Utilização de peptídeos sintéticos derivados de moléculas imunodominantes de Toxoplasma gondii para diagnóstico sorológico da toxoplasmose em ovinos e galinhas caipiras

Chapter I - The obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii is the causative agent of toxoplasmosis, a disease that affects humans and generates economic losses in farm animals. When prevention fails disease refers to the diagnosis and subsequent treatment if the individual is diagnosed as positive. Therefore, the development of new accurate diagnostic tools for detecting T. gondii infection is a need in particular to determine the environmental source of infection which can result in more appropriate public health policies against different routes of infection and prevent potential damage that toxoplasmosis can cause when animals are infected. Chapter II - The domestic chicken (Gallus gallus domesticus) are considered epidemiological sentinels, still representing a major source of recombinant strains when predated by cats, it is common to find them with multiple infections. We evaluate the diagnostic potential of six synthetic peptides (SAG2Y, MIC1, M2AP, GRA10, ROP2 and ROP7) predicted in silico from tachyzoites immunodominant markers of T. gondii in samples from naturally infected chickens, comparing synthetic peptides with antigen total soluble (STAg). In general, our results demonstrated that reactivity rates and positivity for these peptides are similar to the STAg, and the ROP7 peptide and the combination of peptides MIC1+ROP2 have significant sensitivity, confirming them as potential diagnostic tools for the diagnosis of toxoplasmosis in chickens. Chapter III - Sheep (Ovis aries) are commonly infected with Toxoplasma gondii due to his eating habits. Infection in pregnant sheep can have serious consequences such as embryonic death, fetal resorption, mummification, and neonatal death. One concern regarding the infection in these animals is that the meat can be a source of contamination to humans and other carnivores. Therefore perform accurate diagnosis in these animals is of fundamental importance. In the present study we evaluated the potential of new synthetic peptides as a diagnostic tool. Synthetic peptides (SAG2Y, SRS52A, MIC14, GRA4, GRA10 and GRA15) were predicted in silico from immunodominant proteins of T. gondii. We determine the levels of IgG antibodies using sera obtained from two farms in the city of Uberlândia. Analyzing the results together, the peptide combination GRA10+GRA15 (Accuracy = 0,82) showed better characteristics compared with the other mixtures. This preparation could be better analyzed with an antigenic mixture potential use in the diagnosis of toxoplasmosis in sheep and other species.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais

Dissertação (Mestrado)

Capítulo I – O parasito intracelular obrigatório Toxoplasma gondii é o agente etiológico da toxoplasmose, doença que acomete o ser humano e gera perdas econômicas em animais de produção. Quando a prevenção à doença falha recorre-se ao diagnóstico e posterior tratamento, caso o indivíduo for diagnosticado como positivo. Portanto, o desenvolvimento de novas ferramentas precisas de diagnóstico para detectar a infecção por T. gondii é uma necessidade, em especial para determinar a fonte ambiental de infecção, que pode resultar em políticas de saúde públicas mais adequadas contra as diferentes vias de infecção e evitar potenciais danos que a toxoplasmose pode causar quando os animais são infectados. Capítulo II – As galinhas domésticas (Gallus gallus domesticus) são consideradas sentinelas epidemiológicas, representando ainda um importante tipo de hospedeiro intermediário por estar envolvido no processo de recombinação genotípica de cepas quando predadas por felinos, uma vez que é comum encontrá-las com múltiplas infecções. Avaliamos o potencial diagnóstico de 6 peptídeos sintéticos (SAG2Y, MIC1, M2AP. GRA10, ROP2 and ROP7) preditos in silico a partir de marcadores imunodominantes de taquizoitos de T. gondii, em 120 amostras de soros obtidos de galinhas naturalmente expostas ao risco de infecção, comparando os peptídeos sintéticos com o antígeno solúvel total (STAg). Os resultados obtidos demonstraram que as taxas de reatividade e de positividade para estes peptídeos são similares às do STAg, sendo que o peptídeo ROP7, bem como a combinação de peptídeos MIC1+ROP2, apresentam sensibilidade significativa, confirmando-os como potenciais ferramentas para o diagnóstico sorológico da toxoplasmose em galinhas. Capítulo III - Ovelhas (Ovis aries) são comumente infectadas com Toxoplasma gondii devido ao seu hábito alimentar. A infecção em ovelhas grávidas pode trazer sérias consequências como a morte embrionária, mumificação e morte neonatal. Uma preocupação decorrente da infecção nesses animais é que a carne pode ser uma fonte de contaminação para seres humanos e outros animais carnívoros. Portanto, realizar um diagnóstico preciso nesses animais é de fundamental importância. Assim, no presente estudo avaliamos o potencial de novos peptídeos sintéticos como ferramenta de diagnóstico. Os peptídeos sintéticos (SAG2Y, SRS52A, MIC14, GRA4, GRA10 e GRA15) foram preditos in silico, a partir de proteínas imunodominantes de T. gondii. Determinamos os níveis de anticorpos IgG, utilizando amostras de soros obtidas a partir de 79 amostras de duas fazendas do município de Uberlândia. Analisando-se os resultados em conjunto, a combinação de peptídeos GRA10+GRA15 (Acurácia = 0,82) apresentou melhores parâmetros diagnósticos quando comparada com as outras combinações. Esta preparação, se analisada melhor, poderia ser uma mistura antigênica com potencial uso no diagnóstico da toxoplasmose em ovinos e outras espécies.