Purificação, caracterização e efeitos imunomodulatório e antiproliferativo de uma lectina do fungo Clavaria cristata (Holmsk.) Pers

A 140,0 kDa lectin was purified and characterized from the mushroom Clavaria cristata. The purification procedures from the crude extract of the mushroom comprised gel filtration chromatography on Sephacryl s200 and ion exchange on Resource Q column. The purified lectin agglutinated all types of human erythrocytes with preference for trypsinized type O erythrocytes. The haemagglutinating activity is dependent of Ca 2+ ions and was strongly inhibited by the glycoprotein bovine submaxillary mucin (BSM) up to the concentration of 0, 125 mg/mL. The C. cristata lectin (CcL) was stable in the pH range of 2,5-11,5 and termostable up to 80 °C. CcL molecular mass determined by gel filtration on a Superose 6 10 300 column was approximately 140,3 kDa. SDS polyacrilamide gel electrophoresis revealed a single band with a molecular mass of approximately 14,5 kDa, when the lectin was heated at 100 ⁰C in the presence or absence of β-mercaptoethanol. CcL induced activation of murine peritoneal macrophages in vitro resulting in the release of nitric oxide (NO), reaching the maximum production at 24 h. In experimental paw oedema model in mice, CcL showed proinflammatory activity being able to induce oedema formation. Cell viability of HepG2, MDA 435 e 3T3 cell lines was examined after 72 h of incubation with CcL in different concentrations (0,5-50 μg/mL). CcL inhibited HepG2 cells growth with an IC50 value of 50 μg/mL. In the present work, the observed immunomodulatory and antiproliferative effects indicate CcL as a possible immunomodulator compound, interfering in the macrophages immune response, taking possible anti-parasitic, anti-tumoral effects or diagnostic and/or therapeutic

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior

Uma lectina de 140,0 kDa foi purificada e caracterizada a partir do extrato protéico do fungo Clavaria cristata. O processo de purificação a partir do extrato bruto do fungo compreendeu uma cromatografia de gel filtração SEPHACRYL S200 e uma cromatografia de troca iônica Resource Q em sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). A lectina de C. cristata (CcL) aglutinou todos os tipos de eritrócitos humanos com preferência pelos do tipo O tratados com tripsina. A atividade hemaglutinante de CcL se mostrou dependente do íon cálcio e foi fortemente inibida pela glicoproteína mucina bovina (BSM) até a concentração mínima de 0,125 mg/mL. CcL foi estável numa ampla faixa de pH, que variou entre 2,5-11,5 e termoestável até 80°C por uma hora. A massa molecular da CcL, determ inada por cromatografia de gel filtração Superose 6 10 300 GL em sistema de FPLC-AKTA foi de aproximadamente 140,3 kDa e uma eletroforese SDS-PAGE revelou uma única banda com massa molecular de aproximadamente 14,5 kDa quando a lectina foi aquecida à temperatura de 100 ⁰C. CcL induziu a ativação de macrófagos murinos in vitro com conseqüente liberação de óxido nítrico atingindo a máxima produção de óxido nítrico no tempo de 24 h. Em modelo experimental de edema de pata em camundongos, a lectina do fungo apresentou atividade pró-inflamatória sendo capaz de induzir a formação do edema. A viabilidade celular das linhagens celulares HepG2, MDA 435 e 3T3 foi analisada após incubação por 72 h com concentrações de CcL (0,5-50 μg/mL). O valor do IC50 foi obtido com a concentração de CcL de 50 μg/mL para linhagem de células HepG2. No presente trabalho, os efeitos imunomodulatórios e antiproliferativos foram observados apontando a CcL como um possível imunomodulador, interferindo na resposta imune de macrófagos levando a possíveis efeitos anti-parasitários, anti-tumorais ou agente diagnóstico e/ou terapêutico