Comparação da sensibilidade da técnica parasitológica (OPG) e da PCR para o diagnóstico de Strongyloides venezuelensis em fezes de ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Lewis infectados experimentalmente

Espécies do gênero Strongyloides são importantes parasitas de humanos e animais domésticos e aquelas que parasitam roedores são freqüentemente utilizadas como modelos experimentais para o estudo da estrongiloidíase. S. venezuelensis parasita ratos (Rattus norvegicus) e seu estudo tem permitido o entendimento de mecanismos imunológicos envolvidos na relação parasita–hospedeiro da estrongiloidíase humana e animal. O diagnóstico parasitológico de S. venezuelensis pode ser realizado pela detecção de ovos embrionados nas fezes, com o uso do OPG (ovos por grama de fezes), também empregado no monitoramento da infecção. Entretanto, essa técnica se mostra pouco sensível quando a carga parasitária é leve. Os métodos moleculares aumentam a sensibilidade e a especificidade das análises. A PCR tem se mostrado como uma técnica sensível e precisa na detecção de parasitas em tecidos e fezes de hospedeiros infectados. A fim de comparar a sensibilidade das técnicas de OPG e PCR em ratos Lewis infectados por S. venezuelensis, foram realizados dois protocolos no presente estudo. No Protocolo I foi comparada a sensibilidade das duas técnicas em amostras de ratos Lewis com diferentes cargas parasitárias. A PCR com o emprego par de primers descrito por Dorris et al. (2002) obteve melhores resultados que o OPG nos grupos inoculados com 40 L3, considerada como infecção leve. Entretanto, não foi verificada diferença estatística significativa entre as técnicas (P>0,05), provavelmente por terem sido utilizados poucos animais (n=10). O outro par de primers utilizado foi desenhado a partir de uma seqüência parcial do gene do rDNA de S. venezuelensis e não foi capaz de detectar a presença do DNA do helminto em nenhuma amostra desse grupo. Já nos grupos inoculados com 400 e 4000 L3, tanto a PCR com...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Identificação molecular e genotipagem pela técnica de Spoligotyping de Mycobacterium tuberculosis isolado da população indígena e não-indígena no Mato Grosso do Sul (MS)

O presente trabalho baseou-se na análise de amostras de isolados de M. tuberculosis provenientes da população indígena e não indígena do Mato Grosso do Sul. As análises foram feitas basicamente por três técnicas de Biologia Molecular: PCR-IS6110 e PRA (para identificação) e Spoligotyping (para genotipagem), ressaltando que somente as amostras negativas para PCR-IS6110 foram submetidas ao PRA. Os objetivos do estudo eram: confirmar por técnicas moleculares de PCR e de PRA a identificação do complexo M. tuberculosis e de outras micobactérias, após o descongelamento e cultivo, analisar a incidência de isolados de M. tuberculosis da região do Mato Grosso do Sul que não tem o IS6110, avaliar a incidência de outras micobactérias entre a população indígena e não indígena do Mato Grosso do Sul, agrupar em famílias, por similaridade epidemiológica os isolados de M. tuberculosis procedentes da população indígena e não indígena com TB e avaliar a presença efetiva de grupos genéticos predominantes; Pela técnica de PCR-IS6110, analisamos um total de 119 isolados clínicos, sendo que apenas 6 apresentaram negatividade, sendo assim submetidos à técnica do PRA. Feito isso, também apresentaram resultado positivo para CMTB, nos permitindo concluir que essas técnicas podem se tornar ferramentas de grande valia no diagnóstico rápido da TB. Pela técnica de genotipagem do Spoligotyping foram analisadas 97 amostras e foi constatado um maciço predomínio da família LAM, principalmente da subfamília LAM 9, representados por 4 SITs, sendo SIT 42 com 44 isolados e SITs 177, 1337 e 1075 com respectivamente 4, 2 e 1 isolados cada (essa subfamília representou 52,6% do total de isolados). Outras famílias, tais como T, H e U também estiveram presentes no estudo em menores proporções

Análise citogenética e investigação molecular do gene RASSF1A em indivíduos com síndrome mielodisplásica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Aplicação de conjugado de microesferas de poliestireno para preparo de RNA no diagnóstico da cinomose canina por RT-qPCR

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Análise da relevância clínica da classificação histológica dos carcinomas de mama de tipos lobular e ductal e sua relação com a classificação molecular

Pós-graduação em Patologia - FMB

Diagnóstico genético pré-implantacional de embriões equinos

O diagnóstico genético pré-implantacional de embriões equinos já é uma realidade nos Estados Unidos e Argentina. Embora o Brasil seja líder mundial de transferência de embriões equinos, essa tecnlogia ainda está em fase de desenvolvimento, com poucos grupos atuando nessa área no país. O objetivo do presente projeto foi desenvolver a metodologia de micromanipulação e identificação do sexo de embriões equinos a campo. Dessa forma, selecionamos sequências específicas para padronização laboratorial dos ensaios de PCR com amostras de DNA da espécie equina. Os primers que apresentaram maior sensibilidade foram selecionados para a realização da PCR em biópsias embrionárias. Além das análises de biologia molecular, foi desenvolvida a técnica de micromanipulação de embriões equinos. Foram realizadas 105 biópsias de embriões pela técnica de microaspiração, permitindo a identificação do sexo pela técnica de WGA (Whole Genome Amplification) e posteriormente PCR seguido de eletroforese. Os embriões sexados foram transferidos para receptoras sincronizadas, permitindo a avaliação da taxa de concepção dos embriões submetidos à biópsia. Além disso, um embrião foi biopsiado, vitrificado e sexado. Após a identificação do sexo (fêmea) o embrião foi desvitrificado e transferido em receptora criteriosamente selecionada, resultando em prenhez

Patógenos periodontais: comparação entre cultura bacteriana e PCR em tempo real para teste diagnóstico

The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning. Considering this fact, some molecular methods of identification and quantification were developed and are extremely sensitive and precise in the characterization of different bacteria species. The present study aimed to realize a literature review, including studies that realized a comparative analysis between bacterial culture and real time PCR methods in the identification of pathogens. The bacterial culture method can possibly identify new microorganisms and realize antibiotics sensitivity tests. The real time PCR is a microbiologic test that identifies and quantifies bacterial species, through gene amplification of predetermined DNA fragments, with high sensitivity and specificity, and need a shorter operation time of the operator when compared to the bacterial culture method. In this way, to determine a specific diagnostic test, should be considered not only its precision in the identification of microorganisms, but the cost-benefit relationship as well.

Determinação molecular da viabilidade do Mycobacterium leprae: uma comparação com outras abordagens metodológicas

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Sarcoma histiocítico: análise molecular pela técnica de hibridação genômica comparativa, microRNA e imunoistoquímica

Pós-graduação em Patologia - FMB

Detecção molecular do rearranjo Line-1 /c-Myc em tumores venéreos transmissíveis caninos espôntaneos

Transmissible venereal tumor (TVT) is a neoplasia that develops naturally in dogs. It can be easily transplanted, which demonstrates its ability to spread from animal to animal. Since the Linr-1/c-MYC rearrangement in TVT cells had not been studied at the Veterinary Hospital of the Veterinary School, Unesp in Botucatu, SP, this study aimed to detect this genetic alteration specific to this kind of tumor by means of the polymerase chain reaction (PCR). Twenty dogs with cytological diagnosis of TVT were used. Samples of neoplastic cells were collected to determine the presence of the Line-1/c-MYC marker. The rearrangement characterized by 340bp amplicons did not vary, in agreement with previous studies using the same methodology. This contributed to a more precise identification of persistent tumor cells in cases in which gross or microscopical detection was not possible.

Detecção molecular de Ehrlichia canis em cães e em órgãos de seus respectivos carrapatos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Análise molecular de pacientes com holoprosencefalia

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)