小鼠Bicc1基因RNAi序列的筛选与鉴定

通过网上提供的生物信息学分析软件进行搜索和比对,初步筛选到3个较好的针对小鼠双尾-C(Bicc1)基因的RNA干扰(RNAi)序列。合成这3个干涉序列片段后克隆到pRS-HushshRNA载体中。构建Bicc1基因的真核表达载体pEGFP-C3-Bicc1,将绿色荧光蛋白(GFP)标签标记在Bicc1蛋白上。利用细胞转染技术将pEGFP-C3-Bicc1与3个干涉序列载体共转染至体外培养的HEK-293细胞中,最后通过细胞荧光强度、半定量PCR和Westernblotting鉴定出其中两个序列(pRS-Hush-RNAi-Bicc1-N/-C)能明显降低Bicc1蛋白在HEK-293细胞中的表达水平,为下一步建立起低表达Bicc1的稳定细胞株和研究小鼠Bicc1的功能提供了良好的材料。

C3植物中PEPCase及其有关酶活性的研究

本实验以C3植物小麦、大豆为材料研究了不同光合器官和生长发育过程中PEPCase及其有关的酶活性。主要结果如下: 1．C3植物中谱遍存在着一定活性的PEPCase，特别是在结实器官的各部位中有着较高活性和比例的PEPCase以及与PEPCase相邻作用的苹果酸酶和苹果酸脱氢酶，如小麦的内稃，大豆的荚壳，种皮中PEPCase活性高于其本身的RuBPCase活性，说明C3植物的结实器官中存在着活跃的CO2β一羧化作用。 2．大豆、小麦结实器官的14CO2暗固定量均比叶片高，因此在这些器官中存在着活跃的CO2暗固定作用，这对植物经济利用碳素提高光合同化效率和籽粒产量有着十分重要的意义，同时CO2暗固定的中间产物能参与其它代谢途径，因此这些器官中的PEPCase时作用是多方面的。 3．RuPEPCase、PEPCase在植物的生长发育过程中其活性发生明显的变化，二种羧化酶活性在生殖期最高，这对于结实器官的形成和发育是十分有意义的。 4．大豆荚果作为光合器官，具有光合同化CO2的生理生化基础—叶绿素和一足活性的PEPCase、RuBFCas e和结构基础—在一定区域细胞内存在着大量的叶绿体。小麦、大豆的结实器具有一定活性的RuBPCase和较高活性的PEPCase，能进行一定程度的光合碳同化，对作物产量的形成和贡献有着不可低估的作用。