Modes of cell death in the hypopharyngeal gland of the honey bee (Apis mellifera L)

Different modes of cell death have been revealed in the regressing hypopharyngeal glands of worker honey bees. The hypopharyngeal gland, which is well developed in young nursing bees to produce protein for larval food, was seen to regress naturally in foraging adult worker bees. A range of techniques including histology, cytochemistry, in situ TUNEL, Annexin V and Comet assays indicated that cells within the gland demonstrate progressive symptoms of apoptosis, necrosis and a vacuolar form of programmed cell death. The latter mode of cell death did not display chromatin margination, but was accompanied by an enhanced level of autophagic and hydrolytic activity in which a cytosolic source of acid phosphatase became manifest in the extra-cisternal spaces. Normal and annexin-positive cells were found to occur in the younger nursing bees, whilst necrosis and an aberrant vacuolar type of apoptosis predominated in the older foraging bees. The relevance of these results to the classification of programmed cell death is discussed. (C) 2000 Academic Press.

Snake Venomic of Crotalus durissus terrificus-Correlation with Pharmacological Activities

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Snake venomics of the Siamese Russell's viper (Daboia russelli siamensis) - Relation to pharmacological activities

The venom proteome of Daboia russelli siamensis, a snake of medical importance in several Asian countries, was analysed by 2-D electrophoresis, subsequent MS/MS and enzymatic assays. The proteome comprises toxins from six protein families: serine proteinases, metalloproteinases, phospholipases A(2), L-amino acid oxidases, vascular endothelial growth factors and C-type lectin-like proteins. The venom toxin composition correlates with the clinical manifestation of the Russell's viper bite and explains pathological effects of the venom such as coagulopathy, oedema, hypotensive, necrotic and tissue damaging effects. The vast majority of toxins are potentially involved in coagulopathy and neurotoxic effects. The predominant venom components are proteinases capable of activating blood coagulation factors and promoting a rapid clotting of the blood, and neurotoxic phospholipase A(2)s. The analysis of the venom protein composition provides a catalogue of secreted toxins. The proteome of D. r. siamensis exhibits a lower level of toxin diversity than the proteomes of other viperid snakes. In comparison to the venoms of Vipera ammodytes ammodytes and Vipera ammodytes meridionalis, the venom from D. r. siamensis showed quantitative differences in the proteolytic, phospholipase A2, L-amino acid oxidase and alkaline phosphatase activities. (c) 2009 Published by Elsevier B.V.

Alkyl Hydroxybenzoic Acid Derivatives that Inhibit HIV-1 Protease Dimerization

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação de mutagenicidade e antimutagenicidade de diferentes frações de Pterogyne nitens (Leguminosae), utilizando ensaio de micronúcleo em Tradescantia pallida

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Dinâmica do herbicida amicarbazone (Dinamic) aplicado sobre palha de cana-de-açúcar (Saccarum officinarum)

O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica do herbicida amicarbazone (Dinamic) aplicado sobre palha de cana-de-açúcar deixada sobre o solo, em sistema de cana crua. Três ensaios foram realizados para avaliar a dinâmica desse herbicida aplicado sobre diferentes quantidades de palha de cana-de-açúcar, em diferentes intervalos de tempo e volumes de simulação de chuvas após aplicação do herbicida. No primeiro ensaio, foi avaliada a interceptação do herbicida por 0, 1, 2,5, 5, 7,5, 10, 15 e 20 t de palha de cana-de-açúcar ha-1. A lixiviação do herbicida em 5, 10, 15 e 20 t de palha ha-1 foi avaliada sob simulação de chuva de 2,5, 5, 10, 15, 20, 35 e 65 mm, um dia após a aplicação (DAPC) do segundo ensaio. As chuvas foram acumulativas, aplicando-se de 2,5 em 2,5 mm. No terceiro ensaio, foi avaliado o efeito dos intervalos de tempo entre a aplicação do herbicida e a primeira chuva na lixiviação do herbicida Dinamic (0, 1, 7, 15 e 30 dias) em 10 t de palha ha-1, em função das mesmas precipitações simuladas no segundo ensaio. Nos segundo e terceiro ensaios foi realizada uma simulação de 20 mm em intensidade de 115 mm h-¹ aos 7 e 14 dias após as primeiras chuvas (DAPC). Os resultados obtidos no segundo e terceiro ensaios foram ajustados pelo modelo de Mitscherlich (Y = a * (1-10-c * (b + x))). A quantificação do herbicida foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Quantidades de palha iguais ou superiores a 5 t ha-1 apresentam interceptação quase que total do herbicida no momento da aplicação, sendo nula a transposição. Com o aumento da quantidade de palha, ocorreu diminuição na quantidade de herbicida lixiviado pela ação da chuva simulada, principalmente para valores de 15 e 20 t de palha de cana-de-açúcar ha-1. Quanto maior o intervalo de tempo entre a aplicação do herbicida e a primeira chuva, menor é a lixiviação total do produto. em relação às chuvas aos 7 e 14 DAPC, no segundo e terceiro ensaios, foram observadas pequenas quantidades extraídas do herbicida, considerando-se que grande parte do amicarbazone foi lixiviada com as primeiras chuvas, que indicaram que os primeiros 20 mm de chuva simulada foram importantes para lixiviação da maior parte do amicarbazone (Dinamic) retido pela palha no momento da aplicação.

Avaliação da atividade anti-séptica de extrato seco de Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville e de preparação cosmética contendo este extrato

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Resíduos da agroindústria de chá preto como substrato para produção de mudas de hortaliças

O objetivo do trabalho foi determinar o efeito do resíduo do chá preto como substrato na produção de mudas de alface, tomate e pepino. Para tal, foram conduzidos testes de germinação e ensaios de crescimento empregando, respectivamente, extrato aquoso e diferentes tipos de resíduo. Nos testes de germinação, sementes de alface, tomate e pepino foram colocadas em bandejas sobre papel de filtro umedecido com água ou extrato aquoso na concentração de 1, 5 e 10%. Nos ensaios de crescimento, sementes das mesmas espécies foram colocadas em bandejas contendo: 1. vermiculita; 2. resíduo decomposto mais vermiculita; 3. resíduo decomposto e 4. resíduo bruto lavado mais vermiculita. O resíduo decomposto foi obtido após processo de decomposição do resíduo bruto e o resíduo bruto lavado foi obtido a partir da lavagem do resíduo bruto em água. Nos testes de germinação e ensaios de crescimento, foi adotado o delineamento experimental inteiramente casualizado com quatro tratamentos e quatro repetições com 30 sementes cada. Os resultados indicaram que o extrato aquoso inibiu a germinação das sementes e o crescimento das plântulas de alface, tomate e penino. O uso do resíduo bruto lavado mais vermiculita reduziu a emergência das plântulas. O resíduo decomposto e o resíduo decomposto mais vermiculita estimularam a emergência e o crescimento das plântulas. O processo de decomposição tornou viável a utilização do resíduo da indústria de chá preto como substrato para produção de mudas de hortaliças.

Avaliação do potencial alelopático, atividade antimicrobiana e antioxidante dos extratos orgânicos das folhas de Pyrostegia venusta (Ker Gawl.) Miers (Bignoniaceae)

Este trabalho apresenta os resultados de atividade alelopática, antimicrobiana e antioxidante dos extratos orgânicos (hexano, acetato de etila e metanol) das folhas de Pyrostegia venusta (Ker Gawl.) Miers (Bignoniaceae). Para alelopatia, foi estudado o desenvolvimento de Cucumis sativus (pepino), sendo avaliados o comprimento da raiz principal, o número de raízes secundárias e o comprimento do hipocótilo. Os dois primeiros parâmetros foram afetados por todos os três extratos testados enquanto o comprimento do hipocótilo só não foi afetado pelo extrato acetato de etila. Quanto à atividade antimicrobiana, avaliada pelo ensaio de CIM, o extrato hexânico apresentou inibição moderada frente ao Staphylococcus aureus (0,9 mg mL-1) e forte ao Enterococcus hirae (0,5 mg mL-1). O extrato acetato de etila apresentou forte atividade frente Candida albicans (0,3 mg mL-1) enquanto o extrato metanólico não mostrou-se ativo para os microrganismos testados. Por outro lado, o extrato metanólico apresentou a maior capacidade de seqüestrar radicais livres (Concentração Efetiva 50%-CE50 =102,0 ± 56,9 mg mL-1, com TCE50 = 30 min) no ensaio com DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazila) e o maior teor de compostos fenólicos (116,2 ± 83,0 mg ácido gálico g amostra-1), avaliado pelo ensaio de Folin-Ciocalteau.

Estudo Comparativo de Três Diferentes Modalidades de Elisa para Medir os Anticorpos Contra o Vírus da Bronquite Infecciosa em Frangos Vacinados e Não Vacinados

No presente estudo, foram vacinados 150 frangos de corte de um dia de idade com sorotipo H120, e, após 28 dias desafiados à vacinação com o sorotipo M 41 do vírus da bronquite infecciosa das aves. da mesma forma, foram obtidos 150 soros de aves não vacinadas para a análise. Os respectivos soros foram analisados 28, 34 e 46 dias após o desafio, examinados através das técnicas de ELISA indireto (ELISA-I), Sandwich ELISA (S-ELISA) e ELISA com bloqueio de fase líquida (ELISA-BFL) e comparados com a técnica padrão de soroneutralização (SN) para efeito de cálculo da especificidade e sensibilidade relativas, bem como os valores predictivos positivos e negativos. O cálculo do coeficiente de correlação também foi empregado para a análise de concordância. Assim, os valores da correlação encontrados foram r = 0.98 entre ELISA-BFL x SNT, r = 0.79 entre S-ELISA x SNT e r = 0.74 ELISA-I x SNT. No entanto, quando comparamos as técnicas de ELISA entre si, ELISA-BFL x S-ELISA, ELISA-BFL x ELISA-I e S-ELISA x ELISA-I os valores encontrados foram r = 0.75, r = 0.69 e r = 0.79. A técnica de ELISA-BFL demonstrou melhor sensibilidade relativa que as técnicas de S-ELISA e ELISA-I, mesmo 46 dias após o desafio com a estirpe heteróloga. Entretanto, apesar das técnicas de S-ELISA e ELISA-I apresentarem especificidade realtiva superiores, a melhor correlação observada foi entre as técnicas de ELISA-BFL e a SN.

Secretion of metalloendopeptidase 24.15 (EC 3.4.24.15)

The metalloendopeptidase EP24.15 (EC3.4.24.15) is a neuropeptide-metabolizing enzyme present in neural and endocrine tissues, presumably functioning extracellularly, Because the majority of the EP24.15 activity is identified in the soluble fraction of cellular homogenates, suggesting that the enzyme is primarily an intracellular protein, we addressed the issue of how EP24.15 arrives in the extracellular environment, We utilized a model system of neuroendocrine secretion, the AtT20 cell, According to both enzymatic activity and immunologic assays, EP24.15 was synthesized in and released from AtT20 cells. Under basal conditions and after stimulation by corticotropin-releasing hormone or the calcium ionophore A23187, EP24.15 activity accumulated in the culture medium. This secretion was not attributable to cell damage, as judged by the absence of release of cytosolic enzyme markers and the ability to exclude trypan blue dye. Pulse-chase analysis and subcellular fractionation of AtT20 cell extracts suggested that the mechanism of EP24.15 secretion is not solely via classical secretory pathways, Additionally, drugs which disrupt the classical secretory pathway, such as Brefeldin A and nocodazole, blocked A23187-stimulated EP24.15 release yet had no effect on basal EP24.15 release, suggesting differences in the basal and stimulated pathways of secretion for EP24.15. In summary, EP24.15 appears to be secreted from AtT20 pituitary cells into the extracellular milieu, where the enzyme can participate in the physiologic metabolism of neuropeptides.

Testing transposable elements as genetic drive mechanisms using Drosophila P element constructs as a model system

The use of transposable elements (TEs) as genetic drive mechanisms was explored using Drosophila melanogaster as a model system. Alternative strategies, employing autonomous and nonautonomous P element constructs were compared for their efficiency in driving the ry(+) allele into populations homozygous for a ry(-) allele at the genomic rosy locus. Transformed flies were introduced at 1%, 5%, and 10% starting frequencies to establish a series of populations that were monitored over the course of 40 generations, using both phenotypic and molecular assays. The transposon-borne ry(+) marker allele spread rapidly in almost all populations when introduced at 5% and 10% seed frequencies, but 1% introductions frequently failed to become established. A similar initial rapid increase in frequency of the ry(+) transposon occurred in several control populations lacking a source of transposase. Constructs carrying ry(+) markers also increased to moderate frequencies in the absence of selection on the marker. The results of Southern and in situ hybridization studies indicated a strong inverse relationship between the degree of conservation of construct integrity and transposition frequency. These finding have relevance to possible future applications of transposons as genetic drive mechanisms.

PLANT-TO-SEED TRANSMISSION of CURTOBACTERIUM FLACCUMFACIENS pv. FLACCUMACIENS IN A DRY BEAN CULTIVAR

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Non-mutagenic or genotoxic effects of medicinal aqueous extracts from the Agaricus blazei mushroom in V79 cells

Agaricus blazei Murill is a mushroom largely consumed due to its medicinal properties. Effects of aqueous extract from its lineage AB97/11 in 2 fruiting body development stages (closed and opened pileus) were evaluated on chinese hamster V79 cells using cytokinesis blocking micronucleus (CBMN) and comet assays. The cells were treated at 0.15% concentration of aqueous extract prepared at different temperatures: ice-cold (4°C), room temperature (21°C) and warm (60°C). The extracts were applied in mutagenicity and antimutagenicity protocols (simultaneous, pre-incubation and continuous). The results showed that the aqueous extracts of Agaricus blazei lineage AB97/11 obtained at the 3 temperatures and both development stages did not present mutagenic or antimutagenic effect in V79 cells either in CBMN or comet assay.

Breve revisão de métodos de determinação de resíduos do herbicida á cido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)

This paper supplies a revision about the main techniques of extraction, clean-up and pre-concentration of the herbicide 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) in water and soil samples, as well as chromatographic methods and immune assays for its identification and quantification.