Analysis of norditerpenoid alkalods in processing Radix Aconiti Lateralis preparata with Radix Glycyrrhizae Preparata by electrospray ionization tandem mass spectrometry

Norditerpenoid alkaloids in the processing of Radix aconiti lateralis preparata with Radix glycyrrhizae preparata was studied by electrospray ionization tandem mass spectrometry. A method of ESI-MS couple with internal standard was applied for semi quantitative analysis of norditerpenoid alkaloids before and after processing. The combined-decoction-to single-decoction-ratios of the relative abundance of toxic hypaconitine, mesaconitine and aconitine were 5. 67%, 4. 05% and 4. 88%, respectively. The chemical changes of processing can been comprehensive observed by ESI-MS/MS analysis. The scientific basis of reducing the toxicity of Radix aconiti lateralis preparata with Radix glycyrrhizae preparata was enlightened by compareing with the single-decotion, the combined-decoction and residue for the compatibility of Radix aconiti lateralis preparata and Radix glycyrrhizae preparata.

Chromosomal mapping of the major ribosomal RNA genes in the dwarf surfclam (Mulinia lateralis Say)

Chromosomal location of the major ribosomal RNA genes (rRNA) were studied in the dwarf surfclam (Mulinia lateralis, Say) using fluorescence in situ hybridization (FISH). FISH probes for the rRNA genes were made by polymerase chain reaction (PCR), labeled with digoxigenin-11-dUTP and detected with fluorescein-labeled antidigoxigenin antibodies. Mulinia lateralis had a diploid number of 38 chromosomes and all chromosomes were telocentric. FISH with the rRNA probe produced positive and consistent signals on two pairs of chromosomes: Chromosome 15 with a relative length of 4.6% and Chromosome 19, the shortest chromosome. Both loci were telomeric. The rRNA location provides the first physical landmark of the M. lateralis genome.

白颌大角蟾三个种群分化的研究

白颌大角蟾（Megophrys lateralis）广布东南亚一些国家和地区。现选择分布在中国云南境内的白颌大角蟾的3个彼此隔离种群,选用它们稳定而可量的性状进行了聚类分析,以检查3个种群的相似和趋异程度,借以评估是否达到亚种或种级水平。结果表明:3个种群分化尚未达到种级水平。估计这3个种群实现隔离和性状趋异的时间可能在横断山抬升的中期以后,即第四纪的上新世末至更新世初,山脉抬升至某一高度后,环境分异渐趋显著,种群适应环境变化,性状从微小变异的积累,分化才趋于明显。研究中发现,这些种群性状变异仍然是小的和连续的,甚至是不稳定的,没有出现间断性的鉴别性状,故尚未达到种级水平。3个种群中,以云南西北贡山县独龙江河谷的种群分异更明显,即使如此,如要作为一个亚种对待,亦感性状分异之不足。相似率表示出,腾冲、景东2种群相似程度最大,可相聚一起,只能作白颌大角蟾的不同地理隔离种群。费粱等（1990,1992）将景东种群描述为“腺角蟾Megophpys glandulosa”。作者所运用前耳骨（prootica）入眶、额顶骨（fronto-parietal）与鳞骨（squamosal）分开或彼此相接两种状态作为种的主要划分...

中国角蟾亚科十一种的同工酶电泳研究(英文)

本文用同工酶电泳的方法分析了中国产角蟾亚科3属11种,共13个地理种群样本,以探讨它们的遗传多样性及系统关系。用于分析的酶共14种,由24个基因位点编码。经过酶带的分析和计算,得出了每个种群样本在每个基因位点上的等位基因频率（见表3）。根据基因频率的分布,计算得出了各种群样本的基因多样性指数——平均杂合率（H）（见表4）,结果表明,角蟾亚科的H值平均值为0.18, 在两栖动物中是属于很高的遗传多样性水平,根据基因频率的分布,计算了所有种群样本间的Nei’s遗传距（见表5）,并通过类平均法（UPGMA）重建了进化树（dendrogram）。分析结果支持将拟角蟾属（Ophryophryne）从角蟾属（Megophrys）中分出为独立属的观点;但是对短腿蟾属（Brachytarsophrys）是否为独立属提出了疑问。在角蟾属（Mesophrys）中,可以明显地看出3个组,它们中的种间亲缘关系比较近,这3个组分别是:①白颌大角蟾（M.lateralis）、大花角蟾（M.giganticus）和长肢角蟾（M.longipes）;②粗皮角蟾（M.palpebralespinneosa）、淡肩角蟾（M.boettgeri）...

利用电喷雾质谱技术研究复方中药的配伍原则

Traditional Chinese Medicine (TCM) based on natural products is one important part of the Chinese civilization.Owing to the complexity of the composition,the study on medical effective components and curative effects are very difficult;Fuzi (Radix Aconiti Lateralis Praeparata) has been widely used for cardiotonic and analgesics in China,however,the component-aconitine in which is very toxic and may cause some side-effect.This paper reported the application of electrospray iohization mass spectrometric(ESIMS) technique on study of the compound prescriptions containing fuzi,Renshensini concoction and Baweidihuang concoction,to explore the mechanism of synergy between fuzi and other herbs.From chemical point of view,the detoxification mechanism can be attributed to the hydrolysis of the solubility of toxic diester-alkaloids from concoctions of fuzi.Radix Glycyrrhizae Praeparata,Rhizoma Zingiberis,Radix Ginsengp promote the hydrolysis to produce the less toxic monoester-alkaloids and Fructus Corni reduce the solubility of hypaconitine from fuzi.

Molecular characterization of an ecdysone inducible gene E75 of Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis and elucidation of its role in molting by RNA interference

Ecdysone inducible gene. E75 is a primary target of ecdysone receptor (EcR). and is found to play a critical role in the molting process of arthropods In this study, a cDNA encoding the E75 of Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis (FcE75) was cloned using RT-PCR and RACE techniques FcE75 cDNA was 3611 bp in length with an ORF of 2394 bp. The deduced amino acid sequence of FcE75 had the highest sequence identity to E75 from a land crab Gecarcinus lateral's and E75 of the shrimp Metapenaeus crisis Quantitative real-time PCR revealed a prominently high expression of FcE75 mRNA in the whole body RNA extract of late premolt period (D3) juvenile shrimp. The role of E75 in the process of shrimp molting was investigated using the RNA interference technique Long double-stranded RNA corresponding to the FcE75 (dsE75) efficiently silenced the FcE75 transcript levels in juvenile F. chinensis. Further, injection with dsE75 completely arrested the molting process in experimental shrimp which eventually caused death Setogenic analysis of the uropods from molt-arrested shrimp, showed defective epidermal retraction, poor development of setae and new cuticle. These results indicate that E75 might be related to the molting process and is essential for proper molting and survival of shrimp This is the first report demonstrating the use of double stranded RNA to elucidate the possible role of E75 in the molting of decapod crustaceans (C) 2010 Elsevier Inc All rights reserved

牡蛎染色体的分子生物学分析

本研究应用显带技术和荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)技术，鉴定了牡蛎的染色体；应用FISH方法定位了一系列的重复序列和大分子的P1克隆DNA；制备了染色体特异性探针。应用FISH特异性探针成功地鉴定了长牡蛎的三体10。结果如下：1．分析了G带和C带在美洲牡蛎染色体上的分布。G带在每一条染色体上的带型不同，某些染色体间(如第1对和第4对染色体，第7对和第9对染色体)的带型差别不是很明显。G带型容易受染色体收缩程度的影响。C带型重复性较好，染色体带型较清楚，分布在染色体的端粒区域和着丝粒区域。G带和C带带型能够用来鉴定牡蛎的染色体，但是重复性低和带型差异不显著，并不适合常规的染色体鉴定。2．早期胚胎和担轮幼虫制备的染色体适合于FISH分析。染色体制备方法重复性好，可适用于其它贝类的染色体制备。3．研究了重复序列基因--rDNA的定位：1)18S-5.8S rDNA在研究的五种巨蛎属Crassostrea牡蛎均只有一个位 点。太平洋种(C.gigas，C. ariakensis和C. plicatula)中，杂交信号位于最短的染色体一第10对染色体长臂的端粒区域，在大西洋种(C. virginica和C. rhizophorae)中，同一序列定位在第2对染色体短臂的端粒区域。2)18S-28S rDNA在两种蛤中有两个位点。rDNA探针定位在侏儒蛤(Mulinis Lateralis)的第15对和第19对染色体的端粒区域，同一序列定位在硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)的第10对染色体的长臂和第12对染色体短臂的端粒区域。信号强度在两对染色体之间有差异。 3)5s rDNA位于美洲牡蛎的第5对染色体的短臂上靠近着丝粒区域和第6 对染色体的短臂的中间区域。信号强度在两对染色体之间没有显著差异。5S rDNA探针可以作为鉴定和识别第5对和第6对染色体的特异性探针。4．研究了一些重复序列的定位1)两个短的重复序列1G8，1P2均产生很强的荧光信号分布在美洲牡蛎所有的染色体上。在低严谨条件下，这些序列均产生很强的信号散布在所有的染色体上。在高严谨条件下，信号强度大大减弱，但是信号仍散布在所有的染色体上。这些重复序列散布在美洲牡蛎的整个基因组中。2)高度重复序列Cgl70产生的信号分布在长牡蛎的7对染色体的着丝粒区域，没有发现间区信号。在第1对，第2对，第4对和第7对染色体上的荧光信号强且稳定。在第5对，第8对和第10对染色体上的信号相对弱且不稳定。在剩余的染色体上(第3对，第6对和第9对染色体)没有检测到荧光信号。结果表明此卫星序列是一个着丝粒卫星序列。在美洲牡蛎的染色体上没有检测到荧光信号，表明了这个着丝粒卫星序列在这两种牡蛎中的分布存在着显著的差异。3)脊椎动物端粒序列(TTAGGG)n的FISH信号局限在四种双壳贝类(美洲牡蛎，the mangrove oyster，硬壳蛤，侏儒蛤)所有染色体的端粒区域，没有发现间区信号的存在。研究结果与已报道的研究结果表明脊椎动物端粒序列或许存在于所有双壳贝类的染色体末端。双壳贝类是目前研究过的唯一含有脊椎动物端粒序列DNA的无脊椎动物。4)研究了RAPD探针在美洲牡蛎染色体上的定位。大多数RAPD探针产生了多个信号散布在间期细胞核和所有的染色体上。引物OPX-03，OPX-04，OPX—06，OPG-02，OPM—04，OPM-11，0PS-02制备的探针在适宜的条件下产生特异性荧光 信号，分布在牡蛎的特定的染色体上。PCR特异性带产生的探针OPX—06—310和0PG-02—300产生了特异性的荧光信号：OPX—06—310产生的信号位于第5对染色体的短臂的近端粒区域，0PG—02—300探针定位到第3对染色体的短臂上。这两个探针是鉴定美洲牡蛎单条染色体的特异性探针。5．研究了大分子Pl克隆DNA(插入片断为80～100 kb)在美洲牡蛎染色体上的定位。Pl克隆DNA通过切口平移方法标记digoxigenin—11-dUTP用作FISH的探针。Cot-1 DNA作为竞争剂有效地抑制了Pl克隆序列中的重复序列产生的信号。杂交信号用fluorescein标记的anti—digoxigenin抗体来检测，用两层抗体rabbit-anti-sheep抗体和FITC anti—rabbit抗体来扩增信号。9个P1探针成功地定位在特定的染色体上。46—1探针杂交到第1对染色体的长臂靠近着丝粒区域；47-10探针定位到第2对染色体的长臂近端粒区域；Cvpl和48-13两探针定位到第3对染色体上：Cvpl位于短臂的端粒区域，48-13探针位于长臂的近着丝粒区域；48—10探针杂交到第4对染色体的长臂上；48-1探针杂交到第5对染色体长臂的近着丝粒区域；49-11探针位于第7对染色体长臂上；探针49-10和44-11位于第8对染色体长臂上。同时我们成功地将2个P1探针杂交到同一染色体分裂相中，进一步确定了Pl探针在美洲牡蛎染色体 上的定位。6．应用18S-28S rDNA探针成功地鉴定出长牡蛎非整倍体中的三体10。经鉴定AF-35，AF-39和AF-3三体家系属于三体10家系。rDNA探针分布在三条染色体上，即多出的一条染色体为染色体10。相应地在间期细胞核上有三个信号出现。AF-34和AF-36家系不属于三体10家系。rDNA探针分布在两条染色体上，相应地在间期细胞核上有两个信号出现。FISH和染色体特异性探针为非整倍体的鉴定提供了一个快速准确可靠的方法和途径。