Silencing of HTLV-1 gag and env genes by small interfering RNAs in HEK 293 cells

Since the discovery of RNAi technology, several functional genomic and disease therapy studies have been conducted using this technique in the field of oncology and virology. RNAi-based antiviral therapies are being studied for the treatment of retroviruses such as HIV-1. These studies include the silencing of regulatory, infectivity and structural genes. The HTLV-1 structural genes are responsible for the synthesis of proteins involved in the entry, assembly and release of particles during viral infection. To examine the possibility of silencing HTLV-1 genes gag and env by RNA interference technology, these genes were cloned into reporter plasmids. These vectors expressed the target mRNAs fused to EGFP reporter genes. Three small interference RNAs (siRNAs) corresponding to gag and three corresponding to env were designed to analyze the effect of silencing by RNAi technology. The plasmids and siRNAs were co-transfected into HEK 293 cells. The results demonstrated that the expression of the HTLV-1 gag and env genes decreased significantly in vitro. Thus, siRNAs can be used to inhibit HTLV-1 structural genes in transformed cells, which could provide a tool for clarifying the roles of HTLV-1 structural genes, as well as a therapy for this infection. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Avaliação da proliferação celular como indicador prognóstico para mastocitomas cutâneos caninos

Este estudo teve como objetivo avaliar o valor prognóstico de marcadores de proliferação celular em casos de mastocitomas cutâneos caninos. Vinte e três casos foram analisados quanto à expressão imuno-histoquímica de Ki67 e do Antígeno Nuclear de Proliferação Celular (PCNA), sendo subsequentemente acompanhados clinicamente. Observou-se que a expressão de Ki67 mantém relação negativa com a tradicional graduação histopatológica (p= 0,0418; p<0,05 entre os graus I e III), sendo um indicador confiável para o tempo de sobrevida pós-cirúrgica (p=0,0089). A imunoexpressão de PCNA, apesar de estar correlacionada à marcação por Ki67, não apresentou valores estatisticamente significantes na predição da mortalidade em função da doença e do tempo de sobrevida pós-cirúrgico. Os resultados obtidos confirmam que informações sobre a atividade proliferativa tumoral pela detecção imuno-histoquímica de Ki67 podem incrementar a classificação de mastocitomas cutâneos caninos quanto à malignidade.

Inquérito de saúde no Município de Campinas, São Paulo, Brasil (ISACamp): comparação de estimativas segundo posse de linha telefônica residencial

O estudo avalia diferenças quanto às características sociodemográficas, de estilo de vida e de condições de saúde entre adultos com e sem linha telefônica residencial, valendo-se de dados de inquérito domiciliar de saúde realizado em Campinas, São Paulo, Brasil (2008/2009). Trata-se de estudo transversal de base populacional com 2.637 adultos (18 anos e mais). Análises descritivas, testes qui-quadrado, prevalências e respectivos intervalos de 95% de confiança foram calculados. Estimaram-se os vícios associados à não cobertura da população sem telefone antes e após o ajuste de pós-estratificação. O impacto do vício nos intervalos de confiança foi avaliado pela razão de vício. Cerca de 76% dos entrevistados possuíam linha telefônica residencial. Exceto para situação conjugal, foram observadas diferenças sociodemográficas segundo posse de telefone. Após o ajuste de pós-estratificação, houve redução do vício das estimativas para as variáveis associadas à posse de linha telefônica, no entanto, exceto para osteoporose, o ajuste de pós-estratificação foi insuficiente para corrigir o vício de não cobertura.

Estudo clínico da aplicação de matriz inorgânica de osso associado a peptídeo sintético de adesão celular (MIO/P-15), PepGen P-15®, em lesões periodontais avançadas de cães

Os mecanismos biológicos desenvolvidos para aumentar a qualidade da regeneração óssea e da reparação tecidual de sítios periodontais específicos continuam a ser um desafio e têm sido complementado pela capacidade de adesão celular do colágeno do tipo I, promovida por um peptídeo sintético de adesão celular (P-15), associado a uma matriz inorgânica de osso (MIO) para formar MIO/P-15. O objetivo deste estudo foi avaliar a perda do nível clínico de inserção e a resposta da bolsa periodontal em dentes após 3 e 6 meses da aplicação de enxerto com MIO/P-15. Vinte e um cães do Hospital Veterinário da Universidade de São Paulo foram anestesiados para realização de tratamento periodontal e 132 faces dentais com perda de nível clínico de inserção foram tratadas, sendo que 36,4% (48 faces) receberam o peptídeo de adesão celular e 63,6% (84 faces) compuseram o grupo controle que recebeu tratamento convencional (retalho muco-gengival e aplainamento radicular). O procedimento foi documentado através de radiografia intra-oral e todas as sondagens de bolsas periodontais foram fotografadas. Depois de 3 e de 6 meses, os animais foram re-anestesiados a fim de se obter novas avaliações, radiografias, fotografias e sondagens periodontais. As 48 faces com perda de nível clínico de inserção que receberam material de enxertia apresentaram taxa de 40% de recuperação do nível clínico de inserção após 6 meses. O grupo controle de faces dentais não apresentou alteração do nível clínico de inserção. A face palatina foi a que apresentou melhor taxa de regeneração (40%) e os dentes caninos e molares mostraram as melhores respostas (57,14% e 65%, respectivamente). Não houve sinais de infecção pós-cirúrgica relacionadas à falta de higienização oral dos animais. Pode-se concluir que o MIO/P-15 auxilia na regeneração e re-aderência das estruturas periodontais, incluindo osso alveolar. Sua aplicação mostrou-se fácil e prática e a incidência de complicações pós-cirúrgicas foi baixa. Ainda assim, mais estudos e pesquisas são necessários para que se avalie a quantidade e a qualidade do osso e do ligamento periodontal formados.

Modelo de suplementação nutricional com fatores hepatotróficos aumenta proliferação celular em fígado de ratos sadios

Foram avaliados dois protocolos de administração, em ratos sadios, de uma solução de fatores hepatotróficos (FH), composta por aminoácidos, vitaminas, sais minerais, glicose, insulina, glucagon e triiodotironina (T3). A solução foi administrada durante 10 dias, 40mg/kg/dia, i.p., em duas, grupo 2xFH (n=15), ou três doses, grupo 3xFH (n=15), diárias. Foram observados os efeitos na proliferação celular dos hepatócitos, na angiogênese e na matriz extracelular hepática, assim como as possíveis reações adversas. Os animais dos grupos 2xFH e 3xFH apresentaram aumento da massa hepática de 30,1% e 22,5%, respectivamente, em relação ao grupo-controle (CT; n=15). O índice de proliferação hepatocelular foi maior nos grupos 2xFH (1,4%) e 3xFH (1,2%) em relação ao grupo CT (0,53%), e a densitometria relativa do fator de crescimento do endotélio vascular pelo imunoblot não revelou diferença estatística entre os três grupos. Nos grupos 2xFH e 3xFH, houve redução do colágeno intersticial em relação ao grupo CT. A solução de FH estimulou o crescimento hepático e reduziu o volume de colágeno perissinusoidal. A administração em três doses diárias resultou em mortalidade de 26,7%, possivelmente pelo excessivo estresse da manipulação e pela menor adaptação fisiológica dos ratos, o que não ocorreu nos grupos 2xFH e CT. Para esse tipo de abordagem em ratos, o procedimento experimental mais apropriado, seguro, com melhor chance de adaptação dos animais e com resultados significativos é a aplicação dos FH em duas doses diárias.

Inquérito de saúde: comparação dos entrevistados segundo posse de linha telefônica residencial

Analisar diferenças quanto a características sociodemográficas e relacionadas à saúde entre indivíduos com e sem linha telefônica residencial. Foram analisados os dados do Inquérito de Saúde (ISA-Capital) 2003, um estudo transversal realizado em São Paulo, SP, no mesmo ano. Os moradores que possuíam linha telefônica residencial foram comparados com os que disseram não possuir linha telefônica, segundo as variáveis sociodemográficas, de estilo de vida, estado de saúde e utilização de serviços de saúde. Foram estimados os vícios associados à não-cobertura por parte da população sem telefone, verificando-se sua diminuição após a utilização de ajustes de pós-estratificação. Dos 1.878 entrevistados acima de 18 anos, 80,1% possuía linha telefônica residencial. Na comparação entre os grupos, as principais diferenças sociodemográficas entre indivíduos que não possuíam linha residencial foram: menor idade, maior proporção de indivíduos de raça/cor negra e parda, menor proporção de entrevistados casada, maior proporção de desempregados e com menor escolaridade. Os moradores sem linha telefônica residencial realizavam menos exames de saúde, fumavam e bebiam mais. Ainda, esse grupo consumiu menos medicamentos, auto-avaliou-se em piores condições de saúde e usou mais o Sistema Único de Saúde. Ao se excluir da análise a população sem telefone, as estimativas de consultas odontológicas, alcoolismo, consumo de medicamentos e utilização do SUS para realização de Papanicolaou foram as que tiveram maior vício. Após o ajuste de pós-estratificação, houve diminuição do vício das estimativas para as variáveis associadas à posse de linha telefônica residencial. ) A exclusão dos moradores sem linha telefônica é uma das principais limitações das pesquisas realizadas por esse meio. No entanto, a utilização de técnicas estatísticas de ajustes de pós-estratificação permite a diminuição dos vícios de não cobertura

A influência da Jean-Claude Gardin e a linha francesa na evolução do conceito de linguagem documentária

Bibliographic review study on the evolution of Documentary Languages and its field of study, the documentary linguistics. Based upon the researches developed by the french approach in Europe notably by jean-claude gardin and in brazil by grupo temma. It is proposes a framework of the main characteristics of documentary languages having the appropriation of the structural linguistics by the documentation as a focus. It anayses the evolution of the denomination of documentary languages, their functions, and it compares both approaches.

Avaliação tecnológica de painéis MDF de madeira de Eucalyptus grandis confeccionados em laboratório e em linha de produção industrial

MDF panels of Eucalyptus grandis wood fibers were made in either experimentally in a laboratory or on an industrial production line. In order to analyze the influence of the production condition, the anatomical, physical and mechanical properties of the panels were determined. The wood refining induced the transversal rupture of the transversal fiber wall. The MDF panels obtained from the industrial production line presented less swelling in thickness and absorption values and improved mechanical properties in the requirements of bending strength, module of elasticity and surface resistance. For laboratory MDF panels, it was possible to verify a statistically significant correlation between bending strength and module of elasticity, medium density and internal bond and swelling in thickness and absorption. This tendency was also true for the MDF panels obtained in real conditions of production, however without statistical significance. By comparing the quality properties of MDF panels produced in the laboratory with those obtained in real conditions of production, it was sought to standardize the established variables for obtaining panels on a small scale, as well to make possible the safe transfer and divulgation of information obtained in the laboratory.

Do labor aos mitos: uma nova linha no mapa das pesquisas em Etnomatemática

In this paper we highlight the existence of a new line of research within the Ethnomathematics Program. In its origin, research in this area has sought to contribute to understanding regarding the diversity of mathematical thought through a careful look at work activities. In recent years, however, we have paid increasing attention to the affirmations of anthropologists that myths can be used to understand the most basic questions of human thought as well as specific questions regarding the society that produced them. Based on this idea, the myths of different peoples are perceived as informative with respect to their Ethnomathematics. Thus, together with work activities, myths constitute a source of support on which we draw to develop this line of research.

Inhibition of Expression of HTLV-1 Structural Genes Mediated by Short Hairpin RNA In Vitro

Background: Human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1) is associated with the T-cell malignancy known as adult T-cell leukemia! lymphoma (ATLL) and with a disorder called HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). Currently, the treatment of these diseases is based on symptom relief. RNA interference (RNAi) technology has been described as an efficient mechanism for development of new therapeutic methods. Thus, the aim of this study was to evaluate the inhibition of HTLV-1 structural proteins using short hairpin RNAs (shRNAs) expressed by non-viral vectors. Materials and Methods: Reporter plasmids that express enhanced green fluorescent protein-Gag (EGFP-Gag) and EGFP-Env fusion proteins and vectors that express shRNAs corresponding to the HTLV-1 gag and env genes were constructed. shRNA vectors and reporter plasmids were simultaneously transfected into HEK 293 cells. Results: Fluorescence microscopy, flow cytometry and real-time PCR showed that shRNAs were effective in inhibiting the fusion proteins. Conclusion: These shRNAs are effective against the expression of structural genes and may provide an approach to the development of new therapeutic agents.

Integration pattern of HIV-1 based lentiviral vector carrying recombinant coagulation factor VIII in Sk-Hep and 293T cells

293T and Sk-Hep-1 cells were transduced with a replication-defective self-inactivating HIV-1 derived vector carrying FVIII cDNA. The genomic DNA was sequenced to reveal LTR/human genome junctions and integration sites. One hundred and thirty-two sequences matched human sequences, with an identity of at least 98%. The integration sites in 293T-FVIIIDB and in Sk-Hep-FVIIIDB cells were preferentially located in gene regions. The integrations in both cell lines were distant from the CpG islands and from the transcription start sites. A comparison between the two cell lines showed that the lentiviral-transduced DNA had the same preferred regions in the two different cell lines.

Expression, Purification, Bioactivity, and Partial Characterization of a Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-7 Produced in Human 293T Cells

Bone morphogenetic protein-7 (BMP-7) is a secreted multifunctional growth factor of the TGF-beta superfamily, which is predominantly known for its osteoinductive properties and emerging potential for treatment of kidney diseases. The mature 34-38 kDa disulfide-linked homodimer protein plays a key role in the differentiation of mesenchymal cells into bone and cartilage. In this study, the full-length sequence of hBMP-7 was amplified and, then, cloned, expressed, and purified from the conditioned medium of 293T cells stably transfected with a lentiviral vector. The mature protein dimer form was properly secreted and recognized by anti-BMP-7 antibodies, and the protein was shown to be glycosilated by treatment with exoglycosidase, followed by western blotting. Moreover, the activity of the purified protein was demonstrated both in vitro, by alkaline phosphatase activity in C2C12 cells, and in vivo by induction of ectopic bone formation in Balb/c Nude mice after 21 days, respectively. This recombinant protein platform may be very useful for expression of different human cytokines and other proteins for medical applications.