Genomic cloning, expression and recombinant protein purification of alpha and beta subunits of the allophycocyanin gene (apc) from the cyanobacterium Anacystis nidulans UTEX 625

A genomic fragment encoding alpha(APC) and beta(APC) (i.e., alpha and beta units of the allophycocyanin, APC) from Anacystis nidulans UTEX 625 was cloned and sequenced. This fragment, containing a non-coding sequence of 56 nucleotides in between, was then subcloned into the expression vector pMal-c2 downstream from and in frame with the malE gene of E. coli encoding MBP ( maltose binding protein). The fusion protein was purified by amylose affinity chromatography and cleaved by coagulation factor Xa. alpha(APC) and beta(APC) were then separated from MBP and MBP fusion proteins, respectively, and concentrated by membrane centrifugation. The study provides a method to produce recombinant allophycocyanin subunits for biomedical and biotechnological applications.

Extraction of Nitraria tangutorum seed oil by supercritical carbon dioxide and determination of free fatty acids by HPLC/APC/IMS with fluorescence detection

The seed oil from Nitraria tangutorum samples was obtained by supercritical carbon dioxide extraction methods. The extraction parameters for this methodology, including pressure, temperature, particle size and extraction time, were optimized. The free fatty acids in the seed oil were separated with a pre-column derivation method and 1,2-benzo-3,4-dihydrocarbazole-9-ethyl-p-toluenesulfonate (BDETS) as a labeling regent, followed by high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. The target compounds were identified by mass spectrometry with atmospheric pressure chemical ionization (APCI in positive-ion mode). HPLC analysis shows that the main compositions of the seed oil samples were free fatty acids (FFAs) in high to low concentrations as follows: linoleic acid, oleic acid, hexadecanoic acid and octadecanoic acid. The assay detection limits (at signal-to-noise of 3:1) were 3.378-6.572 nmol/L. Excellent linear responses were observed, with correlation coefficients greater than 0.999. The facile BDETS derivatization coupled with mass spectrometry detection allowed the development of a highly sensitive method for analyzing free fatty acids in seed oil by supercritical CO2 extraction. The established method is highly efficient for seed oil extraction and extremely sensitive for fatty acid profile determination. (C) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

藻胆体的光谱特性和光能传递

一，螺旋藻藻胆体光谱特性及其光能传递的研究 1，完整藻胆体与解离藻胆体吸收光谱的比较研究 对螺旋藻完整藻胆体和解离藻胆体的吸收光谱中进行了比较研究。随着PBS逐渐解离，其吸收光谱表现出如下变化特点：在紫外区，吸收峰始终位于355nm，尖形峰逐渐变成钝形峰;在红区，完整藻胆体和解离藻胆体都有很强的光吸收，吸收峰呈平顶状，其半带宽逐渐变小，紫外区与红区相对吸收强度比值逐渐变小，四组导数吸收光谱中的小峰数目越来越少。室温荧光发射光谱表明，PBS在低于0.9mol/L的磷酸缓冲液中变得不稳定，并开始逐渐解离，解离的PBS与完整的PBS相比，其荧光发射峰逐渐蓝移。 2，藻胆体在解离过程中荧光发射和光能传递的研究 完整藻胆体的室温荧光发射光谱中只有一个峰，在678nm。说明在完整藻胆体中，光能传递效率高。在77K荧光发射光谱中，完整藻胆体只有一个峰，位于682nm，这是L_(cm)(TE_1)的荧光峰;严重解离的藻胆体的主峰在656nm，是PC的荧光;在679nm有一个小峰，是APC-B的荧光(TE_2)。据此，我们提出螺旋藻藻胆体的光能传递链为：(此处表从略，见全文) 二，螺旋藻藻胆体核心及其与藻蓝蛋白的重组 PC+core混合物，浓缩重组48h后，其室温荧光发射峰位于663nm，与PC的室温荧光发射峰643nm和PC+core混合物（未重组）的室温荧光发射峰648nm相比，说明部分APC与部分PC发生了重组，使部分PC吸收的光能传递给了APC，使荧光发射峰红移;与藻胆体核心室温荧光发射峰664nm相比，则非常接近，说明重组效果较好。PC+core混合物（未重组），其77K荧光发射光谱中有两个峰：654nm,679nm,分别是PC,APC-B的荧光峰，F679/F654的比值为32.0%。我们以F679/F654比值的变化来判断PC与core是否发生了重组。PC+core混合物，经48h浓缩重组后，77K荧光发射光谱中有F657,F679两个峰，F679/F654的比值则为45.9%，比未重组的混合物32.0%升高了，说明部分PC与core发生了重组，部分PC吸收的光能传递给了APC和APC-B，使F679加强，F654减弱。 三，螺旋藻藻胆体一类囊体膜光谱特性与光能传递的研究 藻胆体一类囊体膜的吸收光谱，室温荧光发射光谱和77K荧光发射光谱表明：藻胆蛋白能将捕获的光能传递给叶绿素a，叶绿素a捕获的光能不能逆传给藻胆蛋白。 四，藻胆体一类囊体膜的重组 藻胆体一类囊体膜的吸收光谱说明，一部分被洗下来的PBS能重新结合到类囊体膜上，但并没有达到100%的重组。 五，整体螺旋藻光谱特性及其光能传递的研究 整体螺旋藻光谱特性与PBS-类囊体膜的光谱特性极为相似，表现出同样的规律：PBS的吸收面积与叶绿素a相比，叶绿素a的吸收是主要的。 从PBS-类囊体膜和整体螺旋藻的吸收光谱，室温荧光发射光谱，77K荧光发射光谱的研究中可知，二者表现出极为相似的规律：PBS藻胆蛋白捕获的光能能传递给叶绿素a，叶绿素a捕获的光能不能逆传给PBS藻胆蛋白。主要的捕光物质是叶绿素a。 另外，我们还对Spirulina platensis 6 and Spirulina maxima的藻胆体在解离过程中的荧光发射和光能传递进行了研究，表现规律与Spirulina platensis相同。

藻胆体的光谱特性光能传递

1．对嗜热蓝藻层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus)藻胆体的光谱特性和光能传递进行了研究。其完整藻胆体的吸收峰位于622 nm，室温荧光发射峰位于673 nm。在77K荧光发射光谱中，完整藻胆体的荧光峰只有一个，位于685 nm，是末端发射体1的荧光。在低浓度磷酸缓冲液中发生严重解离的藻胆体，其77K荧光发射光谱中有二个发射峰和一个发射肩。两个荧光发射峰分别位于644 nm和683 nm。前者为主峰，属于C-藻蓝蛋白的荧光，后者是次峰，属于末端发射体2的荧光。荧光发射肩位于660 nm附近，属于别藻蓝蛋白的荧光。据此，提出层理鞭枝藻藻胆体光能传递途径如下： 藻红蓝蛋白→c—藻蓝蛋白→别藻蓝蛋白→端发射体l、末端发射体2： 2．对嗜热蓝藻层理鞭枝藻藻胆体—类囊体膜的光谱特性和光能传递进行了研究。在吸收光谱中，其藻胆体——类囊体膜在可见光区域有5个峰，它们分别位于420 nm、438 nm、490 nm、624 nm和678 nm。420 nm、438 nm和678 nm为叶绿素a的吸收峰位置。490 nm是类胡罗卜素的吸收峰，624 nm是藻胆体的吸收峰。对藻胆体——类囊体膜用580 nm波长的光激发藻胆蛋白时，在室温荧光发射光谱中有一个发射峰和一个发射肩，分别位于657 nm和690 nm，前者属于藻胆蛋白的荧光，后者属于叶绿素a的荧光。这说明藻胆蛋白能将捕获的光能传递给类囊体膜上的叶绿素a。在77K荧光发射光谱中有4个峰，它们分别位于649 nm、660 nm、688 nm和730 nm。前二者属于藻胆蛋白的荧光，后二者属于叶绿素a的荧光。这同样说明藻胆蛋白能将捕获的光能传递给类囊体膜上的叶绿素a。当用436 nm波长光激发叶绿素a时，藻胆体——类囊体膜的室温荧光发射光谱中有两个荧光峰出现，位于685 nm的峰来源于光系统Ⅱ，位于713 nm的峰来源于系统I。这说明叶绿素a捕获的光能不能逆传递给藻胆体中的藻胆蛋白。在77K荧光发射光谱中也只有叶绿素a的荧光峰，位于695 nm的峰来源于光系统Ⅱ，位于730 nm的峰来源于光系统l。此结果同样说明叶绿素a捕获的光能不能逆传递给藻胆蛋白． 3．我们以多变鱼腥藻(Anabaena variabilis)为材料，对其藻胆体核心和藻蓝蛋白进行了重组实验，得到了具有光能传递效率的藻胆体核心——藻蓝蛋白复合物。在吸收光谱中，藻胆体核心有一吸收峰和一个吸收肩，分别位于654 nm和600 nm。藻蓝蛋白的吸收光谱中只有一个峰，位于620 nm．重组样品的吸收光谱有一吸收峰和一吸收肩，分别位于654 nm和620 nm．由于620 nm与654 nm的吸收比远大于核心的600 nm与654 nm的吸收比，因此，可以认为部分藻蓝蛋白已与核心重组。在室温荧光发射光谱中，藻胆体核心只有一个峰，位于676 nm。藻蓝蛋白只有一个峰，位于653 nm。重组样品有一荧光发射峰和一荧光发射肩，分别在669 nm和650 nm附近。669 nm荧光来源于核心，650 nm荧光来源于藻蓝蛋白。重组后的核心的650 nm荧光显著大于未重组的核心，这也说明部分藻蓝蛋白与核心已重组．在77K荧光发射光谱中，藻蓝蛋白只有一个峰，位于655 nm。藻胆体核心有二个峰，分别位于666 nm和686 nm。重组样品有两个荧光发射峰和一荧光发射肩，分别位于666 nm、683 nm和648 nm附近．重组的核心的别藻蓝蛋白的荧光(F666)和藻蓝蛋白的荧光(F648)都强于未重组的核心。这一结果同样说明有藻胆体——藻蓝蛋白复合物生成。 除以上研究工作之外，我们还对多变鱼腥藻藻胆体在解离过程中的光谱特性及光能传递、藻胆体——类囊体膜的光谱特性及光能传递、藻胆体解离重组、藻胆体核心在低浓度磷酸缓冲液中的光谱特性、以及温度对藻胆体核心的影响等进行了研究。研究结果有待整理。 本文编写：PBS：藻胆体;PEB：藻红胆素;PE：藻红蛋白;PUB:藻尿胆素;PEC：藻红蓝蛋白;PCB:藻蓝胆素;PC：藻蓝蛋白;PSⅡ：光系统Ⅱ;APC:别藻蓝蛋白;PS I：光系统I;TE:末端发射体

盐胁迫对螺旋藻光合作用影响的研究

盐胁迫是限制高等植物和藻类生长和产量的主要环境因子之一。PSII对环境胁迫的响应被认为是光合作用适应逆境过程中最重要的一个环节。尽管盐胁迫对PSII的影响已进行了大量的研究，但有关盐胁迫对PSII作用方式和位点的研究仍存在着争议。我们主要研究了盐胁迫对螺旋藻PSII结构和功能的影响，以探讨盐胁迫对PSII的作用方式和位点以及该藻细胞PSII对盐胁迫的适应机理。主要研究结果如下： 1． 用0、0.2、0.4、0.6、0.8M NaCl处理螺旋藻细胞12小时。随盐浓度的增加，螺旋藻细胞的Chla、carotenoid、PC、APC及蛋白含量均呈下降趋势，说明盐胁迫抑制了上述色素及蛋白的合成或加速了它们的降解，从而影响了螺旋藻的光合作用。 2． 随盐浓度的增加，螺旋藻细胞光合放氧活性和PS II电子传递活性显著降低，表明盐胁迫引起藻细胞PS II活性的下降。 3． 通过放氧活性、热致发光（TL）、多相荧光瞬态上升动力学曲线的测定以及Western 杂交，来探讨盐胁迫对螺旋藻细胞PS II供体侧电子传递及OEC33蛋白含量的影响。结果显示：随盐浓度的增加，螺旋藻细胞光合放氧活性和PS II电子传递活性下降;TL B-band和Q-band强度降低，在0-0.6M NaCl下，B-band的周期性振荡清楚，最大值出现在第二次和第六次闪光，而在0.8M NaCl时，S态振荡基本上消失，S 态氧化还原循环受阻;Fm， J、I和P相荧光水平降低。以上结果都表明盐胁迫使PS II的放氧侧受损伤。且随盐浓度的增加，盐分引起螺旋藻细胞外周蛋白OEC33的降解，在蓝藻中首次提出放氧机构的S态循环受阻，放氧活性降低。 4． 通过OJIP曲线的测定以及JIP-test、闪光诱导的可变荧光衰减动力学、热致发光（TL）的分析，我们研究了盐胁迫对螺旋藻细胞PS II受体侧的影响。结果显示： JIP-test的参数Ψo和φEo随盐浓度的增加而下降,显示QA-到QB 电子传递受阻;可变荧光衰减动力学快相组分半衰期延长，所占总可变荧光百分比下降，表明QA-到QB 电子转移变慢，中相组分半衰期延长、所占百分比下降，说明空的QB位点对PQ的结合减慢，有可能PQ分子对QB位点的结合能力下降;TL B-band和Q-band的峰温度出现了位移，可能QA、QB的氧化还原电势发生了改变。以上结果表明，盐胁迫伤害了PSII受体侧的电子传递。 5． 首次运用闪光诱导下的叶绿素荧光上升及其衰减动力学来研究盐胁迫对PS II受体侧的影响。 6． 盐胁迫下，PS II供体侧和受体侧电子传递受抑制，有活性的PSII反应中心数量下降，说明盐胁迫对螺旋藻细胞PSII的伤害也可能是多位点的作用方式。此外，盐胁迫下，藻细胞放氧活性的下降快于受体侧QA 到QB电子传递所占百分比的下降，有可能PS II放氧侧先受损伤，然后是反应中心和受体侧。上述结果表明盐胁迫下PSII活性的降低是由于PSII供体侧和受体侧电子传递的抑制，有活性的PSII反应中心的减少。 7． 借助螺旋藻类囊体膜的Western杂交分析，来研究盐胁迫对螺旋藻类囊体膜PSII相关蛋白的影响。结果表明，上述PSII活性的抑制是由于类囊体膜蛋白的损失。主要与PSII反应中心CP43、CP47和OEC33蛋白含量的下降有关。 8． PS II机构对盐胁迫的适应涉及以下几个方面：降低吸收横截面，（PC/chla，APC/chla比值的降低）;光系统II光化学反应的改变，通过关闭的PS II反应中心比例的增加，使得PS II机构免于过多激发能的伤害而得以保护;提高了剩余的有活性反应中心的耗能效率（DIo/RC增加）;保持有活性反应中心高的激发能转化效率，比如，TRo/RC保持不变;另外，随盐浓度的增加，由藻胆体向光系统I的能量传递增加，避免过量激发能对 PSII的伤害，使螺旋藻细胞适应盐胁迫环境。

树突状细胞在抗HIV-1感染免疫预防与治疗中的应用

树突状细胞(DC)不仅是已知惟一能够激活初始T淋巴细胞的抗原提呈细胞,而且也是已知最强的抗原提呈细胞(APC),其对抗原的提呈能力远大于巨噬细胞.经抗原刺激的DC回输到体内后,能够迁移到淋巴结,释放多种细胞因子,同时激活T淋巴细胞的分化和分裂,产生抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),这些细胞因子和特异性CTL能够有效地促进或直接杀伤表达该抗原的细胞.

HIV感染中的细胞凋亡

HIV感染以后,病毒蛋白的持续性产出导致免疫系统的持续性激活,引起Th1细胞的丢失,Th1细胞通过合成Ⅰ型细胞因子,抑制淋巴细胞的自发凋亡。另外,病毒蛋白或其他因素能够使CD4~(+)、CD8~(+) T细胞和APC转化为凋亡的效应细胞,通过Fas/FasL或其他途径引起细胞凋亡。HIV感染人体后凋亡细胞不仅有CD4~(+) T细胞,还包括B细胞、NK细胞、粒细胞、神经细胞和单细胞。凋亡作为机体的自我防护措施,在清除感染细胞的同时,并没有抑制HIV在单细胞/巨噬细胞内的复制,反而造成大量未感染细胞的凋亡,导致对HIV复制的失控,发展为严重的免疫缺陷,引起AIDS相关的机会性感染。

盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究

盐泽螺旋藻(Spirulina subsalsa)的水溶性色素粗提物经过硫酸铵沉淀和羟基磷灰石(HA)柱层析后可以分出两种藻胆蛋白,即藻蓝蛋白(c-PC)和别藻蓝蛋白(APC)。它们的纯度(指其在可见光部分的最大吸收与280nm处吸收之比)可分别达到7.27(c-PC)和6.55(APC)。而一般认可的纯度标准,PC为5,APC为6。纯化后的c-PC和APC在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中仅见一条色带,其最大吸收峰分别在620_(nm)和650_(nm),其室温荧光发射峰分别为642_(nm)和657_

HIV-1 C亚型gp120重组腺病毒载体的构建及gp120负载人树突状细胞疫苗的初步研究

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的，以全身免疫系统受到严重损害为特征的传染性疾病。从目前HIV-1的流行趋势来看，HIV-1 C亚型已经成为全球最主要的流行株之一，因此，针对HIV-1 C亚型的疫苗设计颇为重要。gp120作为HIV-1的包膜糖蛋白，能够诱导广泛的中和抗体反应，中和进入机体的病毒粒子，阻止病毒早期感染，所以本实验选取HIV-1 C亚型密码子优化的gp120作为免疫原进行研究。目前的疫苗研究中，腺病毒载体是较理想的病毒载体之一，具有安全性好、外源基因容纳量大、感染效率高、操作简便等优点。我们以复制缺陷型腺病毒为载体，构建了表达HIV-1 C亚型密码子优化的gp120的重组腺病毒vAd-gp120，经Western Blot方法检测到了gp120蛋白的表达。树突状细胞（DC）是已知最强的抗原呈递细胞(APC)，也是目前发现的唯一能够刺激初始型T细胞增殖的细胞。经抗原致敏的DC可通过MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ途径递呈抗原，并激活T细胞，从而激发体内的体液免疫和特异性细胞免疫反应。我们利用Amaxa系统将HIV-1 C亚型gp120基因转入人外周血单核细胞来源的DC，构建了以DC为载体的治疗性疫苗，并对其功能进行初步研究，发现负载gp120的DC能够显著刺激淋巴细胞的增殖、增强CD8T细胞表面活化分子CD25的表达以及促进CD8T细胞分泌++IFN-γ，为下一步DC治疗性疫苗的体内研究奠定了基础。

侵蚀条件下坡地土壤水分与有效磷的空间分布特征

坡地的水土流失及磷素在泥沙中的富集不仅导致土地生产力下降、环境恶化 ,也对下游水体的环境造成严重危害。以不同施磷时间的黄绵土为试验材料 ,通过人工模拟降雨试验观察了坡地侵蚀土壤水分含量 (SM)与有效磷含量 (APC)的空间变化特征。结果表明 :自坡顶向下侵蚀土壤表层 0～ 5 cm与 5～ 10 cm的土壤水分 (SM)呈现出完全一致的波浪状递增趋势。有效磷含量 (APC)的空间变化虽然也为波浪状 ,但其节奏要较水分变化快一倍 ,而且 0～ 5 cm与 5～ 10 cm两层间并不同步 ,下层略有滞后。磷向 2 0 cm以下土层的迁移量极少 ,不同坡位间差别不大。施磷 2 4d以前从坡顶向下有效磷含量 (APC)呈降低趋势 ,而施磷 2 4d以后在坡下则略有富集 ;施磷 6 d以前坡地 0～ 5 cm土层有效磷含量 (APC)较 6 d以后低 8%左右

马来酸酐封端聚碳酸亚丙酯的大分子偶联反应

自从 1 969年井上祥平[1] 发现二氧化碳 (CO2 )可以同环氧化合物直接共聚合成脂肪族聚碳酸酯(APC)以来 ,这一学科领域受到科学家的广泛关注[2～ 8] .这是因为CO2 所产生的温室效应 ,成为使全球变暖的主要因素[9,10 ] .已经确定CO2 使气侯变暖占诸多因素中的 66% .目前大气中CO2 的体积浓度为 345ppmv,由于人类的各类活动每年以 1ppmv的速度递增 .因此 ,降低CO2 排放量已成为全人类共同关注的热点之一 .另一方面 ,CO2 的固定化以及消耗、利用显然是一个应积极鼓励的研究课题 .目前人们已经将CO2 同环氧乙烷 (EO)、环氧丙烷 (PO)、环氧环己烷 (CHO)等环氧化合物实现共聚 ,制得一类脂肪族碳酸酯新材料 .特别是自从人们发现戊二酸锌等高效催化剂可以得到具有高分子量的APC以来 ,APC做为一种新的塑料材料使用已具有现实意义 .由于APC的加工热稳定性较差 ,在高温条件下 ,很容易产生大分子主链的断裂及从端基开始的解拉链式降解 ,因此 ,研究其物理特性及提高其热稳定性的方法具有重要的科学意义和实际应用价值 .本文采用熔体反应的办法 ,实现了马来酸酐(MA...

Biosynthesis of fluorescent allophycocyanin alpha-subunits by autocatalysis in Escherichia coli

APC (allophycocyanin) is widely used for fluorescence tagging and may be a promising antioxidant agent for use within the food and pharmaceutical industries. Chromophore attachment to apo-ApcA (apo-APC alpha-subunit without chromophore) can be auto-catalysed both in vitro and in vivo. In the present study, a plasmid containing genes of apo-ApcA and chromophore synthetases (HOI (ferredoxin-dependent haem oxygenase) and PcyA (phycocyanobilin:ferredoxin oxidoreductase)] was constructed and expressed in Escherichia coli. The results show that holo-ApcA (APC alpha-subunit with chromophore) can be synthesized by autocatalysis in E. coli. Recombinant holo-ApcA showed the same spectral and fluorescent properties as PC (phycocyanin) and could serve as a good substitute for native PC for fluorescent tagging. Moreover, recombinant ApcA can inhibit hydroxyl and peroxyl radicals more strongly than holo-ApcA and native APC. The EC50 values were 296.4 +/- 22.4 mu g/ml against hydroxyl radicals and 38.5 +/- 2.6 mu g/ml against peroxyl radicals.

Effect of lanthanum on expression of recombinant allophycocyanin gene in Pichia pastotis

The enhancing effect of lanthanum on gene expression of recombinant allophycocyanin (rAPC), a potential antitumor medicine, in Pichia pastoris was studied. PCR and sequence analysis were used in order to prove whether the APC gene had integrated into the yeast genome. The expression level of the recombinant allophycocyanin (rAPC) in BMMY medium containing LaCl3 was detected by ELISA method. The recombinant allophycocyanin was determined by Western blot. The results show that the recombinant Pichia pastoris chromosome contained allophycocyanin gene. Expression efficiency of rAPC gene in Pichia pastoris was promoted by proper LaCl3 concentration like 2, 5, 10 mmol (.) L-1, among which 5 mmol (.) L-1 was the most effective. The highest expression yield of rAPC in the BMMY medium containing 5 mmol (.) L-1 LaCl3 was 4.4 mg (.) L-1 at 48 h, that was increased by 110% compared with 2.1 mg (.) L-1 of control, in the meantime, the optimum culture time is shortened from 72 to 48 h. The result of western blot analysis indicates that the rAPC consisted of two kinds of subunits with molecular weight of 19 and 21 kDa respectively.

Characterization of the artificially covalent conjugate of B-phycoerythrin and R-phycocyanin and the phycobilisome from Porphyridium cruentum

B-phycoerythrin (BPE) and R-phycocyanin (RPC) were purified from Porphyridium cruentum by Sephadex G-200 chromatography, then the BPE was attached covalently to the RPC by reacting their amino groups to form the artificially covalent BPE-RPC conjugate in which the excitation energy can transfer from the BPE to the RPC with low efficiency. Meanwhile, the intact phycobilisome (PBS) consisting of BPE, RPC, APC and L-CM was isolated and purified from Porphyridium cruentum, and the purified PBS was found to keep intact if the solution contains sucrose. Comparison of spectroscopic properties between the purified PBS and the BPE-RPC conjugate suggests that the BPE-RPC conjugate is much more stable than the purified PBS. The construction of BPE-RPC conjugate with low efficiency of the excitation energy transfer may be useful for preparing phycobiliprotein probes. (C) 2002 Elsevier Science Ireland Ltd. All rights reserved.

Spectroscopic properties of the C-phycocyanin-allophycocyanin conjugate and the isolated phycobilisomes from Spirulina platensis

C-phycocyanin (CPC) and allophycocyanin (APC) were purified from Spirulina platensis, then the CPC was attached covalently to the APC by reacting their epsilon-amino groups. The excitation energy could be transferred from the CPC to the APC in the CPC-APC conjugate. Intact phycobilisomes (PBS), consisting of CPC, APC, colourless linker polypeptides, and APC B or L-cm, were isolated from S. platensis. Spectroscopic properties of the isolated PBSs kept at 20 degrees C for various times showed that the connection between the APC and the APC B or L-cm was looser than that between the CPC and the APC in the isolated PBSs. The CPC-APC conjugate was more stable than the isolated PBSs, and the linker polypeptides had a minor influence on the excitation energy transfer characteristic between different phycobiliproteins in the PBS.