Síntese de nitrosotióis para experimentação ex vivo e in vivo relacionada com a resistência à insulina

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

O presente projeto de investigação pretende propor que a Substância Hepática Sensibilizadora de Insulina (HISS) consiste num dos produtos de degradação da insulina (cadeia A/B) nitrosilados, e que a enzima interveniente na formação de tais produtos é a Proteína Dissulfito Isomerase (PDI) presente nos hepatócitos. Adicionalmente sugere-se a ligação dos nitrosilados de insulina à albumina. Com vista a tentar comprovar esta hipótese, a investigação efetuada teve o intuito de confirmar a existência de PDI ao nível dos hepatócitos, determinar a sua atividade e analisar os produtos de degradação originados. Outro dos objetivos foi efetuar a produção de nitrosotióis de cadeia A e B para posterior administração ex vivo e in vivo, e respetiva quantificação do potencial terapêutico. Neste sentido, foram realizados diversos ensaios. Assim, numa fase inicial procedeu-se à monitorização da degradação enzimática da insulina por via in vitro com recurso à PDI purificada e a lisados de hepatócitos de rato recorrendo à técnica de turbidimetria. Seguidamente, foi realizada a análise dos produtos originados pela degradação da insulina efetuada pela PDI purificada através de eletroforese SDS-PAGE. Posteriormente, procedeu-se à separação química da cadeia A e B da insulina com posterior produção de nitrosotióis. Por último, estes produtos foram administrados a miotubos de rato e a ratos Wistar e o seu potencial terapêutico quantificado através da medição da captação de 2-deoxi-glucose marcada com trítio radioativo e através de sucessivos testes RIST, respetivamente. Com efeito, os resultados desta investigação permitiram reforçar as ilações feitas pelos demais autores quanto à presença e atividade da PDI ao nível dos hepatócitos em relação à insulina, e para além disso confirmaram a suspeita inicial de que um dos derivados de insulina nitrosilados tem potencial efeito terapêutico ao nível da resistência à insulina apesar de não parecer estar relacionado com a estrutura da HISS.