A coordenação motora de indivíduos com Transtorno do Desenvolvimento da Coordenação (TDC): o ritmo em foco

The aim of the present study was to examine tapping synchronization in children with and without Developmental Coordination Disorder (DCD). Participants were 27 children from which 13 diagnosed with motor difficulties composed the DCD group and 14 children with typical development (TD) the comparison group. The experimental task consisted of performing 25 continuous tapping on a surface of an electronic drum with the preferred hand. Participants were required to tap in synchrony with an auditory bip generated by customized software. Three interval values the tapping task were tested: 470 ms, 1000 ms, 1530 ms. The dependent variables were constant error (CE) and absolute error (AE) and standard deviation of absolute error (SD of AE). The ANOVA 2 x 3 x 3 (Group X Age x Interval) with repeated measures in the last factor for the CE indicated significant interaction among Group X Age X Interval. For the AE and SD of AE the ANOVAs yielded significant main effect of Interval and a significant interaction between Group X Interval. The results of the present study indicated that children with DCD were less accurate and more variable in the tapping synchronization than children with TD. Differences in performance between DCD and children with TD become larger as the interval of the auditory signal increases.

Avaliação da expressão gênica de MMPs e TIMPs modulados por RECK e SPARC durante o desenvolvimento ovariano e a foliculogênese em ratas

O remodelamento da matriz extracelular (MEC), um importante componente dos organismos multicelulares, relaciona-se diretamente com o desenvolvimento embrionário, a angiogênese, a morfogênese de órgãos e a formação de cartilagens. Especificamente nos ovários, este remodelamento permite a ocorrência dos diversos eventos observados no ciclo ovariano, a citar: o crescimento folicular, a ovulação e a formação e regressão do corpo lúteo. A reorganização tecidual advinda destes eventos é regulada, em parte, pela ação de enzimas proteolíticas conhecidas como metaloproteinases de matriz (MMPs) e de seus inibidores (TIMPs e RECK) (revisado por Curry et al., 2003). Atualmente, o remodelamento da MEC pelo sistema MMPs/TIMPs é fortemente correlacionado com a expressão de alguns genes, tais como o gene Basigin (BSG), que induz a expressão de MMPs durante o ciclo ovariano em ratos (Smedts et al., 2005), ou o gene SPARC, que modula a expressão do TGF-β, fator de crescimento este associado ao aumento da agressividade tumoral (Podhajcer et al., 2008). A expressão do gene RECK foi descrita em diversos processos de remodelamento tecidual fisiológicos. Porém, uma diminuição em sua expressão, juntamente com o aumento na expressão das MMPs, tem sido associada com tumores mais agressivos e metastáticos (Meng et al., 2008). No entanto, apesar de RECK e SPARC estarem amplamente associados com remodelamento tecidual em diversas patologias, ainda não foi descrita a associação destes com remodelamento tecidual promovido pelo sistema MMPs/TIMPs que ocorre naturalmente durante a dinâmica ovariana. Considerando este quadro, o trabalho aqui proposto tem por objetivo analisar a expressão gênica de algumas MMPs- (-2, -9, -13, -14 e -19), e alguns de seus inibidores (TIMPs -1, -2, e -3 e RECK) e correlacioná-la com a expressão de SPARC e BSG durante a foliculogênese ovariana de ratas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Expressão do mRNA do gene Capn 2 e índice de apoptose de ilhotas pancreáticas de rato tratadas com fibrilas de amilina e com oligômeros de amilina de tamanho intermediário

O depósito de amilina é um achado histopatológico freqüente em pacientes portadores de diabetes melito tipo 2 (DM 2) e parece estar relacionado à disfunção da célula beta pancreática característica desta doença. Apenas as moléculas de amilina que sofrem agregação in vivo, tal como a amilina humana, são citotóxicas para as células beta, enquanto as variedades não agregantes, como a amilina de rato, não apresentam efeito deletério. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos de toxicidade associados à forma agregante da amilina, um projeto em andamento em nosso laboratório estudou, por micro-arranjos de cDNA, o perfil de genes modulados pela amilina humana em ilhotas pancreáticas murídeas, comparando duas situações específicas: ilhotas tratadas com fibrilas de amilina (“amilina madura”) e ilhotas tratadas com oligômeros de tamanho intermediário (“amilina fresca”), já que evidências recentes apontam para um efeito deletério apenas de oligômeros de amilina. As ilhotas foram isoladas a partir de ratos Wistar, mantidas em cultura por 24 horas e a seguir tratadas com 10

Antidepressivo em ratos com insuficiência aórtica pode modificar a expressão gênica de ocitocina e vasopressina centrais?

Aortic regurgitation (AR) leads to a left ventricle dilation and hypertrophy in response to a chronic volume overload. It is still very frequent in developing countries, for instance Brazil, and often as secondary to rheumatic fever. Usually, chronic AR is generally well tolerated for many years, when with the heart dilated the patient searches for treatment. Bidirectional association with depression and cardiovascular disease has been described. Selective serotonin reuptake inhibitors (SSRI) are widely prescribed to treat several affective disorders, especially for cardiovascular patients since they decrease arrhythmia probability. These SSRI improves cardiac function in rats submitted to stress protocols. Preliminary study from our laboratory showed that following 4 weeks of treatment with one SSRI (paroxetine) in subchronic AR rats there was a decreased in daily sodium intake and an improvement in systolic function. An increase in the central oxytocinergic transmission may be involved in this peripheral improvement to the heart. The investigations about the mechanisms underlying this improvement are necessary. Therefore the aims of this project is investigate the effects of 4 weeks of treatment of paroxetine, a SSRI, in rats with a subchronic AR over the central central gene expression of oxytocin and vasopressin using a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)

Clonagem, expressão e purificação de três mutantes truncados da proteína LaRPA-1 de Leishmania amazonensis

A leishmaniose é uma doença que atinge milhões de pessoas no mundo e, de acordo com a FUNASA, está se espalhando por todas as regiões do Brasil. O tratamento desta zoonose é ineficaz, pois os fármacos utilizados apresentam muitos efeitos colaterais e colaboram com o aparecimento de parasitas e vetores resistentes. Portanto um maior conhecimento sobre a biologia molecular destes protozoários poderá facilitar o descobrimento de novas terapias e desenvolvimento de drogas antiparasitárias. O complexo telomérico é formado pela interação de DNA com proteínas, sendo que estas últimas podem também interagir entre si. A proteína RPA de eucariotos compreende um complexo trimérico subdividido em três subunidades. Este cumpre independentemente ou juntamente com outras proteínas diversas funções vitais para a célula, entre elas, auxiliar na manutenção dos telômeros e ajudar a recrutar a telomerase. Além disso, ela parece ser um dos principais componentes do complexo de proteínas que interagem com o terminal simples fita telomérico de protozoários tripanosomatídeos. Curiosamente, em Leishmania spp., as subunidades 2 e 3, ao contrário da subunidade 1 da RPA, não fazem parte do complexo telomérico. Portanto a LaRPA-1 pode apresentar comportamentos peculiares quando comparada a RPA dos outros eucariotos, e se tornar um importante alvo ao se estudar a biologia molecular do parasita. Este trabalho tem como objetivo clonar, expressar e purificar os três diferentes mutantes truncados da proteína LaRPA-1 para, futuramente, utilizar-se estas proteínas recombinantes como ligantes em ensaios de interação proteína:proteína, visando mapear possíveis sítios ou domínios na proteína LaRPA-1.O gene que codifica LaRPA-1 já encontrava-se clonado e sequenciado no laboratório de Telômeros da UNESP de Botucatu....(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Análise da expressão gênica de pequenos RNAs derivados de tRNAs (tRFs) em plantas

Small non coding RNAs emerged as important characters in several biology aspects. Among then, the most studied are microRNAs (miRNAs) and short interfering RNAs (siRNAs), that regulate their target gene post-transcriptionally in plants, animals and RNAi pathway intermediates, respectively. Both of classes have similar biogenesis being processed by Dicer enzymes and subsequent association with Argonaute enzymes. In plants, miRNAs and siRNAs have important functions in development, genome integrity and biotic and abiotic stress responses. The advances in high-throughtput sequencing and in silico analisys provide the uncover of new small non coding RNAs classes, many of them with unknown functions and biogenesis. tRNA derived small RNAs (tRFs) are a small non coding RNA class, that have as precursor a tRNA molecule. These were uncovers in the last decade in many organisms and, recently, in plants. Recent works detected tRFs from different sizes, with different source portions of the mature tRNA molecule (5’ end; 3’ end, anti-codon loop) and some from the tRNA precursor (pre-tRNA), suggesting that may be a novel class of small RNA and not random degradation products. Works in humans showed that some tRFs are processed by the Dicer enzymes, have association with the Argonaute enzymes and cell differentiation, tumor appearance and gene silencing related functions. Works in Arabidopsis and pumpkin (Cucurbita maxima) showed, respectively, that the tRFs have nutritional stress response possible functions and long distance signaling function between source and drain tissues, and may affect the translation. The tRFs biogenesis in plants are, until now an unknown, absence information about it in the literature and its possible biological functions are few studied yet, making then interesting target for studies among the small non coding RNAs in plants

Identidade e expressão ao pavilhão permanente de exposições: “Dr. Licínio Hilmar Oliveira de Arantes”

Trata-se de projeto para novos edifícios em substituição ao Pavilhão Permanente de Exposições “Dr. Licínio Hilmar Oliveira de Arantes” bem como intervenção em seu entorno localizados no município de Ibitinga – SP. Foram realizadas coletas de dados e elaboração de um programa para área. Como resultado desta pesquisa foi elaborado um projeto arquitetônico para a área de intervenção

Clonagem, Expressão e Purificação da Proteína Telomérica LaTRF em sistema bacteriano (pMAL)

As proteínas da família TRF2 (“TTAGGG repeat-binding factor 2”) fazem parte de complexos multiprotéicos responsáveis pela manutenção dos telômeros de alguns eucariotos. Elas apresentam domínios funcionais que a caracterizam como proteínas que interagem com DNA telomérico na forma de dupla fita. São eles, o domínio de interação com o DNA do tipo Myb-like, localizado na porção C-terminal, um domínio acídico N-terminal e um domínio de homodimerização TRFH (“TRF homology domain for homodimerization”). A proteína TRF2 também está envolvida na formação de estruturas teloméricas terminais denominadas “t-loops”. O intuito deste projeto é a clonagem, expressão em vetor bacteriano (pMAL) e a purificação de uma proteína homóloga as proteínas teloméricas TRFs humana em parasitas do gênero Leishmania, especificamente a espécie Leishmania amazonensis (LaTRF). Primeiramente foram desenhados iniciadores (primers) utilizados para a amplificação da sequência LaTRF por PCR. O(s) produto(s) de amplificação foram clonados em vetores de clonagem para produtos de PCR e sequenciados para análise. Uma vez obtida a seqüência da LaTRF, o inserto contendo o gene foi subclonado direcionalmente e na mesma fase de leitura do vetor de expressão bacteriano (pMAL-c5x, NEB) para obtenção e futura purificação da proteína recombinante. Verificou-se a expressão da proteína recombinante LaTRF utilizando SDS-PAGE e “Western Blot”. Pelos resultados obtidos na análise de expressão em pequena escala da proteína recombinante, foi observado possíveis indícios de que esta esteja sendo expressa. Com isso, torna-se possível a tentativa de uma expressão em grande escala utilizando esse mesmo sistema bacteriano (pMAL) a fim de se obter a proteína purificada que poderá ser futuramente utilizada para ensaios de “pull-down” dentre outras aplicações

Avaliação da atividade do tipo ansiolítica e antidepressiva do óleo essencial de Cananga odorata por meio de procedimento sequencial em camundongos

Os distúrbios do sistema nervoso central mais comuns relatados no mundo são a ansiedade e a depressão, com grande incidência de casos nos quais aparecem juntos. Os tratamentos utilizados na clínica além de não serem efetivos na totalidade dos casos podem, por vezes, apresentar diversos efeitos não desejados. Assim, na busca novas drogas mais efetivas e com menor incidência de efeitos adversos, a Cananga odorata (Lam.) Hook. f. & Thomson aparece como uma alternativa. Esta espécie vegetal é utilizada na aromaterapia como na prevenção do estresse, ansiedade e depressão (BIRD, 2003). A busca de novas ferramentas terapêuticas depende do uso de animais de experimentação, e com as discussões na sociedade científica sobre o uso de animais, há uma maior preocupação em se desenvolver novas técnicas experimentais onde se possa aplicar os conceitos dos 3Rs objetivando a redução (Replacement) do número de animais, sua substituição (Reduction) e o refinamento (Refinement) das técnicas experimentais. Neste trabalho avaliou-se a atividade ansiolítica e antidepressiva do óleo essencial (OE) de Cananga odorata, em animais que foram sucessivamente submetidos a testes para avaliar a atividade motora, ansiolítica e antidepressiva. Camundongos machos foram tratados por via oral com OE nas doses de 0,1; 1, 10 e 100 mg/kg, e após 30 minutos foram submetidos ao teste do Campo Aberto, da Caixa Claro-Escuro e Suspensão pela Cauda, nesta ordem, com um intervalo de 30 minutos entre eles. Os resultados indicaram que a seqüência de testes é adequada para a avaliação destas atividades com economia de tempo, animais e drogas

Amplificação, clonagem e sequenciamento do promotor de um gene que codifica uma aquaporina com expressão específica em rais de eucalipto (Eucalyptus grandis)

A biotecnologia define-se pelo uso de conhecimentos sobre os processos biológicos e sobre as propriedades dos seres vivos, com o fim de resolver problemas e criar produtos de utilidade. É importante frisar que uma das principais vantagens da biotecnologia moderna voltada para a área vegetal é a de poder gerar estratégias de melhoramento aplicáveis a diferentes culturas. Uma das principais estratégias de ação nessa área trata da produção de plantas geneticamente modificadas com transgenes de interesse. Nesse contexto, a identificação e caracterização de promotores com padrão de expressão tecido-específico é essencial para que a expressão de tais transgenes em plantas de interesse agronômico e florestal, como em eucalipto, fique limitada a determinados órgãos/tecidos. Assim, o presente trabalho teve por objetivo clonar e sequenciar a região promotora de um gene com expressão específica em raiz de eucalipto cujo produto gênico tem similaridade a uma aquaporina. Uma vez clonado, o promotor foi introduzido em vetor binário e inserido em plantas de tabaco visando a sua caracterização funcional. Além disso, a expressão do gene em estudo foi investigada em eucalipto, e uma analise filogenética comparativa com outras angiospermas foi empreendida

Associação entre expressão de receptores TLR2 e TLR4 e produção de TNF-alpha e IL-10 por monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Preeclampsia (PE) is a pregnancy specific syndrome characterized by a systemic inflammatory response, with higher intensity than that observed in normal pregnancy. Cells of the immune system, such as monocytes and granulocytes are endogenously activated and secrete high levels of free radicals and inflammatory cytokines. The objective of this study was to assess the activation state of monocytes from pregnant women with preeclampsia by endogenous expression of TLR2 e TLR4 receptors and to correlate the expression of TLR2 and TLR4 on monocytes surface of pregnant women with PE with the production of tumor necrosis factor-alpha (TNF- and interleukin-10 (IL-10) by these cells stimulated or not with peptidoglycan (PG) and lipopolysaccharide (LPS), as agonists agents of TLR2 and TLR4, respectively. We evaluated 15 pregnant women with PE, 15 normotensive pregnant women (NT) and 15 non-pregnant (NP). Peripheral blood monocytes were incubates in the presence or absence of LPS or PG. The supernatant obtained after 18h of culture was aspirated and used for TNF- and IL-10 determination by enzyme immunoassay (ELISA). The endogenous expression of TLR2 and TLR4 receptors was evaluated by flow cytometry. Our results showed significant highly concentrations of TNF- and TLR4 expression in monocytes of preeclamptic women when compared with NT and NP. Normal pregnant women presented higher levels of IL-10 in comparison with PE and NP groups. TLR2 expression was similar in the three groups studied. Therefore, our study highlights the important role of TLR4 in PE and the consequent high production of TNF- by monocytes of these patients, as well as the potential mechanism involving low levels of IL-10 in the pathophysiology of the disease. These observations demonstrate the strong link between the pathology of PE and the immune system of these patients

Produção de vetores recombinantes para expressão de diferentes formas da proteína K1 do herpesvírus associado ao Sarcoma de Kaposi (KSHV)

Kaposi´s sarcoma associated herpesvirus (KSHV) or human herpesvirus 8 (HHV-8) is a gammaherpesvirus essential for the development of all forms of Kaposi´s sarcoma (KS). The KSHV’s life cycle is basically divided into latent and lytic phases, which have distinct viral gene expression profiles. Some important oncogenic products of KSHV are expressed during the lytic phase, including the viral K1 protein. As an effect of interfer-ence with intracellular signaling, K1 expression increases proliferation and survival of KSHV-infected cells. Due to its high level of genetic variability compared to other re-gions of the viral genome, the K1-encoding ORF (ORF-K1) is commonly evaluated for KSHV genotyping. It remains unclear whether different viral genotypes have particular biological effects that might modify the KSHV oncogenicity. The present study aimed to contribute to the establishment of an experimental in vitro model for evaluation of the K1 protein from common KSHV genotypes. Recombinant expression vectors with the ORF-K1 from KSHV genotypes A, B and C were prepared by genetic cloning. The recombi-nant vectors pKSHVOK1 obtained by cloning were sequenced for structural validation. After that, HEK293 cell line was transfected with the recombinant vectors, and proteins were extracted for expression analysis by Western blot technique, for K1 functional vali-dation. Results showed that ORF-K1 vectors containing KSHV ORF-K1 from the A, B and C genotypes were produced and structurally validated by DNA sequencing. The K1 expression at the protein level was also confirmed by immunoblots using an antibody for FLAG detection, an epitope from the vector that binds to K1. Based on presented re-sults, it´s possible to conclude that the recombinant vectors will be able to be used in future studies of K1 protein biological properties from distinct KSHV genotypes

Avaliação dos efeitos do Imidaclopride, sobre o sistema nervoso de Apis mellifera africanizada, através da expressão da proteína FOS

As abelhas Apis mellifera africanizadas são consideradas importantes agentes polinizadores que estão freqüentemente expostos à ação tóxica de inseticidas aplicados em cultivos. O imidaclopride é um inseticida sistêmico do grupo dos neonicotinóides e atua como agonista da acetilcolina nas sinapses do sistema nervoso central. Em abelhas foi verificado, através do método de resposta de extensão da probóscide (REP), que doses subletais de imidaclopride provocam deficiência no aprendizado olfatório e prejudicam a memória. A proteína Fos, expressa em neurônios, tem sua transcrição alterada por diversos estímulos como estresse, lesões, exposição a toxinas ou a predadores. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos neurotóxicos do inseticida imidaclopride, em operárias de Apis mellifera africanizadas, através da análise da expressão de Fos. Abelhas recém-emergidas e campeiras foram tratadas com 10, 20, 40 e 80 ng/abelha de imidaclopride e seus cérebros dissecados 15 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas após a ingestão do composto. Houve uma marcação positiva para Fos nos ocelos e na região dos olhos, principalmente na lâmina e na retina. Tal resultado era esperado, uma vez que o as abelhas foram expostas a luminosidade, durante a realização dos ensaios. Os lobos antenais são constituídos por prolongamentos de células sensoriais das antenas e pelos neurônios motores e os corpos pedunculados são tidos como os centros de processamento dos estímulos sensoriais recebidos pelos olhos e pelas antenas, assim, esperava-se que houvesse marcação positiva nestas regiões. Porém isto não foi observado no presente trabalho. Analisando-se os valores quantitativos da expressão da proteína Fos percebeu-se que não houve um padrão de ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Clonagem e caracterização do promotor de um gene com expressão em folha de Eucalipto (Eucalyptus grandis)

Uma das principais estratégias de ação da biotecnologia na área vegetal trata da produção de plantas geneticamente modificadas com transgenes de interesse. Entretanto, para garantir a correta expressão de tais transgenes em plantas de interesse agronômico e florestal, como é o caso do eucalipto, a identificação e caracterização de seqüências promotoras com padrões conhecidos de expressão gênica se fazem necessárias. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou clonar e sequenciar a região promotora de um gene com expressão em folha de Eucalyptus grandis. Em seguida, um cassete de expressão contendo o gene repórter GUS sobre controle do referido promotor foi construído e introduzido em vetor binário. O referido cassete foi então inserido em agrobactéria visando a futura transformação de plantas modelo para a realização de estudos funcionais

Expressão gênica dos receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChR) e caracterização morfológica das junções neuromusculares em músculo esquelético de ratos com insuficiência cardíaca

A insuficiência cardíaca (IC) está associada à miopatia dos músculos esqueléticos com aumento da expressão das isoformas rápidas da cadeia pesada de miosina e alterações na matriz extracelular. Os fatores de regulação miogência(MRF),como a MyoD e MRF4, pertecem a uma família de fatores transcricionais que controlam vários genes músculo-específicos.Esses fatores forma heterodímeros com proteínas HLH e ligam-se a seqüências de DNA conhecidas como Ebox, presentes na região promotora de vários genes músculo–específicos, incluindo todos aqueles que codificam as subunidades dos receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChR) da junção neuromuscular (JNM). Baseado no fato de que na IC há uma diminuição na expressão da MyoD e MRF4 no músculo sóleo de ratos com IC induzida por monocrotalina, o objetivo do presente trabalho é verificar possíveis alterações na expressão dos receptores de acetilcolina, bem como realizar uma análise morfológica e morfométrica das JNMs. Neste estudo foram utilizados ratos Wistar, machos, divididos em grupos controle e experimental e a Insuficiência cardíaca (IC) foi induzida pela injeção de monocrotalina intra-peritoneal.Quando os sintomas de IC foram visualizados (após 22 dias) os animais foram sacrificados pentobarbital sódico i.p. (50 mg/Kg). A seguir foram mensurados o peso corporal (PC) dos ratos, bem como outros parâmetros. O músculo sóleo de ambos os antímeros foram dissecados e preparados para: avaliação da expressão gênica das subunidades ε, γ e α dos receptores de acetilcolina por PCR em Tempo Real; para análise morfológica e morfométrica da Junção Neuromuscular através da técnica de Esterase inespecífica; para análise ultra-estrutural da JN. Os resultados indicam que não houveram alterações morfológicas e morfométricas na JN, mas houve um aumento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)