11 resultados para Reprogrammation
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Resumo:
Lors de la fcondation, le gnome subit des transformations pigntiques qui vont guider le dveloppement et le phnotype de lembryon. L'avnement des techniques de reprogrammation cellulaire, permettant la ddiffrenciation d'une cellule somatique adulte, ouvre la porte de nouvelles thrapies rgnratives. Par exemple, les procdures de transfert nuclaire de cellules somatique (SCNT) ainsi que la pluripotence par induction (IP) visent reprogrammer une cellule somatique adulte diffrentie un tat pluripotent similaire celui trouv durant la fcondation chez l'embryon sans en impacter l'expression gnique vitale au fonctionnement cellulaire. Cependant, la reprogrammation partielle est souvent associe une mauvaise mthylation de squences gniques responsables de la rgulation des empreintes gniques. Ces gnes, tudis chez la souris, le bovin et l'humain, sont exprims de manire monoalllique, parent spcifique et sont vitaux pour le dveloppement embryonnaire. Ainsi, nous avons voulu dfinir le statut pigntique du gne empreint H19 chez l'quin, autant chez le gamtes que les embryons drivs de manire in vivo, SCNT ainsi que les cellules pluripotentes induites (iPSC). Une rgion contrle empreint (ICR) riche en lots CpG a t observe en amont du promoteur. Coupl avec une analyse de transcrit parent spcifique du gne H19, nous avons confirm que l'empreinte du gne H19 suit le modle insulaire dcrit chez les autres mammifres tudis et rsiste la reprogrammation induite par SCNT ou IP. La dmthylation partielle de l'ICR observe chez certains chantillons reprogramms n'tait pas suffisante pour induire une expression bialllique, suggrant un contrle des empreintes chez les quins durant la reprogrammation.
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Limmunothrapie tumorale mdiation cellulaire est un traitement qui utilise le systme immunitaire des patients afin dinduire une rponse des lymphocytes T CD8+ (T CD8+) contre la tumeur. Cette rponse est produite suite la reconnaissance des antignes par les T CD8+. Ces cibles sont appeles antignes tumoraux (TAA) et dfinies comme des protines exprimes par les cellules cancreuses mais absentes des tissus normaux. Par une approche bio-informatique, notre laboratoire a identifi Dickkopf-1 (DKK1), une protine inhibitrice de la voie de Wnt, comme un TAA potentiel. Une immunothrapie mdiation cellulaire efficace requiert lidentification de TAA candidats pertinents. Le traitement de patients par immunothrapie pourrait galement tre amliores par laugmentation de la puissance daction anti-tumorale ainsi que la persistante des T CD8+ spcifiques aux TAA. Ce projet de doctorat se divise en deux parties : 1- La caractrisation de lexpression de DKK1 dans les cancers communs et la dtermination de son immunognicit afin de valider sa candidature comme TAA. 2- La reprogrammation des T CD8+, de patients atteints dun cancer commun, vers un phnotype moins diffrenti afin daugmenter leur potentiel anti-tumoral et leur persistance. Dans le premier objectif, nous avons caractris lexpression de DKK1 dans le cancer du sein et dans dautres cancers communs. Le profil dexpression de DKK1 a t tudi par RT-PCR et par ELISA dans plusieurs lignes cellulaires de cancer et dans les tissus normaux. Lexpression de DKK1 a aussi t tudie dans des chantillons cliniques provenant de cancers du sein, du poumon et du rein. Trente pourcents (30%) des tumeurs provenant dun cancer du sein exprimaient DKK1. La moiti des tumeurs DKK1(+) tait triple ngative, donc pas de rcepteurs dstrogne et de progestrone et tait Her-2/neu(-) (ces patientes ont des possibilits de traitements trs restreintes). De plus, 50% des chantillons cliniques de tumeurs du poumon et 30% des tumeurs de rein exprimaient DKK1. Les observations effectues dans le cancer du poumon ont t, par la suite, corrobores par d'autres groupes qui ont montr une corrlation entre l'expression de DKK1 et un mauvais pronostic. Aprs avoir confirme lexpression de DKK1 dans les cancers communs, justifiant ainsi sa candidature comme TAA, nous avons valu limmunognicit de DKK1. Pour ce faire, nous avons effectu des stimulations in vitro de cellules mononucles du sang priphrique (PBMC) de patient(e)s atteint(e)s dun cancer du sein ou du poumon avec des peptides drivs de DKK1 pouvant tre prsents par les complexes majeurs dhistocompatibilit (CMH) HLA-A*0201. Des clones de T CD8+ reconnaissant un peptide de DKK1 ont t identifis et isols. Par essai multiplex et cytomtrie de flux intracellulaire, la polyfonctionnalit dun ces clones T CD8+ spcifiques DKK1 a t tudie et a rvle un profil effecteur, renforant ainsi la candidature de DKK1 comme TAA. Dans lensemble, les rsultats obtenus dans cette premire partie de thse suggrent une possible utilisation de DKK1 en immunothrapie contre les cancers communs, attribuable son expression dans ces cancers et la possibilit de faire prolifrer des T CD8+ effecteurs spcifiques DKK1 partir de sang de patients. Dans la seconde partie de cette thse, je dcrirai la manipulation in vitro des T CD8+ de patients atteints dun cancer commun, afin daugmenter la force et la dure de leurs fonctions anti-tumorales. Il a t dmontr que des lymphocytes moins diffrentis sont capables dune rponse immunologique plus efficace et durable. Nous avons bas ce projet sur lutilisation dun inhibiteur pharmacologique de la GSK-3, pour activer de la voie de Wnt chez les T CD8+ et ainsi leur confrer un phnotype moins diffrenti, partageant des caractristiques de la cellule nave et de la cellule mmoire. Des cultures de T CD8+, spcifiques des antignes viraux, en prsence de linhibiteur ont permis daugmenter la scrtion dinterfron (IFN)- et leur activit cytotoxique. Ces rsultats indiquent un effet de lactivation de la voie de Wnt sur la fonction des T CD8+. Ces observations sont rapportes pour la premire fois chez les T CD8+ humains et suggrent une nouvelle stratgie, applicables limmunothrapie du cancer, afin de prolonger la persistance des cellules ainsi que leur activit anti-tumorale. En conclusion, ces travaux de recherche ont men la ralisation dune tape trs importante dans la validation de la candidature de DKK1 comme TAA pour les cancers communs, soit la dmonstration de son expression dans ces cancers et son absence dans les tissus normaux drivs dorganes importants. Ces travaux ont galement men la dmonstration de limmunognicit de DKK1, par lidentification dun peptide de DKK1 reconnu par les T CD8+. De plus, ltude de la polyfonctionnalit des T CD8+ spcifiques DKK1 a rvle un profil effecteur favorable pour lobtention dune rponse anti-tumorale efficace. Ces dcouvertes pourraient servir llaboration dune stratgie dimmunothrapie mdiation cellulaire pour les cancers communs. Pour sa part, ltude phnotypique et fonctionnelle de la modulation de la voie de Wnt dans les T CD8+ a donn lieu lobservation dun phnotype encore jamais rapport chez lhumain, confrant aux T CD8+ un aspect moins diffrenti avec des caractristiques propre un phnotype mmoire. Ces rsultats sont pertinents dans lamlioration de limmunothrapie du cancer, passant par laugmentation de la persistance des lymphocytes. En rsum, les rsultats prsents dans cette thse de doctorat fournissent des vidences indniables quant la validation de DKK1 comme TAA pour une immunothrapie mdiation cellulaire des cancers communs. Ces rsultats fournissent galement des preuves quant la pertinence de la reprogrammation des T CD8+ par lactivation de la voie de la voie de Wnt, afin de gnrer des lymphocytes mdiateurs plus efficaces pour ce type de thrapie.
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La rgulation transcriptionnelle des gnes est un processus indispensable sans lequel la diversit phnotypique des cellules ainsi que ladaptation leur environnement serait inexistant. Lidentification des lments de rgulation dans le gnome est dune importance capitale afin de comprendre les mcanismes gouvernant lexpression des gnes spcifiques un type cellulaire donn. Ainsi, suite au pic de LH, le follicule ovarien entre dans un programme intensif de diffrentiation cellulaire, orchestr par des modifications majeures du profile transcriptionnel des cellules de granulosa, dclenchant ultimement lovulation et la lutinisation, processus indispensables la fertilit femelle. Lhypothse supporte par cette tude stipule quune rorganisation de la structure chromatinienne survient aux rgions rgulatrices dune panoplie de gnes dans les heures suivant le pic de LH et quen isolant et identifiant ces rgions, il serait possible de retrouver des lments essentiels aux processus dovulation et de lutinisation. Ainsi, en utilisant un protocole standard de superovulation chez la souris, les lments de rgulation se modifiant 4h suivant ladministration de hCG ont t isols et identifis dans les cellules de granulosa en utilisant la mthode FAIRE (Formaldehyde-Assisted Isolation of Regulatory Elements) combine un squenage haut dbit. Cette tude a dmontr que suite au stimulus ovulatoire, les cellules de granulosa subissent une reprogrammation majeure des lments de rgulation, qui est corrle avec une modification drastique de leurs fonctions biologiques. De plus, cette tude a mis en vidence une association majoritaire des lments de rgulation des rgions intergniques distales et des introns, indiquant que ces rgions ont une importance capitale dans la rgulation transcriptionnelle dans les cellules de granulosa. Cette tude a galement permis didentifier une panoplie de rgulateurs transcriptionnels reconnus pour tre essentiels la fonction ovarienne, ainsi que leur sites de liaison dans le gnome, dmontrant que la mthode FAIRE est une mthode assez puissante pour permettre la prdiction dvnements molculaires prcis ayant un sens physiologique rel.
Derivation de cellules souches pluripotentes induites autologues a partir du clonage somatique equin
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Le recours aux cellules souches pour ameliorer la reparation et guerison des blessures et maladies musculosquelettiques chez le cheval est de plus en plus frequent. Les developpements recents dans la reprogrammation cellulaire ont permis le developpement de nouvelles sources de cellules souches pour ces therapies regeneratives. Des cellules souches pluripotentes induites (iPS) autologues peuvent etre derivees de cellules adultes par la reprogrammation directe a travers l'expression induite des genes de pluripotence. Le clonage par transfert nucleaire (SCNT) suivi de la derivation de cellules souches embryonnaires (ES) permet la reprogrammation indirecte des cellules adultes. Cependant, lefficacite de ces deux methodes pour la derivation de cellules pluripotentes genetiquement stables est faible. Nous avons donc combine les techniques SCNT et iPS dans le but de developper un protocole efficace de derivation de cellules iPS autologues a partir de fibroblastes de la peau equine. Quatre facteurs de reprogrammation ont ete introduits dans les cellules fibroblastes de ftus clones (ntFF) ainsi que les cellules ES provenant dembryons clones (ntES) pour induire leur reprogrammation en cellules iPS autologues. Les cellules ntFF-iPS et ntES-iPS ont des capacites proliferatives avancees et expriment des marqueurs de pluripotence importants. Par contre, les cellules ntES ont une efficacite de reprogrammation significativement superieure aux cellules nt-FF et forment des colonies trois fois plus rapidement. Contrairement aux cellules ntES, les cellules ntES-iPS demontrent une augmentation de lexpression des marqueurs de pluripotence et survivent a la culture cellulaire prolongee. Les resultats presentes dans ce memoire attestent que lutilisation de la reprogrammation secondaire de cellules FF et ES clonees permet la production de cellules souches pluripotentes autologues stables chez le cheval.
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Les kinases rgules par les signaux extracellulaires (ERK1/2) rgulent une multitude de processus cellulaires, incluant la prolifration, la survie et la diffrenciation. Ces kinases reprsentent llment terminal de la voie ERK/MAPK, laquelle est active dans prs de 30% de tous les cancers humains et donc gnralement perue comme tant un effecteur critique de la progression tumorale. Cependant, une accumulation dobservations suggrent que les kinases ERK pourraient galement induire la suppression tumorale. Le but premier de cette thse est de dmontrer comment la signalisation par ERK peut contribuer la suppression tumorale et de concilier les mcanismes impliqus avec son rle dans la progression du cancer. Puisque nos travaux ont une incidence sur les bnfices attendus de certaines thrapies actuellement en dveloppement, le deuxime objectif de la thse est de proposer de nouvelles stratgies thrapeutiques pour combattre le cancer. Nous avons dmontr quune hyperactivation des kinases ERK induit la snescence cellulaire. Le mcanisme implique la dgradation slective et dpendante du protasome de nombreuses protines, ce que nous avons nomm le SAPD (Senescence-Associated Protein Degradation). Ce processus cible des protines requises pour diffrentes fonctions cellulaires, incluant la progression du cycle cellulaire, les fonctions mitochondriales et la biogense des ribosomes. Ensuite, nos rsultats montrent quen plus dinhiber ltablissement de la snescence, une diminution de la signalisation par les kinases ERK favorise la reprogrammation cellulaire, laquelle permet aux cellules prcancreuses de dvelopper leur tumorignicit et aux cellules cancreuses dacqurir des proprits attribuables aux cellules souches. Ces observations suggrent que les mcanismes qui inhibent la voie ERK/MAPK pourraient favoriser linitiation du cancer, la formation de mtastases et la rsistance diverses thrapies. Enfin, nous avons dmontr que la metformine, utilise pour le traitement du diabte, inhibe le facteur de transcription NF-kB. Ce dernier joue un rle central dans la reprogrammation cellulaire et dans la production de cytokines pro-inflammatoires nocives par les cellules snescentes. Ainsi, nous mettons lhypothse que la metformine pourrait tre utilise en combinaison avec certaines thrapies afin dviter les effets secondaires tant dune inhibition des kinases ERK que dune hyperactivation. Globalement, les rsultats prsents dmontrent que leffet de la voie ERK/MAPK dpend de la force de son activation. Alors quune activation modre peut contribuer la prolifration de la plupart des cellules, une forte activation induit la snescence tandis quau contraire, une faible activation favorise la reprogrammation des cellules cancreuses et donc une augmentation de lagressivit de la tumeur. Cette polyvalence de la voie suggre une certaine prudence face lusage des inhibiteurs de la voie ERK/MAPK. Cependant, elle nous motive travailler au dveloppement de nouvelles stratgies thrapeutiques, lesquelles pourraient inclure la metformine.
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La mthylation de l'ADN est l'une des modifications pigntiques au niveau des lots CpG. Cette modification pigntique catalyse par les ADN mthyltransfrases (DNMTs) consiste en la mthylation du carbone 5' dune cytosine ce qui aboutit la formation de 5-mthylcytosine. La mthylation de l'ADN est clairement implique dans l'inactivation des gnes et dans l'empreinte gntique. Elle est module par la nutrition, en particulier par les donneurs de mthyle et par une restriction protique. Ces modifications pigntiques persistent plus tard dans la vie et conduisent au dveloppement de nombreuses pathologies telles que le syndrome mtabolique et le diabte de type 2. En fait, de nombreux gnes cls subissent une modification de leur tat de mthylation en prsence des composants du syndrome mtabolique. Cela montre que la mthylation de l'ADN est un processus important dans l'tiologie du syndrome mtabolique. Le premier travail de ce doctorat a port sur la rdaction dun article de revue qui a examin le cadre central du syndrome mtabolique et analyser le rle des modifications pigntiques susceptibles d'influer sur l'apparition du stress oxydant et des complications cardiomtaboliques. Dautre part, les cellules intestinales Caco-2/15, qui ont la capacit de se diffrencier et dacqurir les caractristiques physiologiques de l'intestin grle, ont t utilises et traites avec du Fer-Ascorbate pour induire un stress oxydant. Le Fer-Ascorbate a induit une augmentation significative de linflammation et de la peroxydation des lipides (malondialdehyde) ainsi que des altrations de de la dfense antioxydante (SOD2 et GPx) accompagnes de modifications pigntiques. De plus, la pr-incubation des cellules avec de la 5-aza-2'-dsoxycytidine, un agent de dmthylation et/ou lantioxydant Trolox a normalis la dfense antioxydante, rduit la peroxydation des lipides et prvenu l'inflammation. Ce premier travail a dmontr que les modifications du redox et linflammation induites par le Fer-Ascorbate peuvent impliquer des changements pigntiques, plus particulirement des changements dans la mthylation de lADN. Pour mieux dfinir limpact du stress oxydant au niveau nutritionnel, des cochons dInde gs de trois jours ont t spars en trois groupes : 1) Tmoins: alimentation rgulire; 2) Nutrition parentrale (NP) 3) H2O2 : Tmoins + 350 uM H2O2. Aprs quatre jours, pour un groupe, les perfusions ont t stoppes et les animaux sacrifis pour la collecte des foies. Pour lautre groupe danimaux, les perfusions ont t arrtes et les animaux ont eu un accs libre une alimentation rgulire jusqu' la fin de ltude, huit semaines plus tard o ils ont t sacrifis pour la collecte des foies. Ceci a dmontr qu une semaine de vie, l'activit DNMT et les niveaux de 5'-mthyl-2'-dsoxycytidine taient infrieurs pour les groupes NP et H2O2 par rapport aux tmoins. A neuf semaines de vie, lactivit DNMT est reste basse pour le groupe NP alors que les niveaux de 5'-mthyl-2'-dsoxycytidine taient plus faibles pour les groupes NP et H2O2 par rapport aux tmoins. Ce travail a dmontr que l'administration de NP ou de H2O2, tt dans la vie, induit une hypomthylation de l'ADN persistante en raison d'une inhibition de l'activit DNMT. Finalement, des souris ayant reu une dite riche en gras et en sucre (HFHS) ont t utilises comme modle in vivo de syndrome mtabolique. Les souris ont t nourris soit avec un rgime standard chow (tmoins), soit avec une dite riche en gras et en sucre (HFHS) ou avec une dite HFHS en combinaison avec du GFT505 (30 mg/kg), un double agoniste de PPAR et de PPAR, pendant 12 semaines. La dite HFHS tait efficace induire un syndrome mtabolique tant donne laugmentation du poids corporel, du poids hpatique, des adiposits viscrales et sous-cutanes, de linsensibilit linsuline, des lipides plasmatiques et hpatiques, du stress oxydant et de linflammation au niveau du foie. Ces perturbations taient accompagnes dune dficience dans lexpression des gnes hpatiques PPAR et PPAR concomitant avec une hypermthylation de leurs promoteurs respectifs. Lajout de GFT505 la dite HFHS a empch la plupart des effets cardiomtaboliques induits par la dite HFHS via la modulation ngative de lhypermthylation des promoteurs, rsultant en laugmentation de lexpression des gnes hpatiques PPAR et PPAR. En conclusion, GFT505 exerce des effets mtaboliques positifs en amliorant le syndrome mtabolique induit par l'alimentation HFHS via des modifications pigntiques des gnes PPARs. Ensemble, les travaux de cette thse ont dmontr que le stress oxydant provenant de la nutrition induit dimportants changements pigntiques pouvant conduire au dveloppement du syndrome mtabolique. La nutrition apparait donc comme un facteur crucial dans la prvention de la reprogrammation ftale et du dveloppement du syndrome mtabolique. Puisque les mcanismes suggrent que le stress oxydant agit principalement sur les mtabolites du cycle de la mthionine pour altrer lpigntique, une supplmentation en ces molcules ainsi quen antioxydants permettrait de restaurer lquilibre redox et pigntique.
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Contrairement la plupart des eucaryotes non-photosynthtiques, les vgtaux doivent assurer la stabilit dun gnome additionnel contenu dans le plastide, un organite dorigine endosymbiotique. Malgr la taille modeste de ce gnome et le faible nombre de gnes quil encode, celui-ci est absolument essentiel au processus de photosynthse. Pourtant, mme si ce gnome est dune importance cruciale pour le dveloppement de la plante, les principales menaces son intgrit, ainsi que les consquences dune dstabilisation gnralise de sa squence dADN, demeurent largement inconnues. Dans lobjectif dlucider les consquences de linstabilit gnomique chloroplastique, nous avons utilis le mutant why1why3polIb dArabidopsis thaliana, qui prsente dimportants niveaux de rarrangements gnomiques chloroplastiques, ainsi que la ciprofloxacine, un compos induisant des brisures double-brins dans lADN des organites. Ceci nous a permis dtablir quune quantit importante de rarrangements gnomiques provoque une dstabilisation de la chane de transport des lectrons photosynthtique et un grave stress oxydatif associ au processus de photosynthse. tonnamment, chez why1why3polIb, ces hautes concentrations despces oxygnes ractives ne mnent ni la perte de fonction des chloroplastes affects, ni la mort cellulaire des tissus. Bien au contraire, ce dsquilibre rdox semble tre lorigine dune reprogrammation gnique nuclaire permettant de faire face ce stress photosynthtique et confrant une tolrance aux stress oxydatifs subsquents. Grce une nouvelle mthode danalyse des donnes de squenage de nouvelle gnration, nous montrons galement quun type particulier dinstabilit gnomique, demeur peu caractris jusqu maintenant, constitue une des principales menaces au maintien de lintgrit gnomique des organites, et ce, tant chez Arabidopsis que chez lhumain. Ce type dinstabilit gnomique est dnomm rarrangement de type U-turn et est vraisemblablement associ au processus de rplication. Par une approche gntique, nous dmontrons que les protines chloroplastiques WHY1, WHY3 et RECA1 empchent la formation de ce type dinstabilit gnomique, probablement en favorisant la stabilisation et le redmarrage des fourches de rplication bloques. Une forte accumulation de rarrangements de type U-turn semble dailleurs tre lorigine dun svre trouble dveloppemental chez le mutant why1why3reca1. Ceci soulve de nombreuses questions quant limplication de ce type dinstabilit gnomique dans de nombreux troubles et pathologies possdant une composante mitochondriale.
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Une des caractristiques principales des cellules cancreuses est la reprogrammation de leur mtabolisme nergtique. Des mutations denzymes impliques dans diffrentes voies mtaboliques sont rcurrentes chez plusieurs tumeurs, contribuant ainsi la drgulation de ces cellules et loncognse. Cest le cas de lisocitrate dshydrognase 1 (IDH1) et 2 (IDH2), responsables de la conversion de lisocitrate en -ktoglutarate dans le cycle de lacide citrique. Ces enzymes sont frquemment mutes chez les gliomes, acqurant ainsi la capacit de convertir l-ktoglutarate en 2-hydroxyglutarate (2HG), un oncomtabolite inhibant les oxygnases -ktoglutarate dpendantes parmi lesquelles figure notamment KDM4A, une dmthylase de lysines. la recherche de nouvelles voies oncogniques potentiellement rgules par les formes mutes de IDH1/2, nous avons initialement observ que les mutations de ces deux enzymes et de PTEN, un rgulateur ngatif de la voie mTOR, taient mutuellement exclusives chez les gliomes. Ceci suggre que les mutations de IDH1/2 reproduiraient certains effets engendrs par les mutations de PTEN, crant ainsi un environnement oncognique similaire. Nous avons observ que les formes mutes de IDH1/2 stimulent lactivation de mTOR grce la production et laccumulation de 2HG. Cette activation repose en partie sur linhibition de KDM4A par cet oncomtabolite. KDM4A est impliqu dans la stabilisation de DEPTOR, un inhibiteur de mTOR. Ainsi, linhibition de KDM4A par le 2HG entrane la dstabilisation de DEPTOR et, par consquent, lactivation de mTOR. Nos travaux ont donc permis lidentification dun nouveau mcanisme oncognique rgul par les formes mutes de IDH1/2 retrouves chez les gliomes, soit lactivation de mTOR.
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Linflammation fait partie des processus ractionnels de dfense dont dispose lorganisme en rponse aux agressions, assurant lintgrit de lhte. En rponse au dommage tissulaire, plusieurs mdiateurs inflammatoires interviennent dans le processus de linflammation. Lors de ces dommages, des signaux de dangers provenant de cellules endommages sont relchs dans lenvironnement tissulaire, pouvant causer des dommages cellulaires et tissulaires. Les macrophages, tout comme dautres cellules, peuvent tre activs par ces signaux de danger, menant la scrtion de molcules telles que des cytokines et des chimiokines pouvant modifier le microenvironnement tissulaire. Les insultes au tissu sain peuvent entrainer la mort cellulaire telle que lapoptose. Les molcules pouvant tre relches lors de celle-ci contribuent au microenvironnement, notamment de par linfluence de celles-ci sur le macrophage. Parmi ces mdiateurs, nous avons identifi le Milk Fat Globule-Epidermal growth factor 8 (MFG-E8), un acteur important dans la rsolution de linflammation, comme tant relch spcifiquement par les cellules apoptotiques. Nous avons mis lhypothse que le microenvironnement apoptotique tissulaire, via la relche de MFG-E8, module le phnotype du macrophage, modifiant le microenvironnement, la rponse inflammatoire ainsi que le devenir de linsulte tissulaire. Nos objectifs sont 1) de caractriser ce microenvironnement apoptotique tissulaire et la cintique de relche du MFG-E8 par les cellules apoptotiques, 2) den valuer son rle dans la modulation du phnotype du macrophage ainsi que 3) den tudier, in vivo, son influence sur lenvironnement inflammatoire et le devenir tissulaire. Dans le premier article prsent, nous avons dmontr que les cellules endothliales apoptotiques relchent le MFG-E8 de faon Caspase-3 dpendante. La stimulation des macrophages par lenvironnement conditionn par les cellules endothliales apoptotiques mne ladoption dun profil macrophagien davantage anti-inflammatoire et moindrement pro-inflammatoire. Ce phnotype est rduit par linhibition de la Caspase-3 et il dpend de la prsence de MFG-E8. De plus, le potentiel du MFG-E8 la reprogrammation du macrophage pro-inflammatoire a t dmontr via un modle exprimental de pritonite. Ce changement phnotypique mdi par MFG-E8 implique une signalisation STAT3. Ayant dmontr que les cellules pithliales apoptotiques, linstar des cellules endothliales apoptotiques, relchent elles aussi de faon apoptose-dpendante le MFG-E8, nous avons tudi plus exhaustivement un modle in vivo riche en apoptose pithliale, lobstruction urtrale unilatrale. Dans ce deuxime article prsent, nous rapportons limplication bnfique de MFG-E8 dans ce modle de pathologie rnale obstructive. Nous avons constat que la prsence ou ladministration de MFG-E8 rduit le dommage tissulaire et la fibrose. La protection confre par MFG-E8 est mdie via la modulation de lactivation de linflammasome. De plus, nos rsultats illustrent limportance du phnotype anti-inflammatoire du macrophage mdi par le MFG-E8 dans la rgulation ngative de lactivation de linflammasome rnal et du dommage tissulaire. Cette thse prsente la premire description de la relche Caspase-3-dpendante de MFG-E8 par les cellules apoptotiques. Elle dmontre galement limportance du MFG-E8 dans le microenvironnement apoptotique inflammatoire dans lattnuation du phnotype pro-inflammatoire du macrophage. De plus, nous avons dmontr son rle protecteur dans des modles in vivo de transplantation aortique et de rparation tissulaire, de mme que dans un modle de maladie rnale chronique o nous avons montr que cette protection confre par MFG-E8 est mdie par la rgulation ngative de linflammasome tissulaire. Nos rsultats suggrent ainsi que le MFG-E8 pourrait tre considr comme un interrupteur inflammatoire et ainsi comme une cible potentielle dans la modulation de maladies inflammatoires.
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Linitiation de la leucmognse dans la leucmie aigue lymphoblastique (LAL)-T rsulte de lactivation aberrante de facteurs de transcription de la ligne lymphocytaire T. Nous dmontrons que les gnes de fusion NUP98-PHF23 (NP23) et NUP98-HOXD13 (NHD13) reprogramment les thymocytes normaux en cellules souches pr-leucmiques (CS-prL) possdant un potentiel aberrant dauto-renouvellement. Bas sur des essais de clonalit performs sur des thymocytes transplants en srie, nous avons dcouvert que cette population est hirarchise similairement aux cellules souches hmatopotiques normales. Ces CS-prL dvoilent un enrichissement du compartiment de prcurseurs thymiques immatures KIT+ o les deux oncognes, NP23 et NHD13, activent des gnes impliqus dans lautorenouvellement, incluant Hoxa9, Hoxa10, Lyl1 et Hhex. De plus, lactivit dautorenouvellement est abroge par les ARN interfrents contre Lyl1 et Hhex, indiquant leur implication fonctionnelle en aval de NP23 et NHD13. Puisque ces gnes sont aussi activs en aval de trois autres oncognes dans la LAL-T, SCL/TAL1, LMO1 et LMO2, nous concluons que les niveaux dactivation de Lyl1 et Hhex fixent le seuil de reprogrammation des thymocytes normaux en CS-prL. Malgr l'efficacit des traitements de chimiothrapie actuels diminuer la masse tumorale, les CS-prL sont pargnes, pouvant mener des rechutes. Nos rsultats rpondent ce besoin et proposent de nouvelles avenues permettant de cibler les CS-prL du compartiment de thymocytes immatures dans la LAL-T.
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Thse numrise par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
