78 resultados para cellules T CD8
em Université de Montréal
Resumo:
Mmoire numris par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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4-1BB (CD137) est un membre de la superfamille TNFR qui est impliqu dans la transmission des signaux de survie aux lymphocytes. TRAF1 est une protine adaptatrice qui est recrute par 4-1BB et autres TNFRs et est caractrise par une expression trs restreinte aux lymphocytes, cellules dendritiques et certaines cellules pithliales. TRAF1 est ncessaire pour lexpansion et la survie des cellules T mmoire en prsence d'agonistes anti-4-1BB in vivo. De plus, TRAF1 est requise en aval de 4-1BB pour activer (phosphoryler) la MAP kinase Erk implique dans la rgulation de la molcule pro-apoptotique Bim. Suite lactivation du rcepteur 4-1BB, TRAF1 et ERK sont impliqus dans la phosphorylation de Bim et la modulation de son expression. Lactivation et la rgulation de TRAF1 et Bim ont un rle important dans la survie des cellules T CD8 mmoires. Dans cette tude, nous avons utilis une approche protomique afin de pouvoir identifier de nouveaux partenaires de liaison de TRAF1. Utilisant cette stratgie, nous avons identifi que LSP1 (Leukocyte Specific Protein 1) est recrut dans le complexe de signalisation 4-1BB de manire TRAF1 dpendante. Une caractrisation plus pousse de linteraction entre TRAF1 et LSP1 a montr que LSP1 lie la rgion unique N-terminal de TRAF1 de faon indpendante de la rgion conserve C-terminal. linstar des cellules T dficientes en TRAF1, les cellules T dficientes en LSP1 ne sont pas capables dactiver ERK en aval de 4-1BB et par consquent ne peuvent pas rguler Bim. Ainsi, TRAF1 et LSP1 cooprent en aval de 4-1BB dans le but dactiver ERK et rguler en aval les niveaux de Bim dans les cellules T CD8. Selon la littrature, le rcepteur 4-1BB nest pas exprim la surface des cellules B murines, mais le rcepteur 4-1BB favorise la prolifration et la survie des cellules B humaines. Cependant, il est important d'tudier l'expression du rcepteur 4-1BB dans les cellules B murines afin de disposer d'un modle murin et de prdire la rponse clinique la manipulation de 4-1BB. En utilisant diffrentes stimulations de cellules B murines primaires, nous avons identifi que le rcepteur 4-1BB est exprim la surface des cellules B de souris suite une stimulation avec le LPS (Lipopolysaccharides). Une caractrisation plus pousse a montr que le rcepteur 4-1BB est induit dans les cellules B murines d'une manire dpendante de TLR4 (Toll Like Receptor 4). Collectivement, notre travail a dmontr que la stimulation avec le LPS induit lexpression du rcepteur 4-1BB la surface des cellules B murines, menant ainsi l'induction de TRAF1. De plus, TRAF1 et LSP1 cooprent en aval de 4-1BB pour activer la signalisation de la Map kinase ERK dans les cellules B murines de manire similaire aux cellules T. Les cellules B dficientes en TRAF1 et les cellules B dficientes en LSP1 ne sont pas en mesure d'activer la voie ERK en aval de 4-1BB et montrent un niveau dexpression du rcepteur significativement diminu compar aux cellules B dune souris WT. Ainsi, TRAF1 et LSP1 sont ncessaires pour une expression maximale du rcepteur 4-1BB la surface cellulaire de cellules B murines et cooprent en aval de 4-1BB afin d'activer la cascade ERK dans les cellules B murines.
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La transplantation de sang de cordon ombilical (TSCO) constitue un traitement de choix pour une multitude de pathologies hmatologiques malignes et non malignes chez lenfant et dans certains cas ladulte. La TSCO est associe certaines complications, dont une reconstitution immunitaire plus lente et une incidence leve dinfections opportunistes, notamment celles relies au cytomgalovirus (CMV) et au virus varicella-zoster (VZV). Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes intresss dans un premier temps la caractrisation de la reconstitution immunitaire spcifique au CMV et au VZV. Nos rsultats ont dmontr que la reconstitution de limmunit cellulaire ne requiert ni un statut sropositif pr-transplantation ni le dveloppement de la maladie. De plus, des reconstitutions spontanes ont t dtectes chez certains patients srongatifs vis--vis du CMV ou du VZV. Outre le fait quelle se manifeste surtout partir de 6 mois post-transplantation, ladite reconstitution mrite le qualificatif de protectrice en termes de ractivations virales et du dveloppement de signes cliniques lorsquune frquence de 150 cellules produisant lIFN-/million est dpasse. Toutefois, moins de 5% des patients dveloppent une rponse T anti-VZV et anti-CMV au cours 100 premiers jours suivant la TSCO. Il est donc possible que les lymphocytes CD8+ T provenant du SCO, comparativement leurs homologues provenant de la moelle osseuse (MO), prsentent un dfaut de fonctionnalit, communment appel puisement clonal . La caractrisation du rpertoire de rcepteurs inhibiteurs exprims par les cellules T CD8+ suivant la TSCO ou la transplantation de moelle osseuse (TMO) a rvl une augmentation significative de la frquence des cellules exprimant PD-1 tt suivant la transplantation. Cette population, caractrise majoritairement par un phnotype effecteur-mmoire (EM), dmontre une perte significative de la capacit prolifrative et exprime moins d'IFN-, d'IL-2, de TNF- et de CD107a. Une meilleure caractrisation de la reconstitution immunitaire aprs TSCO permettrait, d'une part de slectionner des biomarqueurs en vue dune meilleure gestion des patients risques de dvelopper des infections virales et/ou de rechuter, et d'autre part d'amliorer leur pronostic.
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La reconnaissance dun antigne prsent par les cellules prsentatrices dantigne induit la prolifration et la diffrenciation des lymphocytes T nafs en lymphocytes T effecteurs et mmoires. Cette reconnaissance se fait par linteraction du rcepteur des cellules T (TCR) des lymphocytes T et le complexe CMH-peptide prsent la surface des DC. Cependant, des signaux additionnels sont requis, une meilleure activation des lymphocytes T implique des corcepteurs prsents la surface de ces deux types cellulaires. Aprs llimination de lantigne, la plupart des lymphocytes T effecteurs vont mourir. Une petite population de lymphocytes T va persister pour se diffrencier en lymphocytes T mmoires capables de protger lorganisme contre une rinfection. Les signaux qui contrlent le maintien des lymphocytes T mmoires sont encore mal compris. Pour comprendre le rle de la molcule de costimulation 4-1BB dans le maintien des lymphocytes T CD8 mmoires, nous avons mis lhypothse que ltat de phosphorylation de la protine adaptatrice TRAF1, qui se lie 4-1BB, module le maintien des lymphocytes T CD8 mmoires. Ainsi, nous avons montr par des expriences de spectromtrie de masse que TRAF1 sassocie prfrentiellement TBK1 lorsquelle nest pas phosphoryle. Nous avons aussi montr que la prsence de TRAF1 est requise pour stabiliser TBK1 au rcepteur 4-1BB aprs stimulation des lymphocytes T. Par ailleurs, les lymphocytes T CD8 OT-I TRAF1-/- reconstitues avec un mutant phospho-dficient de TRAF1 (S139A) et ensuite diffrencies en lymphocytes T mmoires in vitro induisent une activation de la voie de signalisation NF-B contrairement ceux exprimant la forme phospho-mimtique de TRAF1 (S139D). Ces premires tudes dmontrent limportance de ltat de phosphorylation de TRAF1 en aval de 4-1BB dans les cellules T. Dans la seconde partie, nous avons valu le rle dun autre corcepteur; la neuropiline 1, dans la maturation des DC. A cet effet, nous avons mis lhypothse que linteraction de la neuropiline 1 et ses ligands contribuerait la fonction des DC. Nous avons dmontr que labsence de la neuropiline 1 na pas deffet sur la maturation au LPS des DC. Cependant, la prsence du VEGF (un ligand de Nrp-1) inhibe la maturation des DC drives de la moelle osseuse. Notre tude a dmontr que VEGF inhibe lexpression des molcules de costimulation, la scrtion des cytokines pro inflammatoires et la signalisation TLR4 principalement les voies MAP Kinase et NF-B. Contrairement aux rsultats avec les cellules WT, VEGF nest pas capable daffecter la maturation, la scrtion des cytokines et la signalisation TLR4 des DC Nrp1-Lyz o la neuropiline 1 est dlte. Ainsi, nos rsultats ont dmontr que VEGF inhibe la maturation des DC de faon Nrp1-dpendante. Enfin, lanalyse des molcules partenaires de la neuropiline 1 montre que Nrp1, VEGF et TLR4 se retrouvent dans le mme complexe. Nos rsultats dmontrent que VEGF, en prsence de la neuropiline 1 est capable dinteragir avec TLR4 pour inhiber la maturation des DC. Toutefois, en absence de la neuropiline1, VEGF nest pas capable de recruter TLR4 pour rduire lexpression des molcules de costimulation. Ces tudes sur les corcepteurs pourraient tre importantes dans llaboration de nouvelles approches vaccinales.
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Thse numrise par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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Lvolution dune cellule tumorale initie une tumeur solide ncessite, chaque tape, un microenvironnement favorable sa survie et sa croissance. Le microenvironnement tumoral est compar un foyer dinflammation chronique dont la composition cellulaire et molculaire est complexe. Les cellules souches msenchymateuses (CSM) reprsentent lun des principaux acteurs cellulaires prsents. Elles migrent vers les sites tumoraux o elles soutiennent linflammation, langiogense et le dveloppement tumoral en activant plusieurs voies de signalisation. Une des voies majeures qui contribuent linflammation est la voie de signalisation NF-B. Linitiation de cette voie provient de la membrane cellulaire entre autres des cavoles. Nous soumettons lhypothse que lune des cavines, protines associes aux cavoles, modulerait le phnotype inflammatoire etou migratoire dans les CSM traites la cytokine TNF- (facteur de ncrose tumorale ) en modulant la voie de signalisation NF-B. En effet, nous avons observ une rgulation la hausse de lexpression de la COX-2 (cyclooxygnase-2) et une diminution de lexpression dIB qui sont synonymes de lactivation de la voie NF-B dans les CSM que nous avons traites au TNF-. Nous avons trouv que le TNF- induit la migration des CSM, et que la rpression gnique de la Cavine-2 augmente significativement la migration des CSM traites par le TNF-. La rpression gnique de la Cavine-2 vient aussi amplifier la tubulogense dans les CSM en rponse au TNF-. Dun point de vue molculaire, la rpression gnique de la Cavine-2 a montr une trs forte amplification de l'expression protique de la COX-2 dans les CSM en rponse au TNF-. Dans ces mmes cellules o la Cavine-2 a t rprime, et suite un traitement au TNF-, le pic de phosphorylation est plus intense et la courbe de phosphorylation est plus prolonge dans le temps. Ces observations nous permettent daffirmer que la Cavine-2 a un rle rpresseur sur lexpression de COX-2. Collectivement, nos rsultats montrent que la Cavine-2 peut tre propose comme un gne suppresseur de tumeur et est de ce fait, une bonne cible thrapeutique dans les CSM qui permettraient dagir des stades prcoces du dveloppement tumoral.
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La maladie du greffon contre lhte (GvHD) est un effet secondaire srieux de la transplantation de cellules souches hmatopotiques (HSCT). Cette maladie entraine une haute mortalit et ses symptmes sont dvastateurs. Les traitements actuels de la GvHD comportent plusieurs produits, tels les corticostrodes, mais ces derniers sont immunosuppresseurs et leurs effets secondaires sont aussi trs dommageables pour les patients et leur gurison. Les cellules stromales msenchymateuses (MSC) reprsentent une alternative ou une addition potentielle de traitement pour la GvHD et ces cellules ne semblent pas possder les effets secondaires des traitements classiques. Un nombre important dtudes cliniques faisant lobjet des MSC ont t enregistres. Malgr cet engouement, le mcanisme de leur immunomodulation reste encore lucider. Notre objectif est donc de mieux dfinir ce mcanisme. Nous avons utilis un modle simplifi pour simuler la GvHD in vitro. Ce modle se base sur la stimulation de lymphocytes CD4+ par des cellules dendritiques allogniques. La mesure de la prolifration de ces cellules stimules sert dindicateur de leur ractivit. Selon les rsultats obtenus par la technologie CRISPR de gnie gntique, les MSC exerceraient leur immunosuppression sur les cellules T CD4+ principalement par la scrtion de lenzyme IDO1. Les MSC seraient galement capables dinduire certaines cellules CD4+ en cellules rgulatrices, un processus indpendant de la scrtion dIDO1. Toutefois, ces cellules ne semblent pas correspondre aux cellules Treg conventionnelles.
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Les cellules endothliales (EC) constituent une premire barrire physique la dissmination de virus pliotropiques circulant par voie hmatogne mais leur contribution la dfense inne anti-virale est peu connue. Des dysfonctions des EC de la barrire hmato-encphalique (BMEC) et des sinusodes hpatiques (LSEC) ont t rapportes dans des neuropathologies et des hpatites aigus ou chroniques dorigine virale, suggrant que des atteintes leur intgrit contribuent la pathogense. Les srotypes de coronavirus de lhpatite murine (MHV), se diffrenciant par leur capacit induire des hpatites et des maladies neurologiques de svrit variable et/ou leur tropisme pour les EC, reprsentent des modles viraux privilgis pour dterminer les consquences de linfection des EC sur la pathogense virale. Lors dinfection par voie hmatogne, le srotype MHV3, le plus virulent des MHV, induit une hpatite fulminante, caractrise par une rponse inflammatoire svre, et des lsions neurologiques secondaires alors que le srotype moins virulent, MHV-A59, induit une hpatite modre sans atteintes secondaires du systme nerveux central (SNC). Par ailleurs, le srotype MHV3, la diffrence du MHV-A59, dmontre une capacit stimuler la production de cytokines par la voie TLR2. Les variants attnus du MHV3, les virus 51.6-MHV3 et YAC-MHV3, sont caractriss par un faible tropisme pour les LSEC et induisent respectivement une hpatite modre et subclinique. Compte tenu de limportance des LSEC dans le maintien de la tolrance hpatique et de llimination des pathognes circulants, il a t postul que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire lors dinfections par les MHV est associe la rplication virale et laltration des proprits tolrogniques et vasculaires des LSEC. Les dsordres inflammatoires hpatiques pourraient rsulter dune activation diffrentielle du TLR2, plutt que des autres TLR et des hlicases, selon les srotypes. Dautre part, compte tenu du rle des BMEC dans la prvention des infections du SNC, il a t postul que linvasion crbrale secondaire par les coronavirus est relie linfection des BMEC et le bris subsquent de la barrire hmato-encphalique (BHE). laide dinfections in vivo et in vitro par les diffrents srotypes MHV, chez des souris ou des cultures de BMEC et de LSEC, nous avons dmontr, dune part, que linfection in vitro des LSEC par le stotype MHV3, la diffrence des variants 51.6- et YAC-MHV3, altrait la production du facteur vasodilatant NO et renversait leur phnotype tolrognique en favorisant la production de cytokines et de chimiokines inflammatoires. Ces dysfonctions se traduisaient in vivo par une rponse inflammatoire incontrle et une drgulation du recrutement intrahpatique de leucocytes, favorisant la rplication virale et les dommages hpatiques. Nous avons aussi dmontr, laide de souris TLR2 KO et de LSEC dont lexpression du TLR2 a t abroge par des siRNA, que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire induite par le srotype MHV3, dpendait en partie de linduction et de lactivation prfrentielle du TLR2 par le virus dans le foie. Dautre part, la svrit de la rplication virale au foie et des dsordres dans le recrutement leucocytaire intrahpatique induits par le MHV3, et non par le MHV-A59 et le 51.6-MHV3, corrlaient avec une invasion virale subsquente du SNC, au niveau de la BHE. Nous avons dmontr que linvasion crbrale du MHV3 tait associe une infection productive des BMEC et laltration subsquente des protines de jonctions serres occludine, VE-cadhrine et ZO-1 se traduisant par une augmentation de la permabilit de la BHE et lentre conscutive du virus dans le cerveau. Dans lensemble, les rsultats de cette tude mettent en lumire limportance du maintien de lintgrit structurale et fonctionnelle des LSEC et des BMEC lors dinfections virales aiges par des MHV afin de limiter les dommages hpatiques associs linduction dune rponse inflammatoire exagre et de prvenir le passage des virus au cerveau suite une dissmination par voie hmatogne. Ils rvlent en outre un nouveau rle aggravant pour le TLR2 dans lvolution de lhpatite virale aige ouvrant la voie de nouvelles avenues thrapeutiques visant moduler lactivit inflammatoire du TLR2.
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Les noplasies pulmonaires demeurent la premire cause de dcs par cancer au Qubec reprsentant prs de 6000 dcs par anne. Au cours des dernires annes, la radiothrapie strotaxique dablation (SABR) sest impose comme un traitement alternatif la rsection anatomique pour les patients inoprables atteints dun cancer pulmonaire non petites cellules de stade prcoce. Il sagit dune modalit de traitement qui permet dadministrer des doses leves, typiquement 30-60 Gy en 1-8 fractions, dans le but de cibler prcisment le volume de traitement tout en pargnant les tissus sains. Le Centre Hospitalier de lUniversit de Montral sest muni en 2009 dun appareil de SABR de fine pointe, le CyberKnife (CK), un acclrateur linaire produisant un faisceau de photons de 6 MV dirig par un bras robotis, permettant dadministrer des traitements non-coplanaires avec une prcision infra-millimtrique. Ce mmoire est ddi la caractrisation de certains enjeux cliniques et physiques associs au traitement par CK. Il sarticule autour de deux articles scientifiques revus par les pairs. Dune part, une tude prospective clinique prsentant les avantages de la SABR pulmonaire, une technique qui offre un excellent contrle tumoral long terme et aide au maintien de la qualit de vie et de la fonction pulmonaire. Dautre part, une tude de physique mdicale illustrant les limites de lacquisition dimages tomodensitomtriques en auto-rtention respiratoire lors de la planification de traitement par CK.
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Mmoire numris par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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Thse numrise par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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