Profile of IL-2, IL-4, IL-10, IFN- ? , TNF- ? and KC-like cytokines in pregnant bitches

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

TNF alpha contributes for attenuating both Y(397)FAK and Y(416)Src phosphorylations in osteoblasts

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudos para obtenção de palmitato de taurina

A taurina (ácido 2-etanoaminossulfônico) apresenta diversas funções fisiológicas, como atuação no neurodesenvolvimento, ação no coração contra arritimias, ação nos músculos esqueléticos contra atrofia, faz parte da bile na forma de um composto conjugado, constutuindo um dos sais biliares, e anti-inflamatória, inibindo mediadores pró-inflamatórios. Neste projeto a ênfase foi voltada para a ação anti-oxidante da taurina, que forma um complexo com espécies como o ácido hipocloroso (HOCl) e ânions clorito (OCl-) que potencialmente possuem ações danosas à célula. Esse complexo, a taurina cloramina (Tau-Cl), possui também ações contra mediadores inflamatórios, como o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e o óxido nítrico (NO). Por ser uma molécula com alta polaridade e hidrossolubilidade, a taurina não consegue penetrar na pele pelo extrato córneo intacto, a camada mais externa da pele, que constitui sua barreira contra perda ou absorção de água e eletrólitos. Foi feita então a síntese de um pró-fármaco derivado da taurina, formado por seu acoplamento com uma cadeia carbônica longa, aumentando significativamente a lipossolubilidade em relação a taurina pura, e podendo assim, essa molécula, transpor o extrato córneo intacto e exercer sua ação anti-oxidante, podendo ser, portanto, caracterizado como um pró-ativo. Este pró-fármaco, o ácido 2-palmitamidoetanossulfônico, foi sintetizado por meio de uma reação entre um cloreto de acila (cloreto de palmitoíla) e taurina, utilizando trietilamina como base, por meio de um método conhecido por Schotten-Baumann. O produto formado foi analisado por cromatografia em camada delgada (CCD), faixa de fusão, espectroscopia de absorção no infravermelho (IV) e espectometria de massa (EM), sendo que todas as análises confirmaram que a síntese foi bem sucedida

Expressão dos fatores de regulação miogênica em cultura de mioblastos submetidos ao TNF-α/IFN-γ

A insuficiência cardíaca (IC) está associada a miopatia dos músculos esqueléticos dos membros, com perda da massa muscular, diminuição na proporção das fibras do tipo I (contração lenta) e aumento na proporção das fibras do tipo II (contração rápida). É provável que alterações na expressão de fatores de transcrição pertencentes à família “basic helix-loop-helix” (bHLH), da qual fazem parte a MyoD, Miogenina, Myf5 e o MRF-4, conhecidos como fatores de regulação miogênica (MRFs), sejam responsáveis pelas mudanças nos tipos de fibras. Enquanto que a Miogenina é expressa em níveis superiores aos da MyoD em músculos lentos, o oposto é verdadeiro para músculos rápidos. Similarmente, a MyoD está associada com a expressão das isoformas de miosina de cadeia pesada rápidas dos tipos IIX e IIB. Estudos in vitro, demonstraram que o TNF-α inibe a expressão de MyoD e miogenina diminuindo a atividade de genes músculo específicos. A ação do TNF-α diminuindo a expressão da MyoD mostra-se mais acentuada quando em associação com o IFN-γ, no entanto, há poucas informações na literatura a respeito do papel desta associação na expressão dos fatores de regulação miogênica, in vitro. Avaliar a expressão dos fatores de regulação miogênica, MyoD, miogenina, Myf5, e MRF-4 em cultura de mioblastos C2C12 submetidos ao TNF-α/IFN-γ. Nossos resultados mostraram um aumentou na expressão dos gene MyoD, Myf5 e miogenina sob tratamento com IFN-γ quando comparado aos grupos controle e TNF-α/IFN-γ. A expressão gênica do MRF-4 na cultura de células não foi detectada em nenhum dos grupos analisados. O GAPDH foi utilizado para normalizar os valores de expressão dos outros genes analisados. O presente estudo demonstrou que o IFN-γ exógeno administrado à culturas de mioblastos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeito da silibinina sobre o fator de transcrição nuclear-kB e produção de citocinas inflamatórias por células mononucleares de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Pre-eclampsia (PE) is a complication of human pregnancy characterized by hypertension and proteinuria after 20 weeks of gestation. Its incidence varies from 5% to 7% of pregnancies and is a major cause of morbidity and maternal and fetal mortality. This is a multisystemic disease, with focus on vascular dysfunction and is closely related to the exacerbated activation of the immune system. In addition to increased activation of monocytes and granulocytes, there is an elevated production of proinflammatory cytokines in pregnant women with PE. The nuclear transcription factor-kB (NF-kB) is present in the cells of the immune system and is responsible for transcription of genes related to inflammation. Whereas the PE is associated with intense inflammatory response, the use of substances modulating the activity of NF-kB factor could be useful in alleviating the inflammation present in these patients. Silibinin is the main component of silymarin, a polyphenolic extract obtained from fruits and seeds of Sylibum marianum with potent hepatoprotective, anti-inflammatory and anti-fibrotic activities. The silibinin mechanism of action includes the ability to inhibit NF-kB activation and, consequently, its migration to the nucleus. The objective of this study was to assess whether silibinin modulates the activity of NF-kB and the production of inflammatory cytokines in mononuclear cells of patients with PE. We evaluated 34 pregnant women with PE, 20 normotensive pregnant women (GN) and 15 non-pregnant women (NG). Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from those groups of women and cultured in the presence or absence of silibinin (5 uM or 50 uM) and stimulated or not with lipopolysaccharide (LPS) for 18 h to obtain supernatant for determination of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-1 (IL-1β) by enzyme immunoassay (ELISA). The cells were...(Complete abstract click electronic access below)

Desenvolvimento de formulações multifuncionais líquido cristalinas contendo nanopartículas de dióxido de titânio e alfa-tocoferol

A destruição da camada de ozônio resulta em um preocupante aumento na incidência de radiação ultravioleta (UV) na superfície da Terra, radiação esta, responsável pela ocorrência de danos na pele e pelo aparecimento do câncer de pele, tipo mais comum de câncer. Assim, neste trabalho foram desenvolvidos sistemas líquido-cristalinos multifuncionais contendo nanopartículas de dióxido de titânio, cuja propriedade fotoprotetora é bem conhecida, e alfa-tocoferol, um composto com ação antioxidante. Com isso, pretendeu-se desenvolver uma formulação que atue como protetor solar inorgânico, bloqueando a radiação UV e impedindo sua penetração que pode causar sérios danos à pele, além de conter o alfa-tocoferol que interage com os radicais livres, diminuindo os danos causados por estes. Para tanto, inicialmente foram preparadas formulações baseadas em dois diagramas de fases, as amostras que apresentaram separação de fase foram excluídas do trabalho, e as outras foram submetidas à análise de microscopia de luz polarizadas. Através da microscopia de luz polarizada foi possível concluir que a estrutura líquido-cristalina é mantida com a incorporação dos ativos no sistema, o que posteriormente foi confirmado com a análise por SAXS. A análise do potencial zeta permitiu verificar que na faixa de pH entre 5 e 7, indicada para produtos de uso tópico, é possível evitar aglomeração das partículas, e com isso obter um visual transparente do produto. A avaliação do comportamento possibilitou concluir que todas as amostras apresentaram uma consistência ideal para aplicação do produto na pele

IL-10 e TNF-α no sangue materno e nas placentas de gestações complicadas por diabete ou hiperglicemia gestacional leve - correlação com controle glicêmico e resultados perinatais

Objective - At evaluating the IL-10 production in maternal blood and placenta and correlate them with perinatal outcomes in pregnancies complicated by hyperglycemia, or with risk to developing it, differentiated by the glycemic mean (GM < or ≥ 100mg/dL). Method- 186 pregnant women were distributed into groups GM < 100 mg/dL and GM ≥ 100 mg/dL. We evaluated the GM, HbA1c levels, maternal and placental IL-10 and TNF-α and the correlation between placental cytokines and perinatal outcomes. Results - In maternal blood, the lower concentrations of IL-10 (1.01 ± 0.87 vs. 3.08 ± 5.57 pg / mL, p = 0.0019) were observed in GM ≥ 100 mg / dL group. Placental IL-10 was directly correlated with hemoglobin levels (r = 0.63, p = 0.02) and insulin (r = 0.78, p = 0.01) from umbilical cord and with Apgar scores 1 (r = 0.53, p = 0.0095) and Apgar 5 (r = 0.69, p = 0.0003). Conclusion - GM ≥ 100mg/dL was associated with decreased of maternal IL-10. Placental IL-10 was similar in both groups and correlated directly with hemoglobin and insulin and with Apgar scores of 1st. and 5th. minutes

Síntese e avaliação biológica de novos derivados anti-inflamatórios esteroides

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação farmacológica de candidatos a fármacos para o tratamento da anemia falciforme

A anemia falciforme (AF) é a doença hematológica hereditária crônica de maior prevalência no Brasil, causada por uma mutação pontual no gene da β-globina, levando as hemácias a adquirirem formato de foice quando em estado desoxigenado. Essa alteração estrutural causa aumento da adesão celular, hipóxia local, vaso-oclusão e alterações na coagulação. O quadro clínico dos pacientes é diversificado, predominando a dor causada pelo processo inflamatório agudo e crônico, além de complicações que podem ocasionar infarto de tecidos e órgãos, levando à morte. O único fármaco aprovado pelo FDA disponível para o tratamento da doença é a hidroxiuréia (HU), mas, devido a sua toxicidade, têm sido intensificadas as buscas por novas possibilidades terapêuticas. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) é uma citocina pró-inflamatória presente em grande quantidade nos pacientes portadores da doença, e o óxido nítrico pode contribuir para vasodilatação e proteção vascular. Assim, propôs-se a síntese e avaliação farmacológica de candidatos a fármacos para o tratamento da AF, desenhados com o propósito de apresentar propriedades inibidoras do TNF-α e doadoras de óxido nítrico (NO). Foi avaliada a estabilidade química dos compostos sintetizados, em água, pH 1,2 e pH 7,4, sendo o Composto II o mais estável tanto em pH ácido como em água. Em pH básico, todos os compostos se mostraram instáveis. Os compostos III e VI apresentaram uma maior inibição da agregação plaquetária, atividade também atribuída à capacidade de doação de NO. O composto III foi o único a mostrar-se inibidor de TNF-α e IL-1β, em todas as concentrações avaliadas, e, também, mostrou-se inibidor de NO, no teste induzido por LPS. Diante de todos os ensaios realizados, o composto III é o mais promissor candidato a fármaco, entre os compostos sintetizados, para o tratamento dos sintomas da anemia falciforme.

Changes in the TNF-alpha/IL-10 ratio in hyperglycemia-associated pregnancies

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Diabetes reduces mesenchymal stem cells in fracture healing through a TNF alpha-mediated mechanism

Diabetes interferes with bone formation and impairs fracture healing, an important complication in humans and animal models. The aim of this study was to examine the impact of diabetes on mesenchymal stem cells (MSCs) during fracture repair.Fracture of the long bones was induced in a streptozotocin-induced type 1 diabetic mouse model with or without insulin or a specific TNF alpha inhibitor, pegsunercept. MSCs were detected with cluster designation-271 (also known as p75 neurotrophin receptor) or stem cell antigen-1 (Sca-1) antibodies in areas of new endochondral bone formation in the calluses. MSC apoptosis was measured by TUNEL assay and proliferation was measured by Ki67 antibody. In vitro apoptosis and proliferation were examined in C3H10T1/2 and human-bone-marrow-derived MSCs following transfection with FOXO1 small interfering (si)RNA.Diabetes significantly increased TNF alpha levels and reduced MSC numbers in new bone area. MSC numbers were restored to normal levels with insulin or pegsunercept treatment. Inhibition of TNF alpha significantly reduced MSC loss by increasing MSC proliferation and decreasing MSC apoptosis in diabetic animals, but had no effect on MSCs in normoglycaemic animals. In vitro experiments established that TNF alpha alone was sufficient to induce apoptosis and inhibit proliferation of MSCs. Furthermore, silencing forkhead box protein O1 (FOXO1) prevented TNF alpha-induced MSC apoptosis and reduced proliferation by regulating apoptotic and cell cycle genes.Diabetes-enhanced TNF alpha significantly reduced MSC numbers in new bone areas during fracture healing. Mechanistically, diabetes-enhanced TNF alpha reduced MSC proliferation and increased MSC apoptosis. Reducing the activity of TNF alpha in vivo may help to preserve endogenous MSCs and maximise regenerative potential in diabetic patients.

Lycopene supplementation reduces TNF-alpha via RAGE in the kidney of obese rats

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Diazepam, em dose única, inibe a migração celular, a estimulação macrofágica e a atividade de TNF-α na reação inflamatória aguda induzida por LPS em camundongos

Benzodiazepines are one of the most frequently prescribed drugs due to their anxiolytic properties. The aim of this study was to evaluate the effects of diazepam on lipopolysaccharide-induced peritoneal acute inflammatory responses. Swiss mice were treated with diazepam in a single dose of 1 or 10 mg/kg- subcutaneously 1 h before an intraperitoneal injection of lipopolysaccharide or sterile saline solution. The mice were killed 16 h after and the cells were washed from the peritoneal cavity to determine the total number of cells and the mononuclear and polimorfonuclear subpopulations, as well as the TNF-alpha activity and percentage of spread macrophages. Our results showed that the diazepam treatment (1 and 10 mg/kg) induced a significant reduction in the LPS-induced macrophage stimulation and TNF-α activity. Diazepam (10 mg/kg) also reduced the inflammatory cellular migration when compared to the control. It can be concluded that the diazepam treatment in a single dose is able to influence the inflammatory cellular influx, macrophage stimulation and TNF-α activity in the acute inflammatory response in mice, having possible implications on the anti-infectious response efficiency.

Ehrlichia canis (Jaboticabal strain) induces the expression of TNF-alpha in leukocytes and splenocytes of experimentally infected dogs

Canine ehrlichiosis is caused by the bacterium Ehrlichia canis and is characterized by a systemic febrile disease of unknown pathogenesis. This study evaluated the expression of cytokines TNF-alpha, IL-10, IFN-gamma, in splenic cells and blood leukocytes during the acute phase of ehrlichiosis and after treatment with doxycycline hyclate in dogs experimentally infected with the E. canis Jaboticabal strain. The study results showed a significant expression of TNF-alpha 18 days post-inoculation, reducing by approximately 70% after treatment. There was a unique peak of expression of IL-10 and IFN-gamma 18 and 30 days post-inoculation, respectively. This study suggests that TNF-alpha plays a role in the pathogenesis of the acute phase of canine ehrlichiosis and that treatment with doxycycline hyclate reduces the systemic effects of this cytokine, possibly by reducing or eliminating parasitemia.