杂多化合物催化性能的研究——单过渡金属配位的磷钨杂多化合物的合成、性质及其对H_2O_2分解反应的催化作用

合成了具有Keggin结构的杂多化合物K_7PW_(11)O_(39)·xH_2O(简写为PW_(11)),K_5PW_(11)ZO_(39)·xH_2O(Z=Mn~(Ⅱ),Co~(Ⅱ),简写为PW_(11)Mn,PW_(11)Co)和Dawson结构的杂多化合物H_6P_2W_(18)O_(62)·xH_2O及其钾盐K_6P_2W_(18)O_(62)·xH_2O(简写为P_2W_(18)和K_(10)P_2W_(17)O_(61)·xH_20(简写为P_2W_(17)),K_8P_2W_(17)ZO_(61)·xH_2O(Z=Mn~(Ⅱ),Co_(Ⅱ),简写为P_2W_(17)Mn,P_2W_(17)Co)。用热差热重、红外光谱、X射线衍射、循环伏安等技术对这类杂多化合物的性质进行了系统的研究,并对其结构和催化活性的关系进行了探讨。

控制气氛光谱法测定纯氧化钬中14个稀土杂质元素

本文介绍的是:使溶液干渣样品在Ar/O_2气氛中交流电弧激发,以基体钬为内标,测定高纯氧化钬中微量稀土杂质。其被测元素的测定下限是:铕、镱和钇各为0.0004％,镧、钐、铒,镝和铥各为0.0016％,铈、钕、钆和铽各为0.0031％,镨和镥各为0.0063％,相对标准偏差均小于7.1％。

Complete mitochondrial genome of the sea cucumber Apostichopus japonicus (Echinodermata: Holothuroidea): The first representative from the subclass Aspidochirotacea with the echinoderm ground pattern

Complete mitochondrial genome plays an important role in the accurate revelation of phylogenetic relationships among metazoans. Here we present the complete mitochondrial genome sequence from a sea cucumber Apostichopus japonicus (Echinodermata: Holothuroidea), which is the first representative from the subclass Aspidochirotacea. The mitochondrial genome of A. japonicus is 16,096 bp in length. The heavy strand consists of 31.8% A, 20.2% C, 17.9% G, and 30.1% T bases (AT skew = 0.027: GC skew = 0.062). It contains thirteen protein-coding genes (PCGs), twenty-two transfer RNA genes, and two ribosomal RNA genes. There are a total of 3793 codons in all thirteen mitochondrial PCGs, excluding incomplete termination codons. The most frequently used amino acid is Leu (15.77%), followed by Set (9.73%), Met (8.62%), Phe (7.94%), and Ala (7.28%). Intergenetic regions in the mitochondrial genome of A. japonicus are 839 bp in total, with three relatively large regions of Unassigned Sequences (UAS) greater than 100 bp. The gene order of A. japonicus is identical to that observed in the five studied sea urchins, which confirms that the gene order shared by the two classes (Holothuroidea and Echinoidea) is a ground pattern of echinoderm mitochondrial genomes. Bayesian tree based on the cob gene supports the following relationship: (outgroup, (Crinoids, (Asteroids, Ophiuroids, (Echinoids, Holothuroids)))). (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

A novel C1q-domain-containing protein from Zhikong scallop Chlamys farreri with lipopolysaccharide binding activity

The C1q-domain-containing (C1qDC) proteins are a family of proteins characterized by a globular C1q (gC1q) domain in their C-terminus. They are involved in various processes of vertebrates and supposed to be an important pattern recognition receptor in innate immunity of invertebrates. In this study, a novel member of C1q-domain-containing protein family was identified from Zhikong scallop Chlamys farreri (designated as CfC1qDC) by expressed sequence tag (EST) and rapid amplification of cDNA ends (RACE) approaches. The full-length cDNA of CfC1qDC was of 777 bp, consisting of a T-terminal untranslated region (UTR) of 62 bp and a 3' UTR of 178 bp with a polyadenylation signal sequence AATAAA and a poly (A) tail. The CfC1qDC cDNA encoded a polypeptide of 178 amino acids, including a signal peptide and a C1q-domain of 158 amino acids with the theoretical isoelectric point of 5.19 and the predicted molecular weight of 17.2 kDa. The C1q-domain in CfC1qDC exhibited homology with those in sialic acid binding lectin from mollusks and C1qDC proteins from higher vertebrates. The typical 10 beta-strand jelly-roll folding topology structure of C1q-domain and the residues essential for effective packing of the hydrophobic core were well conserved in CfC1qDC. By fluorescent quantitative real-time PCR, mRNA transcripts of CfC1qDC were mainly detected in kidney, mantle, adductor muscle and gill, and also marginally detectable in hemocytes. In the bacterial challenge experiment, after the scallops were challenged by Listonella anguillarum, there was a significant up-regulation in the relative expression level of CfC1qDC and at 6 h post-injection, the mRNA expression reached the maximum level and was 4.55-fold higher than that of control scallops. Similarly, the expression of CfC1qDC mRNA in mixed primary cultures of hemocytes stimulated by lipopolysaccharides (LPS) was up-regulated and reached the maximum level at 6 h post-stimulation, and then dropped back to the original level gradually. In order to investigate its function, the cDNA fragment encoding the mature peptide of CfC1qDC was recombined and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3). The recombinant CfC1qDC protein displayed a significantly strong activity to bind LIDS from E. coli, although no obvious antibacterial or agglutinating activity toward Gram-negative bacteria E. coli JM109, L. anguillarum and Gram-positive bacteria Micrococcus luteus was observed. These results suggested that CfC1qDC was absolutely a novel member of the C1qDC protein family and was involved in the recognition of invading microorganisms probably as a pattern recognition molecule in mollusk. (c) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Purification and characterization of two types of chitosanase from a Microbacterium sp.

Two extracellular chitosanases (ChiX and ChiN) were extracted from Microbacterium sp. OU01 with Mr values of 81 kDa (ChiX) and 30 kDa (ChiN). ChiN was optimally active at pH 6.2 and 50 degrees C and ChiX at pH 6.6 and 60 degrees C (assayed over 15 min). Both the activities increased with the degree of deacetylation (DDA) of chitosan. ChiN hydrolyzed oligomers of glucosamine (GlcN) larger than chitopentaose, and chitosan with 62-100% DDA; but ChiX acted on chitosan and released GlcN. Hydrolysis of chitosan with 99% DDA by ChiN released chitobiose, chitotriose and chitotetraose as the major products.

An analysis of the recent severe storm surge disaster events in China

The economic loss caused by the storm surge disasters is much higher than that caused by any other marine disaster in China, the loss from the severe storm surge disaster being the highest. Statistics show that there were 62 typhoon landings over the east-southeast coast of China since 1990, three of which, occurring in 1992, 1994 and 1997, respectively, caused the most severe damage. The direct economic losses due to these events are 9.3, 17.0 and 30 billion yuan (RMB, or about 1.7, 2.6 and 3.8 billion USD, respectively), which is much greater than the loss of 5.5 billion yuan (RMB) on an average every year during the 1989-1991 period. This paper makes a comparative analysis of the damage caused by the three events and presents an overview of progress of precautions against storm surge disaster in China. The suggested counter measures to mitigate the loss from the severe storm surge disasters in China is as follows: (1) Raise the whole society awareness of precaution against severe storm surge disaster; (2) Work out a new plan for building sea walls; (3) Improve and perfect the available warning and disaster relief command system; (4) Develop the insurance service in order to promptly mitigate the loss caused by severe storm surge disaster event.

迟缓爱德华氏菌III型分泌系统(T3SS)输送器蛋白及分子伴侣的研究

迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是重要的革兰氏阴性致病菌，可以感染包括人类在内的多种动物。由迟缓爱德华氏菌引发的爱德华氏菌病已经在许多水产养殖动物中被发现，每年给淡水和海水水产养殖业带来巨大的损失。目前为止对于迟缓爱德华氏菌病的防治以化学治疗为主，疫苗的研究还在进行中。III型分泌系统（T3SS）是E. tarda重要的致病因子，虽然T3SS基因簇的结构及部分基因的功能得到了初步研究，但其作用机制还未得到阐明。本研究着重开展了迟缓爱德华氏菌T3SS输送器蛋白EseC的分子伴侣的鉴定及功能研究，并对输送器蛋白及其免疫功能进行了初步探讨，希望进一步地了解T3SS在E. tarda致病中的功能及其在疫苗研制中的作用。 一、迟缓爱德华氏菌III型分泌系统（T3SS）输送器蛋白EseC分子伴侣的鉴定和功能研究 以前的工作表明，EseB、EseC和EseD蛋白是E. tarda T3SS输送器蛋白的组成成分，在分泌到细菌细胞外后可以组成输送器装置。分子伴侣对于输送器蛋白的稳定和分泌具有重要的作用，EscC已经被鉴定为EseB和EseD的分子伴侣，而EseC的分子伴侣还没有得到鉴定。在本实验中，我们以EseC作为研究对象，主要开展了EseC分子伴侣鉴定的研究。 生物信息学分析表明，在E. tarda T3SS基因簇上的escA基因与eseC相邻，其编码的蛋白形成一个大的螺旋结构，为分子量较小（17.5kD）的酸性蛋白（pI 4.79），并与已鉴定的分子伴侣具有序列的同源性，这些符合细菌T3SS分子伴侣的特征。研究发现，EscA蛋白分布在细菌的细胞质和细胞膜上。在escA基因缺失后，大大降低了EseC分泌到细菌细胞外的量，同时EseC蛋白在细菌细胞质中的积聚量也减少，当escA基因缺失突变株得到escA基因互补后，EseC的分泌和在细胞质内的积聚恢复到了野生型菌株水平。氯霉素阻断蛋白质合成的实验发现，当细菌不表达EscA的情况下，EseC蛋白逐渐降解，说明了EscA可以影响EseC在胞质中的稳定。蛋白体外结合试验和免疫共沉淀实验发现，EseC和EscA在体外可以结合，在细菌细胞质中也可以相互结合，表明EseC和EscA可以相互作用。上述结果表明，EscA是EseC的分子伴侣。 在确定了EscA是EseC的分子伴侣之后，我们进一步确定EscA对EseC表达的影响，以及两者相互作用的结构域。通过检测转录水平和翻译水平的EseC-LacZ融合蛋白表达情况，发现在EscA缺失的情况下，EseC的转录水平没有变化，而翻译水平下降，表明EscA对EseC的影响在转录后水平。通过构建含有部分结构域缺失的escA或eseC的体外共表达体系，并进行Western blot分析，确定了EseC的31-137氨基酸序列为与EscA结合的区域，而在EscA中并没有找到与EseC结合的区域。EseC的31-137氨基酸片段缺失后，EseC的分泌和在E. tarda细菌细胞中的积聚下降，其下降幅度与escA突变株相当，进一步表明EseC的31-137氨基酸为与EscA相互作用的区域。最后人工感染实验表明，分子伴侣EscA及其与EseC的相互作用对E. tarda的致病力有影响。 二、迟缓爱德华氏菌T3SS输送器蛋白的研究 一些研究表明，T3SS在细菌与宿主相互作用的过程中表达，在体外诱导的条件下也可表达。为了确定E. tarda T3SS体外诱导表达的条件，我们检测了不同培养温度、pH条件下，E. tarda T3SS输送器蛋白表达的情况。研究表明，37°C条件下，E. tarda生长快，T3SS的输送器蛋白表达较低；28°C条件下，T3SS的输送器蛋白表达最高，而在20°C条件下，没有检测到T3SS输送器蛋白的表达。在28°C和37°C的培养条件下，中性和碱性相对酸性来说适合细菌的生长和T3SS输送器蛋白的表达。我们分析了E. tarda野生型和输送器蛋白突变株中的输送器蛋白的细胞分布，并据此推测输送器形成的机制。单一输送器蛋白的缺失不影响其它两个输送器蛋白的积聚，而输送器蛋白的分泌之间存在一定的相互影响。 通过检测输送器蛋白突变株ΔeseB, ΔeseC, ΔeseD生长、泳动、自凝聚和溶血能力的变化，发现在输送器蛋白基因缺失后，体外培养的E. tarda的生长速度变慢，泳动、自凝聚和溶血能力也变弱，说明了输送器蛋白在细菌的生长和功能行使中的重要作用。 为了检测输送器蛋白的免疫保护效果，我们克隆了eseD基因，将其在表达菌株BL21(DE3)中进行表达，并将重组表达的EseD蛋白经Ni-NTA树脂进行纯化。以EseD纯化蛋白作为蛋白抗原对大菱鲆进行注射，EseD蛋白表现出了对鱼类的免疫原性，其抗体效价在第7周达到了最高，为1：5120。攻毒实验表明该蛋白对于保护大菱鲆免疫E. tarda的感染具有帮助作用，在105cfu攻毒浓度下大菱鲆的相对存活率(RPS)为62.5%。结果说明EseD蛋白可以作为蛋白抗原疫苗的候选，并能够在保护鱼类免疫爱德华氏菌病中发挥作用。

中国近海浮游细菌生物量与生产力的生态分布特点

本论文研究了胶洲湾、东海和渤海的蓝细菌（Synechococcus）、生物量、异养细菌生物量和生产力的生态学特点。并在汇泉湾、渤海和东海用分极增减法对海洋蓝细菌在微型食物环（the microbial loop）中的作用进行了初步研究。在以上海区调查研究的时间如下：胶州湾：1993年2月、5月、9月11月，1996年5月、1999年3月、5月和12月。汇泉湾：1996年4月至1998年4月。东海：1997年2-3月，1998年7月。渤海1998年9-10月，1999年4-5月。研究结果如下：胶州湾：蓝细菌生物量的变化范围是11.4-0.03 mgC/m~3，季节变化是夏季>秋季和春季>冬季。其水平分布是除夏季蓝细菌生物量是沿岸浅水区向湾外递减外，其它三季（春、秋和冬季）是由湾外向湾内至沿岸浅水区递减。蓝细菌生物量与海水温度周年变化正相关，与季节海水温度的关系是秋、冬季分布变化一致，春、夏季分布变化相反。海水温度是影响胶州湾蓝细菌生物量分布变化的主要原因。异养细菌生物量和生产力的变化范围分别是29.8-1.62 mgC/m~3; 129.12-1.92 mgC/m~3.d。季节变化都是夏季>秋季、春季>冬季。夏季的异养细菌生物量和生产力水平分布趋势与蓝细菌生物量的分布变化相同。海水温度对异养细菌生产力的影响较对异养细菌生物量的影响大。异养细菌生产力相比（BP:PP）的变化在0.58-0.02之间，季节分布变化是夏季>秋季、春季>冬季。夏季表层的BP:PP由沿岸浅水区向湾心、湾口和湾外递减。东海：蓝细菌生物量的变化范围是46.72-0.011 mgC/m~3，夏季高平均是23.59 mgC/m~3，冬季低平均是3.61 mgC/m~3。冬季蓝细菌生物量的水平分布明显受黑潮的影响，在表面和20米层是由东南向西北方向递减。其垂直分布是冬季表层和20米层>底层，夏季是20米层>表层>底层；在连续站冬111站和410站变化都是中层>底层>表层。异养细菌生物量和生产力的变化范围分别是17.2-4.4 mgC/m~3（1997.2）；376.8-7.2 mgC/m~3.d。异养细菌生产力夏季高平均是35.1 mgC/m~3.d。异养细菌生物量的水平分布是由沿岸向外海递增（1997.2），异养细菌生产力的水平分布是冬季异养细菌生产力在32度断面有由沿岸向外递减趋势，PN断面的变化与冬季相似。垂直分布，冬季和夏季的异养细菌生产力的垂直变化在2断面是底层大于表面，PN断面则是表层大于底层，32度断面大多断站是底层大于表层。在连续站冬季111站异养细菌生产力的变化是底层>中层>表层，409站的变化是中层>底层>表层，夏季111站和410站都是中>底层>表层。异养细菌生物量（1997.2）表层分布变化与海水温度分布变化相似，底层变化相反。异养细菌生产力与初级生产力相比（BP:PP），冬季在0.04-0.30之间，平均为0.17；夏季在0.20-0.43之间平均0.32。冬季在长江口附近BP：PP有一个高值区是0.30，夏季在111站附近有一个高值区是0.43。从连续站111站和409’站观测发现底层的BP：PP明显高于表层。渤海：蓝细菌生物量秋季（16.6-0.37 mgC/m~3）比春季（0.44-0.015 mgC/m~3）高。其秋季的水平分布与海水盐度水平分布相同，与海水温度水平分布相反。异养细菌生产力秋季（189-62.2 mgC/m~3.d）与春季（193.2-49.8 mgC/m~3.d）相当。但秋季捕层BP普遍小于底层，而春季是表层普遍大于底层。根据颗粒分级培养实验结果，海洋蓝图细菌在微型食物环中的作用如下：在汇泉湾的春季和秋季蓝细菌可能主要被小型浮游动物（microzooplankton 20-200 μm）捕食。在渤海的春季和秋季也是同样结果。但在东海夏季的111站和410站附近（东海大陆架中部）微型浮游动物（nanozooplankton 2-20 μm）对蓝细菌的捕食压力明显。

刺参遗传连锁图谱构建及卵母细胞成熟过程研究

第一部分 刺参遗传连锁图谱的构建 利用AFLP和微卫星标记以一个远缘地理杂交家系为作图群体，以拟测交理论为作图策略，构建了刺参Apostichopus japonicus的雌性和雄性遗传连锁图谱。利用62对AFLP引物组合，对亲本和93个个体进行了分离分析，共得到3572个标记，其中具有多态性的标记为点数为1133个，多态性比例为31.5%。平均每个引物对产生18.3个多态片段。1133个多态性位点中，294个标记在父母本中都出现并在后代中分离，839个标记在父本或母本中出现并在子代分离，其中母本443(52.8%)个分离标记，父本396(47.2%)个分离标记。卡方检验显示，556个标记符合孟德尔1:1分离。筛选微卫星标记中30个在家系中具有作图信息，其中19个可用于母本作图，19个可用于父本作图。 利用Mapmaker 3.0/EXP软件对分离标记进行连锁分析。358个分子标记用于雌性遗传连锁分析，其中包括19个微卫星标记，199个AFLP标记和11个微卫星标记定位在雌性框架图谱中。雌性框架图谱共有25个连锁群，总长度为3148.3 cM。标记之间最大间隔为37.5 cM，平均间隔为17.0 cM，连锁群的分子标记数最大为21个最小为4个。用于雄性连锁分析的分子标记共有332个，其中包含19个微卫星标记。207个标记定位于23个连锁群上，其中AFLP标记数为196个，微卫星标记数为11个。23个连锁群总长度为3059.8 cM，标记间最大间隔38.6 cM，平均间隔16.6 cM。每个连锁群的长度范围在40 cM到271.4 cM之间，标记数在18到4个之间，包括二、三连体在内的雄性连锁图谱共覆盖3227 cM。雌雄基因组的预测长度分别为4053.7 cM和3816.3 cM，因此，所构建的雌雄连锁图谱覆盖率分别为84.0%和84.5%。通过共有微卫星标记，有3个连锁群在两个图谱中对应。分子标记在两个图谱中呈均匀分布，没有成簇现象。 分子标记筛选、遗传图谱的构建为刺参分子标记辅助选择育种，经济性状QTL定位和比较基因作图打下基础，并且最终将促进中国刺参遗传改良和新品种的培育工作。 第二部分 卵母细胞成熟过程研究 对刺参卵母细胞的体外诱导成熟方法进行探索，并且通过透射电子显微镜、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜结合超薄切片技术及间接免疫荧光染色技术研究卵母细胞成熟的生物学过程。 分别利用在海参中有诱导作用的海星神经提取液和二硫苏糖醇(DTT)对从成熟卵巢解剖出的刺参卵母细胞进行诱导成熟试验，结果显示，刺参的卵母细胞在海水中不会发生自发成熟，海星神经提取液以及神经提取液加滤泡悬浮液对卵母细胞没有诱导成熟的作用，而二硫苏糖醇处理可以诱导卵母细胞生发泡破裂，当DTT溶液的浓度处于10-1 mol/L到10-3 mol/L之间时，对刺参卵母细胞的促熟作用较为明显，在10-2 mol/L左右时，卵母细胞的诱导成熟率可以达到90%以上。未成熟的卵母细胞处于第一次减数分裂前期，不具备受精能力。经DTT诱导后，生发泡发生移动并破裂，染色体排列到赤道板上，然后第一、二极体先后排出，诱导成熟的卵母细胞排出极体的时间与自然受精的卵子一致。在卵母细胞成熟过程中有受精膜举起的现象，说明精子入卵不是受精膜举起的必要条件。卵母细胞只有在生发泡破裂之后才具有受精能力，从生发泡破裂到第二极体排出前的整个减数分裂过程中，卵母细胞都可以受精，但是只有在第一极体排出前受精的卵母细胞才能发生卵裂。人工促熟的卵母细胞受精后，形成的胚胎似乎并不能正常发育，试验过程中最多只得到了8细胞期的胚胎，之后细胞便产生畸形并停止分裂，最终裂解消失。 利用DTT诱导刺参卵母细胞成熟，综合运用光镜、电子显微镜及激光共聚焦技术观察卵母细胞成熟过程，分析了卵母细胞表面动物极突起在卵母细胞脱滤泡中的作用，以及卵母细胞动物极突起和微管组织在生发泡移动过程中所起的作用。卵母细胞通过动物极突起连接到滤泡上，在脱滤泡作用开始时，卵母细胞动物极突起刺入并穿过滤泡膜，使得滤泡膜表面形成一个缺口，然后整个卵母细胞开始从缺口处挤出。脱滤泡的作用力来源有两种：胶膜层的水合作用以及滤泡的收缩。通过激光共聚焦显微镜观察，未成熟的卵母细胞中存在5种类型的微管，并且有两个微管组织中心锚定在卵母细胞突起下方。减数分裂重新启动时，生发泡沿微管向动物极移动，至细胞膜下时破裂。微管解聚对照实验证明驱动生发泡移动的细胞结构为微管束。生发泡破裂后，两个微管组织中心组织形成减数分裂纺锤体，然后第一极体以“收缩-排出”的独特方式排出。 本研究填补了刺参繁殖生物学研究中的缺失环节，为刺参人工繁育技术提供理论基础和指导。

真鲷（Pagrus major）胚胎超低温损伤机理研究

鱼类胚胎由于其自身结构特征：体积大、含水量高、多室结构等，迄今超低温保存尚未成功。超低温保存过程中所造成的冷冻损伤是制约鱼类胚胎超低温保存成功与否的关键，具体表现为渗透压影响、抗冻剂毒性、冰晶损伤等。系统研究并阐明鱼类胚胎冷冻损伤机理，是成功建立鱼类胚胎超低温保存技术的基础。本论文主要针对胚胎对渗透压的耐受性、抗冻剂对胚胎的渗透性、降温速率对胚胎内外冰晶形成温度的影响等冷冻损伤机理进行了系统研究，主要研究结果如下： 1.通过检测胚胎在不同浓度人工海水（0%、25%、50%、75%、1×、2×、3×、4×，渗透压范围0~3740 mOsm/kg）中的孵化率，确定了真鲷不同发育时期胚胎对渗透压的耐受范围，以及心跳期胚胎浸泡不同时间对渗透压的耐受范围。结果显示：①真鲷2-4细胞期、原肠期、10-14体节期胚胎、心跳期和出膜前期胚胎孵化率>50%时渗透压的范围依次为：919~1391 mOsm/kg、919~1391 mOsm/kg、462 ~1391 mOsm/kg、232~1878 mOsm/kg和692~1391 mOsm/kg，表明心跳期胚胎对渗透压变化的耐受范围最广；②在不同浓度人工海水中分别浸泡10 min、30 min、1 h、5 h和10 h后，真鲷胚胎孵化率无显著变化的渗透压范围分别为0~2804 mOsm/kg、0~1878 mOsm/kg、232~1391 mOsm/kg、232~1391 mOsm/kg和919~1391 mOsm/kg；结果表明心跳期胚胎对渗透压的耐受范围随浸泡时间的延长而减小。 2.采用毛细管电泳技术检测胚胎内部DMSO的浓度，并且分析了胚胎孵化率和胚胎内部DMSO的浓度随浸泡时间变化与外部抗冻剂的关系。结果表明胚胎孵化率随胚胎外部抗冻剂溶液浓度和浸泡时间的增加而降低；胚胎内部DMSO浓度随胚胎外部抗冻剂溶液浓度和浸泡时间的增加而增加。对胚胎孵化率（y1）随抗冻剂溶液浓度（x）的变化进行一元三次多项式回归，当浸泡时间分别为10 min、30 min和60 min时，回归方程依次为：y1 = -2832.7x3 + 575.01x2 - 37.011x + 99.641（R2 = 0.9722）；y1 = 30288x3 - 16322x2 + 2077.3x + 27.603（R2 = 0.9876）；y1 = 16052x3 - 5985.2x2 - 32.696x + 119.6（R2 = 0.9124）。对胚胎内部DMSO浓度（y2）随抗冻剂溶液浓度（x）的变化进行回归，当浸泡时间分别为10 min、30 min和60 min时，回归方程依次为：y2 = 0.2584e6.7294x（R2 = 0.9876）；y2 = 0.2521e10.964x（R2 = 0.9644）；y2 = 0.4054e10.95x（R2 = 0.8954）。 3. 利用低温显微镜观察了不同降温速率（20、40、60、80、100、120℃/min）对胚胎内外冰晶形成温度的影响。胚胎外部冰晶形成温度（TEIF）随降温速率的增加显著下降，在降温速率大于80℃/min之后，TEIF随降温速率增加而降低的幅度减小；胚胎内部冰晶形成温度（TIIF）在降温速率小于80℃/min 时随降温速率的升高而降低，在降温速率大于80℃/min 时随降温速率的升高而升高；胚胎内外冰晶形成温度差值（TEIF - TIIF）在降温速率小于80℃/min时随降温速率的升高而增大，在降温速率大于80℃/min时随降温速率的升高而减小。 4. 在低温显微镜下观察了真鲷胚胎低温保存中有复活胚胎记录的保存方法在冷冻解冻过程中的冰晶形成过程，结果表明：①在冷冻过程中，玻璃化法冷冻的胚胎的内部冰晶形成温度（-53.70，-64.33℃）显著低于程序降温法（-17.51，-21.40℃）；而且在玻璃化法冷冻的胚胎内部冰晶形成温度高于外部冰晶后形成（-70.30℃），程序降温法中则相反，胚胎内部冰晶形成温度显著低于外部冰晶形成温度（-4.93，-5.00℃）；玻璃化法中，40%PG冷冻的胚胎外部溶液出现玻璃化现象，其他组均未出现；②在解冻过程中，各组均出现重结晶现象；解冻后，玻璃化法的胚胎完整率（62.82%）远高于程序降温法（9.21%）。

滤食性贝类筏式养殖对浅海生态环境影响的基础研究

近年来，由于对海区不合理的开发，我国浅海贝类筏式养殖接连遭受重创，这亟需从理论上和实践中确定养殖容量和养殖模式。本文在我国北方典型养殖海湾四十里湾对筏式养殖的贝类开展了现场生理生态学研究，对贝类对浮游植物等悬浮颗粒物的处理过程即贝类对颗粒有机物及营养元素C、N、P的摄食、吸收、排泄、排粪和生长进行了剖析，分析了贝类在沿岸养殖生态系中的物质和营养循环中所扮演的角色，为海区贝类养殖容量和养殖模式的最终确定提供了基础数据。另外，本文还对海水、沉积物及生物体中磷的分析方法进行了大量的实验工作。主要结果如下：① 比较系统地评述了双壳贝类的生物沉积(biodeposition)的原理、测定方法及其生态效应。贝类通过生物沉积在沿岸生态系中的物质和营养循环中扮演着重要的角色。国际上已有不少研究专门报道了贝类在海区现场的生物沉积。而在我国，这方面的研究却罕见。② 综述了双壳贝类各种形态的 N 和 P 排泄及其生态效应。对于我国广泛养殖 的栉孔扇贝、海湾扇贝和牡蛎等双壳贝类的TDN、TP排泄尚未见报道。 ③ 在6～7月，在四十里湾的不同养殖海区(8个站位)对扇贝的生物沉积进行了现场测定。在整个四十里湾海区，一龄栉孔扇贝(壳高 41.1±4.1mm，软体干重 0.48±O.10 g/ind))每个每天所产生生物沉积物干重平均为59.9mg，对颗粒有机质(POM)、颗粒有机碳(POC)、颗粒有机氮(PON)和颗粒有机磷(POP)的生物沉积速率范围及平均值分别为： 6.88、3.09、0.392 和 0.022mg/ind·d。还在一个站位测定了海湾扇贝(壳高 24.6±2.3mm；软体干重 O.14g/ind)的生物沉积速率为 24.3mg/ind·d，或179.2mg/g·d。不同站位一龄栉孔扇贝的生物沉积速率有较大变化，这主要与饵料浓度不同有关。二龄栉孔扇贝(壳高60.9±8.2mm；软体干重1.91±0.32 g/ind)的生物沉积速率平均为 112.7mg/ind·d，对POM、POC、PON和POP的沉积速率分别是一龄扇贝的1.85倍、1.68倍、1.77倍和2.33倍。养殖海区与非养殖海区比较，前者近海底沉积速率是后者的 1.51～3.47 倍。根据以上数据，作者计算了中等规格栉孔扇贝(用壳高 41.1±4.8mm 扇贝估算)在四十里湾在夏季每天的生物沉积量达 162 吨(干重)，或18.6tPOM、8.37tPOC、1.06tPON和60kgPP。在四十里湾的贝类筏式养殖海区，可以估计贝类每年因生物沉积的生产而循环427tN和98.OtP(包括20.0t OP的贡献)，它们能分别满足浮游藻类生产所需求N和P的17.0％和28.3％(其中OP贡献 6.9％)。可见，贝类在养殖生态系的物质和营养盐循环中扮演着重要的角色。高密度、大面积的贝类养殖使大量的生物沉积物聚集于海底，可能对海区环境产生冲击。作者分析，98年8月份烟台养殖区赤潮的发生很可能与海底生物沉积物营养盐的快速释放以及栉孔扇贝大面积死亡而使浮游藻类失去了摄食控制有关，而风平浪静和养殖笼对水流的阻挡也为赤潮的发生提供了有利条件。④ 采用半现场流水系统法测定了栉孔扇贝在不同养殖密度、不同养殖模式(扇贝单养、贝藻混养、贝藻参混养)中的生物沉积。实验时间尺度大，前后计80天。结果说明扇贝的生物沉积速率与其养殖密度呈反比关系。养殖密度的高低影响饵料浓度的变化(两者呈负相关的对数函数关系)，而饵料浓度的高低直接决定着扇贝的生物沉积速率的高低，两者呈正相关关系(生物沉积速率与POC和叶绿 a 分别呈对数和指数函数关系)。不仅生物沉积物的数量与养殖密度(或饵料浓度)有关，生物沉积物的质量同样与养殖密度(或饵料浓度)有关。栉孔扇贝的养殖使沉积物的有机质含量及C、N 和 P 含量降低，且密度越高，它们的含量越低。这反映了扇贝对环境的适应能力。在海带和扇贝的混养模式中，海带对扇贝生物沉积物的数量和质量不构成影响，当然这是在海带不影响浮游植物数量的前提下得出的结果。而实际上在自然海区两者可能是竞争关系。⑤ 对从海区取回到实验室的多种滤食性动物，包括经济双壳贝类(栉孔扇贝、海湾扇贝、长牡蛎、贻贝、菲律宾蛤仔等)和养殖中的污损动物(栖海鞘、玻璃海鞘、藤壶、玟斑稜蛤)的 N 和 P 排泄进行了测定，包括排泄成分和排泄速率。在N排泄中，NH_4-H 占主要部分，如笼式养殖的双壳贝类 NH_4-N 占总N排泄的70％以上，平均值范围为70.8～80.1％。氨基酸是第二大排泄成分，平均占总N排泄的10～25％。其它形态的N，如尿素、亚硝酸盐和硝酸盐也有检出，如双壳贝类尿素氮在总氮排泄中占 2～5％。但在双壳贝类中未检出尿酸氮。比较而言，海鞘、藤壶的尿素氮相对高一些。在P排泄中，OP约占TDP排泄的15～27％。栉孔扇贝TDP排泄速率为0.281μmol/h·ind。作者以实验室测定结果计算，在整个四十里湾的夏季，所养殖的双壳贝类每天将排泄4.54t总溶解氮，其中NH_4-N 3.36t、Amino-N 0.69t、Urea-N 0.2t。 同时每天磷的排泄为0.57t TDP，其中OP O.15t。对面积为1.3 * 10~4hm~2的海区而言，贝类的N、P排泄分别能满足浮游植物生产所需N、P的44％和40％。尽管Urea-N所占比例有限，但也能满足海区浮游植物所需 N 的 2％左右。以上说二月高密度的贝类养殖对海区生态系统营养盐循环的影响是很显著的。附着动物(柄海鞘等)的N、P 排泄也不容忽视，它们分别能满足浮游藻类生产所需 N、P 的 ll％和 12％。它们一方面通过排泄和排粪加速营养盐和物质的循环对浮游植物的生长产生刺激作用；另一方面，对藻类产生摄食控制，如果海区中滤食性动物太多，即使营养盐再丰富也难以使浮游植物大量繁殖，这无疑将影响滤食性动物的生长速率。⑥ 运用近年来发展起来的生物沉积法对四十里湾半现场流水系统中贝类的滤水率、吸收率、生长率、生态效率等生理生态学参数进行了测定。栉孔扇贝(收获时规格0.194～0.412g软体干重/ind)滤水率平均为3.65 1/ind·h。扇贝放养密度和饵料浓度没有显著关系。扇贝的总摄食率平均为3.98mg/ind·h，对POM、POC、PON的 摄食率范围为0.84～1.87、0.335～0.748、0.0515～O.1293mg/ind·h。扇贝的摄食率随放养密度的升高而降低，与POM呈正相关关系。扇贝的吸收速率受密度和饵料浓度的影响不明显。扇贝对N的吸收效率较C、P稍高，对总有机质的吸收效率为75.9±4.1％，如此高的吸收效率与低饵料浓度有关。扇贝氨基酸泄漏所损失的能量高于排氨的能量损失。代谢能与吸收能呈明显的正相关关系。SFG与饵料浓度呈正相关关系。总生长效率K1(* 100)变化较大，范围为20～49；净生长效率K，K_2(* 100)随POM的升高而升高。扇贝对N的总生态效率范围为6.2～12.8％(平均9.9％)，这高于对C(平均5.9％)和P(平均4.1％)的总生态效率。扇贝对POC、PON和PP的生长余力(SFG_C、SFG_N、SFG_P)平均分别为197、46.8和6.2μg/ind·h，它们分别与POC、PON和PP呈正比关系。扇贝对N的净生长率高于对C和P的净生长率。在N的预算中，如果仅考虑NH_4-N的排泄而忽视其它形态氮的排泄，将会产生很大偏差(平均约20％)。扇贝贝壳生长所需的能量在整个扇贝生长所需能量的9.0～15.1％(平均 11.2％)；贝壳C、N和P在扇贝生长中所占的比例分别为10.5～17.8％、9.4～16.1％和8.7～15.O％。可见，贝壳不管在能量预算还是在元素预算中都不应该被忽视。理论计算而得到的SFG和SFG_C、SFG_N、SFG_P与扇贝的实际生长和扇贝C、N、P的实际增长量之间呈正相关关系，但前者明显过高地估计了扇贝的生长。⑦ 运用生物沉积法在四十里湾养殖海区现场对栉孔扇贝的生理生态学特征进行了研究。不同海区扇贝的滤水率有变化，一龄扇贝(41.1±4.1mm，软体干重 0.48±O.10g/ind)滤水率变化范围为 0.72～2.54(平均 1.27)1/ind·h 或 1.65～5.97(平均 2.61)1/g·h。与半现场研究结果一致，滤水率与TPM没有明显关系，而摄食率却与TPM呈正相关关系。二龄扇贝(软体干重 1.91±0.32g/ind)滤水率为 2.09～3.99(平均 3.10)1/ind·h。吸收速率与POM(或TDM)呈正相关关系，与饵料质量(POM/TPM)无明显的相关关系。吸收效率AE_(POM)与TPM(或POM)没有相关关系，却与饵料质量呈明显 的正相关关系。扇贝对POC、PON和PP的吸收效率平均分别为68.9％、64.0％和63.6％。不同海区SFG差别很大。一龄扇贝SFG范围为-O.174～24.08 J/ind·h，SFG与饵料浓度POM呈正相关关系。SFG负值的出现主要与低饵料浓度有关。SFG_C、SFG_N、SFG_P分别与POC、PON和PP呈正相关关系。在N的生长余力计算中，如果仅考虑NH_4-N排泄，而不考虑其它形态N的排泄，就可能产生相当大的偏差，偏差范围为11～360％，这高于半现场的偏差值，显然SFG_N越低，产生的偏差就越大。这说明在饵料不足、扇贝生长受到限制的环境下进行N生长余力的计算时必须考虑其它形态N的排泄。⑧ 对四十里湾养殖海区一些双壳贝类和藻类的化学组成和有机净生产量进行了讨论。不同双壳贝类的软体有机碳含量差别不大，而N含量差异较大。栉孔扇贝N含量最高(占软体干重的12.36％)，而牡蛎、毛蚶软体N含量相对较低，为 8～9％。从双壳贝类贝壳的组成来看，贻贝和菲律宾蛤仔贝壳中N含量最高，分别为 0.55％ 和 0.56％；而栉孔扇贝贝壳N含量相对较低，在 O.1％左右。贻贝贝壳有机磷含量 (308ppm) 也明显高于栉孔扇贝贝壳(62.1 ppm)。不同海区海带的 C/N 比值较高，变化明显，范围为17.36～30.23。石莼与此相似。大型藻类高 C/N 比值说明海区营养元素N的不足。海带的不同部位N含量差别很大，中带部和边叶在不同海区有较大变化，即对环境的营养状况比较敏感。紫贻贝贝壳中C、H、N 和 P 的含量在整个贻贝中占有相对大的比例，分别为 30.4％、30.2％、31.8％和 29．6％。

桑沟湾贝藻养殖区附着生物生态效应研究

附着生物又称污损生物，是附生在海洋设施和生物体表面的动物、植物和微生物等生物的总称（Azis et al., 2001）。附生在养殖器材和生物体表面的数量巨大的附着生物，对贝类养殖和海湾生态系统内的物质和营养盐循环等多个方面产生影响。本研究以北方重要的养殖海湾----桑沟湾为研究对象，对贝藻养殖区附着生物的群落演替及其生态效应进行了研究。主要研究结果如下： ① 2007年5月至2008年5月，采用挂网的方法对桑沟湾栉孔扇贝和海带混养区的附着生物的季节变化进行了研究。结果显示挂网上的附着生物具有显著的季节变化特征，网片上的附着生物湿重与水温的变化相一致，生物量为3~1210 g•m-2。2月份附着生物的生物量最低，8月份最高。2007年9月至11月，对栉孔扇贝养殖笼上和贝壳上的附着生物种类和数量进行了研究。结果显示9月份养殖笼上附着生物的湿重约为1.94 kg，10月份降至0.99 kg，11月份又稍有增加，为1.03 kg。扇贝壳上的附着生物变化趋势与养殖笼上的相同，9~11月份壳上附着生物的数量约0.49~2.09 g。扇贝养殖笼上可鉴定的大型附着生物约23种，包括藻类、海鞘类、苔藓虫类、环节动物、腔肠动物、软体动物、甲壳动物和海绵动物等。玻璃海鞘、柄海鞘、紫贻贝和苔藓虫等是附着生物群落中的优势种。 ② 通过在栉孔扇贝和虾夷扇贝上壳上添加不同重量的“模拟附着生物”（速凝水泥）的方法，研究了贝壳上附着生物的重量对这两种扇贝生长和存活的影响。结果显示水泥重量是上壳重0.5-3倍的各组实验组扇贝的生长和存活与对照组（未添加水泥的扇贝）之间没有显著差异。说明贝壳上附着生物重量为上壳的3倍重时，也不会显著影响扇贝生长存活。9-11月份贝壳上的自然附着生物的重量约为1.47-2.09 g，为上壳重的28.16 (±38.6)%—31.29 ± (31.63)%。因此，贝壳上附着的生物重量不太可能对扇贝的生长存活造成显著的负面影响。 ③ 在桑沟湾现场测定了玻璃海鞘和柄海鞘的生物沉积速率。9月份（水温约24℃）玻璃海鞘和柄海鞘的生物沉积速率分别为32.14和90.06 mg•ind-1•d-1或（858.99 和467.76 mg•gdw-1•d-1），据此计算，养殖笼上的两种海鞘的生物沉积速率约为84.29 mg•m-2•d-1。海区的自然沉积速率为41.49 mg•m-2•d-1；玻璃海鞘和柄海鞘沉积物中有机质含量分别为14.34%和13.77%，对照组海区自然的有机质含量为14.36%；以上三者有机碳的含量分别为24.72%，23.74%和24.76%；氮的含量分别为0.27%和0.25%，自然沉积物中的氮含量为0.30%。9月份扇贝养殖笼上附着的海鞘将产生2588.16吨的沉积物，即向底部沉积363.77吨的有机物、6.99吨的氮和1.79吨的磷。 ④ 通过测定扇贝养殖笼上优势种附着生物--玻璃海鞘、柄海鞘和贻贝的摄食、呼吸和排泄，研究了这些优势种类对贝类养殖和海湾环境的影响。9月份（水温约24.5℃）玻璃海鞘和柄海鞘对颗粒有机物（POM）的摄食率分别为14.30 和17.01 mg• h-1•ind-1。根据实验结果计算这两种海鞘摄取的颗粒有机物相当于312个扇贝的摄取量，大于笼内养殖的扇贝的摄取量；玻璃海鞘和柄海鞘的耗氧率分别约为0.32和0.18 mg•h-1•ind-1，养殖笼上的这两种海鞘消耗的溶解氧约等于75个扇贝消耗的溶解氧。栉孔扇贝、玻璃海鞘、柄海鞘和贻贝的排氨率分别为33.66 ±11.34，117.90±23.46，35.91±6.22，28.08±3.41 ug NH4-N•gdw-1•h-1。以此估算，9月份玻璃海鞘、柄海鞘和贻贝每天排泄的氨氮约为654.08 kg，相当于16467吨栉孔扇贝（鲜重）排泄的氨氮。海鞘和贻贝排泄的氨氮可提供浮游植物等所需的2.75%的氮，可以提供1204吨海带的生长所需的氮。 ⑤ 一个养殖笼内的栉孔扇贝和全部附着生物（Scallop Culture Unit, SCU）在夏季（6-9月）对颗粒有机物的摄食速率约为43.13-98.94 mg/h，平均74.05 mg/h，期间桑沟湾养殖的栉孔扇贝及附着生物摄取的POM约为1279.58吨；同期，SCU对氨氮和磷（PO4-P）的排泄速率分别为125.59-1432.23 μmol•h-1和76.2-252.89μmol•h-1，期间桑沟湾养殖扇贝及附着生物排泄的氮磷分别为211.09 吨和83.79 吨。一串牡蛎及吊绳和牡蛎壳上的附着生物（Oyster Culture Unit, OCU），夏季摄食率为5-41.43μmol•h-1，耗氧率为16.54-41.76μmol•h-1，对氨氮和磷（PO4-P）的排泄速率分别为35.56-489.34μmol•h-1 和9.92-16.68μmol•h-1。以此估算，夏季OCU可摄取POM535.68吨，消耗溶解氧955.58吨，排泄氮磷分别为62.37 吨和15.50 吨。

东海内陆架泥质区EC2005孔沉积特征及古环境记录

本论文通过对东海内陆架浙闽沿岸泥质沉积带EC2005孔沉积物岩性、粒度、AMS14C测年、粘土矿物以及全岩矿物衍射分析、沉积物常微量元素和稀土元素分析、总碳氮以及有机碳氮分析、磁化率测试和综合研究，以EC2005孔岩芯记录为依据分析了研究区的沉积环境演化、海平面升降、浙闽沿岸流形成历史以及蕴含的古气候信息，探讨了陆源物质矿物、地球化学成分与粒度的关系。 EC2005孔岩芯自底部至41.00 m（17.3~13.1 ka BP）为末次冰消期以来的湖泊三角洲沉积序列，物质来源主要是来自湖盆流域物质的输入。随着海平面逐渐上升，海水自13.1 ka BP开始侵入研究区，自12.3 ka BP开始海水深度加大，沿岸流的地位开始显现，7.3 ka BP以来，形成了高海平面以来主要受沿岸流控制的浅海沉积。稀土元素结果显示，东海内陆架EC2005孔12.3~9.8 ka BP是以湖盆流域近源物质为主向长江物质为主转变的过渡阶段，自大约10~9.8 ka BP开始，由于海水深度的进一步加大、沿岸流作用进一步增强，长江物质对研究区的物质供给成为主导。海平面的升高以及沿岸流的形成是物质来源发生变化的重要原因。 东海内陆架泥质沉积物中全新世期间长达700 a（5.9~5.2 ka BP）的高分辨率细粒敏感组分资料揭示的东亚冬季风增强，与GRIP冰芯δ18O揭示的冷期具有良好的对应关系。5500 a BP前后东亚冬季风突然增强，与世界范围内的5500 a BP强降温事件非常一致。功率谱分析揭示出62 a和11 a的太阳活动周期以及与现代ENSO周期相似的6 a和5 a周期，因此，中全新世东亚冬季风演化可能是太阳活动以及古ENSO事件对全球气候系统的影响所致。 东海内陆架区对末次冰消期至早全新世气候回暖的记录与该时期世界性的广泛记录相一致，应该是轨道时间尺度上太阳辐射增强与ITCZ北移以及太阳活动变化综合影响的结果。东海内陆架浙-闽沿岸泥质带EC2005孔存在的4个百年时间尺度上快速沉积事件：12.3~12.1 ka BP、7.5~7.3 ka BP、5.9~5.2 ka BP和1.5~1.3 ka BP，与新仙女木事件、7.3 ka BP冷事件、第二新冰期（5.5 ka BP强降温事件）以及北大西洋1.4 ka BP浮冰事件均有良好的对应，世界范围内广泛存在的8.2 ka冷事件对本钻孔沉积也形成了一定影响。 EC2005孔磁化率变化受到多种因素的制约，如岩性粗细、早期成岩作用以及人类活动等的影响。近3.6 ka以来，磁化率的剧烈波动可能是由于人类活动影响造成的。东海内陆架EC2005孔TOC、TN和TOC/TN的大小主要受控于岩性变化。 此外，根据陆源物质粒度和矿物成分之间的关系，建立了陆源物质平均粒径与主要矿物成分含量大小的函数模型。地球化学成分与其所赋存单种矿物的相关性分析则进一步表明，陆源矿物种类和含量控制着地球化学成分及其含量，矿物种类和含量对地球化学成分的控制是决定性的，而粒度对元素（化学成分）的“控制”实际上是由于不同粒度的矿物组分不同而造成。

海洋经济动物精子超低温保存的研究

从1949年以来经过近五十年的发展，超低温保存种质细胞技术已经趋于成熟，特别是在家畜推广良种化的过程中发挥重要作用。对海洋动物种质细胞保存研究的范围主要集中在鲑鳟鱼类和牡蛎等少数几种海洋生物上。本研究结合“国家自然科学基金”研究项目，进行了三种贝类和两种鱼类精子的超低温保存实验，得到了它们在液氮（－196 ℃）条件下的适宜保存条件。栉孔扇贝（Chlamys farreri）冻精解冻后复苏比例、受精率和孵化率最高可达到49.39％、42.06％和12.15睦栉孔扇贝精子超低温保存时发生冷冻伤害的温度范围在－30 ℃～－60 ℃；其低温保存的最适降温速率为20 ℃／min；使用抗冻剂二甲基亚砜（DMSO）的最适浓度为5 ℃，其保存效果优于甘油；样品保存的最佳体积为0.6ml～1ml；解冻精子的最适水温为35 ℃，50 ℃次之，20 ℃最差；用自然海水激活解冻后精子的效果好于低盐度溶液；在0 ℃进行预处理平衡时间不宜太长；在抗冻液中加入蛋黄对保存效果没有改善，并且会对冻精的孵化率有抑制作用；用20 ℃／min和5％DMSO冷冻精子，液氮中保存栉孔扇贝精子55天后其复苏比例达到42.17％。超低温保存紫贻贝（Mytilus galloprovincialis Lamarck）精子，解冻后其复苏比例、受精率和孵化率最高可达到41.63％、69.52％和54.74％。保存紫贻贝精子最适降温速率为5 ℃／min，发生冻伤的温度范围是－20 ℃～－60 ℃；使用抗冻剂DMSO的保存效果好于甘油，且使用抗冻剂DMSO的最适浓度为15％；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；样品体积（在0.2～1ml之间）对保存效果没有影响；采用15％DMSO和5 ℃／min的降温速率处理精子，液氮中保存90天后复苏比例仍达到41.8％。保存菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum （Adams and Reeve））精子的最适降温速率为5 ℃／min，发生冻伤的温度范围是－30 ℃～－60 ℃；抗冻剂DMSO的保存效果好于甘油，也用DMSO与甘油混合使用，使用抗冻剂DMSO的最适浓度为10％；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH的溶液；样品体积（在0.2％～1.6ml之间）对保存效果有显著影响。冷冻保存后精子复苏比例、受精率和孵化率最高达到40.84％、68.87％和47.17％；以最适降温速率和抗冻剂浓度处理精子，并在液氮中保存36天后冻精复苏比例仍可以达到38.54％。黑鲷（Sparus macrocephalus）精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可以达到61.37％和61.4。保存黑鲷精子时发生冷冻伤害的温度范围是－20 ℃～－60 ℃，适宜的降温速率为20 ℃／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％；样品体积对保存效果有相关性；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；使用20％DMSO和20 ℃／min降温速率处理，在液氮中保存黑鲷精子66天后解冻，其复苏率和存活率分别为59.81％和58.45％。在液氮中保存真鲷（Pagrosomus major）精子时发生冷冻伤害的温域为－30 ℃～－60 ℃，适宜的降温速率为20 ℃／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％；采用低盐度或高pH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鲷冻精的复苏率和存活率最高可达到50.73％和62.5；以20 ℃／min和20％DMSO处理真鲷精子，保存在液氮中46天后冻精复苏率和存活率为50.63％和61.02％。通过对多种贝类和鱼类精子的超低温保存实验，不仅获得超低温保存基本条件，并且通过显微镜观察结合前人的研究，对产生冻伤的原因和保护的机理提出了一个模式。

A nitrogen budget of the Changjiang river catchment

Based on 1997-1998 field investigations in the Changjiang river mouth, rain sampling from the river's upper reaches to the mouth, historical data, and relevant literature, the various sources of Total Nitrogen (TN) and Dissolved Inorganic Nitrogen (DIN) in the Changjiang river catchment and N transport in the Changjiang river mouth were estimated. The export fluxes of various form of were mainly controlled by the river runoff, and the export fluxes of NO3-N, DIN and TN in 1998 (an especially heavy flood year) were 1438 103 tonnes (t) yr(-1) or 795.1 kg km(-2) yr(-1) 1746 10(3) t yr(-1) or 965.4 kg km(-2) yr(-1) and 2849 10(3) t yr(-1) or 1575.3 kg km(-2) yr(-1), respectively. The TN and DIN in the Changjiang river came mainly from precipitation, agricultural nonpoint sources, N lost from fertilizer and soil, and point sources of industrial waste and residential sewage discharge, which were about 56.2% and 62.3%, 15.4% and 18.5%, 17.1% and 14.4%, respectively, of the N outflow at the Changjiang river mouth; maximum transport being in the middle reaches.