2,4-二取代氨基-6-取代-[1,3,5]三嗪或1,3-嘧啶类化合物、其制备方法、药物组合物及用途

一种新型的2，4-二取代氨基-6-取代-[1，3，5]三嗪或1，3-嘧啶衍生物及其制备方法、药物组合物和其药理用途，其结构通式如式(I)所示，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、A、B、X、Y和Z的定义如说明书中所述。该类化合物与HIV-1整合酶具有很高结合活性，并且在底物竞争测试中能够有效的抑制整合酶对底物的结合。因此该类化合物是较强的HIV-1整合酶抑制剂，有望开发成为新的抗HIV病毒药物。

Anti-HIV-1 Activities of Hemslecins A and B

目的:研究从药用植物金佛山雪胆分离的雪胆素A和雪胆素B两个三萜类化合物的体外抗HIV活性.方法:应用合胞体抑制实验、p24抗原产生的抑制实验、慢性感染细胞和正常细胞间的细胞融合抑制实验等技术检测化合物的体外抗HIV-l活性;利用HIV-l逆转录酶、蛋白酶抑制实验,NCp7锌离子逐出实验探讨化合物的作用机制.结果:雪胆素A和雪胆素B在体外有较好的抑制HIV-l活性,其活性主要表现为:(1)抑制HIV-l诱导合胞体形成,EC50值分别为3.09 μg·mL-1和2.53μg·mL-1;(2)抑制HIV- 急性感染的C8106细胞p24抗原产生,EC50值分别为3.97μg·mL-1和18.90μg·mL-1;(3)抑制HIV-1 慢性感染H9与正常C8166细胞间融合,EC50分别为1.76μg·mL-1和11.95μg·mL-1.雪胆素A和雪胆素B对HIV-l逆转录酶、蛋白酶、NCp7锌离子逐出均没有抑制作用.雪胆素A对HIV-1整合酶有微弱的结合活性,而雪胆素B对HIV-1整合酶没有结合活性.在共培养实验中,雪胆素A和雪胆素B预处理C8166细胞组比未经预处理细胞组能够更有效的抑制HIV-l活性.结论:化合物雪胆素A和雪胆素B体外有较好的抗HIV-1活性,可能主要作用于HIV-1病毒进入细胞阶段.

HIV-1核衣壳蛋白NCp7抑制剂体外筛选方法的建立

目的 表达HIV-1核衣壳蛋白(nucleocapside protein p7,NCp7),并建立抑制剂筛选方法.方法 从pBRU2/ADP202质粒经PCR得到HIV-1 NCp7编码序列,克隆到pet28a 质粒中构建HIV-1 NCp7表达载体.阳性克隆转染E.coli BL21 DE3,以IPTG诱导,细胞裂解液经Q Sepharose H.P和SP Sepharose H.P纯化后纯度达到90%以上.将具有锌离子逐出活性的H2O2和2,2'-联硫基二吡啶(2,2'-dithiodipyridine,AT-2)与NCp7作用,用锌离子特异的荧光染料检测.用该方法检测KIZ-CM系列化合物.结果 可以检测H2O2和AT-2的锌离子逐出活性,经该方法筛选,KIZ-CM 10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性.结论 在国内首次建立了HIV-1 NCp7锌离子逐出方法,该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选.

法落海的化学成分及抗HIV活性

下载PDF阅读器利用多种柱层析方法,从法落海(Angelica apaensis)95%乙醇提取物中分离得到8个化合物.经IR、MS、NMR等波谱数据鉴定为氧化前胡素(oxypeucedanin,1)、氧化前胡素水合物(oxypeucedanin hydrate,2)、异欧芹属乙素(isoimperatorin,3)、白当归脑(byakangelicin,4)、白当归素(byakangelicol,5)、3'-O-acetylhamaudol (6)、(+)-9(Z),17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol(7)和9,17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol,1-acetate(8),其中,化合物6-8是首次从该植物中分离得到.我们对所有得到的8个化合物进行抗HIV活性分析,化合物1具有明显的抗HIV活性,其抑制合胞体形成的半数有效浓度(EC50)为1.6 ms/L,治疗指数(TI)为17.59.

藤三七中一个新黄烷醇和抗HIV活性成分

利用各种色谱(硅胶和凝胶)方法,从藤三七[Boussingaultia gracilis Miers var.pseudobaselloides Bailey]的70%(体积分数)的乙醇提取物中分离得到2个黄烷醇类化合物(1,2)和4个黄酮类化合物(3～6).采用UV,IR,MS 和1D,2D NMR方法,分别鉴定出如下化合物: 7-羟基-5-甲氧基-8-甲基-6-甲酰基-3,4-黄烷二醇,命名为藤三七醇A(1);4,7-二羟基-5-甲氧基-8-甲基-6-甲酰基黄烷(2);7-O-methylunonal(3);5,7-二羟基-6,8-二甲基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮(4);Desmosflavone(5)和Demethoxymatteucinol(6).其中化合物1是一个新的黄烷二醇化合物,化合物2～6为首次从该植物中分离得到.抗HIV-1活性筛选结果表明: 化合物1,2,5,6对HIV-1诱导合胞体的形成具有一定的抑制作用,其半数有效浓度(EC50)分别为45.09,48.73,55.47 和 82.75 μmol/L,治疗指数(TI)分别为1.41,1.20,7.15 和》8.51.

贻贝凝集素抗-HIV活性研究

分离提取海洋无脊椎动物贻贝(Crenomytilus grayanus)凝集素,考察其抗HIV活性。采用半乳糖-Sepharose 6B亲和层析和Sephacryl S-200层析分离提取贻贝凝集素(Crenomytilus grayanus lectin,CGL),以光镜检查合胞体抑制试验,以ELSA测定HIVp24抗原表达水平。从海洋无脊椎动物贻贝中分离出的凝集素(CGL),为N-乙酰半乳糖胺/半乳糖(GalNAc/Gal)特异性的凝集素。CGL在27.88mg.L-1浓度时,对HIV诱导细胞病变的抑制达50%;在45.70mg.L-1时,对HIV-1复制的抑制达50%;同时在35.12mg.L-1浓度时,对HIV感染细胞融合的阻断达50%。

HIV一1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

：从HIV．1ⅡIB病毒RNA经RT—PCR得到HIV一1蛋白酶编码序列，克隆到pet28a质粒中构建HIV一1蛋白酶 表达载体。阳性克隆转染E．coli BL21 DE3，经IPTG诱导，蛋白酶以包涵体的形式表达，表达量占菌体总蛋白量 的40％。包涵体经Triton X．100洗涤后溶解于8M尿素，溶解后的蛋白溶液经sephacyl s一200 H．R分子筛柱纯化后 纯度达到90％以上，收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测，纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧 光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响，表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。

HIV蛋白酶抑制剂与细胞凋亡

　HIV 感染人体后造成大量CD4 + T 淋巴细胞的凋亡, 从而破坏免疫系统,使机体无法抵抗病毒的入侵,导致免疫 缺陷。目前的药物靶点都针对病毒本身,无法清除体内储存 病毒的感染细胞,而HIV 蛋白酶抑制剂治疗HIV/ AIDS 患 者后可以减少HIV 感染引起的细胞凋亡,帮助机体恢复免 疫功能,并且这种作用与其抑制病毒的作用是相独立的,这 提示了可以通过免疫重建的策略来治疗AIDS。本文综述了 HIV 蛋白酶抑制剂的研究和发展概况,其作用特点以及对细 胞凋亡的影响。明确HIV 蛋白酶抑制剂与细胞凋亡的关 系,可以启发新的思路从细胞着手,通过恢复机体的免疫能 力来对抗病毒,从根本上治疗AIDS。

天然来源具有抗HIV 活性的多肽和蛋白类化合物

　从天然药物中寻找高效低毒的抗HIV/ AIDS 活性化合物和先导化合物是国内外新药研制中非 常活跃的领域之一,也应该是我国近期创制新药的一条捷径。来源于动植物、海洋生物、微生物以及人体等中 的许多天然化合物具有抗HIV 活性。本文仅对天然来源的多肽和蛋白类化合物抗HIV 的研究简要综述。

抗HIV p24多肽单克隆抗体和抗血清的制备及初步应用

检测p2 4抗原的诊断试剂在AIDS研究和防治方面具有重要意义。为研制国产HIVp2 4抗原诊断试剂 ,根据国内外文献 ,合成了HIVp2 4抗原的六个肽段 :G -A 12 ,D -R 16 ,P -S 18,A -G 2 3(HIV - 2ROD) ,P -S 18,N -I 15以及D -C 2 2。六个肽段中 ,N -I 15肽和D -C 2 2肽用于制备McAb ,其余 4个用于制备山羊抗血清。除D -R 16肽的滴度较低 (1∶2 0 0 0 )外 ,其余三个肽的抗血清滴度都在 1∶10 0 0 0以上。McAb中 ,N -I 15肽的反应比D -C 2 2肽要强 ,但两者的腹水滴度相同 ,均为 1∶10 0 0。单抗铺板检测病毒 p2 4抗原的非特异性反应比较强。用山羊抗血清铺板 ,1∶80 0 0的稀释度检测效果最好。用我们研制的抗体检测不出裂解HIV - 1ⅢB中 p2 4 ,却能够测出Abbott公司p2 4抗原诊断试剂盒的阳性对照 (HIVAG - 1)。用北海道大学免疫科学研究所研制的单抗和人阳性血清做的交叉对照实验表明 ,可能是由于合成肽免疫产生的抗体与裂解病毒p2 4的亲和力较差引...

抗HIV药物的体外筛选和研究方法

　合适的体内外药物研究方法是研究和开发新药中最关键的环节之一。由于至今尚无理想的艾滋病 (AIDS) 动物模型,目前抗人免疫缺陷病毒(HIV) 药物的筛选和研究仍然主要依赖于各种体外的筛选和研究方法。 本文简要综述了抗HIV 药物的体外筛选和研究方法。

卵叶槲寄生化学成分体外抗HIV活性的初步研究

　目的: 探讨卵叶槲寄生化学成分的体外抗人免疫缺陷病毒(H IV)活性。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法测定化合物的细胞毒性;细胞病变法检测化合物对H IV急性感染的抑制活性; H IV21 p24抗原EL ISA方法检测化合物对慢性感染细胞中H IV复制的影响。计算化合物的抑制率和半数抑制浓度(EC50 )。结果:多种卵叶槲寄生的化学成分具有体外抑制H IV复制的作用,特别是3, 5, 7, 4′2 四羟基23′2 甲氧基黄烷酮和圣草酚。3,5, 7, 4′2 四羟基23′2 甲氧基黄烷酮在2～3μg·mL- 1的浓度范围内对H IV21和H IV22复制的抑制率均≥50%,而对 C8166细胞的半数细胞毒性浓度(CC50 ) >200μg·mL - 1。圣草酚在低浓度(1. 5～2. 5μg·mL- 1 )时,对H IV21和H IV22复制的抑制率达50%,其对C8166细胞的CC50为43. 40μg·mL - 1。结论:卵叶槲寄生化学成分3, 5, 7, 4′2四羟基23′2 甲氧基黄烷酮和圣草酚对H IV21和H IV22的体外复制均有不同程度的抑制作用。

三个非核苷类逆转录酶抑制剂S-DABO类衍生物的体外抗HIV作用(英文)

本文对3个新S-DABO类衍合物(RZK-4、RZK-5、RZK-6)的体外抗HIV活性进行了研究。化合物RZK-4、RZK-5和RZK-6在200μg·mL-1的浓度下均能完全抑制HIV-1逆转录酶的活性。3个化合物对多种细胞均呈现出低毒性,且均在较低浓度下具有抑制HIV-1病毒实验株、临床株和耐药株的作用,治疗指数为3704～38462。其中,化合物RZK-6对HIV-1耐药株HIV-1IIIBA17具有非常显著的抑制作用。结果表明,这3种S-DABO类衍生物有良好的体外抗HIV-1作用,具有开发成为抗HIV-1药物的前景。

我国中药来源的抗HIV天然化合物研究进展

由于迄今仍无艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)疫苗问世,抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)药物仍然是艾滋病治疗的主要手段。传统中药和药用植物来源的天然化合物具有结构多样性、毒性较低、来源广泛等特点,因而在防治艾滋病方面有着独特的优势和巨大的潜力。研究者已经对天然化合物抗HIV作用进行了大量研究,并取得了可喜的成绩,发现了一些生物碱、香豆素、木脂素、黄酮类、萜类、鞣质类、多糖类、蛋白质和多肽类等天然化合物具有抗HIV的活性。然而,多数研究都是在体外试验完成的,大多数天然化合物体外抗HIV活性偏低,而且抗HIV的靶点仍不十分清楚。本文结合笔者实验室研究工作,重点介绍近年来我国传统中药来源的抗HIV活性较强的天然化合物研究进展。

Independency of anti-HIV-1 activity from ribosome-inactivating activity of trichosanthin

Trichosanthin (TCS) is a type I ribosome-inactivating (RI) protein possessing multiple biological and pharmacological activities. Its major action is inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) replication but the mechanism is still elusive. All evidences showed that this action is related to its RI activity. Previous studies found that TCS mutants with reduced RI activity simultaneously lost some anti-HIV activity. In this study, an exception was demonstrated by two TCS mutants retaining almost all RI activity but were devoid of anti-HIV-1 activity. Five mutants were constructed by using site-directed mutagenesis with either deletion or addition of amino acids to the C-terminal sequence. Results showed that the RI activity of mutants with C-terminal deletion mutants (TCSC2, TCSC4, and TCSC14) decreased by 1.2-3.3-fold with parallel downshifting of its anti-HIV-1 activity (1.4-4.8-fold). Another two mutants, TCSC19aa and TCSKDEL having 19 amino acid extension and a KDEL signal sequence added to the C-terminal sequence, retained all RI activity but subsequently lost most of the anti-HIV-1 activity. These findings suggested that ribosome inactivation alone might not be adequate to explain the anti-HIV action of TCS. (C) 2003 Elsevier Science (USA). All rights reserved.