Target joining of duplicated insertion sequence IS21 is assisted by IstB protein in vitro.

Tandemly repeated insertion sequence IS21, located on a suicide plasmid, promoted replicon fusion with bacteriophage lambda in vitro in the presence of ATP. This reaction was catalyzed in a cell extract containing the 45-kDa IstA protein (cointegrase) and the 30-kDa IstB helper protein of IS21 after both proteins had been overproduced in Escherichia coli. Without IstB, replicon fusion was inefficient and did not produce the 4-bp target duplications typical of IS21.

Tissue oxygenation and hemodynamic response to NO synthase inhibition in septic shock.

The objective of the study was to evaluate the tissue oxygenation and hemodynamic effects of NOS inhibition in clinical severe septic shock. Eight patients with septic shock refractory to volume loading and high level of adrenergic support were prospectively enrolled in the study. Increasing doses of NOS inhibitors [N(G)-nitro-L-arginine-methyl ester (L-NAME) or N(G)-monomethyl-L-arginine (L-NMMA)] were administered as i.v. bolus until a peak effect = 10 mmHg on mean blood pressure was obtained or until side effects occurred. If deemed clinically appropriate, a continuous infusion of L-NAME was instituted and adrenergic support weaning attempted. The bolus administration of NOS inhibitors transiently increased mean blood pressure by 10 mm Hg in all patients. Seven out of eight patients received an L-NAME infusion, associated over 24 h with a progressive decline in cardiac index (P < 0.001) and an increase in systemic vascular resistance (P < 0.01). Partial or total adrenergic support weaning was rapidly possible in 6/8 patients. Oxygen transport decreased (P < 0.001), but oxygen consumption remained unchanged in those patients in whom it could be measured by indirect calorimetry (5/8). Blood lactate and the difference between tonometric gastric and arterial PCO2 remained unchanged. There were 4/8 ICU survivors. We conclude that nitric oxide synthase inhibition in severe septic shock was followed with a progressive correction of the vasoplegic hemodynamic disturbances with finally normalization of cardiac output and systemic vascular resistances without any demonstrable deterioration in tissue oxygenation.

Pretreatment and outcome correlates of sexual and physical trauma in an epidemiological cohort of first-episode psychosis patients.

OBJECTIVES: High prevalence of trauma has been reported in psychosis. While role of trauma as a risk factor for developing psychosis is still debated, its negative impact on outcome has been described. Few studies have explored this issue in first-episode psychosis (FEP) patients. We assessed rate of stressful events, as well as premorbid and outcome correlates of past sexual and/or physical abuse (SPA) in an epidemiological FEP patients cohort. METHODS: The Early Psychosis Prevention and Intervention Centre admitted 786 FEP patients between 1998 and 2000. Data were collected from patients' files using a standardized questionnaire. A total of 704 files were available, 43 excluded because of a nonpsychotic diagnosis at end point and 3 due to missing data regarding past stressful events; 658 patients were analyzed. RESULTS: A total of 83% patients had been exposed to at least one stressful event and 34% to SPA. SPA patients were more likely to have presented other psychiatric disorders before psychosis onset (posttraumatic stress disorder, substance use disorder), to have made suicide attempts in the past, and to have had poorer premorbid functional levels. Additionally, SPA patients had higher rate of comorbid diagnosis at program entry and were more likely to attempt suicide during treatment. CONCLUSIONS: SPA prevalence is high in FEP patients and must be explored by clinicians considering its durable impact on psychological balance and link with long-lasting suicidal risk. More research is warranted to better understand mechanisms involved between trauma and its potential consequences, as well as to develop psychological interventions adapted to this very sensitive and complex issue.

Decreasing mortality and changing patterns of causes of death in the Swiss HIV Cohort Study.

BACKGROUND: Mortality among HIV-infected persons is decreasing, and causes of death are changing. Classification of deaths is hampered because of low autopsy rates, frequent deaths outside of hospitals, and shortcomings of International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems (ICD-10) coding. METHODS: We studied mortality among Swiss HIV Cohort Study (SHCS) participants (1988-2010) and causes of death using the Coding Causes of Death in HIV (CoDe) protocol (2005-2009). Furthermore, we linked the SHCS data to the Swiss National Cohort (SNC) cause of death registry. RESULTS: AIDS-related mortality peaked in 1992 [11.0/100 person-years (PY)] and decreased to 0.144/100 PY (2006); non-AIDS-related mortality ranged between 1.74 (1993) and 0.776/100 PY (2006); mortality of unknown cause ranged between 2.33 and 0.206/100 PY. From 2005 to 2009, 459 of 9053 participants (5.1%) died. Underlying causes of deaths were: non-AIDS malignancies [total, 85 (19%) of 446 deceased persons with known hepatitis C virus (HCV) status; HCV-negative persons, 59 (24%); HCV-coinfected persons, 26 (13%)]; AIDS [73 (16%); 50 (21%); 23 (11%)]; liver failure [67 (15%); 12 (5%); 55 (27%)]; non-AIDS infections [42 (9%); 13 (5%); 29 (14%)]; substance use [31 (7%); 9 (4%); 22 (11%)]; suicide [28 (6%); 17 (7%), 11 (6%)]; myocardial infarction [28 (6%); 24 (10%), 4 (2%)]. Characteristics of deceased persons differed in 2005 vs. 2009: median age (45 vs. 49 years, respectively); median CD4 count (257 vs. 321 cells/μL, respectively); the percentage of individuals who were antiretroviral therapy-naïve (13 vs. 5%, respectively); the percentage of deaths that were AIDS-related (23 vs. 9%, respectively); and the percentage of deaths from non-AIDS-related malignancies (13 vs. 24%, respectively). Concordance in the classification of deaths was 72% between CoDe and ICD-10 coding in the SHCS; and 60% between the SHCS and the SNC registry. CONCLUSIONS: Mortality in HIV-positive persons decreased to 1.33/100 PY in 2010. Hepatitis B or C virus coinfections increased the risk of death. Between 2005 and 2009, 84% of deaths were non-AIDS-related. Causes of deaths varied according to data source and coding system.

Médecines complémentaires: vers un consensus evidence- based à l'hôpital universitaire [Complementary and alternative medicines (CAM): towards an evidence-based consensus in the university hospital].

While a popular vote supported a new article on complementary and alternative medicines (CAM) in the Swiss Constitution, this assessment in 14 wards of the University Hospital of Lausanne, Switzerland, attempted at answering the question: How can CAM use be better taken into account and patients informed with more rigor and respect for their choices? Confronted with a review of the literature (> 2000 publications in "Evidence-based complementary medicines" since 1998), respondents declared their ignorance of the clinical data presently available on CAM. All were in favour of more teaching and information on the subject, plus an official statement from the Hospital direction, ensuring production and diffusion of rigorous and clinically significant information on CAM.

Prévalence du désir de mort et facteurs associé : une revue de la littérature

Contexte: Le désir de hâter la survenue de leur mort (DM)¦exprimé par certains patients est souvent vécu difficilement¦par les soignants. Le débat actuel sur le¦suicide assisté et l'euthanasie met en lumière cette¦problématique encore peu explorée. Le but de cette¦revue est d'identifier la prévalence du DM et les¦facteurs associés à ce désir.¦Méthode: Une revue de littérature a été conduite jusqu'en¦septembre 2010 en utilisant les termes : « Wish to¦die/to hasten death - Desire to hasten death/for¦death/for early death - Request for assistance in¦dying - Assisted suicide - Euthanasia » et « Advanced/¦terminal illness - Chronic illness/disease ». Seules les¦études cliniques menées auprès de patients ont été¦sélectionnées.¦Résultats: 55 études ont été identifiées, dont 13 de type qualitatif¦: 63% d'entre elles portaient sur des patients¦atteints de cancer, 22% de maladies de diverses origines,¦9% d'VIH et 6% de sclérose latérale amyotrophique.¦Seulement 9% portaient spécifiquement sur¦des patients gériatriques. La définition du DM était¦très variable d'une étude à l'autre, allant du désir de¦mourir à un souhait de hâter la survenue de la mort,¦voire à une demande explicite d'assistance au suicide¦ou d'euthanasie. La prévalence du DM variait¦de 2 à 22% selon la définition utilisée et la population¦étudiée. Les facteurs les plus fréquemment associés¦au DM étaient la dépression, le désespoir, la perte¦de sens, de dignité et le sentiment d'être une charge.¦Les symptômes physiques et les autres dimensions¦psychosociales ne paraissaient jouer qu'un rôle indirect.¦Une instabilité temporelle du DM était rapportée¦par neuf travaux, notamment lors de dépression.¦Discussion: L'hétérogénéité de ces études ne permet pas de¦conclure sur la prévalence des différentes expressions¦du DM. Par ailleurs, même si certains facteurs¦semblent associés au DM, de nouvelles études sont¦nécessaires pour mieux comprendre la chronologie¦de son développement.¦Perspectives: Des études prospectives, utilisant notamment une¦approche mixte, qualitative et quantitative, sont nécessaires. Elles devraient explorer non seulement les facteurs de risque mais également les facteurs « protecteurs » du DM. Sur cette base, un modèle conceptuel pourrait être défini et utilisé ensuite pour développer des interventions spécifiques dans l'objectif d'améliorer la prise en charge des patients exprimant un tel désir.¦Références: 1. Hudson PL, Kristjanson LJ, Ashby M, et al. Desire for hastened death in patients with advanced disease and the evidence base of clinical¦guidelines : a systematic review. Palliat Med 2006;20:693-701.¦2. Schroepfer TA. Mind frames towards dying and factors motivating their adoption by terminally ill elders. J Gerontol 2006;61:S129-S139.¦3. Rodin G, Lo C, Mikulincer M, Donner A, Gagliese L, Zimmermann C.¦Pathways to distress : the multiple determinants of depression, hopelessness, and the desire for hastened death in metastatic cancer¦patients. Soc Sci Med 2009;68:562-9.

Evaluation and comparison of current fetal ultrasound image segmentation methods for biometric measurements: a grand challenge.

This paper presents the evaluation results of the methods submitted to Challenge US: Biometric Measurements from Fetal Ultrasound Images, a segmentation challenge held at the IEEE International Symposium on Biomedical Imaging 2012. The challenge was set to compare and evaluate current fetal ultrasound image segmentation methods. It consisted of automatically segmenting fetal anatomical structures to measure standard obstetric biometric parameters, from 2D fetal ultrasound images taken on fetuses at different gestational ages (21 weeks, 28 weeks, and 33 weeks) and with varying image quality to reflect data encountered in real clinical environments. Four independent sub-challenges were proposed, according to the objects of interest measured in clinical practice: abdomen, head, femur, and whole fetus. Five teams participated in the head sub-challenge and two teams in the femur sub-challenge, including one team who tackled both. Nobody attempted the abdomen and whole fetus sub-challenges. The challenge goals were two-fold and the participants were asked to submit the segmentation results as well as the measurements derived from the segmented objects. Extensive quantitative (region-based, distance-based, and Bland-Altman measurements) and qualitative evaluation was performed to compare the results from a representative selection of current methods submitted to the challenge. Several experts (three for the head sub-challenge and two for the femur sub-challenge), with different degrees of expertise, manually delineated the objects of interest to define the ground truth used within the evaluation framework. For the head sub-challenge, several groups produced results that could be potentially used in clinical settings, with comparable performance to manual delineations. The femur sub-challenge had inferior performance to the head sub-challenge due to the fact that it is a harder segmentation problem and that the techniques presented relied more on the femur's appearance.

Trends in cardiovascular risk factors (1984-1993) in a Swiss region: results of three population surveys.

BACKGROUND: This study attempted to assess the time trends in lifestyle and cardiovascular risk factors in the Swiss region of Vaud-Fribourg (population 784,000). METHODS: Three surveys (1984/1985, 1988/1989, and 1992/1993), based on independent representative samples (n = 3,300) of the population ages 25 to 74, were conducted within the framework of the international WHO-MONICA Project. RESULTS: The most favorable changes were observed in reported behaviors: increased physical activity in leisure time, healthier dietary habits (switch from unskimmed milk, butter, and meat to skimmed milk, margarine, and fish, with no change for fruits and vegetables), and lower prevalence of regular smoking among men (from 32 to 28%). Body mass index did not vary significantly, apart from an increase in the prevalence of obesity among men (from 11 to 15%). Total cholesterol varied only slightly, while the HDL cholesterol levels decreased steadily (from 1.37 to 1.19 mmol/L among men; from 1.59 to 1.51 among women). Average systolic blood pressure regressed among women (from 127.2 to 124.4 mm Hg), while the prevalence of untreated hypertension increased among older men. CONCLUSION: The self-reported changes in lifestyle were only partially reflected by favorable trends in objective measurements. Physical activity, even at moderate intensity, and consumption of fruits, vegetables, and fiber in general should be promoted.

Replicating adenoviruses targeting tumours with constitutive activation of the Wnt signalling pathway

Abstract Activation of the Wnt pathway through mutation of the adenomatous polyposis coli and 13-catenin genes is a hallmark of colon cancer. These mutations lead to constitutive activation of transcription from promoters containing binding sites for Tcf/LEF transcription factors. Tumour-selective replicating oncolytic viruses are promising agents for cancer therapy. They can in principle spread throughout a tumour mass until all the cancerous cells are killed, and clinical trials have shown that they are safe except at very high doses. Adenoviruses are interesting candidates for virotherapy because their biology is well understood and their small genome can be rapidly mutated. Adenoviruses with Tcf binding sites in the E2 early promoter replicate selectively in cells with an active Wnt pathway. Although these viruses can replicate in a broad panel of colon cancer cell lines, some colorectal cancer cells are only semi-permissive for Tcf-virus replication. The aim of my thesis was to increase the safety and the efficacy of Tcf-viruses for colon cancer virotherapy. I replaced the endogenous ElA viral promoter by four Tcf binding sites and showed that transcription from the mutant promoter was specifically activated by the Wnt pathway. A virus with Tcf binding sites in the ElA and E4 promoters was more selective for the Wnt pathway than the former Tcf-E2 viruses. Moreover, insertion of Tcf binding sites into all early promoters further increased viral selectivity, but reduced viral activity. I showed that Tcf-dependent transcription was inhibited by the interaction between ElA and p300, but deletion of the p300-binding site of ElA generally led to viral attenuation. In the semi-permissive cell lines, replication of Tcf-viruses remained lower than that of the wild-type virus. The E2 promoter was the most sensitive to the cell type, but I was unable to improve its activity by targeted mutagenesis. To increase the toxicity of the Tcf-E1A/E4 virus, I decided to express a suicide gene, yeast cytosine deaminase (yCD), late during infection. This enzyme converts the prodrug 5-FC to the cytotoxic agent 5-FU. yCD was expressed in a DNA replication-dependent manner and increased viral toxicity in presence of 5-FC. Tcf-ElA and yCD adenoviruses are potentially useful vectors for the treatment of liver metastases from colorectal tumours. Résumé Dans la quasi-totalité des cancers du côlon, la voie Wnt est activée par des mutations dans les gènes codant pour APC ou pour la (3-caténine. Ces mutations activent de façon constitutive la transcription de promoteurs contenant des sites de liaison pour les facteurs de transcription Tcf/LEF. Les virus réplicatifs spécifiques aux tumeurs sont des agents prometteurs pour la thérapie cancéreuse. En principe, ces vecteurs peuvent se propager dans une masse tumorale jusqu'à destruction de toutes les cellules cancéreuses, et des études cliniques ont démontré que de tels vecteurs n'étaient pas toxiques, sauf à de très hautes doses. Les adénovirus sont des candidats intéressants pour la thérapie virale car leur biologie est bien définie et leur petit génome peut être rapidement modifié. Des adénovirus comportant des sites de liaison à Tcf dans leur promoteur précoce E2 se répliquent sélectivement dans les cellules qui possèdent une voie Wnt active. Ces virus sont capables de se répliquer dans un grand nombre de cellules cancéreuses du côlon, bien que certaines de ces cellules ne soient que semi-permissives pour la réplication des virus Tcf. Le but de ma thèse était d'augmenter la sécurité et l'efficacité des virus Tcf. Le promoteur viral endogène ElA a été remplacé par quatre sites de liaison à Tcf, ce qui a rendu son activation dépendante de la voie Wnt. Un virus comportant des sites de liaison pour Tcf dans les promoteurs ElA et E4 était plus sélectif pour la voie Wnt que les précédents virus Tcf-E2, et un virus comportant des sites Tcf dans tous les promoteurs précoces était encore plus sélectif, mais moins actif. J'ai montré que l'interaction entre ElA et p300 inhibait la transcription dépendante de Tcf, mais la délétion du domaine concerné dans ElA a eu pour effet d'atténuer les virus. Dans les cellules semi-permissives, la réplication des virus Tcf était toujours plus basse que celle du virus sauvage. J'ai identifié le promoteur E2 comme étant le plus sensible au type cellulaire, mais n'ai pas pu augmenter son activité par mutagenèse. Pour augmenter la toxicité du virus Tcf-E1A/E4, j'ai décidé d'exprimer un gène suicide, la cytosine déaminase (yCD), pendant la phase tardive de l'infection. Cette enzyme transforme la procirogue 5-FC en l'agent cytotoxique 5-FU. yCD était exprimée après réplication de l'ADN viral et augmentait la toxicité virale en présence de 5-FC. Les virus Tcf-ElA et yCD sont des vecteurs potentiellement utiles pour le traitement des métastases hépatiques de cancers colorectaux.

Traitement par thoracoscopie du pneumothorax récidivant [Thoracoscopic treatment of recurrent pneumothorax].

Spontaneous pneumothorax (PNO) is usually due to rupture of a small subpleural bleb into the pleural cavity and affects mainly young men. After simple drainage, recurrence occurs in about 50% of cases. The risk of recurrence increases after each new PNO. Secondary PNO complicates an underlying pulmonary disease, especially chronic obstructive pulmonary disease with emphysema. A new form of secondary PNO has emerged in the recent years in AIDS patients with pneumocystis carinii pneumonia. We have shifted to a thoracoscopic therapy of PNO since May 1991. 25 PNO in 24 patients (1 bilateral) have been treated since that time up to April 1993. 19 PNO were primary, whereas 6 were secondary, included 3 iatrogenic PNO. Resection of the leaking parenchymal area was performed in 20 patients, and parietal partial pleurectomy was done in 20 cases. In the remaining cases, fibrin glue was applied on the lesion and in 3 cases, chemical pleurodesis was attempted using silver nitrate or talc. 1 AIDS patient died of ARDS. 3 patients had recurrent PNO and had thoracotomy without complication. 21 patients did well. Partial PNO recurred in one of them 4 months later, and was treated by simple needle aspiration. Thoracoscopy is a useful method to treat recurrent or persistent spontaneous PNO. After only 25 cases, our success rate in primary PNO is 90%. There should be a learning curve. On the basis of our experience, we believe that recognition of the lesion and its resection as well as apical parietal pleurectomy are necessary to obtain good results and a low recurrence rate.

Intrinsic ROS-production capacity of nanoparticles

Engineered nanomaterials (ENMs) exhibit special physicochemical properties and thus are finding their way into an increasing number of industries, enabling products with improved properties. Their increased use brings a greater likelihood of exposure to the nanoparticles (NPs) that could be released during the life cycle of nano-abled products. The field of nanotoxicology has emerged as a consequence of the development of these novel materials, and it has gained ever more attention due to the urgent need to gather information on exposure to them and to understand the potential hazards they engender. However, current studies on nanotoxicity tend to focus on pristine ENMs, and they use these toxicity results to generalize risk assessments on human exposure to NPs. ENMs released into the environment can interact with their surroundings, change characteristics and exhibit toxicity effects distinct from those of pristine ENMs. Furthermore, NPs' large surface areas provide extra-large potential interfaces, thus promoting more significant interactions between NPs and other co-existing species. In such processes, other species can attach to a NP's surface and modify its surface functionality, in addition to the toxicity in normally exhibits. One particular occupational health scenario involves NPs and low-volatile organic compounds (LVOC), a common type of pollutant existing around many potential sources of NPs. LVOC can coat a NP's surface and then dominate its toxicity. One important mechanism in nanotoxicology is the creation of reactive oxygen species (ROS) on a NP's surface; LVOC can modify the production of these ROS. In summary, nanotoxicity research should not be limited to the toxicity of pristine NPs, nor use their toxicity to evaluate the health effects of exposure to environmental NPs. Instead, the interactions which NPs have with other environmental species should also be considered and researched. The potential health effects of exposure to NPs should be derived from these real world NPs with characteristics modified by the environment and their distinct toxicity. Failure to suitably address toxicity results could lead to an inappropriate treatment of nano- release, affect the environment and public health and put a blemish on the development of sustainable nanotechnologies as a whole. The main objective of this thesis is to demonstrate a process for coating NP surfaces with LVOC using a well-controlled laboratory design and, with regard to these NPs' capacity to generate ROS, explore the consequences of changing particle toxicity. The dynamic coating system developed yielded stable and replicable coating performance, simulating an important realistic scenario. Clear changes in the size distribution of airborne NPs were observed using a scanning mobility particle sizer, were confirmed using both liquid nanotracking analyses and transmission electron microscopy (TEM) imaging, and were verified thanks to the LVOC coating. Coating thicknesses corresponded to the amount of coating material used and were controlled using the parameters of the LVOC generator. The capacity of pristine silver NPs (Ag NPs) to generate ROS was reduced when they were given a passive coating of inert paraffin: this coating blocked the reactive zones on the particle surfaces. In contrast, a coating of active reduced-anthraquinone contributed to redox reactions and generated ROS itself, despite the fact that ROS generation due to oxidation by Ag NPs themselves was quenched. Further objectives of this thesis included development of ROS methodology and the analysis of ROS case studies. Since the capacity of NPs to create ROS is an important effect in nanotoxicity, we attempted to refine and standardize the use of 2'7-dichlorodihydrofluorescin (DCFH) as a chemical tailored for the characterization of NPs' capacity for ROS generation. Previous studies had reported a wide variety of results, which were due to a number of insufficiently well controlled factors. We therefore cross-compared chemicals and concentrations, explored ways of dispersing NP samples in liquid solutions, identified sources of contradictions in the literature and investigated ways of reducing artificial results. The most robust results were obtained by sonicating an optimal sample of NPs in a DCFH-HRP solution made of 5,M DCFH and 0.5 unit/ml horseradish peroxidase (HRP). Our findings explained how the major reasons for previously conflicting results were the different experimental approaches used and the potential artifacts appearing when using high sample concentrations. Applying our advanced DCFH protocol with other physicochemical characterizations and biological analyses, we conducted several case studies, characterizing aerosols and NP samples. Exposure to aged brake wear dust engenders a risk of potential deleterious health effects in occupational scenarios. We performed microscopy and elemental analyses, as well as ROS measurements, with acellular and cellular DCFH assays. TEM images revealed samples to be heterogeneous mixtures with few particles in the nano-scale. Metallic and non-metallic elements were identified, primarily iron, carbon and oxygen. Moderate amounts of ROS were detected in the cell-free fluorescent tests; however, exposed cells were not dramatically activated. In addition to their highly aged state due to oxidation, the reason aged brake wear samples caused less oxidative stress than fresh brake wear samples may be because of their larger size and thus smaller relative reactive surface area. Other case studies involving welding fumes and differently charged NPs confirmed the performance of our DCFH assay and found ROS generation linked to varying characteristics, especially the surface functionality of the samples. Les nanomatériaux manufacturés (ENM) présentent des propriétés physico-chimiques particulières et ont donc trouvés des applications dans un nombre croissant de secteurs, permettant de réaliser des produits ayant des propriétés améliorées. Leur utilisation accrue engendre un plus grand risque pour les êtres humains d'être exposés à des nanoparticules (NP) qui sont libérées au long de leur cycle de vie. En conséquence, la nanotoxicologie a émergé et gagné de plus en plus d'attention dû à la nécessité de recueillir les renseignements nécessaires sur l'exposition et les risques associés à ces nouveaux matériaux. Cependant, les études actuelles sur la nanotoxicité ont tendance à se concentrer sur les ENM et utiliser ces résultats toxicologiques pour généraliser l'évaluation des risques sur l'exposition humaine aux NP. Les ENM libérés dans l'environnement peuvent interagir avec l'environnement, changeant leurs caractéristiques, et montrer des effets de toxicité distincts par rapport aux ENM originaux. Par ailleurs, la grande surface des NP fournit une grande interface avec l'extérieur, favorisant les interactions entre les NP et les autres espèces présentes. Dans ce processus, d'autres espèces peuvent s'attacher à la surface des NP et modifier leur fonctionnalité de surface ainsi que leur toxicité. Un scénario d'exposition professionnel particulier implique à la fois des NP et des composés organiques peu volatils (LVOC), un type commun de polluant associé à de nombreuses sources de NP. Les LVOC peuvent se déposer sur la surface des NP et donc dominer la toxicité globale de la particule. Un mécanisme important en nanotoxicologie est la création d'espèces réactives d'oxygène (ROS) sur la surface des particules, et les LVOC peuvent modifier cette production de ROS. En résumé, la recherche en nanotoxicité ne devrait pas être limitée à la toxicité des ENM originaux, ni utiliser leur toxicité pour évaluer les effets sur la santé de l'exposition aux NP de l'environnement; mais les interactions que les NP ont avec d'autres espèces environnementales doivent être envisagées et étudiées. Les effets possibles sur la santé de l'exposition aux NP devraient être dérivés de ces NP aux caractéristiques modifiées et à la toxicité distincte. L'utilisation de résultats de toxicité inappropriés peut conduire à une mauvaise prise en charge de l'exposition aux NP, de détériorer l'environnement et la santé publique et d'entraver le développement durable des industries de la nanotechnologie dans leur ensemble. L'objectif principal de cette thèse est de démontrer le processus de déposition des LVOC sur la surface des NP en utilisant un environnement de laboratoire bien contrôlé et d'explorer les conséquences du changement de toxicité des particules sur leur capacité à générer des ROS. Le système de déposition dynamique développé a abouti à des performances de revêtement stables et reproductibles, en simulant des scénarios réalistes importants. Des changements clairs dans la distribution de taille des NP en suspension ont été observés par spectrométrie de mobilité électrique des particules, confirmé à la fois par la méthode dite liquid nanotracking analysis et par microscopie électronique à transmission (MET), et a été vérifié comme provenant du revêtement par LVOC. La correspondance entre l'épaisseur de revêtement et la quantité de matériau de revêtement disponible a été démontré et a pu être contrôlé par les paramètres du générateur de LVOC. La génération de ROS dû aux NP d'argent (Ag NP) a été diminuée par un revêtement passif de paraffine inerte bloquant les zones réactives à la surface des particules. Au contraire, le revêtement actif d'anthraquinone réduit a contribué aux réactions redox et a généré des ROS, même lorsque la production de ROS par oxydation des Ag NP avec l'oxygène a été désactivé. Les objectifs associés comprennent le développement de la méthodologie et des études de cas spécifique aux ROS. Etant donné que la capacité des NP à générer des ROS contribue grandement à la nanotoxicité, nous avons tenté de définir un standard pour l'utilisation de 27- dichlorodihydrofluorescine (DCFH) adapté pour caractériser la génération de ROS par les NP. Des etudes antérieures ont rapporté une grande variété de résultats différents, ce qui était dû à un contrôle insuffisant des plusieurs facteurs. Nous avons donc comparé les produits chimiques et les concentrations utilisés, exploré les moyens de dispersion des échantillons HP en solution liquide, investigué les sources de conflits identifiées dans les littératures et étudié les moyens de réduire les résultats artificiels. De très bon résultats ont été obtenus par sonication d'une quantité optimale d'échantillons de NP en solution dans du DCFH-HRP, fait de 5 nM de DCFH et de 0,5 unité/ml de Peroxydase de raifort (HRP). Notre étude a démontré que les principales raisons causant les conflits entre les études précédemment conduites dans la littérature étaient dues aux différentes approches expérimentales et à des artefacts potentiels dus à des concentrations élevées de NP dans les échantillons. Utilisant notre protocole DCFH avancé avec d'autres caractérisations physico-chimiques et analyses biologiques, nous avons mené plusieurs études de cas, caractérisant les échantillons d'aérosols et les NP. La vielle poussière de frein en particulier présente un risque élevé d'exposition dans les scénarios professionnels, avec des effets potentiels néfastes sur la santé. Nous avons effectué des analyses d'éléments et de microscopie ainsi que la mesure de ROS avec DCFH cellulaire et acellulaire. Les résultats de MET ont révélé que les échantillons se présentent sous la forme de mélanges de particules hétérogènes, desquels une faible proportion se trouve dans l'échelle nano. Des éléments métalliques et non métalliques ont été identifiés, principalement du fer, du carbone et de l'oxygène. Une quantité modérée de ROS a été détectée dans le test fluorescent acellulaire; cependant les cellules exposées n'ont pas été très fortement activées. La raison pour laquelle les échantillons de vielle poussière de frein causent un stress oxydatif inférieur par rapport à la poussière de frein nouvelle peut-être à cause de leur plus grande taille engendrant une surface réactive proportionnellement plus petite, ainsi que leur état d'oxydation avancé diminuant la réactivité. D'autres études de cas sur les fumées de soudage et sur des NP différemment chargées ont confirmé la performance de notre test DCFH et ont trouvé que la génération de ROS est liée à certaines caractéristiques, notamment la fonctionnalité de surface des échantillons.

History of offending behavior in first episode psychosis patients : a marker of specific clinical needs and a call for early detection strategies among young offenders

Plusieurs études suggèrent que les patients qui présentent un premier épisode psychotique et un passé délictueux présenteraient une clinique spécifique et nécessiteraient une prise en charge adaptée. A partir d'une cohorte de patients suivis pour un premier épisode psychotique dans la région de Melbourne {The Early Psychosis Prevention and Intervention Centre), nous avons analysé la prévalence d'actes délictueux dans leur passé (1), les caractéristiques cliniques à leur admission (2), l'évolution à court terme des patients ayant commis des délits par rapport aux autres patients (3). Nous avons également cherché à déterminer si des délits plus graves (atteinte à l'intégrité d'une personne) étaient corrélés à des caractéristiques cliniques particulières. Sur les 649 patients dont les données ont pu être analysées entre 1998 et 2000, 29% avaient un passé délictueux. Ils étaient en majorité des hommes et présentaient des difficultés sociales et scolaires plus importantes que les autres patients. Ils avaient également recours de manière plus régulière à des substances illicites et commis plus souvent des tentatives de suicide. Le tableau clinique qu'ils présentaient à leur admission dans le programme de soins était plus complexe et l'évolution globalement plus défavorable après 18 mois de traitement. Nous avons relevé aussi que la durée de psychose non traitée était plus longue que celle des autres patients. Enfin, les délits avec atteinte à l'intégrité d'une autre personne étaient plus fréquents en présence d'un insight faible et nécessitaient un plus grand nombre d'hospitalisation. Ces résultats confirment le besoin d'une recherche approfondie dans ce champ de la clinique et de stratégies de prévention et de soins plus spécifiques. Une détection précoce chez les jeunes hommes qui commettent des actes délictueux serait particulièrement importante puisque notre étude suggère que certains d'entre eux seraient dans une phase débutante et non reconnue d'un épisode psychotique. Une intervention plus rapide et adaptée pourrait avoir des conséquences positives à plusieurs niveaux.

Development of novel immunotherapies against bladder cancer

Le cancer de la vessie est le deuxième cancer urologique le plus fréquent dans le monde. La plupart des patients (75%) sont initialement diagnostiqués avec un cancer non musculo- invasif. Après résection trans-urétrale, ie traitement standard pour ce type de lésion chez les patients présentant un risque important de récidive/progression consiste en une série d'instillations intravésicales du Bacille de Calmette-Guerin (i.e. le vaccin BCG). Cependant cette "BCG thérapie" est associée à des effets secondaires non négligeables et s'avère inefficace dans 30% des cas, des limitations donc importantes qui soulignent la nécessité de développer des stratégies thérapeutiques alternatives. L'utilisation d'antigènes associés aux tumeurs (TAA) comme vaccin, combinée à une application locale d'immunostimulants sur le site tumoral, est une approche prometteuse en vue de maximiser les réponses immunitaires anti-tumorales localement. Nous montrons que la bactérie vivante atténuée Ty21a, issue du vaccin Vivotif® contre la fièvre typhoïde, peut être utilisée comme immunostimulant intravésical (IVES), mais ce uniquement dans le cas où la bactérie est en phase exponentielle de croissance (Vivotif exp). En effet, l'instillation IVES de Vivotif exp à la suite d'une vaccination par un TAA, un antigène mineur d'histocompatibilité mâle H-Y (Uty), permet d'augmenter de 15 fois le nombre de cellules T CD8 totales et spécifiques de l'antigène dans la vessie. Le recrutement des cellules T est TLR4-dépendent, ce qui suggère un rôle des lipopolysaccharides du Vivotif exp. Par ailleurs, en comparaison avec le contenu bactérien de la capsule de Vivotif, les bactéries en phase exponentielle de croissance permettent également une augmentation préférentielle des chemokines C5/C5a, CXCL1, CXCL2 et CXCL5 dans la vessie, mais pas du nombre de cellules T exprimant les récepteurs apparentés (C5aR et CXCR2). De plus, combiner la vaccination Uty avec le Vivotif exp en IVES permet d'améliorer la survie des souris présentant une tumeur orthotopique de la vessie exprimant l'antigène Uty (lignée tumorale murine MB49). Puisque pour certains cancers, aucun TAA - du moins exprimé à tous les stades tumoraux - n'est identifié, il est nécessaire de développer d'autres approches non vaccinales. Dans une deuxième partie de ce travail de thèse, nous avons donc investigué deux stratégies permettant d'induire une destruction des cellules tumorales, la thérapie génique par gène de suicide, d'une part, et la thérapie photodynamique dans le proche infrarouge (NIR-PDT), d'autre part. Pour appliquer ces thérapies, nous avons utilisé comme vecteur sûr et non toxique une forme non réplicative du virus du « Human Papillomavirus » (HPV) capable de "pseudo-infecter" préférentiellement les souris présentant des tumeurs vésicales (MB49). L'utilisation de pseudovirions (PsV) HPV portant comme gène suicide la thymidine kinase, une enzyme du virus de l'herpès simplex, suivi d'un traitement par la prodrogue Ganciclovir, permet de tuer 90% des cellules MB49 in-vitro ainsi que de ralentir significativement le développement des tumeurs vésicales in-vivo. Par ailleurs, l'emploi de particules pseudo- virales HPV couplées à la phtalocyanine IR700, un pigment photosensible présentant un pouvoir cytotoxique une fois activé, permet de tuer, après application d'une lumière dans le proche infrarouge, quasi 100% des cellules MB49 in-vitro et, plus important, de régresser des tumeurs in-vivo. De façon générale, ce travail de thèse présente des approches thérapeutiques innovantes et prometteuses pour le traitement des patients avec un cancer non musculo-invasif de la vessie. -- Bladder cancer is the second most common urological malignancy in the world. At initial diagnosis, non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) accounts for 75% of bladder cancer. The standard of care of NMIBC consists of intravesical (IVES) treatments with Bacillus- Calmette-Guerin (BCG) following transurethral resections of the lesions. However, repeated BCG treatments are associated with significant side effects and treatment failure may occur in 30% of the cases, underlying the necessity of alternative therapeutic strategies. The use of tumor-associated antigens (TAA) as vaccines followed by the local application of immunostimulants where the tumor resides is a promising approach to increase anti-tumor immune responses locally. We show that live attenuated Ty21a bacteria used from the vivotif® vaccine against typhoid fever can efficiently be used as IVES immunostimulant, only if bacteria are grown to exponential phase (Vivotif exp). In this condition, IVES immunostimulation after TAA vaccination with a minor histocompatibility male antigen HY (Uty) resulted in more than 15-fold increase of both vaccine-specific and total CD8-T cells in the bladder. T cell recruitment was mediated by TLR-4 suggesting that it was mainly mediated by lipopolysaccharides of Vivotif exp. In addition, these bacteria, as compared to the bacterial content of the vivotif capsule preferentially increased C5/C5a, CXCL1, CXCL2 and CXCL5 chemokines, but not the numbers of T cells expressing the cognate receptors (C5aR and CXCR2). Combination of IVES Vivotif exp with Uty vaccination improved survival of mice with pre-established orthotopic Uty-expressing MB49 murine bladder tumors, as compared to vaccination alone. As known TAA are not identified in all cancers, or not expressed in all stages of the tumor, we further investigated two potent approaches able of initiating tumor-cell destruction, suicide-gene therapy and near-infrared (NIR) photodynamic therapy (PDT). Towards a safe and non-toxic application of these therapies, we used Human Papillomavirus (HPV) replication-defective vectors that were able to preferentially pseudo-infect MB49-tumor bearing mice. HPV pseudovirions (PsV) carrying the Herpex-Simplex virus thymidine kinase suicide-gene followed by treatment with the prodrug Ganciclovir resulted in 90% of MB49 cell-death in-vitro and was able to significantly reduce bladder tumor growth in-vivo. Furthermore, HPV virus-like particles coupled to a NIR phtalocyanine dye, IR700 in combination with specific NIR light led to almost 100% of MB49 cell-death in-vitro and more interestingly, to bladder tumors shrinkage in-vivo. Overall, in this thesis, we offer promising therapeutic approaches for application in NMIBC patients.

Post-mortem determination of insulin using chemiluminescence enzyme immunoassay: preliminary results.

Insulin determination in blood sampled during post-mortem investigation has been repeatedly asserted as being of little diagnostic value due to the rapid occurrence of decompositional changes and blood haemolysis. In this study, we assessed the feasibility of insulin determination in post-mortem serum, vitreous humour, bile, and cerebrospinal and pericardial fluids in one case of fatal insulin self-administration and a series of 40 control cases (diabetics and non-diabetics) using a chemiluminescence enzyme immunoassay. In the case of suicide by insulin self-administration, insulin concentrations in pericardial fluid and bile were higher than blood clinical reference values, though lower than post-mortem serum concentration. Insulin concentrations in vitreous (11.50 mU/L) and cerebrospinal fluid (17.30 mU/L) were lower than blood clinical reference values. Vitreous insulin concentrations in non-diabetic control cases were lower than the estimated detection limit of the method. These preliminary results tend to confirm the usefulness of insulin determination in vitreous humour in situations of suspected fatal insulin administration. Additional findings pertaining to insulin determination in bile, pericardial, and cerebrospinal fluid would suggest that analysis performed in post-mortem serum and injection sites could be complemented, in individual cases, by investigations carried out in alternative biological fluids. Lastly, these results would indicate that analysis with chemiluminescence enzyme immunoassay may provide suitable data, similar to analysis with liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and immunoradiometric assay, to support the hypothesis of insulin overdose. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.

Les infirmiers du DUPA aux champs ?

Congrès de l'Union nationale pour la prévention du suicide (UNPS), Paris, février 2002 : Présentation de l'UNPS / Didier Camus - La privation de la relation et l'exclusion. La relation au travail / Catherine Matter - Violence et suicide / Dominique Papilloud - La relation aux soins: accueil des suicidants à l'hôpital / Fatima Belhadj - Congrès du GRAAP sur la psychose paranoïaque, 15-16 mais, Lausanne - 2ème congrès international "la réadaptation psychosociale intégrale dans et avec la communauté", 26-30 mai 2002, Barcelone : Les structures d'urgence et d'acceuil psychiatrique à Paris / Jean-Christophe Miéville - Psychiatrie-limite et limites de la psychiatrie / Eric Girard, Jérôme Pedroletti - Qu'est-ce qui nous a échappé ? / Rachèle Brodard, Sabrina Roger