Ⅰ应用高通量技术筛选松树抗微生物分子的研究;Ⅱ向日葵种质资源相关基础研究

一．应用高通量技术筛选松树抗微生物分子的研究 我们提出一种对纯化组分的抗菌活力进行高通量技术筛选的比色方法。该方法利用一种新型四氮唑盐MTS（methyl tetrazolium salt）在电子偶联剂PMS( phenazine methosulfate)的辅助下对供试样品进行比色分析，其原理是MTS能穿透进完整活性细胞，在接受电子偶联剂PMS提供的电子后，被其中细胞器膜或质膜上的脱氢酶还原成一种水溶性的显色甲替（formazan）化合物。甲替在490nm波长的吸收值能直接用96孔酶标板读取，无须通过额外的溶解步骤。甲替的产生量（吸收值）和基质中的活细胞数成正比。因此，抗菌成分作用于供试细菌后，其抗菌活力大小可通过对照孔（未加抗菌成分）和试验孔吸收值的差异反映出来。借助该技术和对影响MTS转化的各种因素标准化，定量研究6种细菌菌株包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长。通过反相C18柱浓缩、凝胶过滤层析和亲和层等技术，从受马尾松毛虫危害的马尾松针内分离和纯化出几种增强的抗微生物活力，证实了。该方法对临床供试菌株的可行性和应用潜力;同时，对植物宿主受害后的诱导生理和功能意义亦进行了探讨。 二．向日葵种质资源相关基础研究中文摘要 1) 维生素E的天然产物有八种类型，分别为α、β、γ、δ一生育酚( tocopherol)和α、β、γ、δ一生育三烯酚( tocotrienol)，对植物、动物和人类都具有十分重要的生理作用。绿色植物是人类和动物VE的基本来源。本文对有关植物中VE生物合成途径和相关酶基因克隆研究现状，以及VE在植物体内的作用和功能研究进展进行了综述，以期为VE的机理探寻和功能开发提供进一步的思路。 2) 以20份向日葵种质资源为实验材料，通过对维生素E含量、含油率、皮壳率以及百粒重的测定及统计分析，试图了解向日葵种质资源中维生素E含量变异及相关数据。结果表明，在20份向日葵种质资源中，油葵的维生素E含量和含油率明显高于食葵：含油率与维生素E含量在0.01水平呈极显著正相关，含油率与百粒重在0,05水平呈显著负相关;百粒重与皮壳率在0.01水平呈极显著负相关。通过初步评价，发现3份富含天然维生素E的向日葵种质。 3) 由自由基介导的脂过氧化、酶失活或蛋白降解、胞膜破裂和遗传完整性（核酸）的损害是种子衰老的主要原因。种子在高温和高含水量情况下曝露数天诱发的加速衰老比一般衰老引起更多的生化分解;另一方面，在长期贮存条件下的低温贮存环境和种子低含水量可能使种子处于玻璃态。种子胞质的极高粘度和低分子运动能够阻止或抑制很多有害过程。尽管种子衰老的生理机制已有大量研究，但衰老过程中的主要过程和相互作用仍未完全清楚。本文报道向日葵种子在宽范围的含水量和温度条件下的脂过氧化、非酶蛋白糖基化对种子衰老的影响;同时，对种子玻璃态在长期贮存中对生化分解的阻滞作用并由此延长种子存活力也进行了探讨。

云南保种山羊血液同工酶遗传多样性研究

采用水平式淀粉胶电泳技术 ,对云南龙陵黄山羊、宁蒗黑头山羊、马关无角山羊和路南圭山羊等 4个保种山羊的 1 2 0个个体共 3 9个基因座位的基因多态性进行了研究。结果显示 ,云南 4个保种山羊品种在AKP、CES - 1、ESD、GOI、LAP、MDH、ME和NP基因座位出现多态。多态座位基因在不同保种山羊中分布不同。多态基因座位百分比 (P)在 4个保种山羊中分别为 0 .2 0 51 ,0 .1 53 8,0 .1 2 82和 0 .1 53 8。平均杂合度 (H)分别为 0 .0 95,0 .0 61 4 ,0 .0 4 67和 0 .0 662。用UPGMA法对由基因频率计算得到的Nei氏标准遗传距离进行聚类分析 ,结果表明云南保种山羊具地理分布及品种特点 ,龙陵黄山羊和其它 3个品种的遗传距离最远。

滇南小耳猪遗传多样性的血液蛋白电泳研究

文采用蛋白电泳技术研究滇南小耳猪血液蛋白多态性。共分析了滇南小耳猪32个遗传位 点，其中AKP、CAT、ES、PA、6PGD和TF等6个位点检测到多态性，多态位点百分比P=0．1875，平均 杂合度H=0．0712。结果表明滇南小耳猪的血液蛋白多态程度较高，反映在蛋白质水平上的遗传多样 性较为丰富。

云南中甸尼西鸡的血液蛋白多态性研究

　采用水平式淀粉胶凝胶电泳技术和垂直式聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了云南中 甸尼西鸡的血液蛋白多态，对33个样本的37个基因座位进行了分析，共有9个座位出现多态，分 别为ES-1、ES-2、AKP-1、AKP-2、LAP、PGM、CK、Tf及6PGD。多态位点百分比P=0.2432,平 均杂合度=0.1015,每个座位等位基因的平均数A=1.3784,结果表明尼西鸡的血液蛋白多态程度较 高，在蛋白质水平上的遗传多样性较为丰富。同时发现Amy-1座位只出现杂合子AB型。

云南盐津乌鸡血液蛋白及同工酶遗传多态性研究

采用水平式淀粉凝胶电泳技术,对云南盐津乌鸡34只个体共计34个基因座位的血液蛋白及同工酶多态性进行研究,发现LAP、AKP-1、AKP-2、CKs-1、PEP-B 5个座位具有多态性,多态座位百分比和平均杂合度分别为P=0.1470,H=0.0586。对多态座位基因频率进行计算发现盐津乌鸡LAP~(B)、aKP-1、AKP-2、CEs-1~(A)、PEP-B~(A)频率较高。结果表明,云南盐津乌鸡遗传多样性程度较常见的外国鸡种高,且具有独特基因型,属选育程度低,选择潜力大的地方品种,具有较高的保种价值。

云南保种乳用圭山羊遗传多样性蛋白电泳研究

采用水平式淀粉胶蛋白电泳技术,对路南保种乳用圭山羊33个个体的46个遗传座位的血液蛋白及同工酶的多态性进行了研究。结果发现AKP、LAP、CES-I、ESD、ME和Pa6个座位具多态性,多态座位的基因AKP~(0)、LAP~(A)、CES-I~(1)、ME~(B)、ESD~(1)和Pa~(A)的基因频率较高;多态座位百分比P=0.1304,平均杂合度H=0.0501。在Tf座位,出现两种表型AA、AB,但多态性贫乏;LDH谱带中发现一种不同的类型。

云南马关保种无角山羊血液蛋白多态性研究

采用水平板淀粉胶电泳技术分析了云南马关保种无角山羊的血液蛋白多态性。对36个个体45个基因座位的分析得出:Esd、Pep-B、Lap、Akp、Ces-1、Ces-2共6个座位出现多态性,且Esd~(A)、Pep-B~(A)、Lap~(A)、Akp~(B)、Ces-1~(A)、Ces-2~(A)的基因频率较高。多态座位百分率P=0.133,平均杂合度H=0.04863。

云南地方猪种血液蛋白多态性研究

采用蛋白电泳技术,分析了3个云南地方猪种32-36个遗传位点,其中AKP、CAT、DIA、ES、G6PD、PA、6PGD、PHI、TF等9个位点检测到多态性,多态位点百分比为0.1875-0.2121,平均杂合度为0.0712-0.1027。结果表明,云南地方猪种血液蛋白多态程度较高,反映在蛋白水平上的遗传多样性较为丰富。

中国部分猪种SLA2DQB 外显子2 遗传多样性

运用PCR2SSCP 和克隆测序对中国部分猪种的SLA2DQB 基因外显子2 的多态性分析表明:有功能的 DQB 基因有68 个新等位基因,假基因(SLA2DXB) 等位基因有5 个。各等位基因的数量分布极其不平衡,而且许多 品种都表现出共享等位基因。9 个主要等位基因中, C08 广泛分布在中国猪种的6 大地方类型11 个品种及云南 和四川野猪中,它为中国猪种特有的共享等位基因,占总数的55. 10 %。在单一的个体中拥有5 条以上序列,说明 SLA2DQB 基因座在某些品种中拷贝数为3 个。SLA2DQB 外显子2 的等位基因核苷酸和氨基酸多态变异位点分别 高达81 个和49 个,等位基因多样度( H= 0. 889) 以及核苷酸多样度( Pi = 0. 047) 都很高,总体表现为β折叠区的Pi 值均高于α螺旋区。综合分析表明华南型、西南型猪H和Pi 均较高,高原型的藏猪最低。类群内遗传距离排序与 Pi 值高低排序一样,可见各地方类型中核苷酸替换的差异正比于核苷酸多样度。类群间遗传距离比较,江海型与 华北型间的距离最大,而华中型和高原型间的遗传距离最小。

Genetic diversity and divergence in Chinese yak (Bos grunniens) populations inferred from blood protein electrophoresis

In 6 Chinese yak (Bos. grunniens) populations including 177 yaks, 34 blood protein loci were studied by horizontal starch gel electrophoresis, four of these loci (AKP: ALB, LDH-1, TF) were found to be polymorphic. The percentage of polymorphic loci(P) is 0.118, the mean individual heterozygosity(H) is 0.015, which means a low level of genetic diversity in the whole Chinese yak population. The coefficient of gene differentiation (G(ST)) is 0.0625, which indicated an almost-indistinguishable divergence among different populations at the level of blood protein electrophoresis.

Genetic diversity of cattle in South China as revealed by blood protein electrophoresis

Genetic variation of 31 blood protein loci in 236 cattle from eight South China populations (including mithan, Bos frontalis) and a Holstein population was investigated by means of horizontal starch gel electrophoresis. Thirteen loci (ALB, CAR, Hb-b, Np, PGM, Amy-I, PEP-B, AKP, 6PGD, Cp, Pa, EsD, and TF) were found to be polymorphic. The comparison of average heterozygosities (H) shows that all the native cattle embrace a rich genetic diversity Our results on protein polymorphism suggest that cattle in China originated mainly from Bos indicus and Bos taurus; Xuwen, Hainan, Wenshan, and Dehong cattle and the Dehong zebu are close to zebu-type cattle, and Diqing and Zhaotong cattle are close to the taurine. The mithan was very different from other native cattle, and we suggest that its origin was complicated and may be influenced by other cattle species.

免疫增强剂对异育银鲫非特异免疫力的影响

分别用添加1%酵母细胞壁(1号饲料)、1%酵母细胞壁+0.23%Vc+0.02%VE(2号饲料)、1%免疫多糖(3号饲料)的饲料投喂异育银鲫,并于试验后4、11、17、24、31 d测定头肾巨噬细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性和血清杀菌活性。结果表明,与对照组相比,3组饲料均能显著提高异育银鲫的头肾巨噬细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性和血清杀菌活性,其中3号饲料效果最为显著,其次为2号饲料。