 6 groups (n = 7), with base thicknesses of 1.25, 2.50, and 3.75 mm and gypsum or silicone flask investment. Points were demarcated on the distal surface of the second molars and on the back of the gypsum cast at the alveolar ridge level to allow linear and angular measurement using AutoCAD software. The data were subjected to analysis of variance with double factor, Tukey test and Fisher (post hoc).Results: Angular analysis of the varying methods and their interactions generated a statistical difference (P = 0.023) when the magnitudes of molar inclination were compared. Tooth movement was greater for thin-based prostheses, 1.25 mm (-0.234), versus thick 3.75 mm (0.2395), with antagonistic behavior. Prosthesis investment with silicone (0.053) showed greater vertical change compared with the gypsum investment (0.032). There was a difference between the point of analysis, demonstrating that the changes were not symmetric.Conclusions: All groups evaluated showed change in the position of artificial teeth after processing. The complete denture with a thin base (1.25 mm) and silicone investment showed the worst results, whereas intermediate thickness (2.50 mm) was demonstrated to be ideal for the denture base.

Optimization of cyclodextrin glucanotransferase production from Bacillus clausii E16 in submerged fermentation using response surface methodology

Cyclodextrin glucanotransferase production from Bacillus clausii E16, a new bacteria isolated from Brazilian soil samples was optimized in shake-flask cultures. A 2 4 full-factorial central composite design was performed to optimize the culture conditions, using a response surface methodology the combined effect among the soluble starch concentration, the peptone concentration, the yeast extract concentration, and the initial pH value of the culture medium was investigated. The optimum concentrations of the components, determined by a 2(4) full-factorial central composite design, were 13.4 g/L soluble starch, 4.9 g/L peptone, 5.9 g/L yeast extract, and initial pH 10.1. Under these optimized conditions, the maximum cyclodextrin glucanotransferase activity was 5.9 U/mL after a 48-h fermentation. This yield was 68% higher than that obtained when the microorganism was cultivated in basal culture medium.

Bacillus lehensis-an alkali-tolerant bacterium isolated from cassava starch wastewater: optimization of parameters for cyclodextrin glycosyltransferase production

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

The Use of Response Surface Methodology in Optimization of Lactic Acid Production: Focus on Medium Supplementation, Temperature and pH Control

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)