Cyclodextrin glycosyltransferase from Bacillus licheniformis: Optimization of production and its properties

Cyclodextrin glycosyltransferase (EC 2.4.1.19) is an enzyme that produces cyclodextrins from starch via an intramolecular transglycosylation reaction. An alkalophilic Bacillus strain, isolated from cassava peels, was identified as Bacillus licheniformis. CGTase production by this strain was better when potato starch was used as carbon source, followed by cassava starch and amylopectin. Glucose and amylose, on the other hand, acted as synthesis repressors. When the cultivation was supplemented with sodium ions and had the pH adjusted between 6.0 and 9.0, the microorganism maintained the growth and enzyme production capacity. This data is interesting because it contradicts the concept that alkalophilic microorganisms do not grow in this pH range. After ultrafiltration-centrifugation, one protein of 85.2 kDa with CGTase activity was isolated. This protein was identified in plates with starch and phenolphthalein. Determination of the optimum temperature showed higher activities at 25 degrees C and 55 degrees C, indicating the possible presence of more than one CGTase in the culture filtrate. Km and Vmax values were 1.77 mg/mL and 0.0263 U/mg protein, respectively, using potato starch as substrate.

Development and validation of a stability-indicative agar diffusion assay to determine the potency of linezolid in tablets in the presence of photodegradation products

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Chemical and microbiological evaluation of the internal surfaces of aluminum tubes both unlined and lined with epoxi resin by means of the stereoscope and scanning electron microscope

A superfície interna das bisnagas fabricadas com alumínio não revestido e revestido com resina epóxi, utilizadas para acondicionar cremes, pomadas, géis, etc., foram avaliadas quimicamente e por métodos microbiológicos correlacionados com a aderência de microrganismos. A prova da porosidade e da resistência à remoção da resina foi observada por meio do microscópio eletrônico de varredura (Topcon FM300) e estereoscópio Leica (MZ12) acoplado a Sistema de Digitalização de Imagens. Para avaliar a ação dos microrganismos foram utilizados corpos-de-prova esterilizados (discos de 10mm de diâmetro), imersos em caldo Mueller Hinton (Difco) e colocados em tubos de polipropileno com tampa de rosca (Corning). Foram inoculados tubos com meio de cultura para cada uma das suspensões bacterianas (10(9)UFC/mL) de Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Acinetobacter lwoffii e Candida albicans, incubados a 37°C, sob agitação constante durante 12 dias. O meio de cultura era trocado a cada 3 dias. Após esse período, os corpos-de prova foram removidos, processados e observados em microscópio eletrônico de varredura JEOL-JSM (T330A). A observação por meio do microscopio eletrônico de varredura mostrou a aderência e a formação de biofilme sobre a superfície de alumínio não revestido e revestido com resina epóxi.

Screening and Production Study of Microbial Xylanase Producers from Brazilian Cerrado

Hemicelluloses are polysaccharides of low molecular weight containing 100 to 200 glycosidic residues. In plants, the xylans or the hemicelluloses are situated between the lignin and the collection of cellulose fibers underneath. The xylan is the most common hemicellulosic polysaccharide in cell walls of land plants, comprising a backbone of xylose residues linked by beta-1,4-glycosidic bonds. So, xylanolytic enzymes from microorganism have attracted a great deal of attention in the last decade, particularly because of their biotechnological characteristics in various industrial processes, related to food, feed, ethanol, pulp, and paper industries. A microbial screening of xylanase producer was carried out in Brazilian Cerrado area in Selviria city, Mato Grosso do Sul State, Brazil. About 50 bacterial strains and 15 fungal strains were isolated from soil sample at 35 A degrees C. Between these isolated microorganisms, a bacterium Lysinibacillus sp. and a fungus Neosartorya spinosa as good xylanase producers were identified. Based on identification processes, Lysinibacillus sp. is a new species and the xylanase production by this bacterial genus was not reported yet. Similarly, it has not reported about xylanase production from N. spinosa. The bacterial strain P5B1 identified as Lysinibacillus sp. was cultivated on submerged fermentation using as substrate xylan, wheat bran, corn straw, corncob, and sugar cane bagasse. Corn straw and wheat bran show a good xylanase activity after 72 h of fermentation. A fungus identified as N. spinosa (strain P2D16) was cultivated on solid-state fermentation using as substrate source wheat bran, wheat bran plus sawdust, corn straw, corncob, cassava bran, and sugar cane bagasse. Wheat bran and corncobs show the better xylanase production after 72 h of fermentation. Both crude xylanases were characterized and a bacterial xylanase shows optimum pH for enzyme activity at 6.0, whereas a fungal xylanase has optimum pH at 5.0-5.5. They were stable in the pH range 5.0-10.0 and 5.5-8.5 for bacterial and fungal xylanase, respectively. The optimum temperatures were 55C and 60 A degrees C for bacterial and fungal xylanase, respectively, and they were thermally stable up to 50 A degrees C.

Effect of indomethacin on the pregnant rat

O objetivo deste trabalho foi avaliar a performance reprodutiva, estudo morfológico do fígado e característicapost mortem de ratas Wistar prenhes tratadas com indometacina, um inibidor geral de COX. Indometacina foi administrada oralmente, nas doses de 0 (controle), 0,32, 1,68 e 8,40 mg/kg/dia (n=10/grupo), nos dias 3 e 4 de prenhez (dia 0 = primeiro dia de prenhez = esperma positivo). Os animais foram eutanasiados sob anestesia no 11º dia de prenhez, e foram realizadas necropsia e cultura de microorganismos. Os resultados mostraram que as doses de 0,32 e 1,68 mg/kg de peso corpóreo (dose terapêutica para humanos) de indometacina não causaram efeitos embriotóxicos ou letais. A maior dose (8,40 mg/kg) de indometacina prejudicou o processo de implantação e, portanto, interferiu no desenvolvimento fetal. A peritonite foi detectada na necropsia e nos estudos bacteriológicos dos animais tratados com 8,4 mg/kg e considerada a causa-morte destes animais. Portanto, este estudo analisou um agente farmacológico na prenhez de roedores e evidenciou que a indometacina apresentou efeitos embriotóxicos e letais na maior dose empregada, mas foi segura na dose terapêutica usada pelo homem.

Lack of Epstein-Barr virus infection in cervical carcinomas

Context.-The Epstein-Barr virus (EBV) is a ubiquitous microorganism strongly associated with lymphoproliferative disorders and a large number of human neoplasms, mainly undifferentiated nasopharyngeal carcinoma and Burkitt lymphoma. The viral DNA has been detected in other tumors, such as carcinomas from tonsil, salivary glands, and thymus, and malignancies of the female genital tract. Some authors have proposed that EBV could play a role in the carcinogenesis of cervical tumors; however, other studies do not support this hypothesis.Objective.-To assess whether EBV is associated with female genital tract neoplasms.Design.-Sixty-five biopsy specimens (5 in situ carcinomas, 24 invasive squamous cell carcinomas, 6 lymphoepithelioma-like carcinomas, and 30 endocervical adenocarcinomas) were used to perform EBV detection through RNA in situ hybridization.Results.-None of the cervical carcinoma cases studied was positive for EBV infection.Conclusions.-The results suggest that it is still premature to incriminate EBV in the carcinogenesis of cervical carcinoma.

Comparison between qualitative and semiquantitative catheter-tip cultures: laboratory diagnosis of catheter-related infection in newborns

Este estudo prospectivo avaliou os métodos semiquantitativo e qualitativo de cultura de cateter para o diagnóstico de infecção relacionada a cateter (IRC) em recém-nascidos (RN). Foram incluídas pontas de cateteres provenientes de recém-nascidos internados na Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Foram utilizadas as técnicas semiquantitativa e qualitativa de cultura de cateter. Para o diagnóstico de IRC, os microrganismos isolados das culturas de cateteres e de hemoculturas periféricas foram identificados e submetidos ao teste de sensibilidade a antimicrobianos. O padrão ouro correspondeu ao diagnóstico de certeza de IRC, com o isolamento do mesmo microrganismo (espécie e perfil de sensibilidade a antimicrobianos) isolado em hemocultura periférica. Foram estudados 85 cateteres provenientes de 63 RN. A cultura semiquantitativa, embora tenha apresentado menor sensibilidade (90%), apresentou uma maior especificidade (71%) em comparação à sensibilidade de 100% e especificidade de 60% encontradas na cultura qualitativa. Através da identificação dos microrganismos obtidos nas culturas de cateteres, observou-se uma predominância de espécies de Estafilococos coagulase-negativa (ECN). A espécie Staphylococcus epidermidis foi a prevalente (77,5%) nos cateteres com culturas semiquantitativas positivas. Dos 11 episódios de IRC diagnosticados, 8 (72,7%) foram associados a espécies de ECN, dos quais 6 eram da espécie S. epidermidis. Também foram detectados dois casos de IRC por S. aureus e um caso por Candida parapsilosis. O método de cultura semiquantitativo cateter apresentou vantagens para o diagnóstico de IRC em RN quando comparado com o método qualitativo tradicional.

Correlation of Atopobium vaginae Amount With Bacterial Vaginosis Markers

Objective. The purpose of this study was to test the correlation of the amount of Atopobium vaginae with the most commonly used markers for bacterial vaginosis (BV).Materials and Methods. We enrolled 103 nonpregnant and premenopausal women that were positive for BV by Amsel criteria and with a Nugent score higher than 3. All women were negative for yeast, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, and Neisseria gonorrhoeae. A. vaginae concentration was determined by quantitative polymerase chain reaction from samples of vaginal rinsings with 2 mL of sterile saline.Results. There was no difference in the median values of A. vaginae concentration when comparing samples with presence or absence of each individual Amsel criterion. In the case of a higher pH cutoff value of 4.9, greater amounts of this microorganism (p = .02) were found. In addition, correlation tests showed that A. vaginae concentration is positively correlated with pH (p < .001) and with Nugent scores (p = .003).Conclusions. The quantification of A. vaginae is useful for identification of the most severe cases of BV.

Correlation between API 50 CH and multiplex polymerase chain reaction for the identification of vaginal lactobacilli in isolates

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Cloning, sequencing and expression analysis of the equine hepcidin gene by real-time PCR

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Detecção de subfertilidade em vacas leiteiras por meio de medidas anatômicas da região pélvica e do aparelho genital

O objetivo deste estudo foi mensurar as regiões que compõem a garupa da vaca leiteira, com aparelho desenvolvido para esse fim, e avaliar o efeito dessas variáveis na contaminação intra-uterina e na eficiência reprodutiva (intervalos parto-primeiro cio e parto-primeira inseminação, número de serviços por concepção e período de serviço). Foram usadas 252 vacas Holandesas, paridas há mais de 30 dias e não inseminadas. Realizaram-se medidas anatômicas da região pélvica e do aparelho genital e cultivo bacteriológico de material uterino. A influência das variáveis independentes (mensurações) sobre a presença de contaminantes intra-uterinos foi analisada por meio de regressão logística, a da presença de contaminantes intra-uterinos sobre a eficiência reprodutiva, por análise de variância, e a das variáveis independentes (mensurações) sobre a eficiência reprodutiva por meio de regressão linear múltipla. A presença de contaminantes intra-uterinos não foi influenciada por nenhuma das variáveis. Staphylococcus sp. (29,6%) foi o microrganismo mais encontrado no material uterino, seguido por Actinomyces pyogenes (26,0%), Streptococcus sp. (22,2%) e coliformes (22,2%), porém essa contaminação não teve efeito negativo nos índices reprodutivos. Das medidas anatômicas avaliadas, as que influenciaram as características reprodutivas foram: abertura do ílio (maior abertura menor eficiência reprodutiva), localização do óstio cranial da cérvice (quanto mais abdominal, piores os índices reprodutivos) e presença de urovagina (influência negativa na taxa de concepção).

Local application of tetracycline solution with a microbrush: An alternative treatment for persistent periodontitis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Healing process of dog teeth after post space preparation and exposition of the filling material to the oral environment

Foi propósito deste estudo analisar a influência da infiltração marginal coronária no comportamento dos tecidos periapicais de dentes de cães após obturação de canal e preparo para pino. Quarenta canais de dentes de cães foram instrumentados e obturados pela técnica da condensação lateral com cones de guta percha e os cimentos Roth e Sealer 26. Após preparo para pino, o remanescente da obturação foi protegido ou não com um plug do cimento temporário Lumicon. Após exposição ao meio oral por 90 dias, os animais foram sacrificados e as peças preparadas para análise histomorfológica. A técnica de Brown e Brenn mostrou 70% de casos com infiltração de microrganismos para o cimento Roth e 20% com o Sealer 26. Quando um plug de Lumicon foi empregado ocorreu 30% de casos de infiltração de microrganismos com o cimento Roth e 0,0% com o cimento Sealer 26. Reação inflamatória crônica foi mais freqüentemente observada com o cimento Roth do que com o Sealer 26. Foi concluído que o plug de Lumicon é eficiente no controle da infiltração coronária (p=0.05) e que o Sealer 26 foi mais biocompatível e selou melhor os canais radiculares do que o cimento Roth (p=0.01).

Occurrence of Aggregatibacter actinomycetemcomitans in Brazilian indians from Umutina Reservation, Mato Grosso, Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Evaluation of two alternative methods for disinfection of toothbrushes and tongue scrapers

Objective: The aim of this study was to investigate the effectiveness of two alternatives methods for the disinfection of oral cleaning devices. Methods: One type of toothbrush and two types of tongue scrapers (steel and plastic) were tested in this study. Sixteen specimens of each group were cut with standardized dimensions, contaminated separately with Candida albicans, Streptococcus mutans and Staphylococcus aureus and incubated for 24 h. After this, oral cleaning devices were washed in saline solution to remove non-adhered cells and divided into two groups (n = 8), one irradiated in microwave and other immersed in 3.78% sodium perborate solution, and evaluated for microbial recovery. The values of cfu of each group of microorganism after disinfection were compared by Kruskal-Wallis and Dunn non-parametric test, considering 95% of confidence. Results: The toothbrush harboured a significant larger number of viable organisms than the tongue scrapers. The steel tongue scraper was less susceptible to adhesion of the three oral microorganisms. The time required to inactivate all contaminating microorganisms using microwave oven was 1 min and, for the immersion in 3.78% sodium perborate solution, was 2 and 3 h, respectively, for C. albicans and S. mutans/S. aureus. Conclusion: Microwave irradiation proved to be an effective alternative method to the disinfection of tongue cleaners and toothbrushes.