97 resultados para Transfection transitoire
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La douleur neuropathique centrale post accident vasculaire crbral est une condition dbilitante dont le traitement savre souvent dlicat et infructueux. Le but de ce projet tait de reproduire cette condition chez le rat en injectant par strotaxie une solution de collagnase produisant une hmorragie localise dans le noyau ventropostrolatral du thalamus. Des tests comportementaux valuant la coordination motrice, la sensibilit mcanique, au chaud et au froid taient raliss rgulirement afin dtablir la prsence de douleur neuropathique puis les effets de ladministration de ktamine, damitriptyline, de gabapentine, et de carbamazepine taient valus. Linduction dune hmorragie intrathalamique conduit lapparition dallodynie mcanique bilatrale persistante ainsi que dallodynie au froid transitoire chez certains sujets et ce sans modification de la coordination motrice. Ladministration de ktamine forte dose renverse lallodynie mcanique mais est associe une altration de la motricit. Ladministration de gabapentine renverse galement cette allodynie mcanique sans effet notable sur la coordination motrice. Les autres mdicaments nont pas dmontr deffet significatif. Lvaluation histopathologique des cerveaux montre une lsion bien localise dans la zone dintrt. Ces rsultats montrent que linjection intrathalamique de collagnase peut tre utilise comme un modle fiable de douleur neuropathique centrale. Si la ktamine semble capable de soulager ce type de douleur, elle est associe des effets indsirables. En revanche, la gabapentine serait une molcule prometteuse pour le traitement de cette condition. Le rle des rcepteurs NMDA et des canaux calciques voltage dpendants, cibles respectives de la ktamine et de la gabapentine dans le maintien de cette douleur mrite dtre prcis.
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Les acides biliaires sont reconnus comme des tensioactifs dorigine biologique potentiellement applicables dans le domaine pharmaceutique. Leurs structures en font une plateforme idale pour lobtention de nouvelles architectures polymres. Des composs synthtiss par polymrisation anionique de drivs doxirane comme loxyde dthylne, offre des drivs amphiphiles pegyls dmontrant des proprits dagrgation intressantes en vue dune amlioration de la biocompatibilit et de la capacit dencapsulation mdicamenteuse. Une large gamme dacides biliaires pegyls (BA(EGn)x) a t prpare avec comme objectif premier leurs applications dans la formulation de principes actifs problmatiques. Pour cela, une caractrisation rigoureuse du comportement de ces drivs (modulation de la longueur (2 < n < 19) et du nombre de bras (2 < x < 4) de PEG) en solution a t ralise. Dans le but damliorer la biodisponibilit de principes actifs lipophiles (cas de litraconazole), des nanomulsions spontanes, composes de BA(EGn)x et dacide olique, ont t dveloppes. Lvaluation in vitro, de la toxicit (cellulaire), et de la capacit de solubilisation des systmes BA(EGn)x, ainsi que les paramtres pharmacocintiques in vivo (chez le rat), suggrent une livraison contrle par nos systmes auto-assembls lors de ladministration orale et intraveineuse. Aussi, la synthse de copolymres en blocs en toile base dacide cholique pegyls a t effectue par polymrisation anionique par addition dun second bloc au caractre hydrophobe de poly(ther dallyle et de glycidyle) (CA(EGn-b-AGEm)4). Selon le ratio de blocs hydrophiles-hydrophobes CA(EGn-b-AGEm)4, des rponses thermiques en solution (LCST) ont t observes par un point de trouble (Cp) entre 8 oC et 37 oC. Un mcanisme de formation dagrgats en plusieurs tapes est suggr. La thiolation des allyles des PAGE permet une fonctionnalisation terminale haute densit, comparable aux dendrimres. Les caractrisations physico-chimiques des CA(EGn-b-AGEm-NH2)4 et CA(EGn-b-AGEm-COOH)4 indiquent la formation de structures auto-assembles en solution, sensibles la temprature ou au pH. Cette fonctionnalisation largie le domaine dapplication des drivs dacides biliaires pegyls en toile vers la transfection dADN, la livraison de siRNA thrapeutiques ou encore une slectivit de livraison mdicamenteux (ex. sensibilit au pH, greffage ligands).
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Lencphalopathie hypoxique-ischmique cause des milliers de victimes travers le monde chaque anne. Les enfants survivants un pisode hypoxique-ischmique sont risque de dvelopper des problmes neurologiques incapacitants comme une paralysie crbrale, un retard mental, une pilepsie ou des troubles dordre comportemental. Les modles animaux ont amlior nos connaissances sur les mcanismes sous-jacents aux dommages crbraux, mais elles sont encore trop incompltes pour tre capables de prvenir les problmes neurologiques. Ce projet vise comprendre limpact dun pisode asphyxique prinatale associ des convulsions ainsi que lactivation de ladenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK) sur les circuits GABAergiques inhibiteurs en dveloppement chez la souris. Dans le but dinvestiguer le sort des neurones inhibiteurs, appels interneurones, suite un pisode asphyxique prinatal associ des convulsions avec des animaux transgniques, nous avons pris avantage dun nouveau modle dhypoxie permettant dinduire des convulsions chez la souris. Deux populations dinterneurones reprsentant ensemble environ 60% de tous les interneurones corticaux ont t tudies, soit les cellules exprimant la parvalbumine (PV) et les cellules exprimant la somatostatine (SOM). Ltude strologique na montr aucune mort neuronale de ces deux populations dinterneurones dans lhippocampe chez les souris hypoxique dge adulte. Par contre, le cortex des souris hypoxiques prsentait des zones compltement ou fortement dpourvues de cellules PV alors que les cellules SOM ntaient pas affectes. Lutilisation dune ligne de souris transgnique exprimant une protine verte fluorescente (GFP) dans les cellules PV nous a permis de comprendre que les trous PV sont le reflet de deux choses : 1) une diminution des cellules PV et 2) une immaturit des cellules PV restantes. Puisque les cellules PV sont spcifiquement affectes dans la premire partie de notre tude, nous avons voulu tudier les mcanismes molculaires sous-jacents cette vulnrabilit. LAMPK est un senseur dnergie qui orchestre le rtablissement des i niveaux dnergie cellulaire dans le cas dune dpltion nergtique en modulant des voies de signalisation impliquant la synthse de protines et lexcitabilit membranaire. Il est possible que lactivation dAMPK suite un pisode asphyxique prinatal associ des convulsions soit nfaste long-terme pour le circuit GABAergique en dveloppement et modifie ltablissement de linnervation prisomatique dune cellule PV sur les cellules pyramidales. Nous avons tudi cette hypothse dans un modle de culture organotypique en surexprimant la forme wild-type (WT) de la sous-unit 2 dAMPK, ainsi quune forme mute dominante ngative (DN), dans des cellules PV individuelles. Nous avons montr que pendant la phase de formation synaptique (jours post-natals quivalents EP 10-18), la surexpression de la forme WT dsorganise la stabilisation des synapses. De plus, labolition de lactivit dAMPK semble augmenter le nombre de synapses prisomatiques faits par la cellule PV sur les cellules pyramidales pendant la phase de formation et semble avoir leffet inverse pendant la phase de maturation (EP 16-24). La neurotransmission GABAergique joue plusieurs rles dans le cerveau, depuis la naissance jusqu lge adulte des interneurones, et une dysfonction des interneurones a t associe plusieurs troubles neurologiques, comme la schizophrnie, lautisme et lpilepsie. La maturation des circuits GABAergiques se fait majoritairement pendant la priode post-natale et est hautement dpendante de lactivit neuronale et de lexprience sensorielle. Nos rsultats rvlent que le lourd fardeau en demande nergtique dun pisode asphyxique prinatal peut causer une mort neuronale slective des cellules PV et compromettre lintgrit de leur maturation. Un des mcanismes sous- jacents possible cette immaturit des cellules PV suite lpisode hypoxique est lactivation dAMPK, en dsorganisant leur profil dinnervation sur les cellules pyramidales. Nous pensons que ces changements dans le rseau GABAergique pourrait contribuer aux problmes neurologiques associs une insulte hypoxique.
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Linsuffisance rnale chronique (IRC) est associe une rduction du mtabolisme de plusieurs mdicaments, due une diminution du cytochrome P450 (CYP450) hpatique. Nos tudes prcdentes ont montr que lIRC affecte lactivit in vivo et in vitro, de mme que lexpression protique et gnique des diffrents isoformes du CYP450, via la prsence du srum urmique et de lhormone parathyrodienne (PTH). Ce projet de doctorat se divise en quatre parties. Premirement, nous avons dvelopp une mthode danalyse de lactivit du CYP450, laide de la production du 3-hydroxy-5,5-dimethyl-4-[4-(methylsulfonyl)phenyl] furan-2(5H)-one (DFH) partir du 3-[(3,4-difluorobenzyl)oxy]-5,5-dimethyl-4-[4-methylsulfonyl)phenyl] furan-2(5H)-one (DFB). Cette mthode nous a permis de mieux quantifier lactivit dans les tudes subsquentes. Deuximement, lactivit du CYP450 3A est diminue chez les patients atteints dIRC. De plus, il a dj t dmontr que des toxines urmiques dialysables seraient impliques puisque lhmodialyse prvient cette inhibition du CYP450. Par contre, le mcanisme expliquant lamlioration transitoire la composition du srum de patients atteints dIRC par lhmodialyse nest pas connu. Lobjectif du projet est dvaluer leffet de lhmodialyse sur lexpression protique et gnique, de mme que sur lactivit du CYP450 3A2 dans un modle dhpatocytes de rat en culture. Troisimement, la dficience en calcidiol est frquente dans les cas dIRC et ltiologie est peu connue. Nous avons rcemment montr que lIRC est associe une diminution du mtabolisme des mdicaments par le foie suite une rduction des diffrents isoformes du CYP450 en partie mdie par lhormone parathyrodienne (PTH). La 25-hydroxylation de la vitamine D, au niveau du foie, permet la formation du calcidiol par diffrents isoformes du CYP450 (CYP2C11, 27A1, 2R1, 3A2 et 2J3) et pourrait tre ainsi altre en prsence dIRC. Les objectifs de cette tude sont de a) confirmer la diminution de synthse de calcidiol en prsence dIRC et b) valuer le rle de la PTH dans la dficience en calcidiol. Finalement, afin de mieux comprendre les inhibitions du CYP450, nous avons tudi les voies de signalisation impliques dans la rgulation du CYP450 en prsence dIRC et avec la PTH puisque les mcanismes daction demeurent imprcis. La contribution des facteurs de transcription et des rcepteurs nuclaires suivants est tudie ; le rcepteur pregnane X (PXR), le rcepteur constitutif androstane (CAR) et le facteur nuclaire kappa B (NF-B), puisquils sont potentiellement activs par le rcepteur de la PTH et ces molcules ont t prcdemment impliqus dans la rgulation du CYP450. Les rsultats obtenus montrent que lhmodialyse des patients atteints dIRC amliore transitoirement lexpression du CYP450 lorsque des hpatocytes sont mis en culture avec du srum provenant de ces patients. Aussi, la 25-hydroxylation de la vitamine D est affecte par lIRC. Les voies de signalisation du NF-B et les facteurs nuclaires PXR et CAR sont impliqus dans linhibition du CYP450. En conclusion, lIRC affecte, non seulement le mtabolisme des mdicaments mais aussi lhydroxylation de la vitamine D, un des rles endognes effectus par le CYP450. Ces tudes nous permettent de mieux comprendre les effets de lIRC afin de mieux cibler les traitements de choix pour les patients qui en sont atteints.
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La mitochondrie est de plus en plus reconnue pour sa contribution la dgnerescence musculaire. Les dysfonctions mitochondriales, en plus de causer une dfaillance nergtique, contribuent la signalisation apoptotique, stimule la production de ROS et peuvent induire une surcharge calcique. Ces caractristiques sont tous relies certains types de myopathies. Cette thse met en lumires comment certaines dysfonctions mitochondriales peuvent intervenir dans la pathogense de diverses myopathies. Nous dmontrons que les dysfonctions mitochondriales sont impliqus dans latrophie d la perte dinnervation. Par contre, la dsensabilisation de louverture du pore mitochondrial de transition de permabilit, via ablation gntique de cyclophiline-D, ne prvient ni la signalisation apoptotique mitochondrial ni latrophie. Nous avons aussi observ des dysfonctions mitochondriales dans le muscle atteint de dystrophie musculaire de Duchenne qui furent amliors suite une transfection de PGC1-, laquelle rsulta aussi en une amlioration de la pathologie. Finalement, nous dmontrons que le recyclage de mitochondrie par les voies de mitophagies et de contrles de la qualit impliquant Parkin et possiblement dautres voies de signalisation inconnues sont cruciales au recouvrement cardiaqe lors dun choc septique.
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Le tamoxifne, un modulateur slectif des rcepteurs oestrogniques, est un mdicament largement utilis depuis plus de vingt ans pour le traitement et la prvention du cancer du sein. Plusieurs tudes ont rapport que ladministration aigu du tamoxifne pouvait rduire certains courants K+ cardiaques. Cette observation suggre que les femmes traites de faon chronique avec le tamoxifne risquent davoir une prolongation de leur intervalle QT, favorisant ainsi le dveloppement de torsades de pointes. Puisque in vivo, le tamoxifne est largement mtabolis et son effet est attribu celui du 4hydroxy-tamoxifne (4OH-tamoxifne), nous avons d'abord vrifi si les effets du tamoxifne sur la repolarisation pouvaient tre dus au 4OH-tamoxifne. l'aide de la mthode de patch-clamp, nous avons tudi leffet aigu du 4OH-tamoxifne sur les courants K+ prsents au niveau ventriculaire chez la souris femelle. En premier lieu, nous avons dmontr que les souris traites avec le 4OH-tamoxifne prsentaient une diminution des courants K+ comparativement aux souris intactes. Fait intressant, le prtraitement des myocytes avec lantagoniste des rcepteurs oestrogniques, le ICI 182,780, ou linhibiteur de la synthse protique, l'actinomycine D, na pas modifi les effets du 4OH-tamoxifne. Ces rsultats suggraient que les effets du 4OH-tamoxifne sur les courants potassiques ne soient pas lis la transcription gnomique et nimplique pas les rcepteurs aux strognes. Bien que ladministration aigu du 4OH-tamoxifne diminue les courants K+ cardiaques, labsence de troubles au niveau du rythme cardiaque chez les femmes traites long terme exclu la possibilit de conclure que le traitement chronique avec le tamoxifne augmente la dure de lintervalle QT. L'accs des souris femelles et des cobayes nous a permis de dmontrer que contrairement au traitement en aigu, les courants et les canaux K+ cardiaques sont augments en chronique. Les oestrognes associs une diminution des courants K+ dune part et nos rsultats obtenus avec le tamoxifne dautre part suggrent quen bloquant les rcepteurs oestrogniques, le tamoxifne puisse prvenir les effets inhibiteurs des oestrognes sur les courants K+. Cette association strognes- tamoxifne- rcepteurs oestrogniques et courants K+ nous a encourages approfondir encore nos tudes et vrifier linfluence des hormones sexuelles fminines sur la repolarisation ventriculaire. Une troisime tude a t ainsi ralise chez des souris femelles ovariectomises et des souris dficientes en rcepteurs oestrogniques ou afin de vrifier le rle des oestrognes et des rcepteurs oestrogniques sur la repolarisation ventriculaire. Nos rsultats ont rvl clairement que labsence des oestrognes entrane une augmentation de la densit du courant K+ transitoire indpendant du Ca2+ (Ito) et de lexpression du canal Kv4.3 et ces effets sont mdis par les RE. Ces donnes soutiennent davantage notre conclusion que linhibition des rcepteurs oestrogniques est responsable de laugmentation des courants/canaux K+ et suggrent fortement quils jouent un rle dans la rgulation de la repolarisation ventriculaire. Elles soulignent aussi l'importance de vrifier le statut hormonal des animaux utiliss pour des tudes touchant l'lectrophysiologie cardiaque. Dans la dernire partie de cette thse nous avons vrifi les effets de la grossesse et du systme nerveux autonome sur les diffrents paramtres lectrocardiographiques et plus particulirement sur le rythme cardiaque chez la souris. Nos donnes ont montr que, comme chez la femme enceinte, la grossesse est associe une augmentation du rythme cardiaque. De plus, l'augmentation des niveaux des hormones fminines pourrait affecter lautomatisme et lactivit lectrique cardiaque. Ces diffrentes tudes ont augment les connaissances sur la rgulation hormonale de l'lectrophysiologie cardiaque et aideront aux avancements des recherches chez les femmes.
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Ralis en cotutelle avec l'Universit de Lorraine (France)
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Chez la levure Saccharomyces cerevisiae, l'actylation de l'histone H3 sur la lysine 56 (H3K56ac) est prsente sur les histones no-synthtises dposes derrire les fourches de rplication et est essentielle pour prserver la viabilit cellulaire en rponse au dommage l'ADN. La dsactylation d'H3K56 sur l'ensemble du gnome catalyse par Hst3 et Hst4 et a lieu en phase G2 ou M. H3K56ac est une lame double tranchant. L'absence d'H3K56ac rend les cellules sensibles aux dommages l'ADN. En revanche, un excs d'actylation d'H3K56 dans un mutant hst3 hst4 a des consquences encore plus svres tels que la thermo-sensibilit, l'hypersensibilit aux agents gnotoxiques, l'instabilit gnomique ainsi qu'une courte dure de vie rplicative. Les dsactylases Hst3 et Hst4 sont troitement rgules au cours du cycle cellulaire afin de permettre l'H3K56ac d'exercer son rle en rponse aux dommages l'ADN tout en vitant les consquences nfastes de l'hyperactylation d'H3K56. Dans cette thse, nous avons identifi la machinerie molculaire responsable de la dgradation de Hst3. De plus, nous avons explor les raisons pour lesquelles l'absence de dsactylation donne lieu aux phnotypes du mutant hst3 hst4. Au chapitre 2, nous dmontrons que la dgradation d'Hst3 peut tre complte avant l'anaphase. Ceci suggre que la dsactylation de H3K56 a lieu durant une courte fentre du cycle cellulaire se situant entre la compltion de la phase S et la mtaphase. De plus, nous avons identifi deux sites de phosphorylation d'Hst3 par la kinase cycline-dpendante 1 (Cdk1) et dmontr que ces vnements de phosphorylation conduisent la dgradation d'Hst3 in vivo. Nous avons aussi dmontr que l'ubiquityltransfrase Cdc34 et l'ubiquitine ligase SCFCdc4 sont requises pour la dgradation d'Hst3. Finalement, nous avons montr que la phosphorylation d'Hst3 par la kinase mitotique Clb2-Cdk1 peut directement entraner l'ubiquitylation d'Hst3 par SCFCdc4 in vitro. Au chapitre 3, nous avons tudi les mcanismes molculaires sous-jacents la sensibilit extrme du mutant hst3 hst4 aux agents qui endommagent l'ADN. Nous avons tabli qu'en raison de la prsence anormale d'H3K56ac devant les fourches de rplication, le mutant hst3 hst4 exhibe une forte perte de viabilit lorsqu'expos au mthyl mthanesulfonate (MMS) durant un seul passage travers la phase S. Nous avons aussi dcouvert que, malgr le fait que le point de contrle de rponse aux dommages l'ADN est activ normalement dans le mutant hst3 hst4, ce mutant est incapable de complter la rplication de l'ADN et d'inactiver le point de contrle pour une longue priode de temps aprs exposition transitoire au MMS. L'ensemble de nos rsultats suggre que les lsions l'ADN induites par le MMS dans le mutant hst3 hst4 causent une forte perte de viabilit parce que ce mutant est incapable de complter la rplication de l'ADN aprs une exposition transitoire au MMS. Dans la deuxime section du chapitre 3, nous avons employ une approche gntique afin d'identifier de nouveaux mcanismes de suppression de deux phnotypes prononcs du mutant hst3 hst4. Nous avons dcouvert que la dltion de plusieurs gnes impliqus dans la formation de frontires entre l'htrochromatine et de l'euchromatine attnue les phnotypes du mutant hst3 hst4 sans rduire l'hyperactylation d'H3K56. Nos rsultats indiquent aussi que l'abondante actylation de l'histone H4 sur la lysine 16 (H4K16ac) est nfaste au mutant hst3 hst4. Ce rsultat suggre un lien gntique intriguant entre l'actylation d'H3K56 et celle d'H4K16. L'existence de ce lien tait jusqu' prsent inconnu. Nous avons identifi un groupe de suppresseurs spontans o H3K56ac est indtectable, mais la majorit de nos suppresseurs ne montrent aucune rduction flagrante d'H3K56ac ou d'H4 K16ac par rapport aux niveaux observs dans le mutant hst3 hst4. Une tude plus approfondie de ce groupe de suppresseurs est susceptible de mener la dcouverte de nouveaux mcanismes gntiques ou pigntiques permettant d'viter les consquences catastrophiques de l'hyperactylation d'H3K56 chez le mutant hst3 hst4. En rsum, cette thse identifie la machinerie molculaire responsable de la dgradation d'Hst3 (une dsactylase d'H3K56) durant une fentre de temps situes entre la fin de la phase S et la mtaphase. Nos rsultats permettent aussi d'expliquer pourquoi la dgradation d'Hst3 prcde le dbut de la phase S durant laquelle l'actylation d'H3K56 s'accumule derrire les fourches de rplication afin d'exercer son rle de mcanisme de dfense contre le dommage l'ADN. De plus, nous avons identifi plusieurs suppresseurs qui permettent de contourner le rle important d'Hst3 et Hst4 en rponse au dommage l'ADN. Plusieurs suppresseurs rvlent un lien gntique inattendu entre deux formes abondantes d'actylation des histones chez Saccharomyces cerevisiae, soit H3K56ac et H4K16ac.
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Les cellules T CD8+ jouent un rle primordial dans le contrle des infections virales en limitant la dissmination des cellules infectes. Lors de linfection chronique par le virus HIV, les cellules T CD8+ HIV-spcifiques ne se diffrencient pas en cellules effectrices fonctionnelles capables de tuer les cellules infectes par le virus ; ces cellules ne sont plus capables de prolifrer ou de produire l IL-2. Ces cellules expriment PD-1 et lengagement de PD-1, par son ligand, aboutit a plusieurs de ces dficits fonctionnels des cellules T . Le rle de PD-1 dans la rgulation d'vnements transcriptionnels contrlant la diffrentiation et l'obtention des fonction effectrices des cellules T CD8+ reste dmontrer. Id2 joue un rle central dans la diffrenciation des cellules T CD8+ effectrices. Nous avons mis lhypothse que le dfaut de maturation observ chez les cellules T CD8+ PD-1 high HIV-spcifiques (CD8+PD-1hi) au cours de linfection chronique par le virus HIV pouvait tre li la diminution dexpression du rgulateur Id2. Nous avons ainsi dmontr que l'engagement de PD-1 contribuait une diminution d'expression de Id2 et de ses cibles transcriptionnelles. La surexpression de Id2 de ces cellules a permis de restaurer l'expression de marqueurs tels que Granzyme B et Bcl-2 et diminuir lexpression du marqueur de maturation de CD27. La famille des cytokines chaine gamma joue un rle clef dans la survie et lhomostasie des cellules T. Dans ce travail, nous avons dmontr que lIL-15 tait unique grce ses capacits de stimulation de lexpression dId2 et ses proprits favorisant la survie ainsi que la diffrenciation des cellules T CD8+ effectrices. lIL-15 induit la prolifration de toutes les populations de cellules T mmoires provenant de donneurs sains. Laddition de cette cytokine aux sous-populations cellulaires Ttm et Tem a permis leur diffrenciation en cellules effectrices capables de produire Granzyme B alors que la stimulation par lIL-15 des cellules Tcm ne favorise pas leur diffrenciation. Un test de cytotoxiciti par cytomtrie en flux nous a permis de confirmer que la stimulation de cellules T CD8+ HIV spcifiques par lIL-15 favorisait lexpression de Id2 et restaurait les fonctions cytotoxiques des cellules T CD8+ HIV spcifiques. En conclusion, nous avons pour la premire fois dans cette thse dfini les mcanismes molculaires impliqus dans la modulation de lexpression du rgulateur transcriptionnel Id2 par lIL-15. Nous avons galement rvl comment lengagement de PD-1 conduisait a une altration de lexpression et de la fonction dId2 et favorisait la diminution des fonctions effectrices des cellules T CD8-HIV spcifiques. Une perspective de traitement avec des agents tels que lIL-15 ou le bloquage de PD-1, en combinaison avec les traitements conventionnels, pourrait contribuer une meilleure stimulation des rponses immunes favorisant ainsi la ractivation des cellules T CD8+ et permettant la destruction de cellules T CD4+ infectes de manire latente.
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L'tre humain utilise trois systmes sensoriels distincts pour rguler le maintien de la station debout: la somesthsie, le systme vestibulaire, et le systme visuel. Le rle de la vision dans la rgulation posturale demeure peu connu, notamment sa variabilit en fonction de l'ge, du type dveloppemental, et des atteintes neurologiques. Dans notre travail, la rgulation posturale induite visuellement a t value chez des participants au dveloppement et vieillissement normaux gs de 5-85 ans, chez des individus autistes (dveloppement atypique) gs de 12-33 ans, ainsi que chez des enfants entre 9-18 ans ayant subi un TCC lger. cet effet, la ractivit posturale des participants en rponse un tunnel virtuel entirement immersif, se mouvant trois niveaux de vlocit, a t mesure; des conditions contrles, o le tunnel tait statique ou absent, ont t incluses. Les rsultats montrent que la ractivit (i.e. instabilit) posturale induite visuellement est plus leve chez les jeunes enfants; ensuite, elle s'attnue pour rejoindre des valeurs adultes vers 16-19 ans et augmente de faon linaire en fonction de l'ge aprs 45 ans jusqu' redevenir leve vers 60 ans. De plus, la plus haute vlocit du tunnel, les plus jeunes participants autistes ont manifest significativement moins de ractivit posturale comparativement leurs contrles; cette diffrence n'tait pas prsente chez des participants plus gs (16-33 ans). Enfin, les enfants ayant subi un TCC lger, et qui taient initialement modrment symptomatiques, ont montr un niveau plus lev d'instabilit posturale induite visuellement que les contrles, et ce jusqu' 12 semaines post-trauma malgr le fait que la majorit d'entre eux (89%) n'taient plus symptomatiques ce stade. En somme, cela suggre la prsence d'une importante priode de transition dans la maturation des systmes sous-tendant l'intgration sensorimotrice implique dans le contrle postural vers l'ge de 16 ans, et d'autres changements sensorimoteurs vers l'ge de 60 ans; cette sur-dpendance visuelle pour la rgulation posturale chez les enfants et les ans pourrait guider l'amnagement d'espaces et l'laboration d'activits ajusts l'ge des individus. De plus, le fait que l'hypo-ractivit posturale aux informations visuelles chez les autistes dpende des caractristiques de l'environnement visuel et de l'ge chronologique, affine notre comprhension des anomalies sensorielles propres l'autisme. Par ailleurs, le fait que les enfants ayant subi un TCC lger montrent des anomalies posturales jusqu' 3 mois post-trauma, malgr une diminution significative des symptmes rapports, pourrait tre reli une altration du traitement de l'information visuelle dynamique et pourrait avoir des implications quant la gestion clinique des patients aux prises avec un TCC lger, puisque la rsolution des symptmes est actuellement le principal critre utilis pour la prise de dcision quant au retour aux activits. Enfin, les rsultats obtenus chez une population dveloppement atypique (autisme) et une population avec atteinte neurologique dite transitoire (TCC lger), contribuent non seulement une meilleure comprhension des mcanismes d'intgration sensorimotrice sous-tendant le contrle postural mais pourraient aussi servir comme marqueurs sensibles et spcifiques de dysfonction chez ces populations. Mots-cls : posture, quilibre, vision, dveloppement/vieillissement sensorimoteur, autisme, TCC lger symptomatique, ralit virtuelle.
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La vaccination ADN laide de plasmides codant pour des autoantignes sest avre efficace dans la protection contre plusieurs maladies auto-immunes. Le but de ce mmoire tait dans un premier temps dtablir si un protocole de vaccination ADN compos de 3 injections de pCMV-CTLA-4-NP et de pVR-IL-12 deux semaines dintervalle avait un effet protecteur contre le dveloppement dune hpatite auto-immune chez la souris TTR-NP, un modle murin transgnique de la maladie et prcdemment dvelopp au laboratoire. Dans un deuxime temps, le but tait dlucider, le cas chant, les mcanismes sous-tendant la protection confre par la vaccination ADN. Les hypothses initiales taient quune protection allait effectivement tre confre par la vaccination ADN et que celle-ci pouvait tre attribuable une dviation de la rponse typiquement Th1 de la maladie vers une rponse Th2, un puisement des cellules immunitaires et/ou lactivation et linduction de prolifration de cellules rgulatrices. Les rsultats montrent que la vaccination ADN induit une protection transitoire contre le dveloppement dinfiltrations lymphocytaires au foie. Cette protection se ferait via un puisement des cellules CD4+, CD8+ et CD19+ se retrouvant la rate et exprimant PD 1 dans une plus forte proportion 3 mois, et ne serait mdie ni par les lymphocytes T rgulateurs CD4+CD25+FoxP3+, ni par les cellules CD8+FoxP3+. Une dviation de la rponse Th1 vers une rponse Th2 demeure une explication supplmentaire plausible la protection confre mais ncessiterait une caractrisation en situation plus physiologique avant de pouvoir infrer sur son implication relle. La vaccination ADN ninflue ni sur la prsence dautoanticorps, ni sur les niveaux dalanine aminotransfrase, deux marqueurs de la maladie.
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Les dyskinsies tardives (DT) sont des troubles moteurs associs lutilisation chronique des antagonistes des rcepteurs dopaminergiques D2 tels que les antipsychotiques et le mtoclopramide. Ces dyskinsies correspondent une incoordination motrice portant prfrentiellement sur la musculature oro-faciale. La gestion des DT s'est impose comme dfi de sant publique surtout en labsence dune alternative thrapeutique efficace et abordable. Lhypothse classiquement avance pour expliquer la physiopathologie des DT inhrente au traitement par les antipsychotiques sarticule autour de lhypersensibilit des rcepteurs dopaminergiques D2, cibles principales de ces molcules. Nanmoins, plusieurs donnes remettent la vracit de cette hypothse en question. Hypothse: nous proposons que le blocage chronique des rcepteurs dopaminergiques soit effectivement responsable dun phnomne dhypersensibilisation mais contrairement lhypothse classique, cette hypersensibilisation porterait sur des paramtres de la transmission dopaminergique autres que les rcepteurs D2. De mme nous postulons que cette hypersensibilisation se traduirait par des altrations des cascades signaltiques au niveau des cellules du striatum. Ces altrations aboutissent des changements portant sur le rcepteur nuclaire (Nur77), qui est hautement associ au systme dopaminergique; linduction de ces rcepteurs dclencherait des cascades associes la compensation ou la gense des DT. Matriels et mthodes: 23 femelles Cebus apella, rparties en 3 groupes: groupe halopridol, groupe clozapine, et groupe contrle, ont t exposes aux traitements respectifs pendant 6-36 mois. Aprs lanalyse comportementale, les animaux ont t dcapits et leurs cerveaux isols pour fin danalyse. Hybridation in situ: nous avons fait appel cette technique pour mesurer lexpression de lARNm de Nur77 et du neuropeptide enkphaline. Hybridation in situ double: nous avons exploits cette technique pour identifier les populations neuronales exprimant les rcepteurs dopaminergiques D3 et localiser leur ventuelle induction. Autoradiographies des rcepteurs dopaminergiques D1, D2 et D3 et autoradiographies des rcepteurs i glutamatergiques mGluR5. Ces autoradiographies avaient pour objectif dvaluer lexpression de ces diffrents rcepteurs. Mutagense dirige et transfection cellulaire: nous faisons appel ces techniques pour reproduire le polymorphisme identifi au niveau de la rgion 3UTR de lARNm Nur77 et valuer limpact que pourrait avoir ce polymorphisme sur la stabilit de lARNm Nur77 sinon sur lexpression de la protine Nur77. Western Blot des kinases ERK 1 et 2: cette technique nous a servi comme moyen pour quantifier lexpression globale de ces kinases. Analyses statistiques: lexpression de lARNm Nur77 a t value en utilisant lanalyse de la variance un seul facteur (One way ANOVA). Nous avons procd de la mme faon pour mesurer lexpression des rcepteurs D2, D3 et mGluR5. Rsultats: le groupe des animaux traits par lhalopridol montre une plus forte expression des rcepteurs D3 par rapport aux sujets des autres groupes. Cette expression se produit au niveau des neurones de la voie directe. De plus, cette augmentation corrle positivement avec la svrit des DT. Lexpression des rcepteurs D2 et mGluR5 reste relativement inchange entre les diffrents groupes, alors quun gradient dexpression a t observ pour le rcepteur D1. Par ailleurs, Nur77 est induit par lhalopridol, alors que son expression semble baisser chez les animaux traits par la clozapine. Linduction de lexpression de Nur77 par lhalopridol est plus accrue chez les animaux non dyskintiques. Les animaux traits par la clozapine dmontrent une expression amoindrie de lARNm de Nur77 qui tend tre plus faible que lexpression de base. Dautre part, la prsence du polymorphisme au niveau de la rgion 3UTR semble affecter lexpression cellulaire de Nur77. Conclusion: ces rsultats confortent notre hypothse concernant lexistence dun phnomne dhypersensibilisation prenant place suite un traitement chronique par les antipsychotiques. Ce phnomne sest traduit par une augmentation de lexpression des rcepteurs D3 sans porter sur les rcepteurs D2 tel que prn classiquement. Cette hypersensibilisation des rcepteurs D3 implique galement lexistence dun dbalancement des voies striatales pouvant ainsi sous tendre lapparition des DT. Ces rsultats dvoilent ainsi un nouveau mcanisme qui pourrait contribuer lapparition des DT et pourraient permettre une meilleure gestion, nous lesprons, des DT lchelle clinique.
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Une comprehension profonde de la separation de charge a lheterojonction de semi-con- ducteurs organiques est necessaire pour le developpement de diodes photovoltaiques organiques plus efficaces, ce qui serait une grande avancee pour repondre aux besoins mondiaux en energie durable. Lobjectif de cette these est de decrire les processus impliques dans la separation de charges a heterojonctions de semi-conducteurs organiques, en prenant en exemple le cas particulier du PCDTBT: PCBM. Nous sondons les excitations dinterface a laide de methodes spectroscopiques resolues en temps couvrant des echelles de temps de 100 femto- secondes a 1 milliseconde. Ces principales methodes spectroscopiques sont la spectroscopie Raman stimulee femtoseconde, la fluorescence resolue en temps et labsorption transitoire. Nos resultats montrent clairement que le transfert de charge du PCDTBT au PCBM a lieu avant que lexciton ne soit relaxe et localise, un fait experimental irreconciliable avec la theorie de Marcus semi-classique. La paire de charges qui est creee se divise en deux categories : les paires de polarons geminales non piegees et les paires profondement piegees. Les premiers se relaxent rapidement vers lexciton a transfert de charge, qui se recombine radiativement avec une constante de temps de 1 2 nanoseconde, alors que les seconds se relaxent sur de plus longues echelles de temps via leffet tunnel. Notre modele photophysique quantitatif demontre que 2 % de lexcitation creee ne peut jamais se dissocier en porteurs de charge libre, un chiffre qui est en accord avec les rendements eleves rapportes pour ce type de systeme.
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Escherichia coli est un agent de mammites environnementales. Par contre, E. coli peut persister dans la glande mammaire. Les objectifs de cette tude taient de confirmer la prsence dinfection persistante chez des vaches laitires canadiennes et didentifier la possibilit de contagion entre les quartiers dune vache dans une cohorte de 91 fermes suivies durant deux ans. De plus, les souches persistantes ont t compares des souches transitoires. Les profils gntiques ont t obtenus laide de llectrophorse sur gel en champs pulss. La dtection de la rsistance pour sept antibiotiques sest faite par microdilution. Vingt-sept gnes de virulence ont t dtermins par hybridation sur colonies. De la persistance a t dtecte chez 18 vaches et de la contagion entre quartiers, chez deux vaches. La proportion de rsistance chez les E. coli persistants tait de 0,0 % (enrofloxacin) 27,8 % (ampicilline et ttracycline) et de 0,0 % (enrofloxacin) 16,8 % (ttracycline) pour les E. coli transitoires. Pour chacune des rsistances additionnelles, les probabilits dtre une souche persistante augmentaient par un facteur 1,6 (95% IC : 1.1, 2.4). Une souche rsistante lampicilline et la cphalothine avait une plus forte probabilit dtre persistante. Une souche possdant le gne iroN avait 5.4 fois plus de probabilit (95% IC: 1.2, 24.0) dtre persistante. Aussi, une souche positive pour le gne sitA avait 8.6 fois plus de probabilit (95% IC: 2.8, 27.1) dtre persistante. En conclusion, cette tude confirme quE. coli peut persister dans la glande mammaire des vaches laitires canadiennes et que ces E. coli sont diffrents de ceux impliqus lors dinfection transitoire.
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Loestradiol joue un rle important dans la reproduction en gnral, particulirement dans la croissance folliculaire chez la vache. La production de lstradiol ncessite lexpression du gne CYP19A1 suite la stimulation des cellules de granulosa par lhormone folliculostimulante (FSH) ou le facteur de croissance insulinique de type 1 (IGF-1). Chez la vache, il existe six promoteurs (1.1 ; 1.2 ; 1.3 ; 1.4 ; 1.5 et 2) qui dirigent la transcription du gne CYP19A1 dans les cellules de la granulosa. Le principal promoteur qui dirige la transcription au niveau de lovaire (cellules de granulosa) est le promoteur 2 (P2). Cependant, leffet de la FSH et de lIGF-1 sur lactivation de ces promoteurs daromatase demeure mal connu. De plus, la demi-vie du transcrit CYP19A1 est trs courte avec une rgion 3UTR relativement longue. Lanalyse de la squence 3UTR montre la prsence des motifs ARE (squence riche en AU), des tudes antrieur montrent que ces squences impliquent dans la rgulation de la stabilit ou la dgradation de lARNm, ce qui est fort probable que la courte demi-vie de lARNm CYP19A1 est sous le contrle post-transcriptionel. Lobjectif de la thse visait tudier la rgulation de lexpression du gne CYP19A1 chez la vache. Il y a deux thmes soit tude de la rgulation transcriptionnelle ciblant le promoteur et soit tude de la rgulation post-transcriptionnelle impliquant la rgion 3non traduite (3UTR). Le premier objectif vise tudier la rgulation transcriptionnelle du gne CYP19A1. Nous avons tudi l'activit du promoteur ovarien bovin dans deux modles de cellules de la granulosa, les cellules lutinises et nonlutinises in vitro, suite une stimulation des cellules par la FSH ou IGF-1. Nous avons galement valu la voie de signalisation implique dans la rgulation des diffrents promoteurs en utilisant un RT-PCR et un gne rapporteur (les diffrents promoteurs daromatase ont t insrs dans le vecteur pGL3promoter en amont du gne exprimant la lucifrase). Les rsultats de RT-PCR dmontrent que la FSH et lIGF-1 augmentent les concentrations dARNm provenant des deux promoteurs 2 et 1.1 dans les cellules de la granulosa non lutinises. Des expriences subsquentes ont montr que la FSH stimule le promoteur 2 via la voie PKA tandis que l'IGF-1 stimule le promoteur 2 via la voie PKC. La FSH et lIGF-1 stimulent lexpression du promoteur 1.1 via la voie PI3K. Lanalyse de lactivit lucifrase dmontre que dans les cellules de granulosa lutinises, la FSH stimule le promoteur 1.1 de faon dose dpendante et ne semble y avoir aucun effet significatif sur le promoteur 2. Nous avons donc compar lactivit du promoteur PII/P2 humain, du rat, de la chvre et de la vache dans les cellules de granulosa bovine lutinises. Le rsultat le plus significatif est que le promoteur 2 bovine (et caprine) dpend de plusieurs facteurs de transcription (NR5A2, FOXL2) compar au promoteur PII humain et celui du promoteur proximal du rat qui dpendent principalement de l'AMPc. En effet, nos rsultats ont dmontr une expression raisonnablement robuste du P2 bovine lorsque les cellules sont traites la forskoline, NR5A2 et FOXL2. Le facteur FOXL2 semble dterminer l'activit du promoteur 2 chez le ruminant. Le deuxime objectif vise tudier la rgulation post-transcriptionnelle du gne CYP19A1. Pour ce faire, nous avons dtermin la squence minimale de l'ARNm CYP19A1 requise pour la rgulation de sa demi-vie. Diffrents squences de la rgion 3UTR ont t insrs dans le vecteur pGL3promoter en aval du gne exprimant la lucifrase ou soit dans le vecteur pGEMTeasy. Le vecteur pGL3promoter a t transfect dans les cellules de granulosa lutinises pour valuer l'impact de la squence 3'UTR sur l'expression du gne rapporteur de la lucifrase, alors que le vecteur pGEMTeasy a t utilis pour la transcription in vitro afin de gnrer de lARNm. Ce dernier sera utilis en raction croise au UV avec des extraits protiques pour dmontrer lassociation du complexe ARNm/protine. Lanalyse de lactivit lucifrase a permis didentifier une squence de 200 pb situe entre 926 et 1134 pb de la rgion 3'UTR de lARNm CYP19A1 qui a rduit significativement lactivit de la lucifrase. Selon les analyses de la raction croise au UV, une ou plusieurs protines de 66 et 80 kDA se lient spcifiquement la squence de 200 pb qui rduit lactivit de lucifrase. Cette protine s'exprime dans les cellules de granulosa, mais na pas t dtecte dans d'autres tissus comme le foie et le cur. Par ailleurs, lutilisation du gne rapporteur sensible la FSH a suscit lintrt d'une compagnie pharmaceutique qui vend de lequine chorionic gonadotropin (eCG) pour lui permettre de distinguer facilement leCG ayant une forte activit FSH et donc, avoir un produit commercial plus efficace et de meilleure qualit. Dans cette tude, nous avons dvelopp un systme de bioessai la FSH bas sur la transfection des cellules avec un rcepteur la FSH et un gne rapporteur colorimtrique qui permet destimer lactivit de la FSH dans le srum de la jument et qui pourrait tre applicable au niveau de la ferme/industrie.
