Capacidade antioxidante de bebidas comerciais

Mestrado em Engenharia Qu��mica

Capacidade antioxidante de cervejas comerciais

Mestrado em Engenharia Qu��mica

Monitoring of ochratoxin a exposure of the Portuguese population through a nationwide urine survey ��� winter 2007

Ochratoxin A (OTA) is a mycotoxin produced by a variety of fungi, such as Penicillium verrucosum and Aspergillium spp., which has been found to have a wide number of potentially deadly toxic effects, and can enter the human organism through a variety of means. It then finds its way into the bloodstream and, after a lengthy process, is eventually excreted through the urine. It can thus be detected in its original form not only in blood samples but also in this biological medium. As such, and in an attempt to evaluate the exposure of the Portuguese population to this mycotoxin, morning urine samples were collected during the Winter of 2007, from each of five geographically distinct Portuguese locations ��� Bragan��a, Porto, Coimbra, Alentejo, and Algarve ��� and subjected to extraction by immunoaffinity columns and to OTA quantification through liquid chromatography coupled with fluorescence detection. Prevalent incidence was higher than 95% with Coimbra being the exception (incidence of 73.3%). In nearly all locations, the OTA content of most samples was found to be above the limit of quantification (LOQ) of 0.008 ng/ml. Indeed, excluding Coimbra, with an OTA content level of 0.014 ng/ml, all regions featured content values over 0.021 ng/ml.

Control and comparison of the antioxidant capacity of beers

The purpose of the present work is to determine the antioxidant capacity (AC) of 27 commercial beers. The AC indicates the degree of protection of a certain organism against oxidative damage provoked by reactive oxygen and nitrogen species. Assays were carried out by the following methods: (i) total radical trapping antioxidant parameter (TRAP); (ii) trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC); (iii) trolox equivalent antioxidant capacity (DPPH); (iv) ferric-ion reducing antioxidant parameter (FRAP); (v) cupric reducing antioxidant capacity (CUPRAC); (vi) oxygen radical absorbance capacity (ORAC). Ascorbic acid (AA), gallic acid (GA) and trolox (TR) were used as standards. All beers showed antioxidant power, but a wide range of ACs was observed. The effect of several factors upon these differences was studied. Statistical differences were found between ACs of beers of different colours. ORAC method provided always higher experimental ACs, of significant statistical differences to other assays.

Mitochondria are the main source and one of the targets of Pb (lead)-induced oxidative stress in the yeast Saccharomyces cerevisiae

The yeast Saccharomyces cerevisiae is a useful model organism for studying lead (Pb) toxicity. Yeast cells of a laboratory S. cerevisiae strain (WT strain) were incubated with Pb concentrations up to 1,000 ��mol/l for 3 h. Cells exposed to Pb lost proliferation capacity without damage to the cell membrane, and they accumulated intracellular superoxide anion (O2 .���) and hydrogen peroxide (H2O2). The involvement of the mitochondrial electron transport chain (ETC) in the generation of reactive oxygen species (ROS) induced by Pb was evaluated. For this purpose, an isogenic derivative ��0 strain, lacking mitochondrial DNA, was used. The ��0 strain, without respiratory competence, displayed a lower intracellular ROS accumulation and a higher resistance to Pb compared to the WT strain. The kinetic study of ROS generation in yeast cells exposed to Pb showed that the production of O2 .��� precedes the accumulation of H2O2, which is compatible with the leakage of electrons from the mitochondrial ETC. Yeast cells exposed to Pb displayed mutations at the mitochondrial DNA level. This is most likely a consequence of oxidative stress. In conclusion, mitochondria are an important source of Pb-induced ROS and, simultaneously, one of the targets of its toxicity.

Avalia����o do efeito da microfauna do tanque de arejamento no efluente final

O presente trabalho, efetuado na Esta����o de Tratamento de ��guas Residuais do Freixo (ETAR do Freixo), decorreu durante um per��odo de nove meses, (entre Dezembro de 2012 e Agosto de 2013), e teve como principais objetivos: - a observa����o microsc��pica e respetiva identifica����o dos organismos presentes nas lamas ativadas dos reatores biol��gicos da ETAR (incidindo nos protozo��rios, metazo��rios e bact��rias filamentosas); - estabelecer a rela����o entre os organismos identificados/quantidade respetiva e a sedimentabilidade das lamas ativadas e sua influ��ncia no processo de depura����o; - avaliar a varia����o das esp��cies identificadas com as altera����es processuais. Para o efeito, a metodologia utilizada foi: - a colheita di��ria de amostras em v��rios pontos da ETAR; - a determina����o dos par��metros operacionais e caracteriza����o das amostras recolhidas, tendo sido efetuadas 6039 an��lises f��sico-qu��micas, incluindo ao afluente �� ETAR, ao afluente e ao conte��do dos dois reatores biol��gicos, �� corrente de recircula����o de lamas e ao efluente; - a visualiza����o di��ria microsc��pica ��tica sem contraste de fase dos microrganismos presentes nos reatores biol��gicos; - a visualiza����o microsc��pica ��tica com contraste de fase da microfauna presente nos reatores biol��gicos, sendo efetuadas 16 identifica����es e quantifica����es dos protozo��rios presentes nas lamas ativadas dos dois reatores e 10 identifica����es e quantifica����es das bact��rias filamentosas presentes nos dois reatores biol��gicos. O in��cio do estudo ocorreu num per��odo em que se come��ou a verificar um aumento excessivo de espumas nos decantadores secund��rios, resultando numa fraca sedimentabilidade das lamas e numa menor qualidade do efluente final. Na tentativa de reduzir a excessiva ascens��o do manto de lamas que se verificou, foram efectuadas altera����es operacionais, consistindo: - na altera����o da raz��o de recircula����o da decanta����o secund��ria para os reatores biol��gicos; - na introdu����o de um composto altamente concentrado em mat��ria org��nica na corrente de recircula����o de lamas; - na altera����o da extra����o de lamas biol��gicas. Verificou-se que as altera����es processuais efetuadas foram muito eficazes na diminui����o do manto de lamas da decanta����o secund��ria, bem como muito eficazes na qualidade do efluente final. Durante os meses de Fevereiro a Agosto fez-se o acompanhamento di��rio de todas as condi����es de opera����o de modo a manter e validar o procedimento de opera����o, o qual se considerou muito eficaz em termos de obten����o de uma ��gua tratada de excelente qualidade. Durante o estudo efetuado, verificou-se que a popula����o microbiol��gica existente nos dois reatores biol��gicos se manteve praticamente inalterada durante todo o per��odo, sendo os m��veis de fundo e os s��sseis os grupos dominantes. Esta domin��ncia traduziu-se na elevada qualidade do efluente final que se observou a partir do m��s de Fevereiro, tendo dificultado o estudo de novas condi����es de opera����o, mas facilitando a valida����o do procedimento adotado. No que se refere ��s bact��rias filamentosas, verificou-se que s��o diversas as esp��cies presentes nos reatores biol��gicos e que existem em grande abund��ncia, sendo que o Tipo 0092 �� claramente dominante. O excessivo crescimento deste tipo de bact��rias mostrou ser o maior problema a n��vel microbiol��gico no processo de tratamento da instala����o, tornando-se cr��tico no per��odo de inverno em que a temperatura e os picos de pluviosidade se mostraram condi����es favor��veis ao seu desenvolvimento. Para al��m da temperatura outros fatores mostraram-se respons��veis pelo seu crescimento tais como a raz��o Alimento/Microrganismo (A/M), a idade das lamas, a carga m��ssica afluente e o teor de oxig��nio dissolvido nos reatores biol��gicos. Pode-se concluir que apesar de n��o se trabalhar com os valores te��ricos dos par��metros microbiol��gicos e operacionais considerados ideais, a ETAR do Freixo, possui um tratamento bastante eficaz na remo����o da carga org��nica, na remo����o de nutrientes e na remo����o de s��lidos suspensos totais, apesar da n��o exist��ncia de uma etapa de afina����o final como a filtra����o.

Desenvolvimento de um m��todo potenciom��trico para dete����o de salmonella typhimurium

A Salmonella �� um microrganismo respons��vel por grande parte das doen��as alimentares, podendo por em causa a sa��de p��blica da ��rea contaminada. Uma dete����o r��pida, eficiente e altamente sens��vel e extremamente importante, sendo um campo em franco desenvolvimento e alvo de variados e m��ltiplos estudos na comunidade cientifica atual. Foi desenvolvido um m��todo potenciom��trico para a dete����o de Salmonellas, com el��trodos seletivos de i��es, constru��dos em laborat��rio com pontas de micropipetas, fios de prata e sensores com composi����o otimizada. O el��trodo indicador escolhido foi um ESI seletivo a cadmio, para redu����o da probabilidade de interfer��ncias no m��todo, devido a pouca abundancia do cadmio em amostras alimentares. El��trodos seletivos a s��dio, el��trodos de Ag/AgCl de simples e de dupla junc��o foram tamb��m constru��dos e caracterizados para serem aplicados como el��trodos de refer��ncia. Adicionalmente otimizaram-se as condi����es operacionais para a analise potenciom��trica, nomeadamente o el��trodo de referencia utilizado, condicionamento dos el��trodos, efeito do pH e volume da solu����o amostra. A capacidade de realizar leituras em volumes muito pequenos com limites de dete����o na ordem dos micromolares por parte dos ESI de membrana polim��rica, foi integrada num ensaio com um formato nao competitivo ELISA tipo sanduiche, utilizando um anticorpo prim��rio ligado a nanopart��culas de Fe@Au, permitindo a separa����o dos complexos anticorpo-antig��nio formados dos restantes componentes em cada etapa do ensaio, pela simples aplica����o de um campo magn��tico. O anticorpo secund��rio foi marcado com nanocristais de CdS, que s��o bastante est��veis e �� f��cil a transforma����o em Cd2+ livre, permitindo a leitura potenciom��trica. Foram testadas v��rias concentra����es de peroxido de hidrog��nio e o efeito da luz para otimizar a dissolu����o de CdS. O m��todo desenvolvido permitiu tra��ar curvas de calibra����o com solu����es de Salmonellas incubadas em PBS (pH 4,4) em que o limite de dete����o foi de 1100 CFU/mL e de 20 CFU/mL, utilizando volumes de amostra de 10 ����L e 100 ����L, respetivamente para o intervalo de linearidade de 10 a 108 CFU/mL. O m��todo foi aplicado a uma amostra de leite bovino. A taxa de recupera����o media obtida foi de 93,7% } 2,8 (media } desvio padr��o), tendo em conta dois ensaios de recupera����o efetuados (com duas replicas cada), utilizando um volume de amostra de 100 ����L e concentra����es de 100 e 1000 CFU/mL de Salmonella incubada.

Effect of active components from Garlic on AGEs formation

Advanced glycation end-products are Maillard reaction products that are found in thermal processed food. This compounds are often referred as unhealthy for human diet, namely because of their capacity to form amino-acid dimers. There is a broad range of answers to get about how these products are formed, how they interact with the organism and how these reactions can be inhibited to prevent the referred effects. Some compounds from garlic are thought to be able to inhibit these reactions. This study using spectrophotometric, High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (HPLC-MS/MS) and Fourier transformed infrared spectroscopy (FTIR) analysis, helps to understand better not only not only the effect of some compounds obtained from garlic, diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DADS) and diallyl trisulfide (DATS), on these AGEs production reaction, but also helped to understand better the reaction itself.

Characterization and Biological Activities of Ocellatin Peptides from the Skin Secretion of the Frog Leptodactylus pustulatus

Eight new peptides were isolated from the skin secretion of the frog Leptodactylus pustulatus and their amino acid sequences determined by de novo sequencing and by cDNA cloning. Structural similarities between them and other antimicrobial peptides from the skin secretion of Leptodactylus genus frogs were found. Ocellatins-PT1 to -PT5 (25 amino acid residues) are amidated at the C-terminus, while ocellatins-PT6 to -PT8 (32 amino acid residues) have free carboxylates. Antimicrobial activity, hemolytic tests, and cytotoxicity against a murine fibroblast cell line were investigated. All peptides, except for ocellatin-PT2, have antimicrobial activity against at least one Gram negative strain. Ocellatin-PT8 inhibited the growth of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, and Salmonella choleraesuis strains with MICs in the 60���240 ��M range. No significant effect was observed in human erythrocytes and in a murine fibroblast cell line after exposure to the peptides at MICs. A comparison between sequences obtained by both direct HPLC-MS de novo sequencing and cDNA cloning demonstrates the secretion of mature peptides derived from a pre-pro-peptide structure.

ABCC Subfamily Vacuolar Transporters are Involved in Pb (Lead) Detoxification in Saccharomyces cerevisiae

The present work has as objective to contribute for the elucidation of the mechanism associated with Pb detoxification, using the yeast Saccharomyces cerevisiae as a model organism. The deletion of GTT1 or GTT2 genes, coding for functional glutathione transferases (GST) enzymes in S. cerevisiae, caused an increased susceptibility to high Pb concentrations (500-1000 ��mol L(-1)). These results suggest that the formation of glutathione-Pb conjugate (GS-Pb), dependent of GSTs, is important in Pb detoxification. The involvement of ATP-binding cassette (ABC) vacuolar transporters, belonging to class C subfamily (ABCC) in vacuolar compartmentalization of Pb, was evaluated. For this purpose, mutant strains disrupted in YCF1, VMR1, YBT1 or BPT 1 genes were used. All mutants tested, without vacuolar ABCC transporters, presented an increased sensitivity to 500-1000 ��mol L(-1) Pb comparative to wild-type strain. Taken together, the obtained results suggest that Pb detoxification, by vacuolar compartmentalization, can occur as a result of the concerted action of GSTs and vacuolar ABCC transporters. Pb is conjugated with glutathione, catalysed by glutathione transferases and followed to the transport of GS-Pb conjugate to the vacuole by ABCC transporters.