Clonagem e expressão da glicoproteína transmembrana do retrovírus HTLV-1 em células de mamíferos

The retrovirus HTLV-1 is the etiological agent of the adult T-cell leukemia and HTLV-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis. The proviral genome has 9,032 base pairs, showing regulatory and structural genes. The env gene encodes for the transmembrane glycoprotein gp 21. The development of methodologies for heterologous protein expression, as well as the acquisition of a cellular line that constituently expresses the recombinant, were the main goals of this work. The DNA fragment that encodes for gp 21 was amplified by nested-PCR and cloned into a pCR2.1-TOPO vector. After which, a sub-cloning was realized using the expressing vector pcDNA3.1+. The transfection of mammalian cells HEK 293 was performed transitorily and permanently. Production of the recombinant gp 21 was confirmed by flux cytometry experiments and the cell line producing protein will be used in immunogenicity assays.

Clonagem e expressão da glicoproteína transmembrana do vírus linfotrópico de células T humanas em sistema procarioto

HTLV-1 is the virus that causes T cell lymphoma/leukemia in adults and a neurological disorder known as HTLV-associated myelopathy or tropical spastic paraparesis. One of the transmission means is through contaminated blood and its byproducts. Because of the risk of HTLV-associated infections, screening for HTLV was introduced for Brazilian blood donors in 1993. Most of the diagnostic kits used in the national blood banks are bought from foreign companies. Brazil does not have the technology to produce this material and there is a need to produce diagnostic systems with national technology. In this study, we show the expression of gp21/HTLV-1 in Escherichia coli and its reactivity towards monoclonal antibodies and the antibodies of infected patients. Expressing these proteins is the first step towards obtaining diagnostic kits with Brazilian biotechnology.

Soroprevalência de HTLV/II, e fatores de risco, em gestantes do município de Botucatu atendidas em unidades básicas de saúde

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Increased salivary immunoglobulin A and reduced alpha-amylase activity in whole saliva from spastic cerebral palsy individuals

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Tomographic and radiographic aspects of an infiltrative mediastinal lymphoma in a domestic cat with acute paraparesis: case report

Lymphomas are malignant neoplasms resulting from clonal proliferations of lymphocytes, originated from lymphoid organs, but can develop in any organ by the migration of lymphocytes to the organ's tissue. Lymphoma constitutes one of the most common neoplasms in cats. Imaging techniques like radiology, ultrasound and tomography may help in diagnosing and classifying lymphomas. Our objective is to report the radiographic and tomographic characteristics of a mediastinal lymphoma in a cat, which occupied a large thoracic and abdominal area and infiltrated into the medullary canal causing acute paraparesis. The tomographic exam was essential for identifying the mass, its extension and its location, besides identifying how compromised the adjacent structures were, but the histopathological examination was crucial to diagnose the nature of the lesion.

Structure-function relationship of new crotamine isoform from the Crotalus durissus cascavella

In this work we isolated a novel crotamine like protein from the Crotalus durissus cascavella venom by combination of molecular exclusion and analytical reverse phase HPLC. Its primary structure was:YKRCHKKGGHCFPKEKICLPPSSDLGKMDCRWKRK-CCKKGS GK. This protein showed a molecular mass of 4892.89 da that was determined by Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. The approximately pI value of this protein was determined in 9.9 by two-dimensional electrophoresis. This crotamine-like protein isolated here and that named as Cro 2 produced skeletal muscle spasm and spastic paralysis in mice similarly to other crotamines like proteins. Cro 2 did not modify the insulin secretion at low glucose concentration (2.8 and 5.6 mM), but at high glucose concentration (16.7 mM) we observed an insulin secretion increasing of 2.7-3.0-fold than to control. The Na+ channel antagonist tetrodoxin (6 mM) decreased glucose and Cro 2-induced insulin secretion. These results suggested that Na+ channel are involved in the insulin secretion. In this article, we also purified some peptide fragment from the treatment of reduced and carboxymethylated Cro 2 (RC-Cro 2) with cyanogen bromide and protease V8 from Staphylococcus aureus. The isolated pancreatic beta-cells were then treated with peptides only at high glucose concentration (16.7 mM), in this condition only two peptides induced insulin secretion. The amino acid sequence homology analysis of the whole crotamine as well as the biologically-active peptide allowed determining the consensus region of the biologically-active crotamine responsible for insulin secretion was KGGHCFPKE and DCRWKWKCCKKGSG.

The extract of the jellyfish Phyllorhiza punctata promotes neurotoxic effects

Phyllorhiza punctata (P. punctata) is a jellyfish native to the southwestern Pacific. Herewith we present the biochemical and pharmacological characterization of an extract of the tentacles of P. punctata. The tentacles were subjected to three freezethaw cycles, homogenized, ultrafiltered, precipitated, centrifuged and lyophilized to obtain a crude extract (PHY-N). Paralytic shellfish poisoning compounds such as saxitoxin, gonyautoxin-4, tetrodotoxin and brevetoxin-2, as well as several secretory phospholipase A2 were identified. PHY-N was tested on autonomic and somatic neuromuscular preparations. In mouse vas deferens, PHY-N induced phasic contractions that reached a peak of 234 +/- 34.7% of control twitch height, which were blocked with either 100 mu m of phentolamine or 1m m of lidocaine. In mouse corpora cavernosa, PHY-N evoked a relaxation response, which was blocked with either L-NG-Nitroarginine methyl ester (0.5 m m) or 1m m of lidocaine. PHY-N (1, 3 and 10 mu g ml(-1)) induced an increase in tonus of the biventercervicis neuromuscular preparation that was blocked with pre-treatment of galamine (10 mu m). Administration of 6 mg kg(-1) PHY-N intramuscularly produced death in broilers by spastic paralysis. In conclusion, PHY-N induces nerve depolarization and nonspecifically increases neurotransmitter release. Copyright (C) 2011 John Wiley & Sons, Ltd.

The surface electromyography analysis of the non-plegic upper limb of hemiplegic subjects

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Textura do recurso pedagógico e implicações em atividade de encaixe realizada por indivíduos com paralisia cerebral

O estudo teve o propósito de verificar a influência da textura do recurso pedagógico no tempo despendido e no índice de retidão para execução de uma atividade de encaixe realizada por indivíduos com paralisia cerebral. Participaram do estudo 6 alunos com sequelas de paralisia cerebral do tipo espástica, com idade entre 7 anos e 8 meses e 28 anos e 1 mês. O participante deveria segurar o objeto e levá-lo a um ponto demarcado previamente para o encaixe e, após, retorná-lo à posição inicial. O objeto foi apresentado nas texturas lisa, intermediária e áspera, de forma aleatória. Para a coleta de dados, foi utilizada filmagem para posterior leitura pelo programa Kavideo, que possibilitou cálculos para observar o tempo despendido na tarefa e o índice de retidão. Foi realizado o estudo da normalidade das distribuições, verificada por meio do teste de normalidade de Kolmogorov-Smirnov (Teste KS) e a comparação entre as texturas lisa, intermediária e áspera, no movimento de encaixe, por meio da análise de variância de medidas repetidas. Adotou-se para todos os testes nível de significância de 5% de probabilidade para a rejeição da hipótese de normalidade. O resultado do teste de análise de variância de medidas repetidas mostrou que não houve significância para as variáveis estudadas com o recurso apresentado nas três texturas. Porém, os dados da estatística descritiva mostraram que o encaixe do recurso com a textura lisa despendeu um menor tempo para execução da tarefa e, também, determinou um melhor desempenho com relação à trajetória do movimento.

Análise do equilíbrio estático e de deformidades nos pés de crianças com paralisia cerebral

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do assento da cadeira adaptada na execução de uma tarefa de manuseio

Este estudo teve como objetivo verificar a influência da flexibilidade da superfície de assento da cadeira na velocidade e no tempo despendido por alunos com paralisia cerebral espástica durante a execução de uma tarefa de manuseio de um objeto na posição sentada. Participaram do estudo 11 alunos, de ambos os gêneros, com diagnóstico de paralisia cerebral espástica, que tinham algum controle de tronco e membros superiores. A quantificação da análise cinemática foi realizada em duas situações experimentais: 1) execução de uma tarefa acadêmica de encaixe, com o indivíduo posicionado em um mobiliário adaptado com assento de lona; 2) execução de uma tarefa acadêmica de encaixe, com o participante posicionado em um mobiliário adaptado com assento de madeira. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística descritiva e não-paramétrica por meio do teste de Wilcoxon. Os resultados indicaram que: 1) a velocidade média de execução das tarefas não foi influenciada pelo tipo de assento utilizado 2) o tempo de execução da tarefa foi influenciada pelo tipo de assento utilizado. A utilização do assento de lona aumentou o tempo de realização da tarefa. Conclui-se que o assento de um mobiliário escolar para um aluno com paralisia cerebral espástica não deve ser confeccionado com um material muito flexível. Este tipo de assento fornecerá uma base instável que dificultará o desempenho do aluno durante atividades realizadas com os membros superiores.

Tratamento médico e fonoaudiológico da disfonia espasmódica: uma revisão bibliográfica

A disfonia espasmódica (DE) é um distúrbio vocal caracterizado por voz tensa-estrangulada, com quebras de sonoridade e que compromete a comunicação do indivíduo. O objetivo deste estudo é apresentar uma revisão bibliográfica dos tratamentos médico e fonoaudiológico proposto para a DE no período entre 2006 e 2010. Os tratamentos descritos foram: injeção de toxina botulínica (TB), miectomia, neurectomia, denervação e reinervação laríngea seletiva adutora, tireoplastia, miotermia tiroaritenóidea com radiofrequência, injeção de lidocaína, homeopatia e tratamento fonoaudiológico (fonoterapia). O uso de injeção de TB mostrou resultados que indicaram a satisfação dos pacientes tratados, embora alguns dos artigos apontassem a necessidade de reaplicação da toxina frequentemente, como desvantagem. Os procedimentos cirúrgicos foram considerados duradouros e indicados para os pacientes que não quiseram se submeter às aplicações de TB. Tais estudos, no entanto, apresentaram contingência de pacientes restrita e os resultados foram baseados, na maioria das investigações, no julgamento dos próprios pacientes sobre a sua qualidade vocal. Os tratamentos, com uso de lidocaína e homeopatia, mostraram resultados positivos em relação à qualidade vocal dos pacientes e foram sugeridos como uma opção, também, para aqueles que não gostariam de ser submetidos ao tratamento cirúrgico ou à aplicação de TB. Os poucos estudos que reportam fonoterapia assinalaram bons resultados quando a mesma foi associada à injeção de TB, mostrando a escassez de informações nesta área. Futuras pesquisas envolvendo a fonoterapia no tratamento da DE são necessárias.

Quantitative comparison of mobility and gross motor function in Brazilian children with cerebral palsy

Background: Cerebral palsy (CP) presents changes in posture and movement as a core characteristic, which requires therapeutic monitoring during the habilitation or rehabilitation of children. Besides clinical treatment, it is fundamental that professionals use systems of evaluation to quantify the difficulties presented to the individual and assist in the organization of a therapeutic program. The aim of this study was to quantitatively verify the performance of children with spastic di-paresia type CP.Methods: The Pediatric Evaluation of Disability Inventory (PEDI) and Gross Motor Function Classification System (GMFM) tests were used and classification made through the GMFCS in the assessment of 7 patients with CP, 4 females and 3 males, average age of 9 years old.Results: According to GMFCS scales, 17% (n=1) were level II and 83% (n=6) were level III. The PEDI test and 88 GMFM items were used in the area of mobility. We observed that there was high correlation between mobility and gross motor function with Pearson's correlation coefficient =0.929) showing the likely impact of these areas in the functional skills and the quality of life of these patients.Conclusion: We suggest the impact of the limitation of the areas in functional skills and quality of life of these patients.

Neurocisticercose e síndrome de lennox-gastaut: relato de caso

Relata-se o caso de uma menina que, aos 2 anos de idade, apresentou a forma epiléptica, hidrocefálica e encefalítica da neurocisticercose, diagnosticada por exame do líquido cefalorraqueano e tomografia computadorizada de crânio, evolução com crises polimórficas, episódios de descompensação da hipertensão intracraniana por obstrução do sistema de derivação ventriculoperitoneal, retardo no desenvolvimento neuropsicomotor e cegueira até que, aos 10 anos de idade, foi diagnosticada síndrome de Lennox-Gastaut. Atualmente, a paciente tem 16 anos, apresenta sequelas neurológicas e crises parciais complexas com automatismos, parcialmente controladas com o uso de clobazan e oxcarbazepina. A primeira associação de neurocisticercose e síndrome de Lennox-Gastaut foi descrita em 1973, por Frochtengarten & Scarante, em uma menina com quadro clínico semelhante ao do caso relatado.